南方红豆杉组织培养研究Ⅰ.愈伤组织诱导和培养条件优化

介绍了南方红豆杉植物愈伤组织诱导和继代培养条件,在ＭＳ－培养基上,附加不同种类和浓度配经的激素,在光照条件下对植物愈伤组织的诱导率和生长量等进行了比较。其中当２,４－Ｄ１．２ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ２．８ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ３ｍｇ／Ｌ或４ｍｇ／Ｌ时,愈伤组织诱导率和生长量最高,结果表明,不同激素组合对愈伤组织诱导率,生长量和发生的性状有明显的影响,为南方红豆杉植物细胞悬浮培养建立了基础,为解决红豆杉的资源贫     

南方红豆杉组织培养研究Ⅰ.愈伤组织诱导和培养条件优化

介绍了南方红豆杉植物愈伤组织诱导和继代培养条件,在ＭＳ－培养基上,附加不同种类和浓度配比的激素,在光照条件下对植物愈伤组织的诱导率和生长量等进行了比较,其中当２,４－Ｄ１．２ ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ ２． ８ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ３ ｍｇ／Ｌ或 ４ ｍｇ／Ｌ时,愈伤组织诱导率和生长量最高,结果表明,不同激素组合对愈伤组织诱导率、生长量和发生的性状有明显的影响。为南方红豆杉植物细胞悬浮培养建立了基础,为解决红豆杉的资源贫乏提供了新途径。     

抗癌植物蔓生长春花的组织培养研究

首次成功地从不同培养基上诱导出蔓生长春花的愈伤组织。实验证明基本培养基ＭＳ比６，７Ｖ为佳。植物激素组合效应表明附加１．２ｍｇ／ＬＫＴ，１．０ｍｇ／ＬＮＡＡ以及１．０ｍｇ／Ｌ，２，４－Ｄ的ＭＳ培养基最有利于愈伤组织的诱导和生长。不同的外植体对愈伤组织的诱导和生长均有影响。愈伤组织再分化成完整植株亦获得成功。在含０．２ｍｇ／ＬＮＡＡ和２．０ｍｇ／Ｌ６ＢＡＭＳ分化培养基上诱导出芽和完整植株，诱导率高达９     

南方红豆杉的组织培养和紫杉醇的含量测定

在Ｂ５培养基上从南方红豆杉茎段和叶片外植体诱导形成愈伤组织。经过比较，确定Ｂ５＋ＮＡＡ３ｍｇ／ｌ＋ＢＡ０．１ｍｇ／ｌ增减基适合红豆杉愈伤组织的诱导和生长。ＨＰＬＣ测定结果表明，南方红豆杉愈伤组织中紫杉醇的含量为提取后干重的０．００８％。     

南方红豆杉愈伤组织培养及其紫杉烷二萜类成分的分析

目的研究南方红豆杉愈伤组织的出愈时间、诱导率、生长率、生长状态、褐变程度,比较愈伤组织中紫杉醇等5种紫杉烷二萜类成分的量。方法采用单因素比较、正交试验设计,研究影响南方红豆杉愈伤组织诱导和生长的各种因素;采用HPLC法测定不同来源愈伤组织中10-脱乙酰基巴卡丁Ⅲ(10-DAB)、巴卡亭Ⅲ、三尖杉宁碱、紫杉醇和东北红豆杉素5种紫杉烷二萜类成分的量;采用加权评分综合考虑以上各因素优选组织培养条件。结果外植体脱分化形成愈伤组织的能力,以完整叶片及茎段最好;暗培养有利于紫杉醇等5种萜类成分的富集;愈伤组织诱导的最适培养基为B5+2,4-D 3.0mg/L+6-BA 1.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L+KT 0.5 mg/L。结论南方红豆杉愈伤组织诱导、培养与外植体种类、培养基种类、光照有较大关联,紫杉醇等5种紫杉烷二萜类成分的富集受植物生长调节剂种类及浓度影响显著。     

南方红豆杉愈伤组织生长动力学及紫杉醇代谢动力学研究

目的通过愈伤组织细胞生长及其紫杉醇代谢动力学的研究,筛选确定南方红豆杉愈伤组织培养生产紫杉醇的最佳培养基配方与最佳收获期。方法以改良MS为基本培养基添加不同质量浓度的IBA、6-BA、GA3组合诱导培养南方红豆杉愈伤组织,通过测定愈伤组织鲜质量进行生长动力学研究,采用HPLC法检测不同生长阶段愈伤组织中紫杉醇的积累量,进行紫杉醇代谢动力学研究。结果改良MS+0.2 mg/L IBA+0.05 mg/L 6-BA+0.3 mg/L GA3、MS+0.2 mg/L IBA+0.01mg/L 6-BA+0.7 mg/L GA3及MS+0.2 mg/L IBA+0.1 mg/L 6-BA+0.5 mg/L GA3培养条件均较有利于南方红豆杉愈伤组织的诱导培养,且紫杉醇的积累量也较高,最高可达0.037 76%。结论在添加IBA及6-BA的基础上适当增补GA3可使南方红豆杉愈伤组织诱导提前启动,缩短出愈时间,促进生长,降低褐变程度,增加愈伤组织中紫杉醇的积累量。愈伤组织的生长曲线呈S型,紫杉醇的积累呈线型增加,是一个逐渐积累的过程,但积累到一定程度就不再增加,且伴随着愈伤组织不断褐变。     

延龄草组织培养研究

目的：探索延龄草Ｔｒｉｌｉｕｍｔｓｅｈｏｎｏｓｋｉ组织培养繁殖技术，为保护和利用这一珍贵药用植物提供新的技术途径。方法：以ＭＳ培养基为基本培养基，附加不同浓度的ＢＡ，ＩＡＡ，ＮＡＡ，玉米素，对不同器官，不同取材时期的延龄草外植体进行愈伤组织诱导和芽分化研究。结果：ＢＡ和ＩＡＡ有利于延龄草愈伤组织的诱导。生长旺盛的根茎是较适宜的培养器官，其愈伤组织诱导频率达２１９％，且较容易分化根茎而形成植株。结论：组织培养繁殖延龄草是一种可行的、具有应用潜力的生物技术方法。而如何进一步提高愈伤组织分化小根茎的频率，是建立延龄草组培繁殖技术的关键。     

南方红豆杉外植体母株来源与培养基成分对愈伤组织生长和紫杉醇的影响

目的建立和优化获得量大而高紫杉醇愈伤组织的培养技术和方法。方法以山西陵川县野生和在西安栽培的南方红豆杉为材料,就最佳母株、外植体种类、基本培养基、植物激素种类及浓度对愈伤组织诱导、生长和紫杉醇的影响等因素进行了系统研究。结果幼茎外植体因诱导的愈伤组织时间早、频率高而最佳;培养基Y 5:M S 2,4-D 4.0 m g/L K IN 1.0 m g/L或B 5Ⅲ:B 5 2,4-D 3.0 m g/L K IN 0.1 m g/L Phe 0.1 m o l/L为最佳诱导愈伤培养基,其诱导频率高达100%。继代培养基中质量浓度2,4-D(0.5~3 m g/L)促进愈伤组织增殖;高质量浓度(8 m g/L)则有抑制作用。当2,4-D质量浓度适宜时,愈伤组织在B 5培养基上较在M S培养基上褐化轻、生长快。HPLC分析表明紫杉醇最高的继代培养基为M SⅢ,其紫杉醇质量分数高达干重的0.004%;野生母株幼芽来源的愈伤组织,其紫杉醇普遍高于栽培母株幼茎来源的愈伤组织。结论以5月份野生红豆杉幼茎为外植体,以Y 5或B 5Ⅲ为诱导培养基和继代培养基,继代8~10代,每代培养30~35 d;用M SⅢ培养基再培养1~2代,收获愈伤组织或细胞培养物,并从中提取紫杉醇是获得大量高紫杉醇愈伤组织的较佳培养程序。     

pH对红豆杉愈伤组织生长、PAL活性和紫杉醇含量的影响

目的 研究不同pH值对东北红豆杉和南方红豆杉愈伤组织生长和紫杉醇含量的影响。方法 采用不同pH值的B5培养基培养两种红豆杉愈伤组织,测定生长率、PAL活性和紫杉醇含量。结果 不同红豆衫愈伤组织所需最适pH值不同,而有利于愈伤组织生长的pH值均不利于PAL活性的提高和紫杉醇的积累。即：愈伤组织生长快时,PAL活性将下降,紫杉醇含量也减少。结论 pH值明显影响红豆杉愈伤组织的生长及次级代谢水平,从而影响了紫杉醇的合成与积累。     

不同种类红豆杉愈伤组织的诱导及紫杉醇含量的差异

研究云南红豆杉、东北红豆杉、红豆杉、南方红豆杉和杂种红豆杉形成愈伤组织的一些因素,比较不同植株来源的愈伤组织系的生长特点和紫杉醇含量。通过考察愈伤组织形成的时间和比率来研究取样时间、当照条件、培养基中２,４－Ｄ浓度和外植体类型对愈伤组织诱导的影响,用高效液相色谱法测定愈伤组织中紫杉醇含量,愈伤组织形成的迟早和比率在不同种类红豆杉之间和同一种类不同植株之间差异较大,在黑暗中,在添加有０．１ｍｇ／ＬＢ     

凹叶厚朴细胞悬浮培养的研究

目的研究凹叶厚朴MagnoliaofficinalisRehd.etils.Subsp.biloba（Rehd.etwils.）Law的细胞悬浮培养。方法以凹叶厚朴茎段诱导的愈伤组织为材料,应用L9（34）正交设计研究植物生长调节剂对凹叶厚朴悬浮细胞生长的影响,通过单因素试验,考察初始接种量、蔗糖浓度、pH值对凹叶厚朴悬浮细胞生长的影响。结果植物生长调节剂6-BA是影响凹叶厚朴悬浮细胞生长的主要因素;最佳初始接种量为8ml;最佳蔗糖浓度为30g/L;最佳pH值为6.5时。结论初步建立了适合凹叶厚朴悬浮细胞培养的体系。     

芫荽腋芽再生植株和快速繁殖的研究

研究了影响腋芽再生植株与快速繁殖的不同激素组合。结果表明合适配比的激数组合对愈伤组织诱导、芽的分化和快繁均有增效作用，有效诱导其愈伤组织、芽分化、生根和快繁的培养基依次为：0．7mg／L（下略）6－BA＋0．1KT＋1．5NAA＋MS；0．15NAA＋6－BA、KT与ZT各0．5＋MSB（由MS的无机成分与B5的有机成分组成）；0．2NAA＋1／2MS和0．66－BA＋0．2NAA＋MS。建立了芫荽无性系快繁系统。     

天山雪莲愈伤组织培养与次生代谢物形成的研究

目的:研究不同培养条件对天山雪莲愈伤组织生长及总黄酮产生的影响,探讨组织培养生产总黄酮的可能性.方法:通过脱分化培养获得天山雪莲愈伤组织,并对该组织含有的总黄酮进行测定.结果:在MS NAA 6-BA培养基上培养10～15d,能获得紫红色愈伤组织,且总黄酮含量较高;温度梯度、NH4NO3浓度、培养基和培养时间对愈伤组织的生长和总黄酮产生均有显著影响.结果:天山雪莲愈伤组织培养条件对总黄酮产生有影响.     

南方红豆杉芽愈伤组织的诱导和培养

目的 为研究南方红豆杉芽愈伤组织诱导条件、最适培养基组成成分和紫醇含量的积累。方法 以南方红豆杉芽为外植体,在MS培养基上,试验不同种类、不同浓度的激素及其组合对愈伤组织诱导的影响。结果 芽诱导的最适培养基是MS添加2,4－D2.0mg/L和NAA0.5mg/L。对愈伤组织的增强、驯化和紫杉醇含量的积累则以B5添加2,4－D 0.5mg/L、NAA1.0mg/L和KT0．5mg/L为最佳。结论 本研究为植物组织细胞培养生产紫杉醇提供实验依据。     

中华芦荟组织培养物的芦荟素含量测定

以中华芦荟的根、茎、叶为外植体,探讨了诱导的愈伤组织与芦荟素积累的关系.分别用薄层色谱法和高效液相色谱法测定.结果表明,在MS NAA 1 mg/L 6-BA 0.5 mg/L培养基上,以叶为外植体产生的愈伤组织,分化程度最高,芦荟素含量也高(0.35%);以茎为外植体产生的愈伤组织,芦荟素含量次之(0.08%);以根为外植体产生的愈伤组织不含芦荟素.在MS 2,4-D 1 mg/L 6-BA 0.5 mg/L培养基上,以根、茎、叶为外植体产生的愈伤组织,分化程度低,均不含芦荟素.     

青叶胆组织培养条件优化及不同交配方式子代植株再生能力比较研究

目的优化青叶胆Swertia mileensis组织培养快速繁殖技术,同时比较不同交配方式后代植株的再生能力,从而探讨青叶胆片断化居群繁殖保障机制。方法以自交、近交、远交和自然结实种子为材料,相同方法消毒后接种于空白MS培养基上,60 d后统计各组萌发率;在此基础上,以各组无菌苗带节茎段为外植体,采用正交试验考察不同来源外植体在添加不同植物激素及质量浓度组合的MS培养基中诱导愈伤组织及丛芽分化能力。结果自交、近交、远交和自然结实种子萌发率之间无显著性差异(P0.05);适宜的愈伤组织诱导培养基为MS+ZT 0.5 mg/L+2,4-D 0.05 mg/L,在此培养条件下,自交、近交、远交和自然结实种子苗带节茎段愈伤组织诱导率分别达100%、96.67%、96.55%和96.29%,各组间无显著性差异;适宜的丛芽发生培养基为MS+BA 2.0 mg/L+KT 0.1 mg/L+NAA 1.0 mg/L,4种来源不同的愈伤组织丛芽分化率均为100%;生根则在1/2 MS+NAA 1.0 mg/L中进行,4种来源不同的试管苗生根率均为100%,生根苗在生长势上亦无明显差别。结论优化的青叶胆组织培养快速繁殖技术,为保护其野生资源、种苗繁殖提供了有效途径,同时从植物生理学角度初步推测青叶胆近交的获益可以补偿与近交相伴的适合度损失,其后代植株在再生能力方面与异交无显著差异。     

刺五加的微乳液毛细管电动色谱指纹图谱研究

目的:在比较毛细管胶束电动色谱(MEKC)和毛细管区带电泳后(CZE)采用微乳液毛细管电动色谱法对刺五加进行指纹图谱的研究。方法:以1.0%(w/w)SDS,6.6%(w/w)正丁醇,0.7%(w/w)正庚烷,25 mmol/L硼砂溶液(91.6%,w/w,pH 9.5)的微乳液为运行介质,波长为222 nm。结果:与毛细管区带电泳、毛细管胶束电动色谱相比,微乳液毛细管电动色谱对刺五加提取物中的复杂组分具有很好的分离能力;指纹图谱中标定了12个指纹峰,重现性、稳定性和方法的精密度较好。结论:微乳液毛细管电动色谱指纹图谱对刺五加的质量控制优于MEKC和CZE法。     

培养条件对罗布麻愈伤组织中金丝桃苷和异槲皮苷积累的影响

目的 探究促进罗布麻愈伤组织积累金丝桃苷、异槲皮苷的培养条件.方法 以罗布麻无菌苗子叶为材料,在诱导培养基上诱导愈伤组织并继代,探索不同激素配比、培养基碳源、氮源和盐浓度对罗布麻愈伤组织生长率和金丝桃苷、异槲皮苷积累的影响.结果 (1)孵育在MS+0.5 mg/L KT+0.5 mg/L NAA培养基上的愈伤组织中,金丝桃苷、异槲皮苷含有量最高,分别为6.12 mg/g、7.23 mg/g;(2)培养基碳源为2.0 mg/L蔗糖+2.0 mg/L葡萄糖时,有利于愈伤组织中金丝桃苷、异槲皮苷的积累,两种成分分别为7.45 mg/g、8.69 mg/g,是植物叶片的1.24倍和1.22倍;(3)当培养基氮源为2 475 mg/L NH4NO3,0 mg/L KNO3时,金丝桃苷、异槲皮苷含有量均最高,分别为8.67 mg/g、9.86 mg/g,是植物叶片的1.44倍和1.38倍;(4)培养基中添加150 mmol/L NaCl时,愈伤组织中金丝桃苷、异槲皮苷含有量最高,分别为10.07 mg/g、11.15 mg/g,是植物叶片的1.67倍和1.56倍.结论 通过改变培养条件,可以促进罗布麻愈伤组织中金丝桃苷和异槲皮苷的积累,为进一步以罗布麻愈伤组织为材,工业化生产金丝桃苷和异槲皮苷这两种重要的药效成分奠定基础.     

药用甘薯西蒙1号胚状体的诱导及植株再生

甘薯西蒙１号的叶片在ＭＳ＋２,４－Ｄ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＡＢＡ５ｍｇ／Ｌ的培养基上易于诱导出愈伤组织,来源于叶片的愈伤分为胚性和非胚性,ＮＥＣ的增殖速度大于ＥＣ,继代培养时应及时将两种愈伤组织剥离才能保证ＥＣ的增殖。