温化蠲痹方对胶原诱导性大鼠滑膜缺氧诱导因子表达的影响

目的:研究中药温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠滑膜缺氧诱导因子(HIF)表达的影响,探讨温化蠲痹方治疗CIA作用机理。方法:选用健康雄性Wistar大鼠,随机分为正常对照组(n=10,简称正常组)和造模组。造模组采用颈、背部5个部位皮内多点注射BCⅡ乳剂的方法进行免疫,建立CIA模型。再选取造模成功大鼠30只随机分为模型组(n=10)、温化蠲痹方组(中药组,n=10)和MTX组(n=10)。采用容积法(排水体积)和计分法分别评价足趾肿胀度和关节炎症程度。分别灌胃给药:中药组给予温化蠲痹方,剂量为22.9 g/kg,每天1次;正常组和模型组给予等量生理盐水,每天1次;MTX组给予MTX混悬液,剂量为0.78 mg/kg,每周1次。治疗30 d后处死,取各组膝关节滑膜及血清。采用免疫组化法检测滑膜HIF表达水平。结果:1AI评分显示:与正常组比较,模型组、中药组大鼠AI评分明显升高,差异均有统计学意义(P0.01);与模型组比较,在第18天,中药组大鼠AI评分差异无统计学意义(P0.05);与治疗前比较,33 d后中药组大鼠AI评分明显降低,差异有统计学意义(P0.01)。2与正常组比较,模型组大鼠滑膜HIF表达显著增加,差异有统计学意义(P0.01);与模型组比较,中药组、MTX组HIF表达显著减少,差异有统计学意义(P0.01)。中药组和MTX组之间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:CIA大鼠滑膜HIF表达水平升高,温化蠲痹方可能通过下调HIF表达,而抑制CIA大鼠血管翳生成,从而治疗CIA。     

温化蠲痹方对胶原诱导性大鼠滑膜血管内皮生长因子表达的影响

目的:研究中药温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠滑膜血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨温化蠲痹方治疗CIA的作用机制。方法:选用健康雄性Wistar大鼠,随机分为造模组、正常对照组(10只,简称正常组),造模组采用牛Ⅱ型胶原乳剂于大鼠尾根部注射,建立CIA模型。再选取造模成功大鼠30只随机分为模型组(10只)、MTX组(10只)、温化蠲痹方组(10只,简称中药组)。中药组给予温化蠲痹方22.9 g/(kg·d)灌胃,模型组灌胃生理盐水,均每天1次,MTX组按0.78mg/kg剂量灌胃MTX混悬液,每周1次,连续30天。给药结束后,运用免疫组化法检测大鼠滑膜VEGF水平。结果:与模型组比较,治疗后中药组和MTX组大鼠关节炎指数(AI)评分明显降低(P<0.01);与治疗前比较,中药组和MTX组大鼠AI评分均明显降低(P<0.01)。与正常组比较,模型组大鼠滑膜VEGF表达水平明显升高(P<0.01);与模型组比较,中药组和MTX组大鼠滑膜VEGF表达水平明显降低(P<0.01),中药组和MTX组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:中药温化蠲痹方可能通过下调CIA大鼠滑膜VEGF水平,抑制血管翳形成而治疗CIA。     

温化蠲痹方诱导胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡的研究

目的：研究中药温化蠲痹方诱导胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠滑膜细胞凋亡作用。方法：选用健康雄性Wistar大鼠,随机分为正常对照组（n=10,简称正常组）、造模组,造模组采用牛Ⅱ型胶原乳剂于大鼠尾根部注射,建立CIA模型。造模成功后随机分为模型组（n=10）、温化蠲痹方组（n=10,简称中药组）、MTX组（n=10）。正常组、模型组、中药组按22.9g·kg-1·d-1剂量分别灌胃生理盐水、温化蠲痹方,均每日1次,MTX组按0.78mg·kg-1·w-1剂量灌胃MTX混悬液,每周1次。给药30天后,运用透射电镜和流式细胞术检测大鼠滑膜细胞凋亡。结果：与模型组比较,治疗后中药组和MTX组大鼠关节炎指数（AI）评分明显降低（P〈0.01）;与治疗前比较,中药组和MTX组大鼠AI评分均明显降低（P〈0.01）。透射电镜显示,中药组大鼠滑膜细胞凋亡较模型组大鼠滑膜细胞凋亡明显。流式细胞术检测显示,与正常组比较,模型组大鼠滑膜细胞凋亡率明显降低（P〈0.05）;与模型组大鼠比较,中药组和MTX组大鼠滑膜细胞凋亡率明显升高（P〈0.01）。结论：CIA大鼠滑膜细胞凋亡减少,诱导滑膜细胞凋亡可能是中药温化蠲痹方治疗CIA的作用机制之一。     

温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜基因表达谱的影响

目的 研究中药温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠滑膜基因表达谱的影响,探讨其治疗CIA的作用机制。方法 选用健康雄性Wistar大鼠40只,采用大鼠尾根部注射牛Ⅱ型胶原乳剂的方法建立CIA模型。选取造模成功的16只大鼠随机分为模型组和中药组,每组8只。中药组给予温化蠲痹方22.9 g/（kg·d）灌胃,模型组以生理盐水灌胃,均每天1次,连续30天。给药结束后,提取两组大鼠滑膜总RNA,运用Illumina基因表达谱芯片分析每个样本基因变化。结果 与模型组比较,温化蠲痹方干预后大鼠滑膜差异表达基因有222条,其中上调基因76条,如防御素3b（RatNP-3b）等;下调基因146条,如血管生成素样蛋白2(Angptl 2)、黏蛋白1（Muc1）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（bcl-2）等。差异表达基因主要涉及细胞凋亡、血管生成素、防御素基因、细胞因子、信号转导、癌基因等。结论 中药温化蠲痹方可能通过对多基因表达进行调控,从而发挥多靶点治疗CIA的作用。     

温化蠲痹方对CIA大鼠外周血TNF-α IL-1β的影响

目的：研究中药温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠外周血TNF-α、IL-1β的影响,探讨温化蠲痹方治疗CIA的作用机制。方法：选用健康雄性Wistar大鼠,随机分为造模组、正常对照组（10只,简称正常组）,造模组采用牛Ⅱ型胶原乳剂于大鼠尾根部注射,建立CIA模型。再把造模组随机分为模型组（10只）、MTX组（10只）、温化蠲痹方组（10只,简称中药组）。正常组、模型组、中药组按22.9g/kg剂量分别灌胃生理盐水、温化蠲痹方,均每日1次,MTX组按0.78mg/kg剂量灌胃MTX混悬液,每周1次。给药30天后,运用ELISA法检测大鼠外周血TNF-α、IL-1β水平。结果：与模型组比较,治疗后中药组和MTX组大鼠关节炎指数（AI）评分明显降低（P〈0.01）;与治疗前比较,中药组和MTX组大鼠AI评分均明显降低（P〈0.01）。与正常组比较,模型组大鼠外周血TNF-α、IL-1水平明显升高（P〈0.01）;与模型组比较,中药组和MTX组大鼠外周血TNF-α、IL-1水平明显降低（P〈0.01）,两组之间比较差异无显著性（P〉0.05）。结论：CIA大鼠外周血TNF-α、IL-1水平升高,降低CIA大鼠外周血TNF-α、IL-1水平可能是中药温化蠲痹方治疗CIA的作用机制之一。     

温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞 miRNA-146a、TRAF6、IRAK1 基因表达的影响

目的 研究温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠成纤维样滑膜细胞（FLS）微小 RNA-146a（miRNA-146a）、肿瘤坏死因子受体相关因子 6（TRAF6）、白细胞介素-1 受体相关激酶 1（IRAK1）基因表达的影响。 方法 选用雌性 Wistar 大鼠 70 只，按随机数字表法分为正常组（10 只，生理盐水每天 1次）和造模组（60 只）。 造模组采用尾部皮内多点注射牛II型胶原乳剂的方法进行免疫，建立 CIA 模型。 造模成功后（40 只）用随机数字表法分为温化蠲痹方组（中药组，温化蠲痹方每天 22.9 g/kg，每天 1 次灌胃）、模型组（生理盐水 2 mL 每天 1 次灌胃）、甲氨蝶呤组（MTX 组，MTX 混悬液每周 0.78 mg/kg，每周 1 次灌胃）和温化蠲痹方加 MTX 组（中药加西药组，灌胃药物同中药组及 MTX 组），每组 10 只。 采用容积法（排水体积）和计分法分别评价足趾肿胀度和关节炎症程度。 治疗 30 天后处死大鼠，取各组膝关节滑膜，运用 HE染色，光镜下观察大鼠滑膜病理；采用 5 级评分法评定滑膜炎细胞浸润和滑膜细胞增生的程度；运用实时荧光定量 PCR 检测滑膜中 miRNA-146a、TRAF6、IRAK1 基因表达水平。 结果 与正常组比较，模型组大鼠足趾肿胀明显，滑膜炎性细胞浸润和增生程度明显（P<0.05）；模型组 miRNA-146a、TRAF6、IRAK1 基因表达明显升高（P<0.01）。 与模型组比较，中药组、MTX 组、中药加西药组足趾肿胀明显减轻，关节滑膜炎性细胞浸润和增生程度显著减轻，miRNA-146a、TRAF6、IRAK1 基因表达明显降低（P<0.05）。 与 MTX 组比较，中药加西药组 miRNA-146a、TRAF6、IRAK1 基因表达更低（P<0.05）。 结论 中药温化蠲痹方可能通过抑制成纤维样滑膜细胞 miRNA-146a、TRAF6、IRAK1 基因表达从而抑制 CIA 大鼠成纤维样滑膜细胞增生，发挥其抗炎作用。 MTX 加用温化蠲痹方比单纯 MTX 治疗效果更好。     

温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎大鼠VEGF表达的影响

目的:研究中药温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨温化蠲痹方治疗胶原诱导性关节炎(CIA)的作用机制。方法:健康雄性大鼠随机分为造模组(60只)、正常对照组(简称正常组,10只),造模组采用牛Ⅱ型胶原(BCⅡ)乳剂于大鼠尾根部及颈背部多点注射,建立CIA模型。造模成功后,选取30只造模成功大鼠随机分为模型组(10只)、甲氨喋呤(MTX)组(10只)、温化蠲痹方组(简称中药组,10只)。给药30天后,运用免疫组化法检测大鼠滑膜VEGF水平,观察各组大鼠足趾肿胀度。结果:与正常组比较,模型组、中药组和MTX组大鼠足趾肿胀明显,差异均有非常显著性意义(P0.01);与模型组比较,中药组和MTX组大鼠足趾肿胀明显减轻,差异均有显著性意义(P0.01);中药组与MTX组比较,差异无显著性意义(P0.05);与治疗前比较,中药组和MTX组大鼠足趾肿胀明显减轻,差异有非常显著性意义(P0.01)。与正常组比较,模型组大鼠滑膜VEGF表达水平明显升高(P0.01);与模型组比较,中药组和MTX组大鼠滑膜VEGF表达水平明显降低(P0.01),中药组与MTX组比较,差异无显著性意义(P0.05)。结论:降低CIA大鼠滑膜VEGF水平可能是中药温化蠲痹方治疗CIA的作用机制之一。     

温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎大鼠外周血单核细胞DNA甲基化转移酶表达的影响

目的观察温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎(collagen-inducing arthritis,CIA)大鼠外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)DNA甲基化转移酶(DNA methyltrsansferases,DNMTs)表达的影响,探讨温化蠲痹方治疗CIA的作用机制。方法将90只Wistar大鼠随机分为造模组(80只)及正常对照组(10只,简称正常组)。造模组在大鼠尾根部注射牛Ⅱ型胶原乳剂制备CIA模型。将造模成功的50只大鼠随机分为模型组、甲氨喋呤组(MTX)、温化蠲痹方低、中、高剂量组(简称中药低、中、高剂量组),每组10只。模型组给予生理盐水灌胃;中药低、中、高剂量组分别给予温化蠲痹方22.9、45.8、68.7 g/(kg·d)灌胃,均每日1次;MTX组按0.78 mg/kg剂量灌胃MTX混悬液,每周1次,连续30日。采用容积法(排水体积)评价足趾肿胀度。给药干预后提取各组大鼠PBMCs,采用实时定量PCR法检测PBMCs DNMTs(DNMT1、DNMT3a及DNMT3b)mRNA表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠足趾明显肿胀(P0.01);与模型组比较,中药低、中、高剂量组及MTX组大鼠足趾肿胀明显减轻(P0.01)。与本组治疗前比较,中药各剂量组及MTX组大鼠足趾肿胀减轻(P0.01)。与正常组比较,模型组大鼠PBMCs DNMT1、DNMT3a及DNMT3b表达明显降低(P0.01);与模型组比较,中药各剂量组及MTX组DNMT1、DNMT3a及DNMT3b表达水平明显升高(均P0.01);中药各剂量组DNMT1、DNMT3a及DNMT3b表达水平比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论 CIA大鼠PBMCs DNMTs表达降低。温化蠲痹方上调CIA大鼠PBMCs DNMTs表达无明显剂量依赖性。通过上调DNMTs表达,调节CIA大鼠甲基化状态可能是其治疗CIA作用机制之一。     

温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎小鼠滑膜增殖、凋亡及Hotair/Wnt1/β-catenin通路的影响

目的 以胶原诱导性关节炎（CIA）小鼠为实验对象进行体内实验，从Hotair/Wnt1/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路的角度，分析温化蠲痹方（WHJBD）对类风湿关节炎（RA)的干预机制。方法 选用雄性DBA/1J小鼠建立CIA模型，将造模成功小鼠按随机数字表法分为4组：模型组（CIA组）、温化蠲痹方组（WHJBD组）、甲氨蝶呤组（MTX组）、WHJBD+MTX组，每组6只。并随机选取同一批次的正常小鼠6只作为正常组。WHJBD组每天予WHJBD灌胃（25.78 g/kg）、MTX组每周予MTX灌胃（1.288 mg/kg）、WHJBD+MTX组同时予WHJBD及MTX灌胃，正常组及CIA组予同等剂量生理盐水灌胃，均持续4周。采用游标卡尺测量足掌和踝关节的肿胀程度并计算关节肿胀度，实时荧光定量PCR法检测各组Hotair、Wnt抑制因子1(WIF1)、C-myc、G1/S-特异性周期蛋白（CyclinD1）表达水平，免疫组化法检测Wnt1、β-catenin、肿瘤增殖抗原抗体（Ki-67）、Caspase3、B淋巴细胞瘤-2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白（Bax）蛋白表达...     

祛痹镇痛方对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜IL-1β、IL-8、VEGF表达的影响

目的研究中药祛痹镇痛方对胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)大鼠滑膜白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白介素-8(interleukin-8,IL-8)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响,探讨祛痹镇痛方治疗CIA的作用机制。方法选用健康雄性Wistar大鼠,随机分为造模组(50只)及正常对照组(正常组,10只),造模组采用牛Ⅱ型胶原(typeⅡcollagen of bovine,BCⅡ)乳剂于大鼠尾根部及颈背部多点注射,建立CIA模型。造模成功后,选取30只造模成功大鼠随机分为模型组(10只)、甲氨喋呤(methotrexate,MTX)组(10只)、祛痹镇痛方组(中药组,10只)。中药组大鼠按22.9g/kg剂量灌胃中药祛痹镇痛方,正常组、模型组灌胃等量生理盐水,每日1次,MTX组按0.78mg/kg剂量灌胃MTX混悬液,每周1次。给药30天后,运用免疫组化法检测大鼠滑膜IL-1β、IL-8、VEGF水平,并予给药前后进行关节炎指数(arthritis index,AI)评分。结果与模型组及本组治疗前比较,治疗后中药组和MTX组大鼠AI评分明显降低(P<0.01)。与正常组比较,模型组大鼠滑膜IL-1β、IL-8、VEGF表达水平明显升高(P<0.01);与模型组比较,中药组和MTX组大鼠滑膜IL-1β、IL-8、VEGF表达水平明显降低(P<0.01),中药组和MTX组组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论降低CIA大鼠滑膜IL-1β、IL-8、VEGF水平可能是中药祛痹镇痛方治疗CIA的作用机制之一。     

温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎大鼠N6-甲基腺苷甲基化的影响

目的 研究温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠炎症及N6-甲基腺苷(m6A)甲基化的影响。方法 选用雌性Wistar 大鼠 50 只,随机分为正常组(n=10)和造模组(n=40)。采用尾部皮内多点注射乳化剂的方法建立 CIA 模型。采用容积法(排水体积)和关节炎指数(AI)评分法对模型进行评估,足肿胀体积>1.6 mL、AI评分≥4分视为造模成功。将造模成功的 30只 CIA大鼠随机分为模型组(n=10)、温化蠲痹方组(中药组,n=10)、甲氨蝶呤(MTX)组(n=10)。中药组给予温化蠲痹方,剂量为 22.9 g·kg^-1·d^-1;MTX 组给予甲氨蝶呤混悬液,剂量为 0.78 mg·kg^-1,每周 1 次;正常组和模型组给予等量质量分数为 0.9% 的氯化钠溶液,每日 1次。治疗 30 d取各组大鼠膝关节滑膜。采用 HE染色法检测滑膜病理情况,以 realtime PCR 法检测滑膜中甲基转移酶样蛋白 3(Mettl3)、甲基转移酶样蛋白 14(Mettl14)、肥胖相关蛋白(Fto)、Alkb 同系物...     

温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞凋亡的影响

目的?研究温化蠲痹方对微小核糖核酸-146a（miRNA-146a）/核因子κB（NF-κB）环路诱导胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠成纤维样滑膜细胞（FLS）凋亡作用及其相关分子机制。方法?选用雌性Wistar大鼠25只，按随机数字表法分为正常组（10只）和造模组（15只），造模组采用尾部皮内多点注射牛Ⅱ型胶原乳剂的方法进行免疫，建立CIA模型。在造模成功后（12只，造模成功率为80%）随机选取10只作为模型组，分别取正常大鼠和CIA大鼠的关节滑膜，用组织块培养法培养出原代FLS，培养至第3代进行干预实验。分别过表达、沉默miRNA-146a，并加入通路阻断剂和含药血清共培养，应用荧光定量聚合酶链式反应（RT-PCR）检测miRNA-146a、肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）、白细胞介素-1受体相关激酶1（IRAK1）基因表达；Western Blot法检测磷酸化核因子κB p65（NF-κB p65，p-p65）、核因子κB抑制因子α（IκBα）、增殖细胞核抗原（PCNA）、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3）蛋白表达；流式细胞术检测各组FLS凋亡；CCK-8法检测各组FLS增殖。结果?与正常组比较，模型组大鼠足掌厚度明显增加（P<0.01）；正常转染miRNA-146a组miRNA-146a、TRAF6、IRAK1基因表达及PCNA、p-p65蛋白表达增加，Caspase-3、IκBα蛋白表达及FLS凋亡率降低（P<0.05）；正常转染反义miRNA-146a组miRNA-146a、TRAF6、IRAK1基因表达及PCNA、p-p65蛋白表达降低，Caspase-3、IκBα蛋白表达及FLS凋亡率增加（P<0.05）。与CIA对照组比较，CIA转染miRNA-146a组TRAF6、IRAK1基因表达及PCNA、p-p65蛋白表达增加，Caspase-3、IκBα蛋白表达及FLS凋亡率降低（P<0.05）；CIA转染反义miRNA-146a组TRAF6、IRAK1基因表达及PCNA、p-p65蛋白表达降低，Caspase-3、IκBα蛋白表达及FLS凋亡率增加（P<0.05）。加入NF-κB通路阻断剂后，随着阻断时间延长及PCNA、p-p65蛋白表达降低，Caspase-3、IκBα蛋白表达增加（P<0.05）。与对照血清组比较，中药含药血清组细胞增殖率降低（P<0.05）。结论?温化蠲痹方可以通过miRNA-146a/NF-κB环路诱导FLS凋亡、抑制FLS增殖。     

温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎大鼠外周血单个核细胞微小RNA-146a表达的影响

目的:研究中药温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠外周血单个核细胞(PBMC)微小RNA-146a(miRNA-146a)表达的影响,探讨温化蠲痹方治疗CIA的作用机制。方法:选用健康雌性Wistar大鼠,随机分为造模组、正常对照组(10只,简称正常组),造模组采用牛Ⅱ型胶原乳剂于大鼠尾根部注射,建立CIA模型。再选取造模成功大鼠50只随机分为模型组(10只)、MTX组(10只)、温化蠲痹方低剂量组(n=10,简称中药1组)、温化蠲痹方中剂量组(n=10,简称中药2组)、温化蠲痹方高剂量组(n=10,简称中药3组)。中药1、2、3组分别给予温化蠲痹方22.9 g/kg·d、45.8 g/kg·d、68.7 g/kg·d灌胃,模型组灌胃生理盐水,均每天1次,MTX组按0.78 mg/kg剂量灌胃MTX混悬液,每周1次,连续30 d。采用容积法(排水体积)评价足趾肿胀度。给药结束后,提取各组大鼠外周单个核细胞,采用实时定量PCR法检测miRNA-146a表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠足趾肿胀明显,差异有统计学意义(P0.01);与模型组比较,中药1、2、3组和MTX组大鼠足趾肿胀明显减轻,差异有统计学意义(P0.01);与MTX组比较,中药1、2、3组大鼠足趾肿胀差异无统计学意义(P0.05);与治疗前比较,中药1、2、3组和MTX组大鼠足趾肿胀减轻,差异有统计学意义(P0.01)。与正常组比较,模型组大鼠PBMC miRNA-146a表达明显升高,差异有统计学意义(P0.01);与模型组比较,中药1、2、3组和MTX组大鼠PBMC miRNA-146a表达均明显降低,差异有统计学意义(P0.05);与MTX比较,中药1、2、3组大鼠PBMC miRNA-146a表达差异无统计学意义(P0.05);中药1、2、3组比较,大鼠PBMC miRNA-146a表达差异无统计学意义(P0.05)。结论:CIA大鼠PBMC miRNA-146a表达升高。中药温化蠲痹方下调CIA大鼠PBMC miRNA-146a表达无剂量依赖性,其可能通过下调miRNA-146a表达,而调节免疫细胞分化、信号转导等达到治疗CIA的作用。     

温化蠲痹方作用于鸟嘌呤释放蛋白1影响微小RNA-146a对胶原诱导性关节炎大鼠外周血单个核细胞DNA甲基化调控作用研究

目的:研究鸟嘌呤释放蛋白1(RASGRP1)在中药温化蠲痹方影响微小RNA-146a(miRNA-146a)对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠外周血单个核细胞(PBMC)DNA甲基化调控中的作用,探讨温化蠲痹方治疗CIA作用机制。方法:随机将健康雌性Wistar大鼠分为造模组和正常对照组(n=10,正常组),造模组在大鼠尾根部注射牛Ⅱ型胶原乳剂,建立胶原诱导性关节炎模型。30只造模成功大鼠随机分组如下:模型组(n=10)、甲氨蝶呤组(n=10,MTX组)及中药温化蠲痹方组(n=10,中药组)。中药组大鼠按22.9 g/(kg·d)灌胃中药温化蠲痹方,模型组给予生理盐水灌胃,两组大鼠都是每天1次,MTX组灌胃MTX混悬液(0.78 mg/kg),每周1次,共观察30 d。采用容积法(排水体积)评价足趾肿胀度。给药结束后,对正常组、模型组PBMC细胞培养,模型组加入ras-MARKs阻断剂,阻断剂①SB230580、阻断剂②PD98059、阻断剂③SP600125,模型组加中药,正常组转染miRNA-146a,模型组转染反义miRNA-146a。采用实时定量PCR法检测miRNA-146a、DNMTs(DNMT1、DNMT3a、DNMT3b)表达水平,Western Blot检测RASGRP1表达。结果:(1)与正常组比较,模型组大鼠足趾肿胀明显,差异有统计学意义(P0.01);与模型组比较,中药组和MTX组大鼠足趾肿胀明显减轻,差异有统计学意义(P0.01);MTX组与中药组比较,大鼠足趾肿胀差异无统计学意义(P0.05);与治疗前比较,中药组和MTX组大鼠足趾肿胀减轻,差异有统计学意义(P0.01)。(2)体内实验:与正常组比较,模型组大鼠外周血RASGRP1表达升高,差异有统计学意义(P0.01)。与模型组比较,中药组、MTX组RASGRP1表达降低,差异有统计学意义(P0.01)。中药组、MTX组之间比较,差异无统计学意义(P0.05)。体外实验:与正常组比较,模型组、正常转染miRNA-146a组PBMC RASGRP1表达升高,差异有统计学意义(P0.01)。与模型组比较,模型加中药组、模型转染反义miRNA-146a组RASGRP1表达降低,差异有统计学意义(P0.01)。与模型组比较,模型加阻断剂①组、加阻断剂②组、加阻断剂③组PBMC RASGRP1表达降低,差异有统计学意义(P0.01)。(3)相关性分析:模型组、模型加阻②、③、加中药组、转染miRNA-146a组、转染反义miRNA-146a组大鼠PBMC miRNA-146a表达水平与DNMT1、DNMT3a、DNMT3b呈显著负相关。结论:温化蠲痹方可能作用于RASGRP1影响ras-MARKs通路,发挥对微小RNA-146a调控CIA大鼠PBMC DNA甲基化作用,是其治疗胶原诱导性关节炎作用机制之一。     

温化蠲痹方对类风湿关节炎患者外周血TNFα-及IL-1β的影响

目的 观察中药温化蠲痹方治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的临床疗效及其减少西药用量及稳定病情作用,初步探讨中药温化蠲痹方治疗RA的机制。     

针刺联合温化蠲痹方治疗膝骨性关节炎临床观察

目的:观察针刺联合温化蠲痹方治疗膝骨性关节炎患者的临床疗效。方法:将膝骨性关节炎患者70例分成2组,观察组患者进行针刺联合温化蠲痹方治疗,对照组患者仅进行针刺疗法。观察并记录患者关节疼痛、晨僵、肿胀等评分,将总疗效及临床症状总积分作为主要指标,评价临床效果。结果:总有效率观察组94.3%,对照组77.1%。2组临床疗效比较,差异有显著性意义(P<0.05)。治疗后,2组疼痛、晨僵、肿胀、临床证候总积分分别比较,差异均有显著性意义(P<0.05)。结论:针刺联合温化蠲痹方及仅用针刺疗法治疗膝骨性关节炎均有效,但前者疗效更优,治疗后症状较后者轻,适合推广使用。     

温化蠲痹方治疗膝骨性关节炎临床研究

目的:观察温化蠲痹方治疗膝骨性关节炎的临床疗效。方法:将90例患者随机分为2组各45例,对照组采用美络昔康片和盐酸氨基葡萄糖胶囊口服,治疗组在对照组治疗的基础上加用温化蠲痹方治疗,均治疗3月。结果:总有效率治疗组为93.33%,对照组为84.44%,2组比较,差异有显著性意义(P0.05)。2组治疗前后疼痛、关节僵硬、生理功能、指数总积分等骨关节指数积分比较,差异均有显著性意义(P0.05);治疗后治疗组上述各项评分较对照组改善更显著,差异均有显著性意义(P0.05)。结论:温化蠲痹方治疗膝骨性关节炎疗效好,疗效肯定。     

温化蠲痹方对CIA大鼠外周血Th_1/Th_2细胞平衡的影响

目的：观察中药温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠外周血Th1/Th2细胞平衡的影响,探讨温化蠲痹方治疗CIA的作用机制。方法：采用牛Ⅱ型胶原乳剂于大鼠尾根部注射,建立CIA模型。随机分为模型组、MTX组、温化蠲痹方组,另设正常对照组,各组分别给药30天后,运用ELISA法检测各组大鼠外周血Th1/Th2细胞水平。结果：与模型组比较,中药组和MTX组大鼠关节炎指数（AI）评分明显降低（P=0.000）;与治疗前比较,中药组和MTX组大鼠AI评分均明显降低（P=0.006;P=0.009）。与正常组比较,模型组大鼠外周血IFN-γ/IL-4比值明显升高（P=0.000）;与模型组比较,中药组和MTX组大鼠外周血IFN-γ/IL-4比值明显降低（P值均为0.000）,两组之间比较差异无显著性（P=0.642）。结论：CIA大鼠外周血Th1/Th2细胞亚群失衡,恢复CIA大鼠外周血Th1/Th2细胞平衡可能是中药温化蠲痹方治疗CIA的作用机制之一。     

益肾蠲痹丸对肾虚胶原诱导性关节炎大鼠踝关节骨质破坏的影响

目的探讨益肾蠲痹丸改善骨质破坏的可能作用机制。方法将106只SD大鼠随机分为空白对照组10只、假手术组10只、肾虚关节炎组10只、肾虚关节炎+西药组10只、肾虚关节炎+中药组11只、关节炎组9只、关节炎+西药组10只、关节炎+中药组10只。肾虚关节炎组、肾虚关节炎+西药组、肾虚关节炎+中药组大鼠采用去卵巢和Ⅱ型胶原免疫诱导建立肾虚关节炎模型,关节炎组、关节炎+西药组、关节炎+中药组大鼠采用Ⅱ型胶原免疫诱导建立关节炎模型。关节炎+中药组和肾虚关节炎+中药组大鼠给予益肾蠲痹丸2.20 g/(kg·d)灌胃。关节炎+西药组和肾虚关节炎+西药组大鼠给予戊酸雌二醇0.092 mg/(kg·d)灌胃。每天1次,连续28天。给药后测定大鼠血清雌二醇(E2)含量,观察踝关节病理损伤情况,检测踝关节破骨细胞数量。结果关节炎组大鼠可见不同程度滑膜细胞增生,滑膜组织充血水肿,关节腔内有剥脱的关节软骨及滑膜组织。肾虚关节炎组大鼠可见骨小梁稀疏变细,间隙增大。关节炎+中药组及肾虚关节炎+中药组大鼠滑膜组织增生及滑膜组织充血水肿明显减轻,血管增生和浸润炎细胞数量及血管翳形成有不同程度减轻。与肾虚关节炎组比较,肾虚关节炎+西药组、肾虚关节炎+中药组大鼠破骨细胞数量减少,E2含量升高(P<0.05或P<0.01)。与关节炎组比较,关节炎+中药组大鼠破骨细胞数量降低,E2含量升高(P<0.05)。与肾虚关节炎+中药组比较,关节炎+中药组大鼠破骨细胞数量降低,E2含量升高(P<0.01)。结论肾虚可加重关节炎引起的骨质破坏,益肾蠲痹丸可以减轻关节炎及肾虚关节炎大鼠关节骨质破坏程度,可能与抑制踝关节局部破骨细胞的数量、升高血清E2含量有关。     

痹清胶囊对痛风性关节炎大鼠IL-1β、IL-8影响的实验研究

1实验材料 动物：Wistar大鼠，体重230～250g，雄性，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供。药物：痹清胶囊（稀莶草、金钱草、薏苡仁、黄柏、牛膝、丹参、土茯苓、蜂房等组成）O．5g／粒，由黑龙江中医药大学药理教研室提供；秋水仙碱片，西双版纳药业有限责任公司。IL-1β、IL-8试剂盒：均由上海森雄科技实业有限公司提供。