红景天苷对缺氧缺糖损伤的神经细胞线粒体膜电位和凋亡的影响

目的:观察红景天苷对神经细胞系SH-SY5Y细胞缺氧/缺糖损伤时线粒体膜电位和凋亡的影响.方法:四唑盐比色实验(MTT)检测线粒体活性,流式细胞术检测细胞凋亡百分率和线粒体膜电位,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死百分率.结果:缺氧/缺糖损伤2h可诱导SH-SY5Y细胞凋亡和坏死,分别为18.59%(P＜0.01)和4.94%(P＜0.01),形态学观察也发现SH-SY5Y细胞的染色质凝聚,核碎裂,凋亡小体产生,线粒体膜电位和活性分别降低29.17%(P＜0.01),38.80%(P＜0.01),随着缺氧/缺糖时间的延长,细胞凋亡的发生也越来越多,坏死的细胞也增多,线粒体膜电位和活性进一步下降;红景天苷能显著降低SH-SY5Y细胞凋亡及坏死的百分率,提高线粒体膜电位和活性,其作用随剂量增加而作用增加.结论:红景天苷可抑制缺氧/缺糖损伤所致的线粒体膜电位和活性的降低,从而具有稳定线粒体膜电位的作用,抑制神经细胞凋亡的发生.     

丹参素对缺氧/缺糖损伤的神经细胞线粒体膜电位和凋亡的影响

目的:观察丹参素对神经细胞SH-SY5Y缺氧/缺糖损伤时线粒体膜电位(MMP)和凋亡的影响。方法:将SH-SY5Y细胞分为5组:对照组、模型组、尼莫地平组及丹参素15、30mg/L组,给予相应处理后分别培养2、4、6、12h。四甲基偶氮唑盐(MTT)比色实验检测线粒体活性,流式细胞术检测细胞凋亡百分率和线粒体膜电位,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死百分率。结果:缺氧/缺糖损伤2h,模型组的线粒体活性和MMP水平较对照组显著降低(P<0.01),并随缺氧/缺糖损伤时间的延长而变化越显著。而细胞凋亡和坏死的百分率均较对照组显著升高(P<0.01),形态学观察也发现染色质凝聚,核碎裂,凋亡小体产生,随着缺氧/缺糖时间的延长,细胞凋亡的发生也越来越多,坏死的细胞也增多。丹参素能显著提高SH-SY5Y细胞线粒体膜电位和活性,降低细胞凋亡及坏死的百分率,其作用随剂量增加而作用增加。结论:丹参素可抑制缺氧/缺糖损伤所致的线粒体膜电位和活性的降低,从而具有稳定线粒体膜电位的作用,抑制神经细胞凋亡的发生。     

红景天苷对缺氧 缺糖损伤的神经细胞线粒体膜电位和凋亡的影响

目的：观察红景天苷对神经细胞系SH—SY5Y细胞缺氧／缺糖损伤时线粒体膜电位和凋亡的影响。方法：四唑盐比色实验（MTT）检测线粒体活性，流式细胞术检测细胞凋亡百分率和线粒体膜电位。荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死百分率。结果：缺氧／缺糖损伤2h可诱导SH—SY5Y细胞凋亡和坏死。分别为18．59％（P〈0．01）和4．94％（P〈0．01），形态学观察也发现SH—SY5Y细胞的染色质凝聚。核碎裂，凋亡小体产生，线粒体膜电位和活性分别降低29．17％（P〈0．01），38．80％（P〈0．01），随着缺氧／缺糖时间的延长，细胞凋亡的发生也越来越多，坏死的细胞也增多，线粒体膜电位和活性进一步下降；红景天苷能显著降低SH—SY5y细胞凋亡及坏死的百分率，提高线粒体膜电位和活性，其作用随剂量增加而作用增加。结论：红景天苷可抑制缺氧／缺糖损伤所致的线粒体膜电位和活性的降低，从而具有稳定线粒体膜电位的作用，抑制神经细胞凋亡的发生。     

三七皂甙Rb1对大鼠慢性阻塞性肺疾病线粒体的防护作用

目的探讨三七皂甙Rb1对大鼠慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)线粒体的保护作用及作用机理。方法将40只大鼠随机分为4组,分别为对照组、COPD组、Rb1 10 mg/kg组和Rb1 20 mg/kg组。用烟熏法复制COPD大鼠模型,用低温差速离心法提取肺脏组织线粒体,紫外分光光度法测定肺脏线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的活性及ATP合酶活性。用荧光分光光度计测量肺脏线粒体的膜电位,采用荧光标记与荧光偏振法测定线粒体膜偏振度,计算膜的微黏度。ELISA法检测肺脏线粒体分泌型磷脂酶A2(secretory phospholipase A2,s PLA2)的活性。结果 COPD组降低线粒体膜电位,增加膜的偏振度、微黏度,降低膜的流动性。Rb1组显著增加呼吸链复合体Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ的活性(P0.01),提高ATP合酶活性(P0.01)。生物物理学证实Rb1组增加线粒体膜电位,减低膜的偏振度、微黏度,增加膜的流动性。Rb1 10 mg/kg和Rb1 20 mg/kg组均抑制s PLA2活性的升高(P0.05,P0.01)。结论三七皂甙Rb1通过保护大鼠肺脏线粒体结构与功能而起到防治COPD的作用。     

清开灵注射液对缺氧/缺糖再给氧损伤时神经细胞线粒体膜电位的保护作用

目的:以缺氧/缺糖再给氧为模型,观察清开灵注射液对神经细胞线粒体膜电位的保护作用。方法:四唑盐比色实验(MTT)检测细胞线粒体活性,激光共聚焦扫描显微镜检测细胞内游离钙离子含量([Ca²⁺]i),流式细胞术检测细胞凋亡百分率和线粒体膜电位。结果:缺氧-缺糖5 h再给氧3 h时,细胞内[Ca²⁺]i和细胞凋亡率明显增加,并随再给氧时间的延长而明显增高,线粒体膜电位和活性明显降低,并随再给氧时间的延长而进一步下降,清开灵注射液能显著降低细胞内[Ca²⁺]i浓度,抑制细胞凋亡的发生,提高线粒体膜电位和活性,与缺氧-缺糖再给氧组相比均有显著性差异(P<0.05,<0.01)。结论:清开灵注射液可抑制缺氧-缺糖再给氧损伤所致的线粒体膜电位的降低,从而具有稳定线粒体膜电位的作用,抑制细胞凋亡的发生,而对海马神经细胞起到保护作用,这种作用可能与其能抑制神经细胞内钙超载有关。     

灯盏细辛对谷氨酸致神经细胞凋亡的影响及其作用机制

目的观察灯盏细辛对谷氨酸致神经细胞凋亡的影响,并探讨其部分作用机制。方法培养PC12细胞,用谷氨酸诱导建立神经细胞损伤模型。应用流式细胞仪观察灯盏细辛对PC12细胞凋亡和细胞内Ca2+浓度的影响,用逆转录多聚酶联反应(RT-PCR)检测抑凋亡基因Bcl-2的表达,用罗丹明123荧光染色法检测细胞线粒体膜电位(MMP)水平。结果灯盏细辛能够抑制谷氨酸诱导的细胞凋亡,降低细胞内Ca2+浓度,升高线粒体膜电位。结论灯盏细辛可能通过抑制细胞凋亡而起到保护神经元的作用,其作用机制可能与增高线粒体膜电位、减低细胞内Ca2+浓度有关。     

线粒体在肝细胞凋亡中的作用及中药对其保护作用

肝细胞凋亡在肝纤维化中有着非常重要的作用,而许多促细胞凋亡信号作用于线粒体,能够改变线粒体通透性,继而导致其蛋白释放入胞质,由此构成线粒体介导的凋亡途径.中药及其有效成分能够从抗氧化、稳定线粒体膜流动性、抑制线粒体膜通透性转变及维持线粒体膜电位稳定等方面发挥线粒体保护作用,从而减少肝细胞的凋亡而发挥抗肝纤维化的作用.现就肝细胞凋亡的线粒体途径及中药保护进行综述.     

黄芪多糖抗心肌缺血再灌注损伤的线粒体机制研究

目的:通过观察黄芪多糖对缺血再灌注损伤大鼠心肌线粒体膜电位、膜通透性转换孔(mPTP)活性及钙离子浓度等指标的影响,以探索黄芪多糖产生心肌保护作用的线粒体机制。方法:健康成年SD雄性大鼠35只分为假手术组、缺血再灌注组、黄芪多糖预处理组、黄芪多糖后处理组、阳性药物腺苷对照组各7只,采用冠状动脉结扎的方法建立大鼠心肌缺血模型,测定心肌线粒体膜电位、线粒体膜通透性转换孔(mPTP)活性、线粒体钙离子浓度及ROS水平等指标。结果:与假手术组比较,缺血再灌注损伤组线粒体膜电位、mPTP的开放程度、线粒体钙离子浓度及ROS水平均显著升高,而经黄芪多糖处理后线粒体膜电位、mPTP的开放程度、线粒体钙离子浓度及ROS水平明显降低。结论:黄芪多糖可通过减轻钙超载,减少ROS产生,降低膜电位水平及抑制mPTP过度开放,从而减轻缺血再灌注损伤对线粒体膜结构的破坏,保护线粒体功能,进而保护心脏舒缩功能。     

基于线粒体功能障碍探讨中医药治疗心肌缺血再灌注的研究思路

线粒体功能障碍可引起线粒体ATP生成减少、Ca2+超载、线粒体跨膜电位下降、活性氧(ROS)生成及线粒体膜通透性增加,最终导致细胞凋亡,从而加重MIRI损伤。因此,在治疗中通过保护线粒体结构及功能的完整性,增加ATP生成,提高线粒体膜电位,降低线粒体膜通透性转化,防止钙超载等对减轻MIRI损伤具有重要意义。中医药具有多组分、多靶点及整体调节的优势特点,其能够抑制钙超载,减少ROS产生及降低膜电位水平等多重治疗,从而减轻线粒体膜结构的破坏,为MIRI损伤后线粒体的整体保护及寻找更有效的治疗策略提供新的方向和新的靶点。笔者拟对心肌缺血再灌注损伤后线粒体结构的改变及中医药对其调节作用机制进行综述。     

再灌注致大鼠心肌生物膜损伤及益心康胶囊的保护作用

目的：观察再灌注对心肌生物膜的损伤,评价中药复方－益心康胶囊（H303）对生物膜保护作用。方法：利用离体大鼠全心停灌／再灌（I／R）模型,预先灌注H303（0．2,0．1mg/mL,灌注10min),观察对MDA、磷脂酶A2、磷脂、游离脂肪酸、膜脂流动性、ATPase及线粒体呼吸功能的影响。结果：I／R可导致离体大鼠心脏生物膜产生严重损伤。H303可通过减轻大鼠心肌组织脂质过氧化程度、抑制PLA2活性、升高线粒体磷脂含量、降低FFA水平、改善膜脂流动性、保护线粒体Ca^2 -ATPase及肌纤维膜的Na^ ,K^ -ATPase活性及改善线粒体呼吸功能等作用而发挥抗损作用。结论：H303对离体大鼠心肌再灌注损伤具有保护作用。     

三七总皂苷对大鼠海马神经细胞缺氧缺糖再给氧损伤的保护作用

目的观察三七总皂苷对大鼠海马神经细胞缺氧缺糖再给氧损伤的保护作用.方法建立缺氧/缺糖再给氧模型,模拟缺血再灌注损伤.流式细胞术检测凋亡细胞百分率,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死细胞百分率,同时,测定细胞乳酸脱氢酶(LDH)的漏出和一氧化氮(NO)的产生量.结果神经细胞缺氧/缺糖5h后再给氧可诱导神经细胞凋亡和细胞坏死,并显著增加LDH的漏出和NO的产生,并随再给氧时间的延长而增加.三七总皂苷能降低神经细胞凋亡及坏死的百分率,减少LDH的漏出和NO的过量产生,三七总皂苷的作用随剂量增加而增加.结论三七总皂苷具有拮抗海马神经细胞凋亡的作用,这种作用可能与降低或抑制一氧化氮合酶(NOS)活性,减少NO的过量产生有关.     

高糖高脂诱导脐静脉内皮细胞凋亡及对线粒体膜电位的影响

[目的]明确糖基化终末产物(AGEs)和氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)联合诱导内皮细胞凋亡及其作用机制。[方法]以AGEs和ox-LDL联合作用人脐静脉内皮细胞24 h,hochest33258染色后观察凋亡,Rhodamin123染色后流式细胞术检测线粒体膜电位。[结果]研究表明AGEs和ox-LDL共同作用可增加内皮细胞的凋亡率,降低内皮细胞线粒体膜电位。[结论]提示高糖高脂促进内皮细胞凋亡,可能和降低线粒体膜电位有关。     

定心方对大鼠缺氧及正常心肌细胞内钙、膜电位和线粒体膜电位的影响

目的：探讨定心方（DXR）抗心律失常的分子机理。方法：采用胰蛋白酶法分离培养心肌细胞，用不同荧光染料分别标记细胞，在激光共聚焦显微镜上测定DXR血清对心肌细胞内钙[Ca^2+]i、膜电位（MP）和线粒体膜电位（MMP）的变化。结果：缺氧使心肌细胞[Ca^2+]i和MMP升高，而使MP降低，DXR血清降低了正常和缺氧心肌细胞[Ca^2+]i,改善了缺氧引起的MP降低，使缺氧状态下MMP保持在基线水平。结论：DXR能通过抑制缺氧引起的[Ca^2+]i和MMP升高，及拮抗缺氧所致的MP降低，从而发挥保护心肌细胞，防治心律失常的作用。     

红景天苷对缺氧/缺糖损伤神经细胞的保护作用

目的 :以SH-SY5Y细胞缺氧 /缺糖损伤为模型 ,观察红景天苷对神经细胞保护的作用。方法 :流式细胞术检测细胞凋亡百分率及细胞内 [Ca²⁺ ]i浓度 ,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死百分率 ,用试剂盒显色法测定LDH的含量。结果 :缺氧 /缺糖损伤 2h可诱导神经细胞凋亡和坏死 ,分别为 18.5 9% (P<0.01)和 4 .94 % (P<0.01)。形态学观察也发现大量神经细胞染色质凝聚 ,核碎裂 ,凋亡小体产生 ,并显著增加细胞内 [Ca²⁺ ]i浓度和LDH的释放 ,分别为 8.46nmol·L^-1(PP<0.01)和 16 .5 9% (P<0.01) ,并随缺氧 /缺糖损伤时间的延长而明显增高 ;红景天苷 (1～ 3μmol·L^-1)能显著降低神经细胞凋亡及坏死的百分率 ,降低细胞内 [Ca²⁺ ]i浓度 ,减少LDH的释放 ,其作用随剂量增加而作用增强。结论 :红景天苷具有抑制SH-SY5Y细胞凋亡的作用 ,可对神经细胞起到保护作用 ,这种作用可能与其降低细胞内 [Ca²⁺ ]i浓度有关。     

三七总皂苷抗缺氧缺糖再给氧诱导大鼠海马神经细胞凋亡的研究

目的 :以原代培养的大鼠海马神经细胞缺氧 /缺糖再给氧为模型 ,观察三七总皂苷对神经细胞凋亡的抑制作用。方法 :流式细胞仪检测凋亡细胞百分率 ,激光共聚焦扫描显微镜检测细胞内Ca²⁺浓度 ,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死细胞百分率 ,同时 ,测定细胞乳酸脱氢酶 (LDH)的释放。结果 :神经细胞缺氧 /缺糖 5h后再给氧可诱导神经细胞凋亡和细胞坏死 ,并显著增加细胞内Ca²⁺浓度和LDH的释放 ,并随再给氧时间的延长而增加。三七总皂苷能降低神经细胞凋亡及坏死的百分率 ,降低细胞内Ca²⁺浓度 ,减少LDH的释放 ,三七总皂苷的作用随剂量增加而作用增强。结论 :三七总皂苷对缺血再灌注损伤后海马神经元的凋亡过程具有抑制作用 ,这种作用可能与其能降低细胞内Ca²⁺浓度有关。     

通塞脉微丸和丁基苯酞对PC12细胞缺氧缺糖损伤模型的保护作用

目的探讨通塞脉微丸和丁基苯酞对PC12细胞缺氧缺糖损伤模型的保护作用。方法以肾上腺嗜铬瘤克隆化细胞株PC12细胞为材料，制备缺氧、缺糖损伤模型：MTT法测定PC12细胞存活数及乳酸脱清酶法测定细胞损伤程度。结果形态学检查发现，通塞脉微丸和丁基苯酞对两种损伤模型中的PC12细胞具有明显保护作用，MTT染色和乳酸脱氢酶活性测定显示，通塞脉微丸和丁基苯酞可显著提高损伤模型中PC12细胞的存活数，降低细胞损伤程度，其中以对缺氧损伤保护作用尤为显著。结论通塞脉微丸和丁基苯酞对PC12细胞缺氧和缺糖损伤模型均有显著保护作用。     

氧应激对豚鼠心肌细胞线粒体膜电位的影响及益心康胶囊含药血清保护作用的研究

目的观察氧应激对豚鼠心肌细胞线粒体的影响，探讨抗心肌缺血中药复方——益心康胶囊(H303)含药血清对氧应激损伤的保护作用机制。方法利用激光共聚焦显微镜，观察羟自由基损伤体系(Fe2＋／H2O2)与豚鼠心肌细胞共同孵育30～60min后对心肌细胞线粒体膜电位的影响。结果豚鼠心肌细胞氧应激后，可致线粒体细胞色素氧化酶活性降低，以及荧光染料Rh123所显示的线粒体膜电位明显降低。H303含药血清可明显减轻上述损伤，表现为明显增强豚鼠心肌细胞线粒体氧化酶活性，使心肌细胞存活率增加；并具有保护心肌细胞膜电位的作用。结论氧应激可造成心肌线粒体膜电位降低。益心康胶囊含药血清可保护线粒体膜电位，从而发挥其膜稳定作用。     

Honokiol attenuates acetaminophen-induced acute liver injury by inhibiting hepatic CYP1A2 activity and improving liver mitochondrial dysfunction

Objective Acetaminophen (APAP) overdose is a common cause of liver injury. This study aimed to investigate the protective effect of honokiol (Hon) against APAP-induced hepatotoxicity and its potential mechanism. Methods C57BL/6 mice were administrated with Hon (10 and 30 mg/kg) after APAP (300 mg/kg) treatment. On 1.5 h and 5 h after Hon treatment, mice were sacrificed. Serum and liver were collected. And then, liver injury-related indexes, APAP metabolism-related indexes, mitochondrial respiratory chain function-related indexes, and mitochondrial membrane function-related protein expression were evaluated. Results It was found that Hon significantly decreased serum alanine aminotransferase (ALT)/ aspartate aminotransferase (AST) activity and glutathione (GSH) depletion, increased hepatic catalas (CAT) and GSH peroxidase (GSH-Px) activities, reduced hepatic MDA and 3-nitrotyrosine contents, inhibited hepatic CYP1A2 activity and APAP protein adducts (APAP-CYS) formation. Meanwhile, oxidative phosphorylation capacity of complex I and electron transfer capacity of complex IV in mitochondrial respiratory chain was increased, whereas the release of H2O2 in the mitochondria was decreased following Hon treatment. Furthermore, Hon markedly down-regulated p-JNK in both cytosol and mitochondria, and obviously inhibited the release of apoptosis inducing factor (AIF) and endonuclease G (EndoG) from mitochondria to cytosol. Conclusion Hon alleviated APAP-induced liver injury through the following pathways: Reducing the production of APAP-CYS by inhibiting CYP1A2 activity; Ameliorating hepatic oxidative stress by increasing the levels of hepatic CAT, GSH-Px and GSH; Improving mitochondrial respiratory chain function by promoting oxidative phosphorylation capacity of complex I and electron transfer capacity of complex IV; Improving the function of mitochondrial membrane by inhibiting p-JNK and its translocation to mitochondria, thereby reducing the release of AIF and EndoG.