运用猴免疫缺陷病毒筛选抗艾滋病中药的实验研究

本文研究了40余种中药或中药有效成分的抗猴免疫缺陷病毒(SIV)的活性,实验结果发现:其中5种中药有>50%的SIV抗原阳性细胞抑制率,抑制率在30～50%之间的中药有5种。实验初步结果认为,中药可以抑制猴免疫缺陷病毒,有些中药的实验结果与国内外报道对人免疫缺陷病毒的抑制作用一致。尚发现几种未见报道的对SIV有抑制作用的中药。因此,在没有P_3级实验室的条件下,采用SIV也可以较好地在普通病毒实验室内进行艾滋病的研究工作。     

鹊肾树体外抗猴免疫缺陷病毒活性部位筛选

目的:筛选鹊肾树枝提取物中具有抗猴免疫缺陷病毒(SIV)的活性部位。方法:以SIV为靶病毒和相应的CEMx174细胞系统为模型,以3-叠氮胸苷(azidothymiding,AZT)为阳性对照药物,观察了鹊肾树枝的不同提取物对SIV的体外抑制作用;以试管法和滤纸法鉴定活性部位可能含有的化学成分。结果:鹊肾树枝的石油醚萃取物在62.5 mg.L-1时,对病毒抗原细胞抑制率为55.9%;乙酸乙酯萃取物在其浓度为15.625 mg.L-1时,对病毒抗原细胞抑制率为41.2%。石油醚萃取物可能含有挥发油、油脂和甾体或三萜类物质,而乙酸乙酯萃取物可能含有酚类物质。结论:鹊肾树枝中具有一定的抗SIV作用的成分可能为挥发油、油脂、甾体、三萜类或酚类物质。     

甘草体外抑制呼吸道合胞病毒作用研究

目的:开发安全有效的抗呼吸道合胞病毒的新药.方法:采用细胞病变抑制实验观察甘草在Hela细胞中对呼吸道合胞病毒的抑制作用.结果:甘草半数中毒浓度(TC50)为3.43g/L;抑制呼吸道合胞病毒的半数有效浓度(EC50)为0.2535g/L,治疗指数(TI)为13.53;甘草对呼吸道合胞病毒的抑制作用存在量效反应关系;在感染后0 h、2 h、4 h、6 h、8 h,甘草均有抑制呼吸道合胞病毒的作用.结论:甘草在Hela细胞中对呼吸道合胞病毒有明显的抑制作用,其作用机制是多途径的.     

太芪培元颗粒体外抗HIV-1病毒活性研究

目的评价太芪培元颗粒体外对HIV-1病毒的抑制活性。方法 MTT法检测太芪培元颗粒细胞毒性;通过细胞病变法检测太芪培元颗粒对HIV-1急性感染的抑制活性;应用HIV-1 p24抗原ELISA检测太芪培元颗粒对HIV-1急性感染细胞中病毒复制的抑制活性,并计算药物治疗指数。结果太芪培元颗粒细胞毒性实验CC_(50)为(3.761±0.370)mg/m L;合胞体抑制实验EC_(50)为(0.454 5±0.204 6)mg/m L,治疗指数为5.84~12.97;p24抑制实验EC_(50)为(0.56±0.27)mg/m L,治疗指数为5.30~8.74。结论太芪培元颗粒体外抗HIV-1活性较弱。     

甘草抗病毒有效部位(GD4)体外抑制呼吸道合胞病毒作用的研究

目的：观察甘草抗病毒有效部位（GD4）抑制呼吸道合胞病毒（RSV）作用。方法：采用煎煮法、二氯甲烷萃取法和柱层析法提取分离得到甘草抗病毒有效部位（GD4）。采用细胞病变抑制实验，观察GD4在Hela细胞中对RSV的抑制作用。结果：GD4半数中毒浓度（TC50）为0．23mg／ml，抑制RSV的半数有效浓度（EC50）为28．73μg／ml，治疗指数（TI）为8．0；GD4对RSV的抑制作用存在量效关系；在感染后至少12h以内给药，GD4能够有效地抑制RSV的复制。GD4不含有甘草酸。结论：甘草抗病毒有效部位（GD4）在Hela细胞中对呼吸道合胞病毒有明显的抑制作用。     

健脾益气方治疗猴免疫缺陷病毒感染猕猴的实验研究

目的 评价健脾益气方对正常实验猴的影响及治疗SIVmac239感染猕猴慢性期的作用效果。方法 4只正常实验猴及8只SIVmac239病毒感染的实验猴,随机分为正常组、对照组、健脾益气方治疗组3组。检测不同时期健脾益气方对正常实验猴和感染猴的体重、血常规、血生化、血浆病毒载量以及CD4⁺ T细胞和CD8⁺ T细胞计数及各亚群的变化情况。结果 健脾益气方对正常实验猴的常规生理指标影响较小,其中白细胞计数和血小板计数与干预开始前相比逐渐降低(P<0.05),但均在非人灵长类动物血常规检测指标的参考范围之内。对照组血小板计数在实验期间显著降低(P<0.05),健脾益气方治疗组也有降低但差异不显著(P>0.05),均在正常参考范围之内。对照组血浆病毒载量与治疗前相比升高了1.01 log₁₀ copies/mL,治疗组升高了1.48 log₁₀ copies/mL,但无显著性差异(P>0.05)。对照组CD4/CD8细胞比值在实验期间逐渐降低(P<0.05),但治疗组无此现象;其...     

猴耳环抗病毒有效成分研究

目的:对抗炎中药猴耳环的化学成分进行研究。方法:采用体外抗病毒活性追踪的方法,应用大孔吸附树脂吸附,聚酰胺、硅胶和凝胶柱色谱技术进行分离,根据理化性质和波谱数据鉴定其结构。结果:分离并鉴定了6个化合物:tricetiflavan(5,7,3,′4,′5-′pentahydroxylflavan)(1),myricitrin(myricetin-3-O-α-L-rhamnopyranoside)(2),quercitrin(quercetin-3-O-α-L-rhamnopyranoside)(3),quercetin(4),methyl gallate(5)和gallic acid(6)。结论:化合物1~5为首次从该植物中分离得到,其中化合物4被发现有较好的体外抗呼吸道合胞病毒(RSV)活性。     

三叶青提取物抗人类免疫缺陷病毒活性研究

目的:探讨三叶青提取物对人类免疫缺陷病毒(HIV)活性的抑制作用。方法:以不同HIV-1病毒株(实验株HIV-1_(IIIB)、HIV-1耐药株HIV-174V、HIV-1临床分离株HIV-1_(KM018))为研究对象,通过合胞体抑制等多种方法检测三叶青提取物对不同病毒株的抑制作用,MTT法、ELISA法及荧光法分别检测三叶青提取物体外细胞毒性、提取物对HIV-1逆转录酶及蛋白酶活性的抑制作用。结果:三叶青提取物对C8166、MT4、PBMC的体外细胞毒性作用CC50值分别为158.73μg/m L、96.42μg/m L、120.67μg/m L。三叶青提取物对不同HIV-1病毒株有不同程度的抑制作用,EC50值在3.54~78.56μg/m L之间,TI值在2.03~43.18之间;其中实验株HIV-1_(IIIB)急性感染C8166细胞抑制HIV-1 p24抗原表达EC50值最大,C8166细胞形成合胞体TI值最大。提取物对HIV-1慢性感染细胞与正常T淋巴细胞C8166融合阻断、重组HIV-1逆转录酶抑制的EC50值分别为14.79μg/m L、170.15μg/m L。结论:三叶青提取物体外对HIV-1活性有一定的抑制作用,且可能是通过抑制HIV-1病毒至细胞及HIV-1逆转录酶活性达到抗HIV活性的目的。     

清热合剂体外抗呼吸道合胞病毒作用

目的：了解清热合剂对呼吸道合胞病毒（RSV）的抑制作用。方法：采用细胞培养技术，以双黄连为阳性对照药，观察清热合剂在非洲绿猴肾细胞（VERO）和咽喉癌上皮细胞（HEP-2）细胞中对RSV的抑制作用。结果：在VERO细胞中，清热合剂半数中毒浓度（TD50）为31．62mg／mL，抗合胞病毒的半数有效浓度（IC50）为0．50mg／mL，治疗指数（33）为63．24；在HEP-2细胞中，TD50为32．10mg／mL，抗合胞病毒的IC50为0．54mg／mL，TI为59．44。且对RSV抑制作用存在明显的量效反应关系（P〈0．01）。结论：清热合剂在VERO和HEP-2细胞中对RSV有明显抑制作用。     

灵芝三萜与灵芝多糖抗肿瘤作用及其机制研究进展

随着人口老龄化程度的加剧,肿瘤患者的发病率和死亡率持续上升。目前肿瘤的治疗方法包括手术、化疗、放疗、靶向治疗、免疫治疗,然而大部分化疗药物可引起严重的副作用和耐药性。因此中医药治疗作为一种替代疗法可以有效地改善肿瘤患者的临床症状,提高生活质量,抑制或稳定肿瘤的发展,延长患者生存期限。由于中药具有良好的安全性,其抗癌潜力日益受到关注。灵芝是一种药用真菌,在我国有着两千多年的历史,是我国中草药宝库中的一个珍品。迄今为止,有许多研究已经提出了灵芝的抗癌特性。灵芝具有广泛的药理作用,如抗肿瘤、调节免疫、保肝、降血糖血脂、抗动脉粥样硬化、保护心脏、抗衰老等。灵芝的化学成分较为复杂,目前已知含有多糖、三萜类、生物碱、核苷类、氨基酸及各种微量元素,灵芝多糖和三萜类化合物的抗肿瘤机制主要通过诱导细胞凋亡、免疫调节、抗血管生成、阻滞细胞周期等来实现。已广泛应用于肺癌、肝癌、宫颈癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠癌等多种肿瘤的辅助治疗。该文通过对近年来灵芝三萜和灵芝多糖的生物活性及作用机制的相关文献进行归纳汇总,重点综述其抗肿瘤作用及作用机制,以期为灵芝抗肿瘤的进一步开发利用提供参考和借鉴。     

不同品种灵芝多糖含量差异研究

目的 :比较产粉灵芝与无粉灵芝多糖含量的不同,明确不同品种灵芝子实体多糖含量的差异。 方法 :光学显微镜观察灵芝子实体结构,蒽酮-硫酸法测定了不同品种灵芝多糖含量。 结果 :无粉灵芝的多糖含量比产粉灵芝多糖含量高出近1倍;灵芝子实体由4部分组成,分别为菌皮、皮层、菌肉、菌管;子实体中菌管所占比例最大,厚度比例占70％以上,且多糖含量在各部分中也最高,最高可达3.88％。 结论 :无粉灵芝多糖含量高于产粉灵芝;菌管是灵芝子实体多糖的主要来源。     

光质对灵芝生长与灵芝多糖含量的影响

目的:研究不同光质对灵芝生长发育和灵芝多糖含量的影响,为灵芝优质高产栽培提供理论依据。方法:栽培灵芝时进行不同光质处理,在灵芝不同生长发育时期观测其形态变化并测量多糖含量。结果:不同光质处理形态上弹孢前期灵芝菌盖厚度与菌盖表面环纹的数目与对照差异显著,灵芝多糖含量出现最高值时期不同。蓝色光质处理在现蕾期、开伞期、弹孢后期多糖含量均高于对照,且差异显著。绿色光质处理有助于生长末期多糖积累。不同光质处理对灵芝子实体产量与灵芝孢子粉产量均有影响。结论:对照处理灵芝子实体产量高,性状好;蓝色光质处理可以提高灵芝多糖含量。     

赤芝孢子粉和子实体主要化学成分变异规律研究

目的:揭示产地、品种、采收部位和潮次、破壁技术对赤芝孢子粉和子实体中总三萜、总多糖、总蛋白含量的影响。方法:收集龙芝1号、沪农1号、市售赤芝孢子粉和子实体,分别采用硫酸-蒽酮比色法、香草醛-冰醋酸比色法和Lowry法测定其中总多糖、总三萜、总蛋白的含量。结果:全国6个主产区的破壁孢子粉总多糖为0.40%~2.25%,总三萜为1.36%~3.15%,总蛋白为0.74%~1.91%;浙江主栽赤芝品种子实体总多糖、总三萜、总蛋白质量分数分别为0.25%~1.42%,0.44%~1.42%,1.82%~3.67%,未破壁孢子粉分别为0.41%~0.91%,0.09%~0.12%,0.78%~0.90%,破壁孢子粉分别为1.03~2.25%,1.89%~3.15%,0.96%~1.04%。结论:全国不同主产区的灵芝破壁孢子粉化学成分含量存在显著差异,浙江产区总多糖和总三萜含量较高,福建产区总蛋白含量较高;浙江主栽赤芝品种龙芝1号总三萜含量较高,沪农1号总多糖含量较高;破壁孢子粉中总三萜与总多糖含量高于子实体,子实体菌柄中总多糖含量大多高于菌盖,菌盖中总三萜含量显著高于菌柄;2潮采收的菌盖和菌柄中总多糖含量高于1潮相应的部位,但总三萜含量大多低于1潮;孢子粉破壁可显著提高总三萜和总多糖的提取和溶出率。     

HPLC测定不同产地灵芝中9种三萜酸

目的:建立HPLC测定灵芝子实体中9种三萜酸的方法.方法:采用Alltima C18色谱柱(4.6 mm × 150 mm,5μm),流动相为乙腈-0.04％甲酸溶液,检测波长254 nm,流速1.0 mL·min-1,柱温15℃.结果:灵芝酸C2、灵芝酸G、灵芝烯酸B、灵芝酸B、灵芝烯酸A、灵芝酸A、赤芝酸A、灵芝烯酸D、灵芝酸C1的线性范围分别为6.81～40.88,6.38 ～38.25,6.75～40.50,6.38～ 38.25,5.95 ～ 35.65,5.90 ～ 35.25,7.00 ～ 42.00,6.20 ～ 37.15,6.05 ～ 36.4 mg· L-1(r=0.999 4,0.999 2,0.999 4,0.999 2,0.999 2,0.994 5,0.999 0,0.999 2,0.998 4),加样回收率分别为102.1％,102.3％,100.6％,103.3％,104.1％,103.2％,96.42％,102.5％,101.5％,RSD为1.5％,0.96％,1.9％,1.3％,1.7％,2.5％,0.62％,2.9％,1.3％.测定了31个不同地区、不同栽培条件下灵芝样品的三萜含量.结论:该方法可行、重复性好,可定量测定灵芝中三萜酸的含量.     

LED光源的不同光质对灵芝菌丝体生长及抗氧化酶活性的影响

目的:研究不同光质对灵芝菌丝体生长及抗氧化酶活性的影响,为灵芝菌丝体培养提供科学的理论依据.方法:采用新型半导体发光二极管(LED)光源设置不同光质处理,动态观测灵芝菌丝体生长、多糖含量及抗氧化酶活性变化.结果:蓝光处理及黑暗对照条件下灵芝菌丝体生长较快,黑暗对照条件下菌丝体形态纤细、菌落淡薄,蓝光、白光处理菌丝体粗壮、菌落浓密.白光处理菌丝体生物量积累最高,蓝光次之.绿光处理灵芝菌丝体POD酶活性波动变化较大,生长中后期显著高于其他处理.白光处理菌丝体CAT酶在生长过程中始终保持较高活性.生长前期黄光处理菌丝体SOD酶活性最高,后期黑暗对照SOD酶活性较高.前期绿光处理菌丝体多糖含量较高,生长后期蓝光处理菌丝体多糖含量显著高于其他处理.结论:光质影响灵芝菌丝体生长代谢,蓝光利于灵芝菌丝体生长代谢.     

指纹图谱和体外细胞活性跟踪相结合考察温度对灵芝中三萜类成分的影响

目的:探讨温度对灵芝中主要抗肿瘤活性三萜类成分含量的影响.方法:采用HPLC灵芝醇提取物中三萜类成分在不同温度处理后的指纹图谱的变化,并结合体外人肺癌SPC-A-1细胞株,通过MTT法评价不同温度影响下的灵芝提取物对肿瘤细胞增殖的抑制作用.结果:灵芝中三萜类成分显著受到温度的影响.在选定的20个特征峰中,第4,14,15,16号峰的峰面积变化经100℃加热处理后最为显著,与未加热处理的灵芝提取物的色谱峰相比,这4个峰的峰面积下降幅度分别高达42.601％,35.909％,49.359％,64.061％.体外细胞活性实验表明经不同温度处理下的灵芝提取物的抗肿瘤活性不同,灵芝提取物的IC50由1.44 g·L-1(醇提取物)升高到2.77 g·L-1(100℃下处理的样品).结论:温度可显著影响灵芝抗肿瘤活性三萜类成分的含量变化,高温易造成其活性成分的损失,进而引起灵芝抗肿瘤活性的降低.     

泰山赤灵芝复合降解酶提取白花丹参须根有效成分的研究

目的:研究泰山赤灵芝复合降解酶在白花丹参须根有效成分提取中的应用.方法:采用木质纤维素复合降解酶来提取丹参须根中的有效成分,通过正交试验法优化酶解参数.结果:利用优化酶解工艺所得到的丹参须根提取液中总丹参酮和总丹酚酸的提取率可达11.923％,12.465％,比常规非酶法提取提高了62.794％,56.086％.结论:采用木质纤维素复合降解酶酶解法可以充分提取出丹参须根中的有效成分,为中药废弃物的再次利用提供了一条新途径.     

光质对灵芝菌丝体生长及内源IAA代谢调控的研究

采用新型LED冷光源设置不同光质条件,动态观测灵芝菌丝体生长、内源IAA含量和其相关酶活性变化及多糖积累情况,研究光质对灵芝菌丝体生长、内源IAA水平及活性成分积累的影响,揭示光质作用于灵芝的效应及机制,为灵芝菌丝体培养提供科学的理论依据.研究发现,蓝光处理菌丝体生长稳定,多糖含量明显高于其他处理,综合优势明显;红光处理在灵芝菌丝体生长前期能显著提高其内源IAA水平,加快其生长;绿光处理菌丝体生长缓慢,鲜重少,但其折干率大.不同光质对灵芝菌丝体IAA代谢相关酶活性有显著影响:蓝光处理灵芝菌丝体IAA含量始终处于较低水平,其吲哚乙酸氧化酶(IAAO)、过氧化物酶(POD)以及色氨酸合成酶活性变化均为前期高而中后期低;黄光处理菌丝体IAA含量居中,但其IAAO、色氨酸合成酶活性最大.结果表明不同光质影响灵芝菌丝体生长,同时对其内源IAA水平也有显著影响.     

Neuroprotective effects of water-soluble Ganoderma lucidum polysaccharides on cerebral ischemic injury in rats

Aim of the study

To investigate the neuroprotective effects of water-soluble Ganoderma lucidum polysaccharides (GLPS) on cerebral ischemic injury in rats, and to explore the involved mechanisms.

Materials and methods

Two models [middle cerebral artery occlusion (MCAO) in Sprague-Dawley (SD) rats and oxygen and glucose deprivation (OGD) in primary cultured rat cortical neurons] were employed to mimic ischemia-reperfusion (I/R) damage, in vivo and in vitro, respectively. Cerebral infarct area was measured by tetrazolium staining, and neurological functional deficits were assessed at 24 h after I/R. Neuronal apoptosis was studied by Nissl staining and DNA fragmentation assay. Neuronal injury was assessed by morphological examination using phase-contrast microscopy and quantified by measuring the amount of lactate dehydrogenase (LDH) leakage, cell viability was measured by sodium 3′-1- (phenylaminocarbonyl)-3, 4-tetrazolium-bis (4-methoxy-6-nitro) benzene sulfonic acid (XTT) reduction. Neuronal apoptosis was determined by flow cytometry, and electron microscopy was used to study morphological changes of neurons. Caspase-3, -8 and -9 activation and Bcl-2, Bax protein expression were determined by western blot analysis.

Results

Oral administration of GLPS (100, 200 and 400 mg/kg) significantly reduced cerebral infarct area, attenuated neurological functional deficits, and reduced neuronal apoptosis in ischemic cortex. In OGD model, GLSP (0.1, 1 and 10 μg/ml) effectively reduced neuronal cell death and relieved cell injury. Moreover, GLPS decreased the percentage of apoptotic neurons, relieved neuronal morphological damage, suppressed overexpression of active caspases-3, -8 and -9 and Bax, and inhibited the reduction of Bcl-2 expression.

Conclusions

Our findings indicate that GLPS protects against cerebral ischemic injury by inhibiting apoptosis by downregulating caspase-3 activation and modulating the Bcl-2/Bax ratio.