翼核果素对肝癌HepG2细胞凋亡及细胞骨架蛋白F-actin的影响

目的:研究翼核果素对人肝癌Hep G2细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法:以不同浓度的翼核果素作用于体外培养的Hep G2细胞,采用MTT法检测细胞生长抑制率,HE、吖啶橙染色观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞凋亡率和周期,激光共聚焦显微镜观察细胞骨架蛋白F-actin形态学变化。结果:翼核果素可明显抑制人肝癌Hep G2细胞的增殖且呈剂量依赖性,作用于Hep G2细胞24 h的IC50值为124.77μmol·L~(-1)。显微镜可见细胞核变形、染色体聚集等典型的凋亡形态学改变。流式细胞仪检测结果显示,60、90μmol·L~(-1)翼核果素给药组细胞凋亡的百分率显著高于对照组,G2/M期细胞比例显著高于对照组,细胞骨架蛋白F-actin呈现解聚断裂状态。结论:翼核果素可抑制Hep G2细胞的增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与细胞周期阻滞、细胞骨架蛋白F-actin解聚有关。     

山茱萸多糖诱导宫颈癌细胞凋亡及Bax蛋白表达的变化

目的:探讨山茱萸多糖诱导人宫颈癌Hela细胞的凋亡作用及Bax蛋白表达的变化.方法:用12.5,25,50 g·L-1的山茱萸多糖作用Hela细胞24 h.倒置显微镜下观察细胞凋亡的形态,免疫组化SP法检测凋亡相关蛋白Bax表达的变化.结果:Hela细胞经3个不同浓度的山茱萸多糖作用后,出现典型的细胞凋亡的形态学变化,其程度与浓度相关;而且Bax蛋白的表达量随浓度升高而增加,免疫组化评分(IHS)分别为0.18,0.44,1.35.结论:山茱萸多糖能够促进Bax的表达,诱导Hela细胞凋亡.     

温阳活血利水方含药血清对嘌呤霉素损伤小鼠永生系足细胞组织蛋白酶L表达的影响

目的观察温阳活血利水方含药血清对嘌呤霉素损伤的小鼠永生系足细胞组织蛋白酶L(Cathepsin L,CatL)表达的影响。方法体外培养小鼠永生系足细胞,将其分为正常对照组、模型组、地塞米松组、10%温阳活血利水方血清组(简称10%中药血清组)、20%中药血清组及中药血清空白对照组。正常对照组以培养液孵育足细胞24 h,模型组应用嘌呤霉素45 mg/L作用于足细胞24 h;在模型组干预基础上,地塞米松组加用地塞米松1μmol/L共孵育24 h;10%及20%中药血清组分别加用10%及20%的中药血清共孵育24h,并设中药血清空白对照组(单用中药血清孵育24 h)。采用细胞免疫荧光染色观察各组足细胞CatL及其底物Synaptopodin荧光表达改变;异硫氰酸荧光素(FITC)-鬼笔毒环肽(phalloidin)染色标记足细胞纤维肌动蛋白(F-actin),并采用F-actin外周环评分(cortical F-actin score,CFS)半定量分析足细胞F-actin分布。结果与正常对照组比较,模型组足细胞Synaptopodin表达水平明显降低,CatL表达水平升高,F-actin排列紊乱,逐渐向细胞外周分布形成F-actin环,CFS评分明显升高(P0.01)。与模型组比较,地塞米松组、10%、20%中药血清组足细胞Synaptopodin蛋白表达升高,CatL表达水平降低,CFS评分亦降低(P0.05,P0.01)。与地塞米松组比较,10%中药血清组Synaptopodin表达降低(P0.05),20%中药血清组CFS评分明显降低(P0.05)。结论温阳活血利水方能上调嘌呤霉素损伤的足细胞Synaptopodin表达,下调CatL表达水平,减少骨架蛋白F-actin的重构,有助于稳定足细胞actin骨架,改善足细胞融合。     

斑蝥提取物诱导宫颈癌细胞凋亡机制的实验研究

目的研究斑蝥提取物(cantharis extract,CTE)诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡作用及其分子机制。方法体外培养人宫颈癌细胞系Hela,利用CCK-8法检测CTE对Hela细胞增殖抑制作用;光学显微镜及荧光显微镜下观察不同浓度CTE诱导细胞凋亡的形态学改变;AnnexinⅤ/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞增殖和凋亡相关蛋白表达变化。结果 CTE显著抑制Hela细胞增殖,呈浓度及时间依赖型,处理48 h的IC50为3.94μg/mL。经光学显微镜下观察可见随着药物浓度增加细胞出现明显离巢凋亡。Hoechst 33258染色后发现,随着药物浓度的增加,核固缩、核碎裂等典型凋亡改变的细胞数目逐渐增多,呈浓度依赖型。AnnexinⅤ/PI双染流式凋亡检测示,随着药物浓度的增加凋亡细胞数量逐渐增加,药物处理组(1.25、2.5、5.0μg/mL)的凋亡率分别为14.73%、29.75%、53.33%;与对照组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。Western blot检测显示,与对照组比较,药物处理组细胞增殖相关蛋白PCNA蛋白表达降低(P0.05);促凋亡蛋白Bax、Bak、Bid表达增加,2、5、5.0μg/mL组Bax表达及1.25、2.5、5.0μg/mL组Bid表达有效期异有统计学意义(P0.05)。而抗凋亡蛋白Bcl-2、Mcl-1、Survivin表达降低(P0.05),Bcl-XL表达无显著改变;凋亡蛋白激酶Caspase-3蛋白表达下降(P0.05),而Caspase-3底物凋亡相关蛋白PARP出现明显切割带,Cleaved-PARP蛋白表达增加(P0.05)。结论 CTE显著抑制Hela细胞增殖,诱导Hela细胞凋亡,其可能机制与下调抗凋亡蛋白、上调促凋亡相关蛋白表达相关。     

金荞麦提取物对人宫颈癌Hela细胞增殖和诱导凋亡的影响

目的:探讨金荞麦提取物对人宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡作用及可能机制。方法:经不同浓度金荞麦提取物(0.4、2、10、50、250 g/ml)处理体外培养的人宫颈癌Hela细胞,采用MTT法检测细胞增殖活性;经6 g/ml金荞麦提取物处理的Hela细胞,相差显微镜和荧光显微镜观察细胞形态,Annexin V-FITC/PI染色法检测细胞凋亡,琼脂糖凝胶电泳法检测DNA碎片,ELISA法检测Caspase-1、3、8、9活性,Western blot法检测PARP、细胞色素C含量、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果:与空白对照组比较,金荞麦提取物浓度为0.2 g/ml开始起效,24h内明显抑制Hela细胞增殖,并呈时间和剂量依赖性;与空白对照组比较,6 g/ml金荞麦提取物处理的Hela细胞出现明显的核固缩、核碎裂,细胞凋亡率、DNA碎片明显增加;与金荞麦提取物组比较,金荞麦提取物与caspase抑制剂混合组DNA碎片明显减少,细胞成活率明显升高;与作用0h组比较,6 g/ml金荞麦提取物处理的Hela细胞PARP裂片、细胞色素C、Bax和Caspase-3、8、9明显增加,Bcl-2明显减少。结论:金荞麦提取物可抑制Hela细胞增殖、诱导细胞凋亡,其机制可能与通过促进诱导凋亡蛋白Bax表达和抑制抗凋亡蛋白Bcl-2表达,从而增加细胞色素C和Caspases有关。     

含羞草水提物对人子宫癌Hela细胞凋亡及mcl-1与bim蛋白表达基因表达的影响

目的观察含羞草水提物(WEMP)对人子宫癌细胞(Hela)生长的抑制和凋亡诱导效果及其对mcl-1和bim表达的影响。方法采用MTT比色法观察不同浓度的WEMP对Hela的生长抑制情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot方法检测WEMP对人胃癌细胞Hela中mcl-1、bim蛋白表达的影响。结果 WEMP作用Hela细胞24 h后,细胞存活率显著降低(P0.05),且与时间、剂量呈依赖关系。流式细胞仪PI单染亚二倍体峰分析,250,500,1000,2000,4000mg/L WEMP作用Hela细胞24 h,Sub-G1期细胞比率分别为(11.60±0.85)%,(15.95±0.64)%,(18.20±1.41)%、(17.5±0.14)%和(18.10±0.57)%,与对照组(7.4±0.84)%比较差异均有统计学意义(P﹤0.01)。WEMP可降低Hela细胞mcl-1基因表达和增加bim基因表达。结论 WEMP对Hela生长有明显的抑制作用并可诱导Hela的凋亡,mcl-1基因表达降低和bim基因表达增加可能是其凋亡机制之一。     

竹节参水提物对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响

目的探讨竹节参水提物对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响。方法0(阴性对照)、50、100、150μg/mL竹节参水提物作用于宫颈癌Hela细胞中后培养48 h。采用一步法TUNEL染色测定细胞凋亡,流式细胞计数仪测定宫颈癌Hela细胞周期,Hoechst 33342荧光染色观察不同浓度下细胞形态,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定凋亡相关基因P53、Bax、Caspase-3 mRNA表达水平。结果竹节参水提取物对宫颈癌Hela细胞增殖具有明显的抑制作用,呈浓度依赖性,36 h时竹节参水提取物对宫颈癌Hela细胞增殖抑制基本达到50.0%以上。竹节参水提取物作用于宫颈癌Hela细胞G0/G1期与S期,随着其质量浓度升高,它对于宫颈癌Hela细胞作用集中于G0/G1期。未加入竹节参水提物时Hela细胞形态均一且结构相对完整,而在50、100、150μg/mL下Hela细胞开始出现凋亡,能增加凋亡相关基因P53、Bax、Caspase-3 mRNA表达。结论竹节参水提物体外能抑制宫颈癌Hela细胞增殖,诱导癌细胞的自噬与凋亡,可能与调控凋亡相关基因mRNA表达有关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对人膀胱癌5637细胞株作用的研究

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人膀胱癌5637细胞株的作用及其作用机制。方法实验分为EGCG 10 mg/L组、EGCG 20 mg/L组、EGCG 40 mg/L组和空白对照组。采用CCK-8法检测各组人膀胱癌5637细胞活性抑制情况,采用吖啶橙(AO)荧光染色观察各组人膀胱癌5637细胞形态,免疫组化法检测各组人膀胱癌5637细胞中Bcl-2、Bax蛋白表达情况。结果 EGCG 10 mg/L组、EGCG 20 mg/L组、EGCG 40 mg/L组培养24 h、48 h和EGCG各组培养72 h的细胞存活率均明显低于空白对照组(P均0.05),且呈浓度依赖性明显降低(P0.05)。AO荧光染色显示空白对照组呈均匀绿色荧光,EGCG各组随着药物浓度的增加,呈绿色荧光凋亡细胞逐渐增多。与空白对照组比较,EGCG 10 mg/L组、EGCG 20 mg/L组、EGCG 40 mg/L组人膀胱癌5637细胞中Bcl-2蛋白阳性表达细胞数明显减少而Bax蛋白阳性表达细胞数明显增多。结论 EGCG能抑制人膀胱癌5637细胞活力,其机制可能与调控Bcl-2、Bax蛋白表达有关。     

桑皮素对人宫颈癌Hela细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨桑皮素对人宫颈癌Hela细胞的增殖抑制及其凋亡诱导作用。方法用10、15、20μmol/L桑皮素作用Hela细胞24 h后,在扫描电镜、透射电镜及倒置显微镜下观察细胞形态学变化;利用MTT法检测桑皮素对Hela细胞的增殖的影响;应用Hoechst单染实验检测Hela细胞的凋亡情况;采用qRT⁃PCR和Western blot检测Bax、Bcl⁃2 mRNA及蛋白的表达。结果桑皮素(2.5、5、7.5、10、15、20、25μmol/L)处理Hela细胞24、48 h,能明显的抑制Hela细胞增殖(P<0.05),且呈浓度依赖性。桑皮素(10、15、20μmol/L)处理Hela细胞24 h,细胞呈现早期凋亡。与0μmol/L桑皮素组比较,桑皮素(10、15、20μmol/L)能显著上调Bax mRNA及蛋白表达(P<0.05),下调Bcl⁃2 mRNA及蛋白表达(P<0.05)。结论桑皮素通过上调Bax表达和下调Bcl⁃2表达,从而诱导Hela细胞发生凋亡。     

隐丹参酮对宫颈癌Hela细胞增殖及细胞凋亡的影响

目的:研究隐丹参酮对人宫颈癌Hela细胞生长的抑制作用及对细胞周期和凋亡的影响。方法:MTT法检测不同浓度隐丹参酮分别在24,48,72 h对Hela细胞的抑制作用;流式细胞仪(FCM)检测隐丹参酮对Hela细胞周期和凋亡的影响;Western blot法检测E6,p53,p21蛋白的表达。结果:不同质量浓度(0.5~16 mg.L-1)隐丹参酮对Hela细胞的毒性均有明显剂量和时间依赖性,其24,48,72 h的IC50值分别为17.8,8.17,6.55 mg.L-1;隐丹参酮可使Hela细胞细胞周期的构成发生明显的变化并诱导细胞凋亡。Western blot表明,隐丹参酮作用Hela细胞后HPV E6的蛋白水平表达逐渐降低,p53和p21的蛋白水平表达逐渐升高。结论:隐丹参酮对宫颈癌Hela细胞有较强的细胞毒性,其作用机制可能是使Hela细胞生长停滞在G0/G1期并诱导细胞凋亡,使S期细胞比例降低;抑制HPV E6的蛋白的表达,使p53功能恢复,启动凋亡,从而起到杀伤肿瘤的作用。     

茶氨酸对人宫颈癌Hela细胞增殖作用的影响

目的研究茶氨酸对人宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的影响。方法 MTT法测定茶氨酸不同浓度不同时间对Hela细胞增殖活性的影响;荧光显微镜观察Hela细胞的形态变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果茶氨酸对Hela细胞具有显著增殖抑制作用,并呈浓度和时间依赖性;荧光显微镜观察发现茶氨酸处理组的Hela细胞有典型的凋亡特征;流式细胞仪检测结果显示,与空白组比较,茶氨酸处理后的Hela细胞的凋亡率显著增加(P<0.01)。结论茶氨酸对人宫颈癌Hela细胞的增殖具有抑制作用,且其与诱导Hela细胞凋亡有关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对结肠癌细胞株抑制作用的体外研究

目的探讨绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对结肠癌细胞株(LoVo细胞、SW480细胞、HT29细胞、HCT-8细胞)增殖的抑制作用及对细胞凋亡和细胞周期的影响,研究其对结肠癌的抑癌机制。方法体外培养结肠癌细胞株,采用不同浓度的EGCG(10,20,35μg/ml)对其进行干预,MTT法检测EGCG对结肠癌细胞株增殖的抑制作用;用流式细胞仪检测EGCG对结肠癌细胞株凋亡和细胞周期的影响。结果 MTT法检测EGCG对结肠癌细胞株的抑制作用均具有浓度依赖性,且HT29细胞株尚具有时间依赖性。流式细胞仪检测EGCG能增强结肠癌细胞株的凋亡率,且剂量与凋亡率呈正相关。EGCG能将SW480细胞和LoVo细胞细胞周期阻滞在G0/G1期,阻碍其向S期转换,将HCT-8细胞阻滞在G2/M期,阻碍其向M期转换,将HT29细胞阻滞在S期,阻碍其向G2期转换,抑制结肠癌细胞株的增殖。结论EGCG对体外培养的结肠癌细胞株的增殖有明显抑制作用,其作用机制与增强细胞凋亡和影响细胞周期有关,具体作用机制有待进一步研究。     

蜈蚣多糖对Hela细胞的增殖抑制作用研究

目的 研究蜈蚣多糖对人宫颈癌细胞Hela细胞的抑制作用及作用机制.方法 用MTT法检测蜈蚣多糖对Hela细胞生长的抑制作用;流式细胞仪和Annexin V-FITC/PI双荧光染色分别检测蜈蚣多糖对Hela细胞周期及凋亡情况的影响.结果 在一定浓度范围内蜈蚣多糖可显著抑制Hela细胞的增殖,改变Hela细胞的细胞周期,使细胞阻滞于G2/M期,并能诱导细胞凋亡.结论 蜈蚣多糖可能通过改变Hela细胞的细胞周期,诱导细胞凋亡,从而对Hela细胞的增殖有一定的抑制作用.     

天花粉蛋白对子宫颈癌Hela细胞Survivin基因的影响

目的:研究天花粉蛋白(TCS)对子宫颈癌Hela细胞Survivin基因表达的影响,以探讨TCS诱导Hela细胞凋亡的机制。方法:MTT法检测TCS对Hela细胞增殖的影响,倒置显微镜观察细胞形态;RT-PCR和Western blot分析TCS对Hela细胞Survivin基因表达的影响;流式细胞仪分析TCS对Hela细胞周期的影响。结果:①TCS显著性抑制Hela细胞增殖;②TCS处理后Hela细胞Survivin mRNA水平无明显改变,但蛋白表达水平显著降低;③TCS降低Hela细胞周期中G2/M期细胞比率,但增加S期细胞的数量。结论:通过下调凋亡抑制因子Survivin的表达而诱发Hela细胞凋亡,可能是TCS抑制Hela细胞增殖的分子机制。     

白花蛇舌草多糖对人宫颈癌Hela细胞和人肝癌Bel-7402细胞生长的影响

目的研究白花蛇舌草多糖对体外培养的人肝癌Bel-7402细胞和人宫颈癌Hela细胞生长的影响。方法常规法体外培养人肝癌Bel-7402细胞和人宫颈癌Hela细胞,设空白对照组、阳性对照组和供试药物组(大、中、小剂量),分别采用MTT法和流式细胞仪检测白花蛇舌草多糖对人宫颈癌Hela细胞和人肝癌Bel-7402细胞的生长抑制率和凋亡率;采用倒置显微镜观察细胞形态学变化。结果白花蛇舌草多糖可抑制人肝癌Bel-7402细胞和人宫颈癌Hela细胞的生长,并促进其凋亡,其作用效果与其浓度正相关,与空白对照组相比具均有显著性差异(P﹤0.01)。结论本研究结果提示,白花蛇舌草多糖具有较好的抗肿瘤活性。     

红花多糖对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的抑制作用

目的:观察红花多糖(Safflower polysaccharide,SPS)对SMMC-7721肝癌细胞增殖的抑制作用。方法:不同浓度SPS处理体外培养的SMMC-7721细胞株,采用MTT法测定SPS对SMMC-7721细胞增殖的影响;倒置显微镜观察细胞形态学变化;吖啶橙(AO)染色荧光显微镜观测以及Annexin-V/PI双染流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况。结果:MTT法检测结果显示SPS对人肝癌SMMC-7721细胞体外增殖具有明显的抑制作用,该抑制作用呈明显的时间和剂量依赖性(P<0.05或P<0.01)。光镜下可见SPS组贴壁细胞数明显减少,细胞变小、变圆,折光性差,贴壁不牢,悬浮细胞增多。AO染色荧光显微镜下观察,24h部分细胞出现胞质浓缩,体积缩小,核固缩,染色增强,荧光更为明亮,形成致密浓缩的绿色荧光等;48h和72h部分细胞可见细胞核固缩为新月状。流式细胞术结果显示细胞凋亡率随药物浓度增加亦呈增长趋势。结论:SPS能显著抑制人肝癌细胞SMMC-7721生长且呈明显的量效和时效关系。SPS可诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡,具有一定的剂量依赖性。     

白英提取液对Hela细胞凋亡及Fas/FasL基因表达的影响

目的:探讨白英提取液对Hela细胞凋亡及Fas/FasL基因表达的影响。方法:采用MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测凋亡,二步法免疫组化检测Fas蛋白表达,半定量RT-PCR检测Fas和FasL mRNA表达。结果:白英提取液对Hela细胞增殖有较强的抑制作用,且这种作用呈一定的剂量-时间依赖性;细胞凋亡率明显升高;Fas基因mRNA和蛋白表达显著上升,FasL mRNA表达明显下降。结论:白英提取液通过上调Fas基因和下调FasL基因表达,诱导细胞凋亡,从而抑制Hela细胞增殖。     

原卟啉钠体外对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞的抑制作用

目的:研究原卟啉钠(NAPP)体外对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞的抑制作用。方法:通过对人正常肝细胞株QSG-7701细胞的药物毒性实验筛选出NAPP对人正常肝细胞无明显毒性的最大无毒浓度(TC0)。以TC0为起始浓度,10倍梯度稀释成5个不同的NAPP浓度,作用于体外培养的人肝癌细胞株SMMC-7721细胞,通过MTT比色法测定NAPP对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用;经倒置光学显微镜和Hoechst33258染色倒置荧光显微镜进行形态学观察,计数凋亡细胞,并计算凋亡指数(AI);采用AnnexinⅤ-FITC/PI双标流式凋亡检测试剂盒经流式细胞仪检测SMMC-7721细胞凋亡和坏死率。结果:不同浓度NAPP作用后,SMMC-7721细胞的增殖明显受到抑制,A值明显降低(P<0.05或P<0.01),且抑制率呈一定的浓度-时间依赖性;光学显微镜下见细胞个数明显减少,细胞密度明显变稀,细胞形态发生了明显变化,很多细胞间的连接消失,细胞变圆、皱缩或见细胞外形变长呈长梭形;荧光显微镜下细胞呈典型的凋亡形态学改变,AI显著升高(P<0.05或P<0.01);经流式细胞仪检测,可见SMMC-7721细胞凋亡和坏死率不同程度升高。结论:NAPP在体外对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞具有一定的抑制增殖、促进凋亡和坏死的作用。