电针对骨骼肌萎缩模型大鼠的干预效果及作用机制研究

目的:研究电针对骨骼肌萎缩模型大鼠的干预效果及作用机制。方法:30只大鼠随机分为模型组、假手术组和电针组,各10只,建立骨骼肌萎缩模型。电针组给予电针治疗,假手术组和模型组大鼠每天进行固定。检查腓肠肌湿重、干重,骨骼肌肌纤维直径、面积,采用ELISA检测泛素蛋白连接酶肌肉环指蛋白1(MURF1)、PGC-1α、Ⅲ型纤连蛋白组件包含蛋白5(FNDC5)蛋白,采用Western Blot检测Akt、mTOR、p-Akt及p-mTOR。结果:电针组骨前肌湿重、干重、干重/体重、骨骼肌肌纤维直径和面积高于模型组,低于假手术组(P 0.05);模型组骨前肌湿重、干重、干重/体重、骨骼肌肌纤维直径和面积低于假手术组(P 0.05)。电针组骨骼肌相关蛋白MURF1表达低于模型组,PGC-1α、FNDC5表达高于模型组;电针组骨骼肌相关蛋白MURF1表达高于假手术组,PGC-1α、FNDC5表达低于假手术组(P 0.05);模型组骨骼肌相关蛋白MURF1表达高于假手术组,PGC-1α、FNDC5表达低于假手术组(P 0.05)。电针组Akt、mTOR、p-Akt及p-mTOR表达高于假手术组和模型组(P 0.05);模型组Akt、mTOR、p-Akt、p-mTOR表达低于假手术组(P 0.05)。结论:电针对骨骼肌萎缩模型大鼠干预效果显著,能改善大鼠骨骼肌萎缩状况,通过激活Akt/mTOR通路,调控骨骼肌相关蛋白MURF1、PGC-1α和FNDC5表达,从而抑制骨骼肌萎缩。     

黄芩甙对重症急性胰腺炎大鼠胰腺ICAM-1和P-选择素表达的影响

目的观察黄芩甙对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠胰腺组织ICAM-1和P-选择素表达的影响情况。方法将45只大鼠随机分为假手术组、模型组、黄芩甙组,每组15只。假手术组进腹后仅翻动胰腺和十二指肠后关腹,模型组、黄芩甙组在造模成功后分别给予生理盐水和黄芩甙。术后3,6,12 h,观察大鼠胰腺的病理变化,测定胰腺组织中髓过氧化物(MPO)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,用免疫组化方法检测胰腺组织ICAM-1和P-选择素的表达情况。结果术后3,6,12 h,模型组和黄芩甙组的病理评分均显著高于假手术组(P均<0.05),且模型组和黄芩甙组6,12 h的病理评分均显著高于3 h(P均<0.05),但2组评分在6 h和12 h间无显著性差异;术后3,6,12 h,模型组胰腺组织中MPO和TNF-α较假手术组显著降低(P均<0.05),黄芩甙组胰腺组织中MPO和TNF-α较模型组显著降低(P均<0.05);术后各时间点,模型组ICAM-1和P-选择素随时间延长显著增多,黄芩甙组则随时间延长而显著减少。结论黄芩甙可能通过抑制中性粒细胞的浸润,减轻ICAM-1和P-选择素的表达而发挥对胰腺组织的保护作用。     

电针对创伤性颅脑损伤大鼠损伤区皮层自噬相关蛋白表达的影响

目的:观察电针对创伤性颅脑损伤(TBI)大鼠大脑皮层自噬相关蛋白表达的影响,探讨电针治疗TBI的可能机制。方法:将雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针Ⅰ组、电针Ⅱ组,每组10只。采用改良Feeney自由落体打击法制备TBI模型。电针Ⅰ组于造模后第7天开始电针"内关""足三里"联合针刺"水沟""百会",1次/d,连续7 d;电针Ⅱ组取穴及治疗方法同电针Ⅰ组,于造模后24 h开始干预,1次/d,连续14 d;假手术组只钻开颅骨,不造模也不进行任何干预。治疗结束后,取各组大鼠损伤区脑组织皮层用HE染色和尼氏染色法观察病理形态变化;Western blot法检测损伤区脑组织皮层AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)、磷酸化AMPK(p-AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化mTOR(p-mTOR)、Ulk1、磷酸化Ulk1(p-Ulk1)蛋白表达情况。结果:与假手术组比较,模型组大鼠大脑损伤区皮层可见大量组织坏死,神经纤维排列散乱,细胞空泡样改变,核破碎、固缩,有增生的瘢痕组织;尼氏小体明显减少;创伤区皮层p-AMPK/AMPK上调(P0.01),p-mTOR/mTOR、p-Ulk1/Ulk1均下调(P0.01)。与模型组比较,两电针组大鼠大脑皮层损伤区病理改变减轻;尼氏小体数量增加;损伤区皮层p-AMPK/AMPK下调(P0.01),p-mTOR/mTOR、p-Ulk1/Ulk1均上调(P0.01)。与电针Ⅰ组比较,电针Ⅱ组损伤区皮层病理改善情况更明显;p-AMPK/AMPK下调(P0.05),p-mTOR/mTOR、p-Ulk1/Ulk1均上调(P0.05)。结论:电针可能是通过调节AMPK、mTOR、Ulk1自噬相关蛋白的活化状态来抑制创伤区皮层神经元自噬的过度活化,进而对TBI大鼠发挥脑保护作用,且电针早期干预效果更佳。     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨炙甘草汤抗大鼠MIRI致室速和室颤的作用机制

目的:通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路,探讨炙甘草汤干预心肌缺血再灌注损伤(MIRI)致心律失常(室速和室颤)的作用及其机制。方法:将72只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,炙甘草汤低、中、高剂量组(11.43,22.86,45.72 g·kg~(-1)),稳心颗粒组(2.43 g·kg~(-1)),连续给药干预10 d。末次给药2 h,采用结扎冠状动脉左前降支法制备大鼠MIRI模型,记录心电图的变化。造模成功后采集血液及心脏组织,检测血清中肌酸肌酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)及丙氨酸氨基转移酶(AST)的含量;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测心肌肌钙蛋白(CtnI)的含量;免疫组化法检测心肌PI3K,Akt,mTOR的表达;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC-3),自噬标志物Beclin1和PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达及磷酸化p-PI3K,p-Akt,p-mTOR的水平。结果:模型组大鼠100%发生室速,91.67%发生室颤;与假手术组比较,模型组大鼠血清CK,LDH,AST以及CtnI的含量显著升高(P0.01),心肌组织中PI3K,Akt,mTOR表达显著升高(P0.01),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ与Beclin1的相对表达量显著升高(P0.01),p-PI3K/PI3K,p-Akt/Akt,p-mTOR/mTOR显著降低(P0.01);与模型组比较,炙甘草汤高剂量组室速、室颤发生率显著降低(P0.01),较其他给药组持续时间短(P0.01);炙甘草汤高剂量组CK,LDH,AST水平及CtnI含量显著降低(P0.01);炙甘草汤给药组的PI3K,Akt,mTOR的表达随剂量的增加而显著降低(P0.01);LC-3,Beclin1的表达随炙甘草汤各剂量组的增加有不同程度地下降(P0.01),而PI3K/Akt/mTOR相关蛋白表达比值明显升高(P0.05,P0.01)。结论:炙甘草汤预处理能使异常升高的心肌酶CK,LDH,AST,CtnI降低,抑制细胞的过度自噬,上调PI3K,Akt和mTOR的表达,说明炙甘草汤抗MIRI致心律失常的作用可能与PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

黄芩甙对重症急性胰腺炎大鼠胰腺聚ADP-核糖聚合酶活性的抑制作用

目的探讨黄芩甙对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠胰腺聚ADP-核糖聚合酶(PARP)活性的抑制作用。方法将45只大鼠随机分为假手术组、模型组、黄芩甙干预组,每组15只。假手术组进腹后仅翻动胰腺和十二指肠后关腹,模型组采用3.5%牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射造成SAP大鼠模型,黄芩甙干预组在造模成功后给予黄芩甙治疗。术后3,6,12 h测定各组大鼠血清淀粉酶、脂肪酶及胰腺组织髓过氧化物(MPO)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平,并用免疫组化方法检测胰腺组织PARP的活性代谢产物聚腺苷二磷酸核糖(PAR)的表达水平。结果术后3,6,12 h,模型组血清淀粉酶、脂肪酶及MPO水平均较假手术组显著增高。黄芩甙干预组血清淀粉酶、脂肪酶及MPO水平均显著低于模型组;术后各时间点,假手术组胰腺组织均无PAR表达;模型组PAR阳性,且随时间延长表达显著增多;黄芩甙干预组PAR表达低于模型组,且随时间延长显著减少。术后各时间点,黄芩甙干预组胰腺组织IL-6和TNF-α水平显著低于模型组(P均<0.01)。结论黄芩甙可能通过抑制PARP的活性,减轻活性氧产物对胰腺组织的损害而发挥对胰腺组织的保护作用。     

大黄对内毒素性肠损伤大鼠PTEN/PI3K/Akt信号通路的影响

目的观察大黄对内毒素性肠损伤大鼠PTEN/PI3K/Akt信号通路的影响,探讨其作用机制。方法将30只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组和大黄低、高剂量组,每组6只。各给药组造模前给予相应药液灌胃,连续5 d,每日1次。第5日给药后2 h,除正常组外各组大鼠尾静脉注射脂多糖制备肠损伤模型。造模7h后取材,光镜下观察大鼠肠组织病理学改变,免疫组化检测PTEN、PI3K、Akt、mTOR蛋白的表达,Western blot检测PI3K、p-mTOR蛋白的表达。结果模型组大鼠肠壁黏膜层广泛变性坏死,大量肉芽组织增生;地塞米松组和大黄低、高剂量组病理学改变较模型组减轻。免疫组化结果显示,与正常组比较,模型组大鼠肠组织PTEN蛋白表达显著降低(P0.001),PI3K、Akt蛋白表达显著升高(P0.001,P0.01);与模型组比较,大黄高剂量组大鼠肠组织PTEN蛋白表达显著升高(P0.01),大黄低、高剂量组PI3K、Akt蛋白表达显著降低(P0.001)。Western blot结果显示,与模型组比较,地塞米松组和大黄低、高剂量组大鼠肠组织PI3K、p-mTOR蛋白表达显著降低(P0.05)。结论大黄对内毒素性肠损伤大鼠具有保护作用,其机制可能与上调肠组织PTEN和下调PI3K、Akt、p-mTOR的表达,抑制PI3K/Akt信号通路有关。     

柴胡皂苷d联合黄芩苷对大鼠脑缺血/再灌注损伤中PARP-1表达的影响

目的:探讨柴胡皂苷d联合黄芩苷对二磷酸腺苷核糖多聚酶-1(Poly(ADP-ribose)polymerase-1,PARP-1)表达的影响。方法:将健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组、PARP-1抑制剂PJ34组、柴胡皂苷d组、黄芩苷组、柴胡皂苷d+黄芩苷组,按再灌注时间点不同分为6h、12h、24h、48h、72h五个亚组;应用修饰酶循环法检测NAD+浓度,定量RT-PCR技术检测PARP-1mRNA表达。结果:模型组NAD+浓度较假手术组明显降低(P0.01),PARP mRNA表达显著增加(P0.01),于再灌注24h达高峰;药物干预组NAD+浓度较模型组显著增加(P0.01),PARP mRNA表达显著降低(P0.01),并于24h表达最低(P0.01,P0.05),且柴胡皂苷d+黄芩苷组效果最为显著(P0.01)。结论:我们推测柴胡皂苷d联合黄芩苷可能是通过抑制MCAO大鼠PARP-1表达,降低NAD+消耗,实现其对大鼠脑缺血/再灌注损伤的神经保护作用。     

丹参酮ⅡA注射液对缺血缺氧性脑损伤新生大鼠皮质神经元自噬及Akt-mTOR通路的影响

目的观察丹参酮ⅡA注射液对缺血缺氧性脑损伤新生大鼠皮质神经元自噬及Akt-mTOR通路影响并探讨其机制。方法 7日龄SD新生大鼠80只,随机平均分为5组,分别为假手术组、模型组及经丹参酮ⅡA处理的高剂量组(0.1 mg/g)、中剂量组(0.05 mg/g)、低剂量组(0.02 mg/g)。Rice法造模,透射电镜观察新生大鼠大脑皮质神经元变化情况,TTC染色检测脑梗死情况,蛋白免疫印迹检测脑组织LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin-1、p-Akt、p-mTOR、p-S6蛋白表达情况。结果假手术组神经元结构正常,模型组中观察到皮质神经元中存在大量的自噬体和自噬溶酶体,其中泡状自噬体中包裹有可见的细胞质结构。相较于模型组,高剂量组、中剂量组、低剂量组中自噬体数量明显减少,且呈一定的剂量依赖性(P 0.05)。与假手术组相比,模型组中幼鼠脑梗死面积显著增加(P 0.05)。与模型组相比,高剂量组、中剂量组、低剂量组中脑梗死面积显著减小,且呈一定的剂量依赖性(P 0.05)。与假手术组相比,模型组中LC3-Ⅰ/(LC3-Ⅰ+LC3-Ⅱ)的比值与Beclin-1蛋白表达水平显著增高(P 0.05)。与模型组相比,高剂量组、中剂量组、低剂量组中LC3-Ⅰ/(LC3-Ⅰ+LC3-Ⅱ)的比值与Beclin-1蛋白表达水平显著降低,且呈剂量依赖性(P 0.05)。与假手术组相比,模型组中pAkt、p-mTOR、p-S6蛋白表达水平均显著降低(P 0.05)。与模型组相比,高剂量组、中剂量组、低剂量组中pAkt、p-mTOR、p-S6蛋白表达水平均显著增加,且呈剂量依赖性(P 0.05)。结论丹参酮ⅡA对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤大脑皮质神经元自噬具有显著的抑制作用,推测其机制可能为通过激活Akt-mTOR信号转导通路实现的。     

黄芪甲苷对特发性肺纤维化自噬活性作用及PI3K/Akt/mTOR信号调控的影响

目的:研究黄芪甲苷对特发性肺纤维化自噬活性影响及其磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/mTOR信号的调控作用,探讨黄芪的抗肺纤维化机制。方法:c57bl/6小鼠分为假手术组、模型组、黄芪甲苷低、中、高剂量组、泼尼松组。博莱霉素(BLM)10 mg·kg-1诱导建立肺纤维化动物模型,以黄芪甲苷低、中、高剂量(25,50,100 mg·kg-1)干预,分别于3,7,14,28 d取材,进行苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织形态变化,马松(Masson)三色染色、羟脯氨酸测定观察胶原表达水平,免疫组化及蛋白质免疫印迹(Western bolt)分析自噬标记蛋白和PI3K/Akt/mTOR信号蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组肺组织炎症反应明显、胶原蛋白显著增加(P0.01),PI3K/Akt/mTOR信号增强,自噬活性下降,与模型组比较,黄芪甲苷中、高剂量明显抑制肺组织炎症反应,下调转化生长因子-β1(TGF-β1)(P0.01)和胶原蛋白(P0.05)表达,提高LC3Ⅱ/Ⅰ和(beclin-1)表达(P0.05),减少p62积累(P0.05),同时抑制PI3K,Akt,mTOR磷酸化水平(P0.05),减少ɑ-平滑肌动蛋白(ɑ-SMA)而提高E-钙黏素(E-cadherin)表达(P0.01)。结论:黄芪甲苷通过抑制肺组织炎性反应、下调TGF-β1表达,抑制PI3K/Akt/mTOR信号增强肺组织细胞自噬活性,阻止上皮间质转分化(EMT)过程。     

黄芩苷对缺血性脑损伤雄性大鼠脑保护作用的机制研究

目的观察黄芩苷对缺血性脑损伤雄性大鼠的脑保护作用及其对大鼠血清孕酮水平的影响,探讨其可能的作用机制。方法采用成年SD雄性大鼠制造永久性左侧大脑中动脉梗阻模型,根据神经功能评分,分为模型组、黄芩苷组和抑制剂组,假手术组不插入拴线。造模后于不同时间点进行神经功能评分及双前肢抓力测定,计算抓力下降率;ELISA检测血清孕酮和促肾上腺皮质激素(ACTH)含量。结果与假手术组比较,模型组大鼠神经功能受损,双前肢抓力显著减小。治疗7 d后,与模型组比较,黄芩苷组神经功能评分降低,双前肢抓力恢复,抓力下降率减小(P0.05);与黄芩苷组比较,抑制剂组黄芩苷神经功能保护作用降低(P0.05)。治疗7 d后,与模型组比较,黄芩苷组血清孕酮水平显著升高(P0.01),ACTH水平有升高趋势;与黄芩苷组比较,抑制剂组血清孕酮和ACTH水平均降低(P0.05)。结论黄芩苷对缺血性脑损伤雄性大鼠的脑保护作用可能与其调控孕酮生成有关。