益气活血组方对大鼠缺血心肌血管新生作用及对血管内皮生长因子和碱性成纤维生长因子的影响

目的：探讨益气活血组方对急性心肌梗死后大鼠缺血心肌组织血管新生作用和对血管内皮生长因子（VEGF）和碱性成纤维生长因子（bFGF）表达的影响。方法：建立心梗模型后,将40只雄性SD大鼠,采用随机数字表法分为4组：模型组、假手术组、麝香保心丸、益气活血组方。运用免疫组化法检测梗死心肌边缘区微血管计数（MVC）和微血管密度（MVD）及VEGF和bFGF表达;同时应用Western blot技术检测各组大鼠缺血心肌VEGF和bFGF蛋白质水平表达变化。结果：益气活血组方和麝香保心丸组分别与模型组比较,梗死心肌边缘区微血管计数和微血管密度都显著高于后者(P<0.01）。益气活血组方、麝香保心丸组中缺血心肌VEGF和bFGF表达以及其蛋白表达水平较其余组显著升高（P<0.01）。结论：益气活血组方能明显促进心梗后大鼠缺血心肌血管新生,上调心肌VEGF和bFGF蛋白表达可能是其中一个重要的作用机制。     

通脉地仙丸对大鼠缺血心肌血管生成及其相关基因表达的影响

目的观察通脉地仙丸对大鼠缺血心肌血管生成及其相关基因表达的影响。方法除假手术组外,大鼠进行慢性心肌缺血造模,造模成功后,随机分为模型组、麝香保心丸组与通脉地仙高、中、低剂量组,各组灌胃给药,6周后采用免疫组化法检测心肌组织中血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)蛋白含量,并观察VEGF、bFGF mRNA的表达。结果与假手术组比较,模型组、通脉地仙丸各剂量组和麝香保心丸组bFGF、VEGF蛋白表达上调(P<0.05,P<0.01,P<0.001);与模型组比较,通脉地仙各剂量组和麝香保心丸组bFGF、VEGF蛋白表达均上调(P<0.05,P<0.01,P<0.001);与假手术组比较,模型组、麝香保心丸组和通脉地仙高、中剂量组VEGF、bFGF mRNA表达上调(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,通脉地仙高、中剂量组和麝香保心丸组VEGF、bFGF mRNA表达均上调(P<0.01,P<0.001)。结论通脉地仙丸对大鼠缺血心肌血管生成的影响与血管内皮生长因子VEGF、bFGF相关,且发挥重要作用。     

芪丹通脉片含药血清对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响

目的观察芪丹通脉片对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管新生的影响。方法制备CAM模型,用芪丹通脉片含药血清作用于CAM,以碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及生理盐水分别作为阳性对照和阴性对照观察血管生成的情况。结果芪丹通脉片具有明显的促进CAM血管新生作用,但效果弱于bFGF。结论芪丹通脉片能够促进CAM血管新生。     

麝香保心丸对实验性心肌梗塞大鼠心脏的促血管生成作用

目的：探讨麝香保心丸对心肌梗塞大鼠冠状动脉侧枝血管生成的影响及其机制。方法：24只大鼠随机分成麝香保心丸组（A组），贝复剂与肝素组（B组）和生理盐水对照组（C组），建立心肌梗塞模型，6周后检测梗塞面积，梗塞边缘区VEGF，bFGF和VⅢ因子的表达量以及血管面密度。结果：A组梗塞面积明显小于C组，梗塞边缘区VEGF，bFGF和VⅢ因子的表达量以及血管面密度均较C组明显增加，结论：麝香保心丸能促进大鼠缺血心肌冠脉侧枝的血管生成，对缺血心肌具有保护作用。     

丹参注射液促心肌梗塞后大鼠缺血心肌血管新生作用及对相关生长因子的影响研究

目的观察丹参注射液对心肌梗塞(MI)后大鼠缺血心肌血管新生作用,并探讨其机制。方法雄性Wistar大鼠,结扎左冠状动脉造成急性心肌梗塞(AMI)模型,随机分为丹参注射液组、麝香保心丸(阳性对照)组、模型组(阴性对照),并设假手术组,6周后处死动物。用免疫组织化学法,检测各组大鼠缺血心肌中微血管数(MVC)、微血管密度(MVD)及血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血小板衍生生长因子β(PDGF-β)、胰岛素样生长因子(IGF-1)蛋白的表达,用病理图像分析系统测定生长因子蛋白表达灰度值并进行半定量分析。结果模型组、麝香保心丸组及丹参注射液组大鼠MI边缘区MVC和MCD较假手术组明显增多(P<0.05);丹参注射液组大鼠缺血心肌局部MVC和MVD明显高于模型组(P<0.05),与麝香保心丸组作用相似(P>0.05)。模型组VEGF,bFGF-β,IGF-1蛋白表达及其灰度值明显高于假手术组(P<0.05);丹参注射液组VEGF,bFGF,PDGF-β蛋白表达灰度值明显高于模型组(P<0.05),而IGF-1蛋白表达灰度值低于模型组(P>0.05)VEGF,bFGF,PDGF-β,IGF-1蛋白表达灰度值低于麝香保心丸组(P<0.05)。结论丹参注射液有促MI后大鼠缺血心肌血管新生的作用,其机制可能与促进VEGF,bFGF,PDGF-β的表达有关。     

川芎嗪注射液促心梗后大鼠缺血心肌血管新生作用及对相关生长因子影响的研究

目的:观察川芎嗪注射液对心肌梗死(MI)后大鼠缺血心肌血管新生作用,并探讨其机制。方法:雄性Wist-ar大鼠,结扎左冠状动脉造成急性心肌梗死(AMl)模型,随机分为川芎嗪注射液组、麝香保心丸组(阳性对照)、模型组(阴性对照),并设假手术组。6周后处死动物,用免疫组织化学法,检测各组大鼠缺血心肌中微血管数(MVC)、微血管密度(MVD)及血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血小板衍生生长因子β(PDGF-β)、胰岛素样生长因子(IGF-1)蛋白的表达,用病理图像分析系统测定生长因子蛋白表达灰度值并进行半定量分析。结果:模型组、麝香保心丸组及川芎嗪组大鼠MI边缘区MVC和MVD较假手术组明显增多(P<0.05);川芎嗪组大鼠缺血心肌MVC和MVD较模刑组明显增加(P<0.05),与麝香保心丸组作用相似(P>0.05)。模型组VEGF、bFGF、PDGF-β、IGF-1蛋白表达及其灰度值明显高于假手术组(P<0.05);川芎嗪组四种生长因子蛋白表达灰度值明显高于模刑组(P<0.05),但低于麝香保心丸组,bFGF、PDGF-β、IGF-1蛋白表达灰度值两组相比无统计学差异(P>0.05),VEGF蛋白表达灰度值两组相比有统计学差异(P<0.05)。结论:川芎嗪注射液有促MI后大鼠缺血心肌血管新生的作用,其机制可能与促进VEGF、bFGF、PDGF-β、IGF-1的表达有关。     

中医药促冠心病缺血心肌血管新生的研究纂要

近年来中医药促缺血心肌血管新生的研究方面主要进行药物和疗法的研究：1、中药和单体：葛根素、川芎醇与川芎咔啉碱、丹参注射液等；2、方剂及中成药：当归补血汤、麝香保心丸、双龙丸、通心络等；3、针灸疗法。以上药物和疗法通过影响心肌局部内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及其mRNA的表达等起促缺血心肌血管新生的作用。对今后相关研究工作提出了一些设想。     

养心通脉方促心肌梗死后大鼠缺血心肌血管生成作用及对VEGF、bFGFmRNA表达的影响

[目的]探讨养心通脉方促心肌梗死后大鼠缺血心肌血管生成作用及对VEGF、bFGFmRNA表达的影响。[方法]120只大鼠制成急性心肌梗死(AMI)模型,随机分为A、B、C、D、E、F 6组,每组20只;治疗6周后处死动物,取心肌组织,用免疫组织化学SP法染色组织切片测定大鼠边缘区心肌微血管数(MVC)、微血管密度(MVD)。用RTPCR法检测心肌血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)的mRNA表达。[结果]养心通脉方各剂量组梗死边缘区MVC、MVD、VEGF、bFGF的mRNA的表达均高于模型组(P 0. 05),高、中剂量组与麝香保心丸组比较,差异有显著性意义(P 0. 05);低剂量组与麝香保心丸组比较,差异无显著性意义(P 0. 05)。[结论]养心通脉方能促进梗死后大鼠缺血心肌局部血管新生,对缺血心肌具有保护作用,而上调心肌梗死边缘区VEGF、bFGF的mRNA表达可能是其作用机制之一。     

中医药促冠心病缺血心肌血管新生的研究纂要

近年来中医药促缺血心肌血管新生的研究方面主要进行药物和疗法的研究:1、中药和单体:葛根素、川芎醇与川芎咔啉碱、丹参注射液等;2、方剂及中成药:当归补血汤、麝香保心丸、双龙丸、通心络等;3、针灸疗法.以上药物和疗法通过影响心肌局部内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及其mRNA的表达等起促缺血心肌血管新生的作用.对今后相关研究工作提出了一些设想.     

养心通脉有效部位方对鸡胚绒毛尿囊膜血管新生的影响

目的 探讨养心通脉有效成分部位方(YTⅡ)对鸡胚绒毛尿囊膜血管新生的影响.方法 制备养心通脉有效部位方组(YTⅡ组)、养心通脉方原方组(YT Ⅰ组)、麝香保心丸组(SBW组)、重组牛碱性成纤维细胞生长因子组(bFGF组)和无药血清组(KX组)各组的含药血清,另外设置空白组,共6组,每组25个鸡胚.复制鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型.从0 h、24 h、48 h、72 h和96 h共5个时间点,观察YTⅡ及各组对CAM模型鸡胚存活情况、CAM标本形态和CAM新生血管数量的影响.结果 分组加药后96 h时,bFGF组和YTⅡ组存活率明显高于其它各组.加药72 h后各药物组粗大血管及细小分支迅速增多,血管网络清晰,呈叶脉样,放射性生长,加药96 h时更明显,尤以bFGF组和YTⅡ组血管生长最为旺盛.加药48 h,72 h和96 h,各药物组与空白组、KX组比较,均具有显著性差异(P<0.05),各组血管新生数呈bFGF组>YTⅡ组>YT Ⅰ组>SBW组>KX组>空白组的趋势.结论 YTⅡ与YTⅠ、SBW、bFGF同样具有促血管新生的作用,且YTⅡ作用与bFGF作用相当,明显优于YT Ⅰ和SBW.     

鳖甲煎丸对HUVEC增殖及HepG2中VEGF表达的影响

目的:通过研究鳖甲煎丸对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vascular endothelial cell,HUVEC)增殖及肝癌细胞系HepG2中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响,探讨其抗肝细胞癌血管生成的机制。方法:将24只6周龄Wistar大鼠随机分为3组(8只/组),分别以临床剂量20,10倍的鳖甲煎丸水溶液及生理盐水ig 3d,3 d后采血,离心,获取血清。用含有不同浓度HepG2培养上清的条件培养基培养HUVEC,48 h后用MTT比色法检测HUVEC的增殖情况并确定条件培养基的最适浓度。用该浓度的条件培养基培养HUVEC,分别于48,72 h后采用MTT比色法检测药物血清对HUVEC增殖的影响。用含药血清培养HepG2,48 h后采用ELISA方法检测培养液上清中VEGF的浓度,采用qRT-PCR法检测VEGF mRNA的表达情况。结果:鳖甲煎丸高、中剂量组10%药物血清能够显著抑制HUVEC的增殖,这种抑制作用具有浓度和时间依赖性。鳖甲煎丸高、中剂量10%药物血清组中VEGF浓度与VEGF mRNA表达水平均明显下降,并且下降程度与药物浓度有关。结论:鳖甲煎丸能够抑制HUVEC的快速增殖并且显著地降低HepG2中VEGF的表达水平。研究表明鳖甲煎丸在抗肝细胞癌血管生成方面具有一定作用。     

舒脉胶囊对大鼠缺血心肌促血管新生的影响

目的观察舒脉胶囊对缺血心肌血管新生和相关因子表达的影响。方法复制大鼠心肌缺血模型,分别给予舒脉胶囊（舒脉组）、贝复济＋肝素（阳性药组）、生理盐水（模型组）,另设假手术组,给予生理盐水;给药不同时间（1、2、4周）后,用免疫组织化学法测定缺血心肌血管性血友病因子（vwF）、血管内皮细胞生长因子（VEGF）的蛋白表达;图像分析系统计算缺血心肌新生血管数;实时定量PCR检测VEGF的基因表达水平。结果与假手术组、模型组比较,舒脉组和阳性药组3个时间段新生微血管数显著增加（P〈0．01）,两用药组比较,差异无统计学意义;与假手术组、模型组比较,舒脉组和阳性药组3个时间段VEGF基因及蛋白表达增加（P〈0．01）,两用药组比较,差异无统计学意义。结论舒脉胶囊能促进实验性大鼠缺血心肌微血管生成,对VEGF基因及蛋白表达的上调可能是其促血管新生的作用机制之一。     

人参、三七提取物对Ras相关信号蛋白的影响

目的 探讨益气活血中药人参、三七提取物对血管内皮细胞血管生成信号蛋白血管内皮生长因子受体-2（VEGFR-2）、Ras及有丝分裂原活化蛋白激酶（MAPK）表达的影响。     

地鳖纤溶蛋白对人脐静脉内皮细胞、肺癌、乳腺癌细胞VEGF和bFGF表达的影响

目的研究地鳖纤溶蛋白(EFP)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和人肺癌(A549)、乳腺癌(MCF-7)细胞分泌血管内皮细胞生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的影响。方法采用含药血清体外培养人脐静脉内皮细胞、肺癌、乳腺癌细胞,通过MTT法和双抗夹心酶联免疫吸附分析法(ELISA)观察地鳖纤溶蛋白对细胞的体外增殖和分泌VEGF和bFGF的影响。结果 EFP含药血清对人脐静脉内皮细胞、肺癌、乳腺癌细胞有显著抑制作用,ELISA法检测结果表明EFP含药血清对人脐静脉内皮细胞、肺癌、乳腺癌细胞的VEGF和bFGF表达均有抑制作用。结论 EFP可抑制肿瘤细胞VEGF和bFGF表达。     

活血化瘀中药对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响

目的观察常用活血化瘀中药赤芍、当归、红花、川芎、丹参、黄芪及复方当归补血汤、血府逐瘀汤、芎芍胶囊等对鸡胚绒毛尿囊膜（chorioallantoic membrane,CAM）新生血管生成的影响。方法制备CAM模型,分别应用赤芍、当归、红花、川芎、丹参、黄芪及当归补血汤、血府逐瘀汤、芎芍胶囊的含药血清,观察CAM血管生成的情况,同时,设立生理盐水对照组、空白血清对照组、空白对照组及碱性成纤维细胞生长因子（basicfibroblast growth factor,bFGF）阳性对照组。结果所选药物及bFGF皆有促进CAM新生血管生成的作用,其中,丹参及当归补血汤、血府逐瘀汤、芎芍胶囊等复方在血管生成及血管计数方面,均明显优于生理盐水对照组、空白血清对照组及空白对照组,与阳性对照药bFGF的作用相当;中药复方的作用优于丹参之外的其他单味中药。结论活血化瘀中药丹参及当归补血汤、血府逐瘀汤、芎芍胶囊具有较好的促进CAM新生血管生成的作用。本实验从一个侧面阐明了活血化瘀中药及方剂治疗缺血性疾病的作用机理,同时,研究也体现了中药复方应用的科学依据。     

淫羊藿素抑制人脐静脉内皮细胞血管生成及其机制

目的:探讨淫羊藿素对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)血管生成的抑制作用及其机制。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,分别观察淫羊藿素对其增殖、迁移及其小管形成的影响。采用酶联免疫吸附法检测血管内皮细胞生长因子(VEGF)和色素上皮衍生因子(PEDF)的含量。结果:经淫羊藿素作用48 h后,未见对内皮细胞增殖有影响。淫羊藿素高浓度组(ICT1 10-6mol/L)、中浓度组(ICT2 10-7mol/L)、低浓度组(ICT3 10-8mol/L)和沙利度胺(TLD)组HUVEC细胞迁移数目(4.67±1.26)、(10.48±3.15)、(21.06±6.83)和(19.15±6.03)个,明显低于空白对照(Control)组(41.38±7.78)个(P0.01)。ICT1、ICT2、ICT3及TLD组小管形成的面积分别为(5 867.45±925.36)、(1 627.33±288.56)、(735.73±325.65)和(2 933.24±741.43)μm2/视野,均低于Control组(7 883.69±1 034.85)μm2/视野(P0.01)。经淫羊藿素处理后,HUVEC细胞分泌VEGF功能明显下降,而分泌PEDF功能明显升高。结论:体外实验结果表明淫羊藿素具有抑制HUVEC细胞血管生成的作用,这种效应与血管内皮细胞VEGF的活性降低及其合成受到抑制,同时对PEDF活性升高及其合成受到促进作用有关。     

12-Deoxyphorbol 13-palmitate inhibit VEGF-induced angiogenesis via suppression of VEGFR-2-signaling pathway

Ethnopharmacological relevance

12-Deoxyphorbol 13-palmitate (G) is one toxic compound isolated from Euphorbia fischeriana, an Asian spice used for cancer treatment as a folk remedy. However, whether 12-deoxyphorbol 13-palmitate affects angiogenesis remains unclear.

Aim of the study

To explore the in vitro and in vivo antiangiogenic effects of 12-deoxyphorbol 13-palmitate and its underlying mechanisms.

Materials and methods

We explored antigenic functions in human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) by 12-deoxyphorbol 13-palmitate, including proliferation, migration and metastasis through matrigel plug assay, chorioallantoic membrane assay, in vitro migration assay, tube formation assay, motility assay. Antibody chip was applied to screen differentially expressed proteins modulated by 12-deoxyphorbol 13-palmitate, and was further confirmed by RT-PCR and western blot analysis. Tumor xenograft mice were applied to investigate whether 12-deoxyphorbol 13-palmitate could inhibit microvessel density in vivo.

Results

12-Deoxyphorbol 13-palmitate inhibited vascular endothelial growth factor (VEGF)-induced angiogenic processes in vitro, such as proliferation, in vitro migration, and tube formation of HUVEC. In chorioallantoic membrane assay, 12-deoxyphorbol 13-palmitate significantly inhibited neovessel formation. Antibody chip technology demonstrated decreased expression of TIMP-1, TIMP-2, VEGF, basic fibroblast growth factor (bFGF), matrix metalloproteinases (MMP)-2, VEGFR-2 and VEGFR-3 proteins in HUVEC after 24 h. In addition, 12-deoyphorbol 13-palmitate inhibited the in vivo growth of MCF-7 cells in grafted mouse model. Immunohistochemistry staining showed decreased microvessel density (CD31) and attenuated VEGFR-2 signaling pathways by 12-deoxyphorbol 13-palmitate.

Conclusion

12-Deoxyphorbol 13-palmitate may be utilized to target active angiogenesis through VEGF/VEGFR2 signal pathway for cancer.     

芪丹通脉片含药血清促血管生成的实验研究

目的:探讨芪丹通脉片含药血清对体内外血管生成的促进作用。方法:采用鸡胚绒毛尿囊膜模型(CAM),观测芪丹通脉片含药血清对CAM新生的促进作用;采用流式细胞术检测芪丹通脉片含药血清对内皮细胞周期的影响;采用免疫组织化学染色法检测内皮细胞VEGF的表达。结果:芪丹通脉片能够明显促进CAM血管新生,但弱于bFGF组;芪丹通脉片促进内皮细胞生长,增加细胞周期中S期细胞的数。芪丹通脉片能够上调VEGF的表达。结论:芪丹通脉片具有促进血管生成作用,其机制与促血管内皮细胞增殖以及上调VEGF的表达有关。     

人参皂苷Rg3对肿瘤血管生长调控因子蛋白表达抑制作用的研究

目的探讨中药单体人参皂苷20(R)-Rg₃对肿瘤血管生长调控因子(VEGF,bFGF,MMP2)蛋白表达的抑制作用。方法进行人肺腺癌细胞株A549、人脐静脉血管内皮细胞HUVEC304细胞株培养、10^-6mol·L^-1浓度Rg₃药物干预72h,采用免疫组化、基因芯片技术,检测上述因子蛋白表达阳性率和灰度变化以及A549细胞基因的差异表达情况。结果Rg₃干预后,A549细胞VEGF蛋白阳性表达率显著降低(P=0.03),VEGF,Flt,KDT以及MMP2蛋白阳性表达的强度较对照组均有显著下降(P<0.05),内皮细胞VEGF,Flt和KDT蛋白阳性表达的灰度较对照组均有显著下降(P<0.05)。基因芯片差异性表达显示其中14个基因下调,10个基因上调。结论Rg₃可显著抑制肿瘤细胞和血管内皮细胞的血管生长调控因子蛋白表达,通过不同靶点作用于肿瘤细胞影响肿瘤新生血管的生成。     

蛇葡萄素的血管生成抑制作用

目的:探讨蛇葡萄素对内皮细胞及肿瘤细胞的生长及其血管生成的影响。方法:体外用MTT法对牛主动脉内皮细胞进行增殖抑制实验;用ELISA法、免疫组化染色法以及流式细胞仪观察蛇葡萄素对人肝癌细胞Bel-7402分泌VEGF、bFGF的抑制作用;体内观察蛇葡萄素对人肝癌Bel-7402裸鼠移植瘤的抑制作用。结果:蛇葡萄素对牛主动脉内皮细胞的增殖在6.4~51.2μg/m l呈现浓度依赖性抑制作用,IC50=22.0±4.0μg/m l。ELISA法测定结果显示,12.8μg/m l、25.6μg/m l、38.4μg/m l蛇葡萄素对肝癌Bel-7402细胞分泌VEGF的抑制率分别为14.2%、40.0%及49.6%。免疫组化染色结果显示,12.8μg/m l以上的蛇葡萄素能使细胞体积缩小,分泌VEGF、bFGF明显减少。流式细胞仪检测VEGF、bFGF结果,25.6μg/m l及38.4μg/m l蛇葡萄素对VGEF的抑制率分别为32.2%及57.4%,对bFGF的抑制率分别为54.9%及62.6%。蛇葡萄素浓度为100、150、200 mg/kg时对人肝癌Bel-7402裸鼠移植瘤的抑制率分别可达24.3%、41.4%及45.7%。结论:蛇葡萄素在体外能有效抑制内皮细胞增殖及人肝癌Bel-7402细胞分泌VEGF和bFGF,具有抑制血管生成的作用;体内能有效抑制人肝癌Bel-7402裸鼠移植瘤的生长,提示蛇葡萄素也许可作为一个肿瘤血管生成抑制剂用于肿瘤防治。