紫苏叶提取物通过AMPK/mTOR自噬信号通路改善糖尿病肾病大鼠肾脏损伤研究

目的：研究紫苏叶提取物在STZ诱导的大鼠糖尿病肾病(DN)中的治疗作用及相关分子机制。方法：取60只SD大鼠以随机数字表法分为空白对照组、模型组、紫苏叶提取物低剂量组(给予紫苏叶提取物200 mg/kg)、紫苏叶提取物高剂量组(给予紫苏叶提取物400 mg/kg)、厄贝沙坦组(给予厄贝沙坦13.5 mg/kg)共5组,每组12只,各给药组大鼠按照其分组进行给药干预7周,1次/d,空白对照组和模型组给予等量生理盐水。实验结束后收集大鼠血、尿及肾脏样本进行分析检测。结果：与模型组相比,紫苏叶提取物干预的糖尿病肾病模型大鼠体质量、24 h尿量、随机血糖、肾脏指数、24 h尿蛋白及肾小球局部纤维化病变得到明显改善(P<0.01),自噬信号通路相关蛋白Sesn2、LC3表达水平明显增加,p-mTOR/mTOR比值增加。结论：紫苏叶提取物能够改善DN模型大鼠肾小球局部损伤,其作用机制可能与Sesn2/AMPK/mTOR自噬信号通路有关。     

黄芪甲苷通过TLR4/p38MAPK信号通路抑制脂多糖诱导的小鼠心肌损伤

目的:探讨黄芪甲苷(astragaloside IV)通过TLR4/p38MAPK信号通路对脂多糖(LPS)诱导的C57BL/6J小鼠急性心肌损伤的作用,并阐明其作用机制。方法:小鼠30只随机分为5组,分为空白对照组、脂多糖组、黄芪甲苷40mg/kg组、黄芪甲苷80mg/kg组、3-去氮腺苷10mg/kg(阳性对照)组。黄芪甲苷给药组给予黄芪甲苷14 d、3-去氮腺苷组给予3-去氮腺苷14 d后,腹腔注射脂多糖建立急性内毒素心肌损伤模型。采用射血分数(EF)、缩短分数(FS)、左心室舒张末期内径(LVIDd)、左心室收缩末期内径(LVIDs)等指标观察小鼠心脏功能;采用免疫组化检测心肌组织中ED1炎性细胞浸润情况;Western Blot检测TLR4、p38MAPK、pp38MAPK的表达情况;应用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中TNF-α、IL-1β、IL6的含量;采用RT-PCR检测心肌组织中BNP mRNA的表达情况。结果:与空白对照组相比,脂多糖组的射血分数(EF)、缩短分数(FS)、左心室舒张末期内径(LVIDd)、左心室收缩末期内径(LVIDs)明显降低,而血清中TNF-α、IL-1β和IL6含量增加,组织中ED1、TLR4、p38MAPK、p-p38MAPK的表达明显增加。与脂多糖组相比,黄芪甲苷(40、80mg/kg)组均能明显提高EF、FS、LVIDd、LVIDs,以及明显降低TNF-α、IL-1β、IL6的含量及ED1、TLR4、p38MAPK、p-p38MAPK的表达。结论:黄芪甲苷对脂多糖引起的心肌炎症具有明显的抑制作用,可能是通过TLR4/p38MAPK信号通路起作用,并有效改善由脂多糖导致的心肌损伤。     

黄芪甲苷通过PI3K/Akt/mTOR通路诱导鼻咽癌细胞自噬和凋亡

目的：探讨黄芪甲苷对鼻咽癌细胞自噬与凋亡的影响及潜在分子机制。方法：在体外实验中,通过单丹磺酰戊二胺(MDC)染色和透射电镜观察黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对鼻咽癌细胞自噬的影响。在体内实验中,建立裸鼠移植瘤模型后采用免疫荧光法(IF)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组别中自噬和凋亡情况的变化及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路关键蛋白的表达变化。结果：与空白组比较,不同浓度AS-Ⅳ(5、10、20μmol·L^-1)作用于5-8F细胞后,各AS-Ⅳ组的自噬荧光强度均明显增强,其中,干预24 h,各AS-Ⅳ组的自噬荧光表达最强,10μmol·L^-1AS-Ⅳ组的荧光表达最明显;与空白组比较,透射电镜下自噬激活剂雷帕霉素(RAPA)诱导5-8F细胞内出现较多自噬体;3-甲基腺嘌呤(3-MA)作为自噬抑制剂,透射电镜下并未观察到5-8F细胞内有自噬体的形成;AS-Ⅳ10μmol·L^-1组细胞内结构和细胞膜完整、清楚,可见自噬体形成;与空白组比较,AS-Ⅳ各组的肿...     

黄芪甲苷对STZ诱导的1型糖尿病小鼠肾组织galectin-3/ERK1/2信号通路的影响

目的：研究黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对链脲佐菌素(STZ)诱导的1型糖尿病小鼠肾组织galectin-3/ERK1/2信号通路的影响,探讨AS-Ⅳ保护早期糖尿病肾病(DKD)肾损伤的作用机制。方法：使用STZ一次性腹腔注射建立1型糖尿病小鼠模型,随机分为正常组(Control组),模型组(STZ组)及黄芪甲苷干预组(STZ + AS-Ⅳ组)。Control组和STZ组给予标准饲料喂养,STZ + AS-Ⅳ组给予添加AS-Ⅳ的饲料喂养。连续给药8周后检测各组小鼠血糖,24 h尿白蛋白,血肌酐及血尿素氮含量的变化;PAS染色观察肾脏病理改变;免疫组化染色观察galectin-3、p-ERK1/2表达分布;Western blot测定肾皮质组织中galectin-3、p-ERK1/2的蛋白含量。结果：与Control组比较,STZ组小鼠24 h尿白蛋白明显增加(P<0.001),血尿素氮明显升高(P<0.01),血糖明显升高(P<0.001),肾皮质组织中galectin-3、p-ERK1/2蛋白表达明显增加(P<0.01),肾小球系膜基质明显增生(P<0.05)。与...     

乌药挥发油通过AMPK/mTOR信号通路诱导胃癌AGS细胞凋亡和自噬

目的 研究乌药挥发油对人胃癌细胞AGS凋亡和自噬的的影响,并探讨腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路在其中的调控作用。方法 利用水蒸气蒸馏法提取乌药挥发油,采用噻唑蓝（MTT）比色法检测乌药挥发油对人胃癌细胞AGS细胞活力的影响,并根据半抑制浓度（IC₅₀）确定最佳给药浓度与时间,用于后续研究;设置空白组、乌药挥发油低、中、高质量浓度组（0、15、30、60 mg·L^-1）及阳性药环磷酰胺（CTX）组（350 mg·L^-1）。用不同浓度的乌药挥发油处理AGS细胞48 h,采用细胞集落形成实验检测细胞增殖能力的变化、流式细胞仪检测细胞周期的变化、细胞划痕实验检测细胞迁移能力的变化、苏木素-伊红（HE）染色观察细胞形态的变化、Annexin-V/碘化丙啶（PI）双染法检测AGS细胞凋亡率、吖啶橙（AO）染色观察自噬水平的变化、蛋白免疫印迹法（Western blot）检测自噬效应蛋白Beclin-1、p62、微管相关蛋白1轻链3（LC3）、B细胞淋巴瘤因子-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、剪切的胱天蛋白酶-3（cleaved Caspase-3）、剪切的多聚ADP-核糖聚合酶（cleaved PARP）、单磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMPK）、磷酸化AMPK（p-AMPK）、雷帕霉素机械靶蛋白（mTOR）及磷酸化mTOR（p-mTOR）蛋白表达水平的变化。结果 与空白组比较,AGS细胞经乌药挥发油干预24、48 h,细胞活性被明显抑制（P<0.05,P<0.01）,呈浓度和时间依赖性;乌药挥发油各浓度组细胞增殖与迁移能力明显降低（P<0.05,P<0.01）,且随浓度的上升抑制能力越明显;乌药挥发油将AGS细胞周期阻滞于G₂/M期（P<0.05,P<0.01）,呈浓度依赖性;乌药挥发油各浓度组出现细胞圆化,体积变小并伴随凋亡小体形成等现象,细胞凋亡率明显增加（P<0.05,P<0.01）;随着乌药挥发油浓度的增加,自噬体数量增加致红色荧光逐渐增强,提示自噬水平的提升;乌药挥发油各浓度组Beclin-1、LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ、cleaved Caspase-3、cleaved PARP、Bax/Bcl-2及AMPK蛋白表达水平明显升高（P<0.05,P<0.01）;p62与p-mTOR蛋白表达水平明显降低（P<0.05,P<0.01）。结论 乌药挥发油通过调节AMPK/mTOR信号通路诱导AGS细胞凋亡和自噬介导的生长抑制。     

黄芪葛根配伍对糖尿病大鼠脂肪组织AMPK信号通路的影响

目的探讨黄芪与葛根配伍对糖尿病脂肪中腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路的作用,明确其调控血糖血脂机制。方法将86只SPF级SD雄性大鼠按照随机数字表分成6组:正常组、模型组、金芪降糖组、黄芪组、葛根组、黄芪葛根配伍组,正常组11只,其余各组15只大鼠。一次性腹腔注射2%STZ(46 mg/kg)造模,同日各组分别予金芪降糖混悬液1.47 g/kg、黄芪2.7 g/kg、葛根1.35 g/kg、黄芪葛根汤4.05 g/kg灌胃,给药30 d。酶联免疫吸附测定(ELISA)检测脂联素(APN)、葡萄糖转运体4(GLUT-4),实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)检测脂联素受体1(AdipoR1)、脂联素受体2(AdipoR2)、AMPK、GLUT-4、过氧化物酶增殖体激活受体-α(PPARα)、PPARγmRNA。结果与正常组比较,模型组大鼠APN、GLUT-4水平降低,AdipoR1、AdipoR2、AMPK、GLUT-4、PPARα、PPARγmRNA表达减少(P<0.05)。黄芪、黄芪与葛根配伍能升高模型大鼠APN、GLUT-4水平(P<0.05);黄芪、葛根及两药配伍能增加AdipoR1(葛根、黄芪与葛根配伍除外)、AdipoR2、AMPK、PPARα(葛根除外)、PPARγ、GLUT-4mRNA表达(P<0.05),黄芪促进AdipoR2、PPARαmRNA表达的作用优于两药合用,黄芪与葛根配伍调节AMPK、PPARγ、GLUT-4mRNA表达的作用优于单一用药(P<0.05)。结论黄芪、葛根及其配伍调节血糖血脂与调控糖尿病大鼠脂肪组织AMPK信号通路有关,黄芪葛根配伍调控血糖、血脂作用优于单一用药,可能与其促进APN、AMPK、GLUT-4、PPARγmRNA表达有关。     

针刺通过AMPK信号通路改善肥胖大鼠瘦素抵抗的机制

肥胖病是由特定生化因子引起一系列进食调控和能量代谢紊乱,能量摄入多于消耗而以脂肪形式储存于体内,体质量超常所致的一种慢性内分泌代谢疾病。在我国,肥胖病的发生率呈逐年增高趋势。世界卫生组织于1997年宣布肥胖是一种疾病。2006年世界肥胖病学术大会报告,全球大约有2.5亿体质量指数(BMI)超过30的肥胖病患者,肥胖正像流行病一样蔓延,已经成为医学社会问题。肥胖病的危害不仅对肥胖患者带来生活不便和身心障碍,更严重的是肥胖是许多     

迷迭香酸通过AMPK/mTOR通路减轻新生大鼠缺血缺氧性脑损伤研究

目的 探讨迷迭香酸对新生大鼠缺血缺氧脑损伤（hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE）的影响,及其对单磷酸腺苷活化蛋白激酶（adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK）/雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）通路的调控作用,初步探讨其脑保护机制。方法 取7 d龄SD新生大鼠,随机分为对照组、模型组、迷迭香酸（300 mg/kg）组、AMPK/mTOR激动剂MT6378（10 mg/kg）组、AMPK抑制剂GSK-690693（30 mg/kg）组和迷迭香酸（300 mg/kg）+MT6378（10 mg/kg）组,每组20只。建立HIE模型,给予相应药物进行干预,采用TTC染色法检测大鼠脑梗死情况;透射电镜（TEM）观察大鼠海马神经元结构损伤及自噬状况;免疫荧光法检测大鼠海马神经元自噬标记物微管相关蛋白1轻链3B（microtubule-associated protein 1 light chain 3B,LC3B）阳性表达;TUNEL法检测大鼠海马神经元凋亡率;免疫组化法检测大鼠海马神经元磷酸化AMPK（p-AMPK）阳性表达;Western blotting检测大鼠海马组织活化的半胱氨酸蛋白酶3（cleaved Caspase-3）、mTOR及其磷酸化蛋白（p-mTOR）、Unc-51样自噬激活激酶1（uncoordinated-51 like autophagy activating kinase 1,Ulk1）及其磷酸化蛋白（p-Ulk1）、LC3B表达。结果 与对照组相比,模型组大鼠脑梗死严重,海马神经元结构损伤及自噬空泡形成较多,细胞自噬及凋亡水平升高,AMPK/mTOR通路活化（P<0.05）。与模型组相比,迷迭香酸组及GSK-690693组大鼠脑梗死、海马神经元结构损伤、凋亡及自噬减弱,AMPK/mTOR通路被抑制（P<0.05）;MT6378组海马组织AMPK/mTOR通路进一步激活,大鼠脑梗死、海马神经元结构损伤、凋亡及自噬进一步加重（P<0.05）;MT6378可逆转迷迭香酸的上述作用（P<0.05）。结论 迷迭香酸可能通过抑制AMPK/mTOR通路激活,降低海马神经元自噬及凋亡进程,发挥抗HIE脑损伤作用。     

葛根素通过调控AMPK/GSK-3β/β-catenin信号通路缓解糖尿病大鼠心肌损伤北大核心

目的:观察葛根素对糖尿病大鼠心肌损伤的影响,并探讨葛根素对腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/糖原合成酶激酶-3(GSK-3β)/β-连环蛋白(β-catenin)通路的调控作用。方法:雄性SD大鼠分为正常对照组、模型组、葛根素低剂量(20 mg/kg)组、葛根素高剂量(40 mg/kg)组、葛根素高剂量+Compound C(AMPK抑制剂,1 mg/kg)组,每组15只,除正常对照组外其余各组大鼠均采用1%链脲佐菌素构造糖尿病模型,测定大鼠左心室LVESD、LVEDD、EF、FS;检测大鼠FBG、FINS、HbA1c水平,并计算HOMA-IR;检测大鼠血清CK-MB、cTnⅠ水平;对大鼠心肌组织进行HE染色及Masson染色观察大鼠心肌病理学变化;TUNEL法观察大鼠心肌细胞凋亡;Western Blot法检测大鼠AMPK/GSK-3β/β-catenin通路相关蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠心肌细胞形态不规则、排列紊乱、局部肌纤维横纹消失,可见心肌细胞水肿,纤维增生明显,少量心肌细胞变性、坏死,FBG、FINS、HOMA-IR、HbA1c、LVESD、LVEDD、心肌细胞凋亡率及血清CK-MB、cTnⅠ水平显著升高,EF、FS及心肌组织p-AMPK/AMPK、p-GSK-3β/GSK-3β水平和核β-catenin蛋白表达显著降低(P<0.05)。与模型组比较,葛根素各剂量组大鼠心肌损伤现象好转,FBG、FINS、HOMA-IR、HbA1c、LVESD、LVEDD、心肌细胞凋亡率及血清CK-MB、cTnⅠ水平显著降低,EF、FS及心肌组织p-AMPK/AMPK、p-GSK-3β/GSK-3β水平和核β-catenin蛋白表达显著升高(P<0.05)。与葛根素高剂量组比较,葛根素高剂量+Compound C组大鼠心肌损伤加重,FBG、FINS、HOMA-IR、HbA1c、LVESD、LVEDD、心肌细胞凋亡率及血清CK-MB、cTnⅠ水平显著升高,EF、FS和心肌组织p-AMPK/AMPK、p-GSK-3β/GSK-3β水平及核β-catenin蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论:葛根素可通过激活AMPK/GSK-3β/β-catenin信号通路改善糖尿病大鼠胰岛素抵抗与心肌损伤。     

黄芪甲苷通过TLR4/NF-κB通路改善脂多糖诱导的急性血管内皮损伤

目的:研究黄芪甲苷对脂多糖(LPS)诱导的急性血管内皮损伤的保护作用并探讨其可能分子机制。方法:在动物实验中,黄芪苷治疗组经连续灌胃给药14天后,除正常组外,其余各组均通过腹腔注射脂多糖(10mg/kg)以建立急性血管内皮损伤模型,DMT系统记录张力以评估血管舒张功能,ELISA法检测大鼠血清TNF-α和IL-6的含量,免疫组化法检测大鼠血管NF-κB p65蛋白的表达和分布,Western-blot法检测主动脉TLR4蛋白的表达;细胞水平采用CCK-8试剂盒检测人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖能力;ELISA法检测HUVEC上清液TNF-α和IL-6的含量;硝酸还原酶法检测HUVEC上清液一氧化氮(NO)的含量;Western-blot法检测HUVEC TLR4和核NF-κB p65蛋白的表达。结果:在动物水平,与模型组相比,40mg/kg和80mg/kg黄芪甲苷均能显著改善血管的舒张功能;40mg/kg以上组黄芪苷降低血清TNF-α和IL-6的含量、下调TLR4和NF-κB p65的表达水平。在细胞水平,与模型组相比,50μM和100μM黄芪甲苷能显著促进HUVEC的增殖能力,降低HUVEC上清液中TNF-α和IL-6的含量,增加上清液中NO的释放量,下调TLR4和核NF-κB p65蛋白的表达,而且,黄芪甲苷对LPS诱导的HUVEC损伤作用与NF-κB p65抑制剂相似。结论:黄芪甲苷对LPS诱导的急性血管内皮损伤具有保护作用,其可能通过TLR4/NF-κB p65信号通路发挥作用。     

黄芪甲苷抑制大鼠心肌肥厚及改善心肌能量代谢的作用观察

目的观察黄芪甲苷对大鼠腹主动脉缩窄所致心肌肥厚的抑制作用及对心肌能量代谢的影响。方法腹主动脉缩窄法制备大鼠心肌肥厚模型。40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、黄芪甲苷高剂量组[5 mg/(kg.d)]和低剂量组[1 mg/(kg.d)]。术后1周开始腹腔注射给药,至12周后处死。检测大鼠全心质量指数(HMI)、左心质量指数(LV-MI);取左心室组织进行HE染色,测量细胞横径(TDM);RT-PCR法检测心肌组织心钠素(atrial natriuretic peptide,ANP)mRNA的表达。紫外分光光度法检测心肌组织中乳酸(LA)和游离脂肪酸(FFA)含有量;激光共聚焦显微镜定量检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)。结果与假手术组相比模型组的HMI和LVMI显著增加,左心室细胞横径增加29%,ANP mRNA的表达明显上调;乳酸与游离脂肪酸含有量显著升高,MMP下降了39%。与肥厚模型组相比,高剂量黄芪甲苷组大鼠心脏HMI、LVMI下降,TDM明显降低,明显下调ANP mRNA的表达;心肌组织乳酸与游离脂肪酸含有量显著降低,心肌细胞MMP上升了60%。黄芪甲苷低剂量组各项指标改变均无统计学意义。结论腹主动脉缩窄12周大鼠心脏出现明显的左心室肥厚,并伴随能量代谢障碍。高剂量的黄芪甲苷具有抑制心肌肥厚,改善心肌能量代谢的作用。     

黄芪党参对STZ诱导糖尿病大鼠作用研究

我科经过多年临床经验优化组合了一个中药方剂,它的主要成分是黄芪、党参、丹参、大黄。多年的临床观察表明中药合剂对糖尿病患者有较好治疗效果,但未进行系统的基础研究及机制探讨。本研究的目的在于观察中药合剂是否对糖尿病(d iabetes m ellitus,DM)大鼠肾脏具有保护作用,并对其机制进行初步探讨。1材料和方法1.1动物模型的建立与分组纯种♂8周龄W istar大鼠(青岛市实验动物中心提供)共24只,体重180~220 g,随机分为3组:①正常对照组(NCn=8);糖尿病非治疗组(DMn=8);③糖尿病中药合剂治疗组(DM-Dn=8)。按W istar大鼠体重,将DM组和DM-…     

大黄酚调控AMPK/mTOR自噬信号通路改善Wilson病铜负荷大鼠认知功能

目的 研究大黄酚（chrysophanol,CHR）对Wilson病（WD）铜负荷大鼠模型的神经保护作用，并探讨其作用机制。方法 SD大鼠随机分为4组：对照组（Control组）、模型组（Model组）、CHR低剂量组（CHR-L组）、CHR高剂量组（CHR-H组），每组10只。通过含铜（1 g/kg）饲料、含铜（0.185%）水喂养12周构建WD铜负荷大鼠模型，铜离子（Cu）测定试剂盒检测肝铜、24 h尿铜水平；Y迷宫实验评估大鼠空间探索和记忆能力；HE染色法观察海马组织CA1区神经元形态学改变；透射电镜观察海马组织CA1区超微结构；免疫荧光法检测自噬标志蛋白LC3A/B的表达情况；Western Blot检测自噬相关蛋白LC3A/B、Beclin-1、p62以及p-AMPK、p-mTOR的表达量。结果 与Control组比较，Model组中肝铜及24 h尿铜水平增加（P<0.01）；空间探索和记忆能力明显减弱（P<0.01）;CA1区海马神经元出现损伤；自噬小体数量增多；LC3A/B荧光表达增高；LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1及p-AMPK表达量升高（P<0.01...     

黄芪甲苷对大鼠心肌纤维化的影响

目的:研究黄芪甲苷(astragaloside IV)对大鼠心肌纤维化的影响和作用机制。方法:异丙肾上腺素腹腔注射造成心肌纤维化模型。大高鼠随机分为空白对照组、异丙肾上腺素模型组(10mg/kg)、异丙肾上腺素+普萘洛尔组(40mg/kg)、异丙肾上腺素+黄芪甲苷组(40mg/kg);30天后处死大鼠,分别测量大鼠全心质量指数HMI和左心室质量指数LVMI,进行组织形态学染色,测定血清中Ⅰ型前胶原羧基端前肽(PⅠCP)及其抑制物Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(ⅠCTP);分别检测转化生长因子β(transforming growth factorβ1,TGF-β1)、Smad2/3、Smad4、Smad7、肌动蛋白α(α-SMA)的表达。结果:异丙肾上腺素模型组的HMI、LVMI较空白组明显增加;血清中PⅠCP、ⅠCTP含量增高;TGF-β1、Smad2/3、Smad 4、α-SMA含量增高,Smad7含量减少。与模型组相比,黄芪甲苷(40mg/kg)能明显降低HMI及LVMI的比例,降低TGF-β1、Smad2/3、Smad 4、α-SMA含量,Smad7含量增加,PⅠCP、ⅠCTP含量降低。结论:黄芪甲苷对异丙肾上腺素所致的大鼠心肌纤维化有保护作用,可能与黄芪甲苷能降低TGF-β1以及α-SMA产生、能够抑制TGF-βSmad通路有关。     

黄芪甲苷通过CaMKⅡ信号通路对异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大的保护作用

目的:从钙调素蛋白依赖激酶Ⅱ(Ca MKⅡ)信号通路的角度探讨黄芪甲苷(AsⅣ)对异丙肾上腺素(Iso)诱导乳鼠心肌细胞肥大的保护作用及其可能机制。方法:原代培养新生乳鼠心肌细胞,10 mol/L异丙肾上腺素诱导心肌细胞肥大,观察KN93(Ca MKⅡ抑制剂)、黄芪甲苷3,10,30 mol/L剂量组对肥大细胞的影响。采用消化分离法及计算机图像分析系统检测心肌细胞体积;考马斯亮蓝试剂盒检测心肌细胞中总蛋白含量;罗丹明-鬼笔环肽染色观察细胞骨架;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测心房利钠肽(ANP)mRNA表达;Wertern blot检测心肌细胞Ca MKⅡ表达。结果:与正常对照组细胞比较,异丙肾上腺素模型组细胞体积、总蛋白含量、ANPmRNA和Ca MKⅡ表达分别增加98.14%、52.63%、87.37%和55.22%。黄芪甲苷可有效抑制异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大,黄芪甲苷30 mol/L组可抑制异丙肾上腺素诱导的心肌肥大,使模型组细胞体积减小49.67%、总蛋白含量降低33.87%、ANPmRNA表达降低40.00%,Ca MKⅡ的表达降低31.73%。结论:黄芪甲苷可抑制异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大,其机制可能与抑制Ca MKⅡ信号通路有关。     

虎杖苷通过PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导人宫颈癌细胞凋亡的初步研究

通过观察虎杖苷对宫颈癌HeLa细胞体外生长的抑制作用,初步探讨其诱导凋亡的可能机制。不同浓度的虎杖苷(50,100,150μmol·L~(-1))处理HeLa细胞后,采用MTT法检测虎杖苷对HeLa细胞增殖的抑制作用,AO/EB染色法荧光显微镜观察HeLa细胞凋亡的形态学变化;Annexin/PI双标记法检测HeLa细胞凋亡率;流式细胞仪分析HeLa细胞周期分布;RTPCR和Western blot法检测HeLa细胞中PI3K,AKT,mTOR,P70S6K的mRNA和蛋白表达。结果显示,虎杖苷显著抑制HeLa细胞增殖,且具有一定剂量依赖性;虎杖苷能够引起HeLa细胞发生S期阻滞,促进细胞凋亡,显著下调HeLa细胞中PI3K,AKT,mTOR,P70S6K的mRNA和蛋白表达。表明虎杖苷具有抑制宫颈癌HeLa细胞增殖及诱导凋亡的作用,其机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路及其下游基因蛋白表达有关。     

黄芪甲苷通过RhoA/ROCK2通路对脑膜炎大鼠皮质神经元的保护作用

目的:探讨黄芪甲苷对脑膜炎(BM)大鼠皮质神经元的保护作用,以及对RAS同源基因家族成员A (RhoA)/Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶2(ROCK2)通路的影响.方法:取SD新生大鼠,经小脑延髓池注射B族溶血性链球菌(GBS)建立BM模型,并随机分为正常对照组、模型组、黄芪甲苷组、RhoA激动剂组、黄芪甲苷+RhoA激动...     

四逆汤抑制RhoA/ROCK信号通路改善大鼠心肌纤维化

目的探究四逆汤(附子、干姜、甘草)对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌纤维化的影响。方法 40只SD大鼠随机分为空白组、模型组、卡托普利组[100 mg/(kg·d)]、四逆汤组[3.8 g/(kg·d)],每组10只。除空白组外,其余大鼠皮下注射异丙肾上腺素[5 mg/(kg·d)]制备心肌纤维化模型,连续给药4周。末次给药后20 h,检测心脏血流动力学变化,计算心脏质量指数,苏木精-伊红(HE)染色及Masson染色观察心肌病理形态学变化,硝酸还原酶法检测血清中NO水平,黄嘌呤氧化酶法检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)活力,硫代巴比妥酸法检测血清中丙二醛(MDA)水平,Western blot法检测心肌组织中Rho A、ROCK1、内皮型一氧化氮合酶(e NOS)蛋白的表达。结果与模型组比较,四逆汤组大鼠心脏功能明显改善,心肌胶原含有量明显减少,血清中MDA水平明显降低,NO水平及SOD活力显著提高,心肌组织中Rho A和ROCK1蛋白的表达显著下降,e NOS蛋白的表达显著升高。结论四逆汤能改善异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌纤维化,其机制可能与抑制了Rho A/ROCK信号通路,进而上调了e NOS的表达后,导致氧化应激减少有关。     

黄芪甲苷对大鼠心肌基因表达谱的影响

目的:观察黄芪甲苷连续给药对大鼠心肌基因表达谱的影响。方法:雄性Wistar大鼠以黄芪甲苷5mg.kg^-1 .d^-1 腹腔注射,连续2周。对照组给予相同容积的黄芪甲苷溶剂。取黄芪甲苷给药组大鼠心肌组织和相同部位的溶剂对照组大鼠心肌组织进行基因芯片对照检测,扫描仪扫描芯片荧光信号,用相应软件分析差异表达基因和基因功能。结果:黄芪甲苷组显示72个上调基因,其中39个基因生物学特性明确。经基因功能分析,黄芪甲苷对血管发育功能的影响最大;其次是对心肌发育功能和与细胞骨架表达及细胞收缩相关功能有影响。结论:黄芪甲苷对促进血管和心肌发育、增强心肌功能等基因上调的作用最为明显。