电针对卵巢早衰小鼠铁死亡的影响

目的 观察电针治疗卵巢早衰(premature ovarian failure, POF)的效果并探讨铁死亡在其中发挥的作用。方法 将36只C57BL/6雌性小鼠随机分成对照组、模型组和电针组,每组12只,利用高脂高糖法造模后,以关元、双侧足三里和三阴交为针刺穴位进行电针干预。采用HE染色法观察小鼠卵泡的发育情况;酶联免疫吸附法检测小鼠血清卵泡生成素(follicle-stimulating hormone, FSH)和雌二醇(estradiol, E2)水平;利用分光光度法检测Fe2﹢、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)浓度;RT-q PCR法检测铁蛋白(ferritin)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4, GPX4)、B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma 2, BCL2)、BCL2相关X蛋白(BCL2-associated X, BAX)mRNA表达水平;Western blot法检测Ferritin、P53、GPX4、BCL2蛋白表达。结果 电针...     

中药活性成分诱导肿瘤细胞铁死亡的研究进展

铁死亡是一种不同于细胞凋亡、细胞坏死、细胞自噬的新型细胞程序性死亡方式,与多种生理和病理过程有密切的联系。铁介导的活性氧积累是铁死亡发生的主要原因,铁死亡的发生机制与细胞内脂质代谢、铁代谢和抗氧化防御系统途径相关,多条信号轴和众多调节因子联合调控铁死亡的发生和中断。研究发现铁死亡对肿瘤细胞的生长和增殖具有一定的调节作用,诱导肿瘤细胞铁死亡能够有效抑制肿瘤的生长、转移及多药耐药等,因此铁死亡针对各类肿瘤细胞的作用效果和机制途径成为抗癌研究的热点话题。与此同时,铁死亡诱导剂的研究迅速发展,已有多种铁死亡诱导剂应用于临床癌症化疗阶段,且疗效显著,因此铁死亡类抗癌药物的研究成为肿瘤治疗发展的新路线。中药活性成分如石蒜碱、齐墩果酸、双氢青蒿素、土槿皮乙酸、麦冬皂苷B等,能通过脂质代谢、铁代谢、胱氨酸/谷氨酸转运体系统或谷胱甘肽过氧化酶4/谷胱甘肽等途径诱导肿瘤细胞铁死亡,调控肿瘤疾病的发展进程,展现出巨大的临床治疗潜力。该文从信号通路和调节因子及作用特点等方面介绍铁死亡的代谢调控网络,并结合铁死亡发生机制的理论基础,对中药活性成分诱导肿瘤细胞铁死亡的研究进展进行综述,为中药活性成分抗肿瘤应用提供新策略。     

基于谷胱甘肽/谷胱甘肽过氧化物酶4轴探讨雷公藤甲素引起肝细胞铁死亡的作用机制

目的 观察雷公藤甲素对铁代谢和脂质过氧化的影响,探讨雷公藤甲素引起肝细胞铁死亡的可能机制。方法 利用雷公藤甲素处理人正常肝细胞HL7702和C57BL/6J小鼠,或利用铁死亡抑制剂（ferrostatin-1,Fer-1）和雷公藤甲素共同处理HL7702细胞,CCK-8法检测细胞存活率;普鲁士蓝染色观察铁沉积;试剂盒检测铁离子、谷胱甘肽（glutathione,GSH）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量以及超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase,AST）活性;qRT-PCR或Western blotting检测转铁蛋白受体1（transferrin receptor 1,TFR1）、谷胱甘肽过氧化物酶4（glutathione peroxidase 4,GPX4）、前列腺素内过氧化物合成酶2（prostaglandin-endoperoxide synthase 2,PTGS2）、长链脂酰辅酶A合成酶4（acyl-CoA synthetase long-chain family member 4,ACSL4）的表达。结果 雷公藤甲素显著降低细胞存活率（P＜0.05）,引起铁沉积,升高血清中ALT、AST活性（P＜0.05）,增加HL7702细胞和小鼠肝组织中铁离子、MDA含量（P＜0.05）,降低GSH含量、SOD活性和GPX4表达（P＜0.05）,上调TFR1、PTGS2及ACSL4表达（P＜0.05）。Fer-1显著上调细胞存活率和GPX4表达量（P＜0.05）,显著下调铁离子含量、TFR1、PTGS2及ACSL4表达（P＜0.05）。结论 雷公藤甲素可能通过GSH/GPX4轴引起铁代谢异常和脂质过氧化,诱导肝细胞铁死亡。     

“通督启神”针法对APPswe/PS1dE9小鼠海马铁死亡相关因子表达的影响

目的：观察“通督启神”针法对阿尔茨海默病小鼠学习记忆能力及铁死亡相关因子的影响,探讨其提高阿尔茨海默病小鼠学习记忆能力的机制。方法：APPswe/PS1dE9小鼠随机分为模型组和针刺组,以C57BL/6小鼠作为对照组,每组各12只。针刺组予电针“百会”“印堂”并点刺“水沟”,每日1次,每次20 min,共28 d。采用Morris水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力;尼氏染色和透射电镜观察小鼠海马组织神经细胞的形态学及超微结构变化;分别采用WST-1法和TBA法检测小鼠海马组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量;实时荧光定量PCR法检测小鼠海马组织中前列腺素内过氧化物合酶2(ptgs2)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)mRNA的表达水平。结果：与对照组相比,模型组小鼠第2—5天逃避潜伏期显著延长（P<0.05）,原平台象限游泳时间和穿越原平台次数显著减少（P<0.05）,SOD活性降低（P<0.05）,MDA含量升高（P<0.05）,ptgs2 mRNA表达水平升高（P<0.05）,GPX4 mRNA表达水平降低（P<0.05）。与模型...     

基于Nrf2/GPX4信号通路探讨半夏泻心汤诱导胃癌细胞铁死亡的机制

目的：观察半夏泻心汤(BXT)对人胃癌HGC-27、MKN-45、AGS细胞增殖的影响及其作用机制。方法：采用细胞增殖与活性检测法(CCK-8)检测不同浓度的BXT含药血清(5%、10%、20%)对HGC-27、MKN-45、AGS细胞增殖的影响;线粒体膜电位探针(TMRE)检测细胞内线粒体膜电位表达,采用试剂盒对铁离子(Fe²⁺)含量、脂质过氧化物(LPO)与超氧化物歧化酶(SOD)活性进行检测,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测糖原合成激酶3β(GSK3β)、磷酸化GSK3β(p-GSK3β)、核转录因子E₂相关因子2(Nrf2)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的蛋白表达水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测胱氨酸/谷氨酸逆向转运蛋白溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、重链溶质载体家族3成员2(SLC3A2)、转铁蛋白受体3(TFRC)和肿瘤蛋白P53(TP53) mRNA表达。结果：CCK-8结果显示含药血清干预3种胃癌细胞24 h,与空白组比较,BXT组与卡培他滨组均可显著降低胃癌细...     

黄精多糖对糖尿病肾病大鼠铁死亡的影响

目的 观察黄精多糖对糖尿病肾病（DN）大鼠铁死亡的影响,研究其可能的作用机制。方法 50只雄性SD大鼠随机选取10只作为正常组,另40只喂食高糖高脂饲料联合腹腔注射链脲佐菌素建立DN模型,将成模大鼠随机分为模型组、阳性药组（厄贝沙坦30 mg/kg）和黄精多糖低、高剂量组（200、800 mg/kg）,每组10只,各给药组分别予相应药物灌胃,连续4周。检测大鼠肾功能指标[血肌酐（SCr）、血尿素氮（BUN）、24 h尿蛋白],HE染色观察肾组织病理变化,ELISA检测肾组织丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）和总铁离子含量,qPCR和Western blot检测肾组织转铁蛋白（Transferrin）、铁蛋白重链1(FTH1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)mRNA和蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠体质量、血糖明显升高,SCr、BUN及24 h尿蛋白含量明显升高,肾小管局灶变性,肾小球基底膜增厚、系膜增生,肾组织MDA和总铁离子含量明显增加,GSH含量明显减少,Transferrin、FTH1 mRNA和蛋白表达明显升高,GPX4 mRNA和蛋白表达明显降低（P<0.0...     

双氢青蒿素诱导前列腺癌PC-细胞凋亡及其机制研究

目的研究双氢青蒿素对前列腺癌PC-3细胞的凋亡诱导作用,并探讨其可能的机制。方法MTT法测定不同浓度双氢青蒿素对PC-3细胞增殖的影响,流式细胞仪(FCM)、透射电镜(TEM)观察双氢青蒿素对PC-3细胞的凋亡诱导作用,免疫组化(SP)检测双氢青蒿素对PC-3细胞内Bax、Bcl-2蛋白阳性表达的影响。结果双氢青蒿素对PC-3细胞有明显增殖抑制效应,能诱导PC-3细胞凋亡且具有浓度-时间依赖性,导致PC-3细胞线粒体肿胀、核碎裂、凋亡小体形成;随着双氢青蒿素浓度的增加,Bcl-2蛋白阳性表达降低,而Bax蛋白阳性表达增加。结论双氢青蒿素可能通过上调Bax,下调Bcl-2蛋白表达诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡。     

细辛通过上调p53介导铁死亡致大鼠肝损伤的作用机制研究

目的 探讨细辛通过上调p53表达介导铁死亡致大鼠肝损伤的作用机制。方法 32只大鼠随机分为对照组和细辛低、中、高剂量(0.27、0.81、1.35 g/kg)组,每组8只,每日ig给药1次,连续28 d。末次给药2 h后采集血清样本和肝脏样本,全自动生化仪检测丙氨酸氨基转移酶(alanineaminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)和碱性磷酸酯酶(alkaline phosphatase,ALP)水平;酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)水平;比色法检测超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)活性和还原型谷胱甘肽(reducedglutathione,GSH)、丙二醛(malonaldehyde,MDA)及Fe²⁺含量;化学荧光法检测活性氧物质(react...     

槲皮素通过诱导铁死亡抑制A549细胞增殖的作用及机制研究

目的 基于铁死亡信号通路探究槲皮素对人非小细胞肺癌A549细胞增殖的影响及其作用机制。方法 CCK-8法筛选槲皮素作用于A549细胞的实验浓度;平板克隆法检测槲皮素对A549细胞集落形成能力的影响;利用试剂盒检测槲皮素对A549细胞内谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平的影响;采用Western blotting检测槲皮素对A549细胞铁死亡相关蛋白及线粒体凋亡蛋白表达的影响;采用流式细胞仪检测槲皮素对A549细胞内线粒体活性氧(mitochondrial reactive oxygen species,mtROS)、脂质过氧化物水平及细胞凋亡的影响。联合铁死亡抑制剂(Ferrostatin-1)或ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(Nacetylcysteine,NAC)检测槲皮素对A549细胞内GSH水平及铁死亡相关蛋白表达的影响。结果 与对照组比较,槲皮素显著抑制A549细胞存活率,且呈时间和剂量相关性(P<0.01);槲皮素呈剂量相关性地抑制A549细胞集落形成(P<0.01),显著降低A549细胞内GSH水平(P<0.01),上调细胞内mtROS及脂质过氧化物水平(P<0.05、0.01),诱导细胞凋亡(P<0.01);显著促进铁死亡相关蛋白p53表达(P<0.05、0.01),并抑制谷胱甘肽过氧化物酶4(recombinant glutathione peroxidase 4,GPX4)及胱氨酸/谷氨酸逆向转运蛋白溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)蛋白表达(P<0.01);显著促进线粒体凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cystein-asparate protease-3,Caspase-3)、Caspase-9、细胞色素C(cytochrome C,CytC)和B淋巴细胞瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)蛋白表达(P<0.05、0.01),并抑制抗凋亡因子Bcl-2蛋白表达(P<0.01)。与槲皮素组比较,槲皮素+NAC组与槲皮素+Ferrostatin-1组均不同程度恢复槲皮素引起的细胞存活率下降(P<0.05、0.001),Ferrostatin-1可显著上调GPX4及SLC7A11蛋白表达水平(P<0.05),并回调GSH水平(P<0.05)。结论 槲皮素能够抑制A549细胞增殖并诱导铁死亡,进而导致细胞凋亡,具有诱导A549细胞铁死亡的生物学效应。     

西红花酸调控Nrf2/HO-1 通路抑制高糖诱导人肾小球系膜细胞铁死亡

目的 探讨西红花酸抑制高糖诱导人肾小球系膜细胞(HGMCs)铁死亡的作用机制。方法 (1)体外培养HGMCs,将细胞分为空白对照组、阴性对照组(60 mmol·L^-1甘露醇)和葡萄糖实验组(30、60、90 mmol·L^-1),干预培养48 h后,采用CCK-8法检测细胞存活率,采用RT-qPCR法检测谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)mRNA表达,以确定高糖诱导HGMCs的造模条件。(2)体外培养HGMCs,分为空白对照组和西红花酸给药组(5、25、125μmol·L^-1),干预培养24 h后,采用CCK-8法检测细胞存活率。(3)体外培养HGMCs,将细胞分为空白对照组、模型组(60 mmol·L^-1葡萄糖)、西红花酸组(60 mmol·L^-1葡萄糖+5、25、125μmol·L^-1西红花酸)及阳性对照组[60 mmol·L^-1葡萄糖+1μmol·L^-1铁死亡抑制剂(Ferrostatin-1,Fer-1)...     

青蒿素和二氢青蒿素的抗炎作用及机制

目的:研究并比较青蒿素和二氢青蒿素的抗炎作用及其分子机制.方法:用LPS刺激小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7释放TNF-α,IL-6,NO等炎症介质,评价药物对巨噬细胞释放以上炎症介质的抑制作用.以ELISA法检测TNF-α,IL-6的含量,以Griess法检测NO的含量,同时以MTF法评价细胞毒性.Western blot法检测iNOS,COX-2及内参蛋白β-actin水平.比色法检测COX-2酶活性.结果:二氢青蒿素在12.5～100μnol·L-1可明显抑制LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7释放TNF-α,IL-6及NO,并呈现良好的剂量依赖关系.青蒿素仅对IL-6具有一定程度的抑制作用.结论:二氢青蒿素通过下调iNOS蛋白表达,抑制巨噬细胞释放炎症因子TNF-α,IL-6和炎症介质NO发挥抗炎活性,青蒿素可能通过代谢为二氢青蒿素发挥抗炎作用.     

地黄饮子对海马神经元缺氧损伤的保护机制

目的 观察地黄饮子(熟地黄、巴戟天、山茱萸、石斛、肉苁蓉等)对缺血缺氧损伤海马神经细胞的保护作用并探讨机制.方法 将培养细胞分为对照组,模型组及药物保护组;其中,损伤组采用Na2S2O4 I mmol/L加低糖作用3h;药物保护组在加入损伤因素同时加入不同浓度含地黄饮子血清.通过比色法测定培养液中乳酸脱氢酶含有量(LDH),采用MTT法测定脑海马神经细胞存活率,利用线粒体内琥珀酸脱氢酶(SDH)含有量来分析地黄饮子的保护作用及其作用的有效浓度;测定缺血缺氧损伤下海马神经细胞内超氧化物歧化酶(SOD) 与丙二醛(MDA)含有量.结果 含地黄饮子血清与空白血清比例在1∶3～3∶1之间,均对缺氧神经细胞具有保护作用.降低损伤细胞LDH释放,细胞膜损伤程度减轻.MTT值不同程度升高,提示细胞活力状态提高、细胞能量代谢过程有所改善;地黄饮子可以保护缺血缺氧环境中海马神经细胞内SOD的活力,降低MDA的含有量,而且随剂量的增加而增加.结论 地黄饮子对缺氧损伤脑海马神经细胞有明显保护作用;其作用机制可能与降低氧自由基损伤有关.     

黄芩苷对人口腔上皮癌KB细胞端粒酶活性和细胞周期的影响

目的:研究黄芩苷(bacailin)对KB细胞生长抑制作用及其对端粒酶活性和细胞周期的影响。方法:采用MTT法检测bacailin对体外培养的KB细胞增殖的抑制作用,TRAP-PCR-ELISA方法检测KB细胞在bacailin作用后端粒酶活性的变化,用流式细胞仪分析细胞周期的改变。结果:bacailin在0.5～2.0mmol/L剂量范围内对KB细胞有抑制作用,且呈剂量依赖关系(P<0.05),同时bacailin作用后,KB细胞端粒酶活性明显抑制(P<0.05),KB细胞的G2/M期细胞含量明显增高(P<0.01)。结论:bacailin对肿瘤细胞的端粒酶活性有抑制作用。     

葡萄籽中原花青素对心肌细胞的保护作用

目的研究原花青素(proanthocyanidins, PA)对心肌细胞损伤的保护作用及机理.方法体外培养乳鼠心肌细胞,用DOG、ADR、X-XO造成损伤模型,比色法测定培养液中LDH的活性.用·OH生成系统Fe2+-抗坏血酸(Fe2+-VitC)和ADR刺激大鼠心肌组织匀浆,用TBA比色法测定MDA生成;用自旋捕集ESR法测定PA对·OH的清除作用.结果25和50mg/L PA均能对抗DOG、ADR、X-XO所致心肌细胞损伤,使心肌细胞胞浆酶LDH漏出显著减少(P<0.01),且剂量依赖性的抑制自发性及Fe2+-VitC、ADR体系诱导的大鼠心肌组织匀浆MDA的生成;ESR法直接抑制·OH的产生,50mg/L PA的抑制率为48.41%.结论PA对心肌细胞损伤有一定的保护作用,其机理与清除活性氧自由基和抗脂质过氧化作用有关.     

Antitumor activity of Hypericum hookerianum against DLA induced tumor in mice and its possible mechanism of action

A large number of plants belonging to the genus Hypericum and their phytoconstituents are known to possess potent anticancer nature. Earlier studies from our laboratories indicated a strong cytotoxic nature of the methanol extract of Hypericum hookerianum stem (MEHH). In the present study, the in vivo antitumor activity of MEHH against the Dalton's lymphoma ascitic (DLA) model was determined at 100 and 200 mg/kg body weight given orally for 10 days. The results indicate that administration of the extract not only increased the survival of animals with ascites tumor, decreased the body weight induced by the tumor burden and reduced the packed cell volume and viable tissue cell count, but also altered many hematological parameters changed during tumor progression indicating the potent antitumor nature of the extract. Hematological and biochemical analysis were carried out to prove the anticancer and antioxidant nature of the extract.     

左旋四氢帕马丁对外源性自由基加重大鼠心脏再灌注损伤的保护作用

 缺血前10min灌流FeSO_-4（0．1μmol／L）／抗坏血酸（1μmol／L）自由基发生系统，可加重大鼠离体灌流心脏缺血再灌注损伤。缺血前10min给予左旋四氢帕马丁能显著减少FeSO_-4／抗坏血酸自由基发生系统所致再灌注室颤发生率，同时伤心肌超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活力升高，丙二醛含量降低，冠脉流出液中乳酸脱氢酶含量减少，效果与还原型谷胱甘肽近似。     

华蟾素对三种消化系肿瘤细胞杀伤机制研究

目的：研究华蟾素对体外培养的人胃癌、结肠癌、肝癌细胞的杀伤作用。方法：ＭＴＴ 法检测细胞增殖抑制率;光镜观察细胞形态改变;琼脂糖凝胶电泳观察ＤＮＡ 断裂。结果：三种肿瘤细胞在华蟾素（２ ｍｇ／ ｍｌ）孵育４８ 小时后其生长抑制率为１６－６ ％ ～２３－３ ％ ,细胞形态由多边形变成圆形,染色质疏松,细胞核溶解,ＤＮＡ电泳显示连续膜状条带。结论：华蟾素直接损伤肿瘤细胞ＤＮＡ,并由此导致细胞坏死     

蜂胶对氧自由基和四氧嘧啶致小鼠肝脏损伤的保护作用

目的研究蜂胶对氧自由基和四氧嘧啶致小鼠肝脏损伤的保护作用.方法应用体外和体内法研究了蜂胶对氧自由基和四氧嘧啶致小鼠肝脏损伤的保护作用.结果体外试验表明,蜂胶能显著地抑制氧自由基在体外引发的小鼠肝微粒体脂质过氧化反应,呈现量效关系.体内试验表明,ig 20 mg/kg蜂胶24 d,可以明显抑制四氧嘧啶致小鼠肝脏的损伤作用,肝匀浆丙二醛(MDA)含量显著下降(P＜O.01),SOD、GSH-Px活力显著低于模型对照组(P＜O.O1).结论蜂胶醇提液对氧自由基在体外引发的肝微粒体脂质过氧化和四氧嘧啶在体内致小鼠肝脏损伤均有保护作用.