铁皮石斛花多糖相对分子质量及其单糖组成的研究

为了明确铁皮石斛花中多糖相对分子质量分布及其单糖组成,该研究采用高效凝胶色谱和柱前衍生UPLC对11个铁皮石斛花样品的多糖进行了相对分子质量及其单糖组成分析,并利用SPSS 19.0软件根据组成的单糖峰面积进行聚类分析,结果表明11个杂交家系铁皮石斛花的粗多糖均分离为三部分(DOP-1,DOP-2和DOP-3),其平均相对分子质量分别为5.53×10~5,3.49×10~5和2.12×10~5。铁皮石斛花多糖主要由葡萄糖、甘露糖、半乳糖、半乳糖醛酸和阿拉伯糖5种单糖组成,其中甘露糖组成比例最高,其与葡萄糖比值为0.302~3.335;不同家系样品多糖中各单糖的相对含量存在一定差异,11个家系按单糖组成及相对含量划分为4类,该研究基本明确了铁皮石斛花中多糖相对分子质量分布及单糖构成,为其资源利用打下基础。     

柱前衍生化HPLC分析不同来源、不同生长年限铁皮石斛多糖的组成和含量

 目的 建立柱前衍生化HPLC分析不同种植基地、不同生长年限铁皮石斛多糖中单糖的组成和主要单糖的含量,并根据含量水平进行聚类分析及判别分析。方法 铁皮石斛药材用乙醇脱脂,沸水提取得到的铁皮石斛多糖,用3.0 mol·L-1盐酸水解,水解产物加入1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP进行衍生化,采用HPLC测定单糖衍生物;并利用SPSS16.0进行聚类分析及判别分析。结果 铁皮石斛多糖主要由甘露糖和葡萄糖组成,不同生长年限、9个种植基地的13批铁皮石斛样品甘露糖的含量范围为19.65%~34.27%,均符合药典标准;并随着生长年限的增加,甘露糖含量降低。不同生长年限的铁皮石斛甘露糖与葡萄糖峰面积比差异较大。聚类分析将13批样品按生长年限聚成3类;并建立了判别函数,回判准确率100％。结论 铁皮石斛多糖中单糖的组成和主要单糖的含量结合化学计量学方法判别铁皮石斛的生长年限是切实可行的,该研究为铁皮石斛的质量评价和开发利用提供了实验依据。     

红杆铁皮石斛与青杆铁皮石斛茎不同部位主要有效成分含量测定

目的:比较西双版纳地区红杆铁皮石斛与青杆铁皮石斛茎上、中、下3个部位的多糖含量、甘露糖含量、甘露糖与葡萄糖峰面积比的差异。方法:采用苯酚-浓硫酸法测定多糖含量,柱前衍生化HPLC法测定甘露糖含量及甘露糖与葡萄糖峰面积比。结果:多糖含量,红杆铁皮石斛茎上、中部明显高于青杆铁皮石斛茎上、中部,而红杆铁皮石斛茎下部明显低于青杆铁皮石斛茎下部;甘露糖含量,红杆铁皮石斛上、中、下3个部位均明显高于青杆铁皮石斛;甘露糖与葡萄糖峰面积比,红杆铁皮石斛上、中、下3个部位均明显低于青杆铁皮石斛。红杆铁皮石斛的多糖含量、甘露糖含量及甘露糖与葡萄糖峰面积比均达到2015版《中华人民共和国药典》标准,青杆铁皮石斛仅多糖含量达到2015版《中华人民共和国药典》标准。结论:同一地区的红杆铁皮石斛与青杆铁皮石斛茎上、中、下3个部位主要有效成分含量有明显的差异,建议在临床用药过程中将红杆铁皮石斛与青杆铁皮石斛分开使用,同时将铁皮石斛按其茎上、中、下3个部位进行分级,为铁皮石斛种质资源品质评价及临床用药提供实验基础。     

安徽霍山产3种石斛多糖组成的比较研究

目的:安徽霍山为兰科石斛属植物地理分布的最北端,主产3种石斛:霍山石斛、细茎石斛和铁皮石斛,其多糖提取物具有显著的药理活性,本研究旨在探究同一特殊生境下3种石斛所含多糖在组成上的相似和差异。方法:实验以越冬茎条为供试材料,采用苯酚-硫酸法分析多糖含量差异,利用HPSEC法分析分子量分布差异,通过柱前衍生化HPLC法分析单糖组成差异。结果:霍山石斛、细茎石斛和铁皮石斛多糖含量分别为其干重的(18.65±1.50)%、(11.32±1.30)%和(20.78±1.60)%;其多糖分子量呈连续分布状态,其中分子量介于50~200 kDa的高活性多糖在3种石斛多糖中的比例分别为:(16.38±1.40)%、(21.61±1.30)%和(14.19±1.50)%;3种石斛多糖水解产物中检出葡萄糖(Glc)、甘露糖(Man)、半乳糖(Gal)、木糖(Xyl)、葡萄糖醛酸(GlcUA)、半乳糖醛酸(GalUA)、阿拉伯糖(Ara)共7种单糖,且都以甘露糖和葡萄糖为主要单糖组分,但铁皮石斛中的甘露糖和葡萄糖的相对峰面积比值最大。结论:同一生境下3种石斛所含多糖在含量、分子量分布和单糖组成上既存在共性也存在明显差异,实验探究了同一特殊生境下3种石斛多糖组分间的异同,其结果对石斛的鉴别和组效关系的研究提供了重要参考。     

开花对铁皮石斛多糖质量分数及单糖组成的影响

目的:揭示开花对铁皮石斛多糖质量分数及单糖组成的影响,为优质铁皮石斛培育提供依据.方法:采集铁皮石斛开花前样品、开花结束时经人工摘除花蕾与未摘花蕾的样品,采用苯酚-硫酸法测定铁皮石斛中多糖质量分数,柱前衍生HPLC检测多糖中的单糖组分.结果:摘花蕾样品与未摘花蕾样品比较,总多糖及多糖中的甘露糖、半乳糖醛酸、葡萄糖绝对量分别高30.35％,26.44％,20.78％,57.80％,木糖,阿拉伯糖分别低28.33％,24.37％,半乳糖差异不显著.结论:开花显著消耗铁皮石斛药材中的多糖及多糖中甘露糖、半乳糖醛酸、葡萄糖的量,而开花过程可能有利于木糖、阿拉伯糖积累.     

不同采收期铁皮石斛主要成分含量测定及比较

目的:测定并比较不同采收期两年生长期的铁皮石斛中多糖含量、甘露糖含量、甘露糖与葡萄糖峰面积比及乙醇浸出物含量,寻找铁皮石斛的最佳采收期。方法:用紫外分光光度法进行多糖含量测定,高效液相法测定甘露糖、甘露糖与葡萄糖面积比,热浸法测定乙醇浸出物。结果:按照干燥品计,头年10月、次年3月采收的铁皮石斛中多糖含量(%)分别为(31.6±2.8)、(38.3±2.7),两组之间比较差异有统计学意义(P0.05);甘露糖含量(%)分别为(32.3±3.6)、(35.0±3.5),两组之间比较差异无统计学意义(P0.05);甘露糖与葡萄糖峰面积比为(3.2±0.7)、(2.0±0.6),两组之间比较差异有统计学意义(P0.05);乙醇浸出物含量(%)分别为(12.6±1.8)、(6.4±1.7),两组之间比较差异有统计学意义(P0.05);铁皮石斛多糖含量增加,甘露糖与葡萄糖峰面积比呈现递减趋势,乙醇浸出物含量呈现递减趋势。结论:铁皮石斛头年10月到翌年3月多糖含量最高,为最佳采收期。如中药生产上需要以铁皮石斛多糖为主要有效成分,两年生的铁皮石斛药材采收时间为次年3月更科学合理。     

铁皮石斛破壁粉工艺参数对质量参数的影响研究

目的:探讨铁皮石斛破壁粉工艺参数对质量参数的影响。方法:采用振动式细胞级粉碎机对铁皮石斛进行破壁粉碎,研究工艺参数铁皮石斛含水量、粉碎时间、粉碎温度对铁皮石斛质量参数醇溶性浸出物、多糖、甘露糖含量及甘露糖/葡萄糖峰面积比的影响。结果:铁皮石斛含水量、粉碎温度、粉碎时间工艺参数对醇溶性浸出物、多糖及甘露糖/葡萄糖峰面积比的影响显著由大到小为:甘露糖/葡萄糖峰面积比浸出物多糖;对甘露糖含量测定无影响。结论:醇溶性浸出物、多糖及甘露糖/葡萄糖峰面积比可作为研究铁皮石斛破壁粉工艺研究和工艺优化的检测性指标。     

云南栽培铁皮石斛适宜采收期研究

为了确定云南省不同产地栽培铁皮石斛的适宜采收期,对云南6个产地大棚栽培的铁皮石斛进行周年采样,每月采集1次,检测样品的折干率、甘露糖与葡萄糖峰面积比、浸出物、多糖和甘露糖含量,对不同采收期铁皮石斛的产量(折干率)及质量(指标性成分)进行综合评价。实验结果表明:不同产地云南省栽培铁皮石斛样品折干率在1-4月为高峰期,醇溶性浸出物在9-12月含量较高,多糖和甘露糖含量在1-4月达到高峰期,在10月-翌年2月,甘露糖与葡萄糖峰面积比符合药典标准。根据药典标准要求,综合测定的产量及质量的结果,云南省各产地栽培铁皮石斛的适宜采收期为12月至翌年2月。     

铁皮石斛茎、叶多糖含量及多糖部位柱前衍生化-高效液相色谱指纹图谱比较研究

为更好地开发利用铁皮石斛叶资源,该文采用苯酚-硫酸比色法和PMP（1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮）柱前衍生化-HPLC-DAD-ESI-MSⁿ对铁皮石斛茎、叶中多糖含量、单糖组成、多糖中甘露糖和葡萄糖的含量及多糖部位HPLC指纹图谱进行了比较研究;并用国家药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价软件2004A”建立了对照图谱和进行了相似度评价。结果表明,铁皮石斛茎与叶多糖含量,组成多糖的单糖种类,各单糖组成比例及单糖含量明显不同。叶中多糖含量约为相应茎中多糖含量的1/3。茎多糖主要由甘露糖和葡萄糖组成;叶多糖为酸性杂多糖,由甘露糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成,但茎和叶多糖中均以甘露糖组成比例最高。茎中甘露糖和葡萄糖的含量均比相应叶中高。14个不同种植基地铁皮石斛茎和叶多糖部位指纹图谱相似性较好,相似度均在0.9以上。该文为进一步研究铁皮石斛叶多糖中各单糖连接顺序、连接位置和多糖药理活性及申报铁皮石斛叶新资源提供了研究资料。     

铁皮石斛与霍山石斛中甘露糖、葡萄糖及柚皮素的含量比较

目的:优化铁皮石斛中甘露糖与葡萄糖的柱前衍生HPLC含量测定方法以及柚皮素HPLC含量测定方法,比较铁皮石斛与霍山石斛中这3种成分的含量差异。方法:在2015年版《中国药典》铁皮石斛甘露糖柱前衍生HPLC含量测定项下色谱条件基础上,选择乙腈-0. 02 mol·L~(-1)乙酸铵溶液为流动相系统梯度洗脱,同时测定甘露糖与葡萄糖的含量,并分析甘露糖与葡萄糖的峰面积比值;采用Kromasil 100-5 C18色谱柱(4. 6 mm×250 mm,5μm);检测波长250 nm;流速1. 0 mL·min~(-1);柱温30℃。柚皮素HPLC含量测定采用Kromasil 100-5 C18色谱柱(4. 6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-甲醇-0. 4%磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长290 nm;流速0. 8 mL·min~(-1);柱温40℃。结果:甘露糖与葡萄糖在0. 15~3. 0,0. 075~2. 25μg线性关系良好(r=0. 999 9),平均加样回收率分别为99. 01%(RSD 2. 1%),101. 69%(RSD 2. 0%),重复性、耐用性等其他方法学研究符合要求。43批不同产区铁皮石斛中甘露糖、葡萄糖以及两者的含量之和分别在12. 75%~36. 40%,2. 93%~18. 39%,19. 23%~54. 58%,除极少数样品外,基本符合2015年版《中国药典》甘露糖含量限度要求,甘露糖与葡萄糖含量之和也接近总多糖含量限度要求;含量与产区相关性不显著。12批霍山石斛的总糖则分别在14. 33%~29. 47%,6. 64%~15. 20%,25. 73%~44. 37%,其含量以及峰面积比值基本落在铁皮石斛范围期间,多批次的平均含量也基本与铁皮石斛一致(约33%左右)。柚皮素在0. 020 8~0. 832 0μg线性关系良好(r=0. 999 9),平均加样回收率为101. 96%(RSD 1. 8%)。11批铁皮石斛与7批霍山石斛的柚皮素含量分别为0. 053 2~0. 122 4 mg·g~(-1)(均值为0. 081 0 mg·g~(-1)),0. 040 3~0. 090 0 mg·g~(-1)(均值为0. 068 3 mg·g~(-1)),铁皮石斛含量稍高于霍山石斛,但含量均亦未达到0. 02%的质量标准下限的常规要求。结论:铁皮石斛中甘露糖与葡萄糖HPLC含量测定方法重复性较好,用两者含量之和替代具有较大误差的总多糖含量作为测定指标具有可行性;单糖含量测定可应用于霍山石斛的定量质控指标;但依据2种石斛的总多糖含量、水解后的单糖含量与峰面积比值以及柚皮素含量,无法区分铁皮石斛与霍山石斛,需结合其他专属性方法方能对两种石斛进行区别。     

铁皮石斛无性系繁育培养基专用性的研究

以浙江雁荡山×云南广南种质的杂交组合茎段为外植体,筛选出1/2MS +IBA1.0 mg·L-1+6-BA1.0mg·L-1腋芽诱导培养基与1/2MS+IBA1.5 mg·L-1+6-BA0.5 mg·L-1芽增殖培养基,在浙江、云南、广西、湖南等159个铁皮石斛野生与人工种质中应用,腋芽诱导率达94.3％,具有较好的通用性;芽增殖培养时,不同种质分化出单芽、丛芽、原球茎3种增殖途径,增殖效果存在显著差异.研究结果表明,不同种质铁皮石斛的增殖对培养基有专用性需求,开发铁皮石斛无性系繁育专用培养基具有紧迫性和重要的应用价值.     

铁皮石斛中基本氨基酸含量变异规律

目的:了解铁皮石斛种质、生理年龄对氨基酸含量的影响,为铁皮石斛药材质量评价与优质药材培育提供依据.方法:采集浙江人工栽培骨干基地一至三年生铁皮石斛11个种质33个样品,经盐酸水解后采用氨基酸分析仪测定基本氨基酸含量.结果:铁皮石斛中7种人体必需氨基酸的平均质量分数为0.28～2.96 mg·g-1,其他9种基本氨基酸的平均质量分数为0.53～4.20mg·g-1;种质对多种氨基酸的积累存在极显著或显著影响,生理年龄对氨基酸的积累也有显著影响,氨基酸含量随着生理年龄增加而增加.结论:铁皮石斛含有丰富的氨基酸,通过品种选育、延长采收期可以增加人体必需氨基酸和其他基本氨基酸的含量.     

铁皮石斛中11种金属元素含量的研究

目的:全面了解不同种质、采收年龄以及市场销售的石斛类药材中11种金属含量与变异规律,为铁皮石斛药材质量评价与优质药材培育提供依据.方法:采集浙江人工栽培骨干基地一至三年生铁皮石斛11个种质32个样品,购买市场销售的石斛类药材11个样品;经湿法消化后采用电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)、原子吸收光谱法(AAS)测定11种金属元素含量.结果:铁皮石斛中钾、钙、镁、锰、锌、铬、铜平均质量分数分别为1205.23,766.82,158.25,31.06,4.28,8.28,0.97mg·kg(-1),砷、汞、铅、镉4种重金属元素含量除1个样品镉元素超过限量指标0.07 mg·kg(-1)外,均在规定限度范围内;种质与生理年龄对金属元素的积累存在显著的影响.结论:铁皮石斛含有丰富的人体必需金属元素,浙江产的铁皮石斛与市场销售的石斛类药材重金属限量指标整体上是安全的;通过品种选育可望增加人体必需的金属元素含量,降低有害金属元素含量;生理年龄对金属元素的影响与各种元素承担的生理生化作用有关.     

铁皮石斛总生物碱含量变异规律

目的:全面了解不同种质、不同采收年限铁皮石斛药材总生物碱含量及其变异规律,为铁皮石斛真伪鉴别与优质药材培育提供依据。方法:采集铁皮石斛人工栽培骨干基地一至三年生铁皮石斛17个种质41个样品,以及市售不同价位枫斗药材11个样品;采用酸性染料比色法测定总生物碱含量。结果:人工栽培的铁皮石斛与市场购买的铁皮枫斗药材总生物碱在0.019 0%～0.043 0%;浙江省11个铁皮石斛种质一年生、二年生、三年生样品平均总生物碱为0.025 3%,0.027 0%,0.032 6%,云南产一年生铁皮石斛平均总生物碱为0.034 3%。结论:不同种质、年龄的铁皮石斛总生物碱含量差异很大,并且总生物碱含量随着生长年限的增加而增加,云南产铁皮石斛总生物碱明显高于浙江产铁皮石斛,但正宗的铁皮石斛总生物碱含量具有明显限量范围,总生物碱含量明显偏离限量范围的样品可以基本确定为非铁皮石斛,总生物碱含量在此范围的样品必须结合多糖含量与其他活性化学组分才能真正辨别铁皮石斛药材的真伪与优劣。     

铁皮石斛悬崖附生栽培技术研究

以铁皮石斛设施栽培投入大、药材功效不如野生等问题为导向,通过水分调控、崖壁坡度选择,研究悬崖附生铁皮石斛生长情况、农艺性状、产量、多糖及醇溶性浸出物含量.结果表明,将铁皮石斛附生于85 ～ 90°悬崖表面,在生长季节喷水1 ～2 h·d-1的条件下,即使在裸露的环境中,不用基质,不施肥料也能够较好的生长,获得较高的产量,其形态与悬崖上野生铁皮石斛无异;多糖与醇溶性浸出物含量显著高于设施基质栽培,并与萌蘖生理年龄密切相关,逆境有利于铁皮石斛多糖与醇溶性浸出物等功效成分的积累.     

光质与种质对铁皮石斛种苗生长和有效成分的影响

为了揭示光质与种质对铁皮石斛种苗生长和有效成分的影响,采用8种光质(红光、蓝光、黄光、绿光和3个不同比例的红蓝混光),对3个家系(9×66,17×30,78×68)进行组培试验,测定农艺性状及叶绿素、总生物碱、多糖的含量.结果表明,光质和种质对铁皮石斛种苗和有效成分均有极显著的影响,红光有利于种苗根系与苗高生长,蓝光有利于种苗增粗与生物碱积累,红蓝混光有利于叶绿素与多糖含量增加.研究结果为铁皮石斛种苗优质、低碳、高效生产提供了基础,并为优质药材生产给出了有益的提示.     

铁皮石斛不同部位黄酮碳苷类成分及清除DPPH自由基能力比较研究

目的:对铁皮石斛根、茎、叶和花中黄酮碳苷类成分及抗氧化作用进行比较,为扩大铁皮石斛的药用部位提供实验依据。方法:采用TLC和HPLC及与对照品对照,对铁皮石斛不同部位黄酮类成分种类和含量进行分析;以清除DPPH自由基能力对抗氧化活性进行比较。结果:铁皮石斛茎、叶和花中含有种类相同的黄酮二糖碳苷类成分,并采用对照品指认了共有的8个色谱峰;但各黄酮碳苷的含量有显著差异,叶和花中黄酮碳苷的含量明显高于茎,叶和花HPLC色谱图相似度较高;根中黄酮类成分较少。茎中含有柚皮素,而根、叶和花均不含该成分。铁皮石斛茎和叶对DPPH自由基均有一定的清除作用,叶对DPPH自由基清除能力优于茎。结论:以黄酮碳苷含量及抗氧化活性为指标,铁皮石斛叶和花代替茎入药有一定可能性。该研究为铁皮石斛的综合开发利用提供了前期基础。     

铁皮石斛功效相关药理作用研究进展

根据中医药古籍中石斛功效的论述,具有“补五脏虚劳赢瘦,强阴益精,久服,厚肠胃,补内绝不足,平胃气…补肾益力,壮筋骨,暖水脏”等功效,该文通过CNKI数据库检索,结合铁皮石斛现代药理学研究和临床应用的文献,总结出铁皮石斛主要有增强免疫、抗疲劳、抗氧化、促消化、促进唾液分泌、降血糖、降血压、抗肝损伤、抗肿瘤等方面药理作用,结合健康需求进行深入分析,为铁皮石斛进一步研究与开发提供参考.