通幽汤及其拆方对食管鳞癌细胞的抑制作用及其机理研究

目的：从细胞凋亡信号通路角度揭示通幽汤对食管鳞癌细胞抑制作用的机理,确定从功效分类的有效药物群。方法：体外培养食管鳞癌EC109细胞,通幽汤全方及活血行气、滋阴养血拆方分别作用于细胞,倒置显微镜观察细胞形态变化,MTT法测定细胞存活率,免疫印迹法观察Caspase-3凋亡信号通路蛋白表达变化情况。结果：全方组IC50=798μg/mL,活血行气拆方组IC50=1413μg/mL,滋阴养血拆方组IC50=1709μg/mL,3组方均可促进p53、cyto-C、Caspase-3、Bax凋亡蛋白表达,作用强弱依次为全方〉活血行气拆方〉滋阴养血拆方。结论：通幽汤抑制食管鳞癌细胞增殖与促Caspase-3凋亡信号通路有关,其药效在于活血行气、滋阴养血类药物的协同作用。     

通莲Ⅰ号方对食管癌Eca109细胞NF-κB信号通路影响的研究

目的 从分子水平揭示通莲Ⅰ号方对食管癌细胞的抑制作用及其治疗噎膈的机制.方法 体外培养食管鳞癌Eca109细胞,通莲Ⅰ号方及3拆方分别作用于细胞,以MTT法检测细胞半数有效量,Western blot法观察NF-κB信号通路各基因表达变化情况.结果 通莲Ⅰ号方及活血行气、清热解毒拆方可显著抑制Eca109细胞增殖,通莲Ⅰ号全方IC50=412 mg·L-1,清热解毒拆方IC50 =718 mg·L-1,活血行气拆方IC50=693 mg·L-1;可抑制NF-κB信号通路相关分子IKKβ3、NF-κB p65、TNF-α、IL-1β3表达,作用强弱依次为:通莲Ⅰ号全方＞活血行气拆方＞清热解毒拆方＞滋阴养血拆方.结论 通莲Ⅰ号方用于治疗食管癌的有效组分在活血行气、清热解毒、滋阴养血类药物的协同作用,通过调节NF-κB介导的信号通路相关基因表达,抑制癌细胞增殖.     

噎膈证方对人表皮生长因子刺激的食管癌EC9706细胞生长信号转导的影响

目的:研究噎膈病辨证施方在不同浓度下对食管癌细胞生长的影响;从生长信号转导角度探讨启膈散等对人表皮生长因子(hEGF)刺激的食管癌EC9706细胞生长抑制机理。方法:体外培养人表皮生长因子(hEGF)刺激的EC9706食管鳞癌细胞株,分别加入启膈散等4方提取液,通过MTT染色、流式细胞技术等观察细胞增殖变化;以western blot法检测PLC-γ1介导的生长信号通路蛋白表达。结果:启膈散(Q)、沙参麦冬汤(S)、通幽汤(T)IC50值分别为849,1004,1 615μg.mL-1;可抑制PLC-γ1信号通路相关蛋白表达,抑制作用强度:TQS;结论:除补气运脾汤外,噎膈证方可抑制hEGF刺激的EC9706细胞的生长;启膈散等3方可通过抑制PLC-γ1介导的生长信号转导而抑制EC9706细胞生长。     

启膈散、沙参麦冬汤、通幽汤和补气运脾汤对人食管癌EC9706细胞增殖及凋亡的影响

目的观察启膈散、沙参麦冬汤、通幽汤、补气运脾汤各证方对人食管癌细胞株EC9706细胞增殖和凋亡的影响作用。方法体外培养人食管癌细胞株EC9706细胞,分别用启膈散、沙参麦冬汤、通幽汤和补气运脾汤处理细胞,倒置显微镜下观察EC9706细胞增殖和形态变化;MTT法检测各证方对EC9706细胞增殖影响的量效关系;TUENL法和荧光显微镜观察各证方诱导EC9706细胞凋亡的作用;Annexin V FITC/PI双标记流式细胞术检测各证方诱导EC9706细胞凋亡率：结果启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤对EC9706细胞增殖的抑制率随药物浓度增加而上升,呈现剂量-效果依赖性关系,在药物浓度为6400μg/ml时,三组抑制率分别为78%、63%、78%。启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤不同程度地诱导细胞发生凋亡,各组诱导细胞的凋亡率依次为：沙参麦冬汤组〉启膈散组〉通幽汤组。结论启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤可不同程度地明显抑制人食管癌细胞株EC9706细胞增殖,补气运脾汤对体外培养细胞增殖的直接抑制作用很弱。启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤均可不同程度诱导人食管癌EC9706细胞凋亡。     

启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤对人食管癌EC9706细胞Caspase-3介导的细胞凋亡信号转导的影响

目的:研究启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤对人食管癌EC9706细胞增殖影响,并从Caspase-3介导的细胞凋亡信号转导通路探讨三方作用机制。方法:体外培养食管鳞癌细胞株EC9706细胞,分别加入启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤提取液培养处理细胞,通过MTT染色观察细胞增殖变化,通过Western blot法检测Caspase-3介导的细胞凋亡信号转导通路蛋白表达。结果:启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤的IC50值分别是1462、1232、2875μg/m L,均可促进Caspase-3蛋白表达而诱导细胞凋亡,而Cyt.C蛋白表达较弱;启膈散和沙参麦冬汤对FADD、Fas、TNFR1和DR5蛋白表达有不同程度地影响。结论:三方可通过激活Caspase-3诱导细胞凋亡,其中启膈散主要通过非依赖FADD死亡受体途径,沙参麦冬汤主要通过依赖FADD死亡受体途径,通幽汤可能通过其他凋亡蛋白参与的上游信号途径而激活Caspase-3致细胞凋亡。     

降膈汤及其拆方对食管癌EC9706细胞增殖及细胞周期的影响

目的研究降膈汤及其拆方对食管癌EC9706细胞增殖及细胞周期的影响作用。方法体外正常条件培养EC9706食管癌细胞,加入降膈汤(Q)及其三个拆方温补脾气方(W)、滋阴养血方(Z)、和中养胃方(H),通过镜下形态观察、MTT染色、流式细胞技术等观察细胞增殖变化情况。结果降膈汤在3200ng/ml浓度、24h作用时间点,对EC9706细胞有明显刺激增殖作用;倒置显微镜下观察,细胞呈长梭形改变,细胞连接紧密;细胞周期分析,降膈汤(Q)刺激细胞30. 03%处于增殖活跃的S期,较之对照组15. 52%,有极显著性差异。结论 h EGF能够刺激食管癌EC9706细胞增殖,其对细胞增殖的刺激作用呈量效、时效关系。     

管通方醇提物对人食管癌EC9706细胞抑制作用的研究

目的:通过观察管通方醇提物对食管癌EC9706细胞增殖、细胞周期的影响,揭示该方抑制食管癌EC9706生长的作用机制。方法:体外培养食管癌EC9706细胞,用管通方醇提物处理细胞,MTT法检测管通方醇提物对食管癌EC9706细胞增殖影响的量效关系;倒置显微镜下观察食管癌EC9706细胞形态学变化;PI单染标记流式细胞术检测醇提物对食管癌EC9706细胞周期的影响。结果:管通方醇提物均可不同程度地抑制食管癌EC9706细胞的增殖,其抑制率呈剂量依赖关系;管通方醇提物影响了细胞形态结构。管通方醇提物对EC9706细胞周期各时相均有影响。与对照组比较,管通方组G0/G1期细胞比率升高(P0.05)。结论:管通方醇提物将食管癌EC9706细胞阻滞于G0/G1,阻滞细胞周期的进程,该方对食管癌EC9706细胞的增殖具有抑制作用。     

启膈散对食管癌EC9706细胞miR-133a/PI3K/Akt信号通路甲基化的影响

目的 观察启膈散乙酸乙酯提取物对食管癌EC9706细胞micoRNA-133a(miR-133a)/磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路甲基化的干预作用。方法 流式细胞术检测启膈散对EC9706细胞的凋亡的影响；蛋白印迹免疫法(Westernblotting)分别检测采用Akt抑制剂、转染miR-133a模拟物及DNMT1抑制剂后启膈散对DNMT1蛋白表达的影响；实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测启膈散对miR-133a及IGF-1R mRNA表达量的影响。结果 与空白对照组比较，启膈散组可增加EC9706晚期凋亡率及总凋亡率(P<0.05),与DNMT1抑制剂组相比，启膈散组、联合用药低剂量组晚期凋亡率差异显著(P<0.05)。与空白对照组比较，启膈散及各联合用药组均能够抑制食管癌EC9706细胞DNMT1蛋白的表达(P<0.05);启膈散与PI3K/AKT信号通路抑制剂联合用药组、启膈散与转染miR-133a模拟物联合用药组均对DNMT1蛋白的抑制呈现一定程度的的协同增效作用。与空白对照组相比，启膈散组、DNMT...     

大半夏汤提取物对食管癌EC9706细胞恶性生物学行为及JAK1/STAT3通路的影响

目的 观察大半夏汤提取物对食管癌EC9706细胞恶性生物学行为及JAK1/STAT3通路的影响,以期为食管癌的防治提供参考。方法 人食管癌EC9706细胞分别以半夏汤提取物（200、100、50、25、12.5μg/mL）、STAT3信号通路抑制剂（Stattic,4、3.5、3、2.5、2μmol/L）处理,MTT法检测细胞抑制率,拟合细胞抑制率-浓度曲线计算50%抑制浓度（IC50）。人食管癌EC9706细胞分为空白对照组、大半夏汤组、Stattic组与大半夏汤+Stattic组。大半夏汤组、Stattic组分别以IC50浓度的大半夏汤提取物及Stattic干预,大半夏汤+Stattic组予以大半夏汤提取物及Stattic联合干预,空白对照组不做特殊处理。MTT法检测细胞增殖能力;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测各组GES-1细胞侵袭能力;q RT-PCR法及Western blotting法检测JAK1/STAT3信号通路相关mRNA及蛋白表达情况。结果 随着大半夏汤提取物、Stattic干预浓度的增加,EC9706细胞的抑制率增加（P <0.05）;拟...     

健脾解毒方对过表达HBx肝癌HepG2细胞PI3K/AKT通路的影响

目的 观察健脾解毒方对过表达乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)的肝癌细胞增殖及PI3K/AKT信号通路相关因子表达的影响。方法 构建过表达HBx肝癌的HepG2细胞,给予不同浓度健脾解毒方药物血清进行干预,实验分为肝癌细胞空白组、pcDNA3.1组、pcDNA3.1-HBx组和健脾解毒方低、中、高剂量组。采用MTT法及流式细胞仪检测细胞增殖及凋亡水平,采用Westernblot检测肝癌细胞p-PI3K、p-AKT蛋白表达。结果 成功构建过表达HBx的肝癌HepG2细胞,发现有促进肝癌细胞增殖及上调p-PI3K及p-AKT表达的作用。健脾解毒方药物血清干预后,可不同程度抑制肝癌细胞增殖、促进肝癌细胞凋亡,以及下调p-AKT、p-PI3K表达的作用,而健脾解毒方低剂量组对p-PI3K表达作用不显著。结论 健脾解毒方有抑制肝癌细胞增殖及促进凋亡的作用,其机制与下调PI3K/AKT通路相关因子表达有关。     

扶正化痰活血方对2型糖尿病模型大鼠胰岛素抵抗的影响

目的：观察扶正化痰活血方对2型糖尿病模型大鼠的降血糖作用和对胰岛素抵抗相关指标的改善作用，并初步探讨其作用机制。方法：以链脲佐菌素加高脂饮食造成2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠模型，观察扶正化痰活血方对大鼠空腹血糖（FBG）、糖化血红蛋白（HBAlC）、血胰岛素含量（FINS）以及胰岛素样生长因子-1（IGF-1）的影响，并计算胰岛素敏感指数和胰岛素抵抗指数。结果：扶正化痰活血方不仅可明显降低糖尿病大鼠FBG及HBAlC，还可以降低FINS水平，升高IGF-1含量，使胰岛素敏感指数升高。结论：扶正化痰活血方具有较好的降血糖、升高胰岛素样生长因子-1含量、改善胰岛素抵抗、防治糖尿病并发症的作用。     

养阴清热理气方及其拆方对食管癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的 研究养阴清热理气方及其养阴、清热、理气3个拆方对食管癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法 将57只BALB/c雌性裸鼠随机分为模型组、全方组、清热组、理气组、养阴组各10只,空白组7只,用人食管癌细胞株EC9706细胞植入裸鼠右胁皮下制造荷瘤裸鼠模型,造模后第2天开始灌胃,各用药组分别给予养阴清热理气方及其拆方,每日1次,共90d.观察各组裸鼠饮食量、体重及移植瘤体积的变化;实验结束后称量各组移植瘤重量并计算抑瘤率.结果 各用药组与模型组比较均可增强荷瘤裸鼠精神和活动状态,增加体重(P<0.01),全方组、清热组和养阴组还可提高动物食量(P<0.05).各用药组对裸鼠皮下移植瘤生长均有不同的抑制作用,瘤体体积、重量与模型组比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).各组抑瘤率依次为全方组>养阴组>清热组>理气组,全方组、养阴组抑瘤率与清热组、理气组差异有统计学意义(P<0.05).结论 养阴清热理气方及其拆方具有改善荷瘤裸鼠生存状态和抑制肿瘤生长的作用.     

养阴益气活血方药不同配伍对VSMC的影响

目的:探讨养阴益气活血方药不同配伍对高胰岛素、高脂血清诱导血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的拮抗作用。方法:通过MTT比色测定及形态学方法观察养阴益气活血方药各组药物血清的作用效果。结果:人参与麦冬组药物血清有较明显的抗VSMC增殖作用,形态学观察显示各组药物血清可不同程度缓解高胰岛素、高血脂造成的形态学改变。结论:养阴益气活血方药物各药物血清治疗瘀血的机制与血管平滑肌细胞有密切联系。     

丹瓜方对GK糖尿病-动脉粥样硬化复合模型大鼠血糖、食量和体重的影响

目的:探讨丹瓜方对高脂饲料喂养的GK糖尿病-动脉粥样硬化复合模型大鼠血糖、食量和体重的影响。方法:40只成模GK大鼠,随机分为二甲双胍组、模型对照组、丹瓜方组、辛伐他汀组,自由进食高脂饲料,并予以相应的药物干预;另设10只同龄Wistar大鼠为正常对照组,喂食普通饲料;观察大鼠血糖、HbA1c、体重、食量的变化情况。结果:丹瓜方组血糖与空白对照组比较无差异,且优于其他各模型组;丹瓜方组HbA1c与二甲双胍组比较无差别,且低于模型对照组(P0.05);GK大鼠食量均明显减少,丹瓜方组食量低于空白对照组和模型对照组(P0.01);GK大鼠体重均低于空白对照组,丹瓜方组体重增幅最小(P0.05)。结论:丹瓜方在控制高脂饲料喂养的GK大鼠的血糖、体重和食量上具有明显优势。     

活血祛痰治法及其组方对原发性高血压左室肥厚大鼠左心室功能的影响

目的 :观察活血祛痰治法及其组方对原发性高血压左室肥厚 ( Essential Hypertension- Left Ven-tricular Hypertrophy,EH- LVH)大鼠左室功能的影响。方法 :采用 1 4周龄自发性高血压大鼠 ( SpontaneouslyHypertensive Rat,SHR)。检测 1 4周龄 SHR、2 8周龄自然病程 SHR以及经中药复方治疗的 SHR的血压( Blood Pressure,BP)、左室重 /体重 ( Left Ventricular Mass/Body Weight,LVM/BW)、左室壁相对厚度( Left Ventricular Wall Thickness,LVWT)、左室舒张末压 ( Left ventricular end diastolic pressure,LVEDP)以及左室发展压 ( Left ventricular- developed pressure,LVDP)等的变化。结果 :1 4周龄 SHR已形成LVH,SHR- LVH大鼠左室舒张末压显著升高 ( P<0 .0 1 ) ,左室发展压显著降低 ( P<0 .0 1 ) ,而中药复方则能明显改善 SHR- LVH大鼠左室舒张功能和左室收缩性能 ,提高左室顺应性 ,降低左室的僵硬度。结论 :活血祛痰治法及其组方对 SHR- LVH大鼠左室功能具有一定的保护作用。     

凉血活血方对脓毒症大鼠白细胞系列黏附分子表达的影响

目的:研究凉血活血方对脓毒症大鼠白细胞黏附分子表达的影响,探讨其药理作用机制。方法:Wistar大鼠90只,雌雄各半,随机分为假手术组(10只)、模型组(20只)、凉血活血方治疗组(分为大,中,小剂量组,每组20只)。采用盲肠结扎穿孔法制作脓毒症模型,造模同时分别进行灌胃治疗,给予大,中,小剂量的活血凉血方浸膏,观察72h动物死亡率;在造模72h后腹主动脉取血抗凝,溶血素处理后,分别加入不同荧光素标记的CD11b、CD31、CD54、CD62L抗体,经流式细胞仪检测白细胞表面4种黏附分子的表达情况;行气管插管进行肺泡灌洗,收集分离白细胞,流式细胞术检测4种黏附分子的表达情况;留取肝、肺及末段回肠组织,检测髓过氧化物酶(MPO)活性。结果:模型组大鼠血中及肺泡灌洗液中白细胞黏附分子CD11b、CD31、CD54、CD62L表达较假手术组显著增高;大,中剂量凉血活血方治疗可显著降低模型大鼠血中及肺泡灌洗液中白细胞CD11b、CD31、CD54、CD62L表达,显著降低肝、肺及末段回肠组织MPO活性;凉血活血方大剂量组动物死亡率显著降低。结论:脓毒症状态下白细胞黏附因子的异常高表达及其与血管内皮的黏附作用可介导多种脏器功能障碍,活血凉血中药可通过抑制血管内皮系列黏附分子高表达而发挥治疗作用。     

护心方对冠心病合并糖代谢异常患者TLR4炎症通路和中医血瘀证评分的影响

目的：同步研究护心方对冠心病合并糖代谢异常患者Toll样受体4信号转导通路及中医血瘀证的影响,探讨以TLR4炎症通路为靶点护心方的干预机制,及炎症反应与血瘀证候的相关性。方法：选择60例冠心病合并糖代谢异常患者,随机分为对照组和治疗组。对照组按常规治疗,治疗组在常规治疗基础上加用护心方,总疗程为60 d。运用Realtime PCR法分别测定治疗前、治疗30 d、60 d外周血单核细胞TLR4 mRNA;ELISA检测外周血血清中C反应蛋白的表达水平。结果：护心方治疗组能在西医常规治疗的基础上更进一步减少了TLR4 mRNA的表达（P〈0.05）,其抑制炎症的效果与TLR4通路下游指标CRP基本一致。经过中医药治疗,冠心病合并糖代谢异常患者的中医血瘀证评分逐渐降低,至60 d时显示出统计学意义（P〈0.05）,与TLR4、CRP的表达呈正相关。结论：护心方能显著改善冠心病合并糖代谢异常患者的血瘀证候,而抑制外周血单核细胞To ll样受体4转导通路的激活,减少炎症反应,可能是其重要机制之一,中医的血瘀证候与炎症反应其本质有一定内在联系。     

基于网络药理学和分子对接探讨预防肺疾一号方预防新型冠状病毒肺炎（COVID-19）的作用机制＊

目的 从分子层面探讨预防肺疾一号方预防新型冠状病毒肺炎的作用机制，并探索预防肺疾一号方的潜在治疗靶点。方法 利用TCMSP数据库及BATMAN-TCM数据库筛选预防肺疾一号方的化合物成分，在PharmMapper数据库进行潜在靶点识别，然后使用David软件对靶点进行GO富集及KEGG通路富集分析，利用iGEMDOCK软件进行分子对接分析。结果 通过网络药理学方法分析预防肺疾一号方的6味中药，发现其有效化学成分有58个，对应47个作用靶点；通过GO分析靶点富集出81个生物学过程、26个细胞组成及31个分子功能；通过KEGG分析得出靶点显著富集的信号通路有35条；分子对接分析得出，靶点CAT和化合物Daidzein-4，7-diglucoside的结合度最高。结论 预防肺疾一号方具有多成分、多靶点的作用特点，并通过参与多种生物过程，调控多条信号通路以预防新型冠状病毒肺炎并发挥其药理疗效。     

六味地黄方药物血清对血管内皮细胞胞内Ca2+的影响

目的：探讨六味地黄方药物血清保护血管内皮细胞的分子机制。方法：取人脐静脉内皮细胞(HUVEC)，用脂多糖(LPS)造成凋亡细胞模型，通过激光共聚焦显微镜观察六味地黄方药物血清对胞内Ca^2 的影响。结果：六味地黄方药物血清可明显缓解其所致的钙超载。结论：六味地黄方药物血清有抗HUVEC凋亡作用，其防治血栓性疾病的机理可能与其缓解细胞钙超载有关。     

泄浊除痹方对高尿酸血症患者中医临床症状的影响

目的观察泄浊除痹方对高尿酸血症患者中医临床症状的影响。方法将66例高尿酸血症患者(脱落7例,剔除1例)随机分成泄浊除痹方组28例和空白对照组30例,泄浊除痹方组口服泄浊除痹方颗粒剂,每日1剂,分2次服用。空白对照组不用药物治疗,仅进行临床观察。两组均观察20天,于观察前后检测血尿酸,采集患者中医临床四诊资料进行中医症状评分。结果两组患者治疗后血尿酸水平均较治疗前有所下降,差异有统计学意义(P<0.05)。泄浊除痹方组与空白对照组治疗前后差值比较差异有统计学意义(P<0.05)。泄浊除痹方组痰涎、神疲乏力、四肢沉重、小便黄赤、大便稀溏等中医临床症状积分较治疗前有所降低,小便清长症状积分较治疗前有所增加(P<0.05)。空白对照组患者各中医临床症状积分治疗前后比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论泄浊除痹方对高尿酸血症痰湿阻滞患者相关中医临床症状有一定改善作用。