犀角地黄汤合银翘散对流感病毒性肺炎小鼠炎性因子和自由基表达的影响

目的观察犀角地黄汤合银翘散对流感病毒感染致病毒性肺炎小鼠炎性因子、自由基表达的影响。方法Balb/c小鼠108只随机分为正常组、模型组、药物组,25μL 50LD50病毒液滴鼻建立流感病毒鼠肺适应株感染的小鼠肺炎模型（除正常组外）,感染后1 h,正常组和模型组予以双蒸水灌胃,药物组予中药23 g/（kg.d）灌胃,各组均给药2次/d,连续5 d。感染后2、4、6 d分别取材,采用酶联免疫吸附法检测血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、肺组织匀浆中单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的含量,生化法检测肺组织中超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（iNOS）、丙二醛（MDA）含量。结果临床等效剂量的犀角地黄汤合银翘散在感染后第4、6日可明显降低TNF-α的含量（P〈0.01,P〈0.05）;感染后第6日,抑制MCP-1的表达（P〈0.01）,升高SOD活性（P〈0.01）;在各时间点均降低MDA含量（P〈0.01）;感染后第2日,明显降低iNOS的含量（P〈0.01）,第4、6日,明显降低NO含量（P〈0.01）。结论犀角地黄汤合银翘散可明显抑制流感病毒致病毒性肺炎小鼠体内炎性细胞因子及氧自由基的产生,具有抗炎作用。     

犀角地黄汤合消风散对慢性皮炎湿疹模型小鼠血清LTB4、LTC4水平的影响

目的：观察犀角地黄汤合消风散对慢性皮炎湿疹模型小鼠血清LTB4、LTC4水平的影响。方法：50只小鼠随机分为5组,致敏小鼠,实验组采用犀角地黄汤合消风散煎剂给药17天,末次激发后24h处死小鼠,使用酶联免疫吸附试验对小鼠血清LTB4、LTC4进行检测。结果：犀角地黄汤合消风散中药干预1、2组LTB4检测结果分别为0.282ng/ml、0.313ng/ml,与模型组相比有非常显著和明显的差异（P〈0.001和P〈0.05）,LTC4检测结果中药干预组分别为1.509ng/ml、1.602ng/ml,与模型组比较显著的差异（P〈0.01）。结论：犀角地黄汤合消风散对慢性皮炎湿疹模型小鼠血清LTB4、LTC4水平有显著的调节作用。     

白背叶根含药血清对脂多糖诱导下RAW264.7细胞分泌的影响

目的:观察不同浓度的白背叶根含药血清对脂多糖(lipopolysac-charide,LPS)诱导下RAW264.7细胞分泌的影响。方法:制作高、中、低浓度白背叶根含药血清,以CCK-8法检测不同浓度白背叶根含药血清对RAW264.7细胞活力的影响。以脂多糖刺激生长良好的RAW264.7细胞,建立细胞炎症模型,检测白背叶根含药血清对细胞上清液中炎症介质一氧化氮(NO)、前列腺素E2(PGE2)、白三烯B4(LTB4)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的影响。结果:不同浓度的白背叶根含药血清均对RAW264.7细胞活力无影响;与模型组比较,10%、5%的白背叶根含药血清可显著抑制NO的释放(P<0.05或P<0.01),10%白背叶根含药血清可显著抑制LTB4的分泌(P<0.05),2.5%白背叶根含药血清可显著抑制IL-1β的分泌(P<0.05);但不同浓度的白背叶根含药血清对PGE2、TNF-α的分泌无显著影响。结论:白背叶根的抗炎机制可能是通过抑制炎症反应中NO,LTB4,IL-1β的释放而实现。     

桂枝汤含药血清对不同比例Poly(I:C)-LPS组合刺激肺巨噬细胞的干预效应

目的:基于方证相应原理,旨在探索建立一种模拟病毒-细菌共感染的桂枝汤汤证体外细胞模型,为进一步桂枝汤汤证动物模型的建立积累数据。方法:研究桂枝汤含药血清对不同浓度比例的聚肌胞苷酸[polyinosinic polycytidylic acid,Poly(I∶C)]与脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)混合物刺激的大鼠肺的巨噬细胞(NR8383)Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)及其下游信号转导通路的影响。采用大鼠肺巨噬细胞株NR8383,分别用25,50,100 mg·L-1的Poly(I∶C)与1,5,10 mg·L-1LPS刺激NR8383细胞,前者于3,6,12,24 h后取细胞上清,后者于6,12,24,48 h后取细胞培养上清液,酶联免疫吸附测定方法(ELISA)测定炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β)的含量,通过上述2个指标选择Poly(I∶C)与LPS合适的浓度区间与反应的最适时间。利用其Poly与LPS配比为10∶1,20∶1,30∶1,40∶1,50∶1来探讨其对NR8383细胞的TNF-α,IL-1β的含量和TLR-2,3,4,6 mRNA表达的影响,以及桂枝汤含药血清的干预作用,通过上述TNF-α,IL-1β,TLR-2,TLR-3,TLR-4,TLR-6 6个指标对实验结果进行综合评价,筛选刺激效应和桂枝汤干预效应最为明显的Poly(I∶C)-LPS比例。结果:选择刺激时间为6 h,Poly(I∶C)在50 mg·L-1以下,LPS在1 mg·L-1时作为合适的刺激浓度。在所用Poly(I∶C)-LPS(10∶1,20∶1,30∶1,40∶1,50∶1)中,与正常组比较,Poly(I∶C)-LPS 50∶1组合刺激效应显著(P0.01),与相对应的模型组比较,桂枝汤含药血清对Poly(I∶C)-LPS 10∶1组合干预效果最为显著(P0.01)。结论:Poly(I∶C)-LPS 10∶1刺激NR8383巨噬细胞株NR8383可以作为一种桂枝汤汤证细胞模型,用于桂枝汤及其类方的基础研究。     

桃红四物汤含药血清对脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞TNF-α、MCP-1和IL-1β表达的影响

目的:研究桃红四物汤含药血清对脂多糖(LPS)诱导刺激下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用。方法:SD大鼠灌胃给予桃红四物汤提取液(生药1.75 g·m L-1),每天2次,按10 m L·kg-1连续给药3d后,制备桃红四物汤含药血清。MTT法检测桃红四物汤含药血清(终浓度为5%、10%和15%)预处理对LPS诱导细胞生存率减少的作用;real-time RT-PCR检测TNF-α、MCP-1和IL-1βmRNA表达情况;Western Blot方法检测MCP-1和NFκB蛋白表达;检测活性氧(ROS)含量,研究桃红四物汤含药血清对HUVEC抗氧化能力的影响。结果:与空白血清对照组比较,经LPS(1μg·m L-1)刺激后细胞ROS含量明显增高而生存率显著降低,同时细胞炎性因子TNF-α、MCP-1和IL-1βmRNA表达增高;含药血清组可显著提高HUVECs活力、降低ROS含量和TNF-α、MCP-1和IL-1βmRNA表达。结论:桃红四物汤含药血清对LPS诱导的HUVECs损伤有显著地保护作用。     

银翘解毒口服液对流感病毒FM1感染SCID小鼠血清TNF-α及TGF-β1含量的影响

目的:研究银翘解毒口服液对流感病毒FM1感染的T,B细胞缺陷小鼠(SCID)血清TNF-α及TGF-β1含量的影响。方法:除正常对照组外,其余小鼠在感染流感病毒鼠肺适应株FM1后,分为模型组、阳性药组、银翘解毒口服液低、中、高剂量组,按组别分别灌胃,分别于感染后第1,3,5,7天采用双抗体夹心ABC-ELISA法动态观察血清血清TNF-α及TGF-β1含量的变化。结果:银翘解毒口服液治疗后,小鼠血清中TNF-α含量有所降低,中、高剂量组的调节作用明显于低剂量组;血清TGF-β1含量有所增加,中高剂量组作用显著。从感染时相上看,从第3天起,血清中TGF-β1含量开始升高,到第5天达最大值,第7天有所回落;TNF-α含量从第3天开始降低并持续到第7天。结论:银翘解毒口服液能够提高血清TGF-β1含量,降低TNF-α含量,维持免疫系统的平衡。     

筋骨草总黄酮对肾小球系膜细胞增殖的影响

目的观察筋骨草总黄酮对大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响。方法 LPS诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖,筋骨草总黄酮含药血清干预24、48 h后,用MTT法检测肾小球系膜细胞增殖情况,硝酸还原酶法、Elisa法分别检测培养液上清中NO、iNOS、MCP-1的含量。结果 LPS能明显诱导肾小球系膜细胞增殖,培养液上清中NO、iNOS、MCP-1的含量明显高于正常对照组(P0.05或0.01)。10%、5%筋骨草总黄酮含药血清干预后OD值及培养液上清中NO、iNOS、MCP-1的含量均明显减少(P0.05或0.01)。结论筋骨草总黄酮能抑制LPS诱导的肾小球系膜细胞异常增殖和炎症介质NO、iNOS、MCP-1的释放。     

银翘散对流感病毒FM1感染胸腺缺陷小鼠血清中IFN-γ、IgG含量的影响

目的:观察银翘散(YQS)对流感病毒感染胸腺缺陷小鼠细胞因子的影响。方法:以流感病毒亚洲甲型鼠肺适应株(FM1)感染小鼠为模型,采用银翘散灌胃治疗。用ELISA法分别检测感染后第1、3、5、7天小鼠血清中IFN-γ、IgG的含量。结果:银翘散各给药组IFN-γ的含量明显降低,与病毒感染模型组比较差异有显著性意义(P<0.01),银翘散各治疗组与感染模型组的IgG含量,差异不是十分显著(P>0.05)。结论:银翘散可以降低血清中IFN-γ,说明银翘散可以降低炎性因子的表达,从而减少炎性损伤。IgG含量与感染模型组差异不是十分显著,有可能因为在病毒感染早期,机体只能产生低水平低亲和力的抗体。     

三草素抗炎作用的机制研究

目的对三草素抗炎作用进行机制研究。方法含药血清干预RAW264.7细胞培养4 h后,加入终浓度为100 ng/mL的LPS进行诱导,MTT法观察三草素含药血清对RAW264.7细胞及LPS诱导的RAW264.7细胞增殖的影响;ELISA法考察三草素含药血清对LTB4生成及对IL-1β、IL-6、TNF-α细胞因子产生的影响。结果三草素含药血清具有促进RAW264.7细胞增殖的活性,无细胞毒性。三草素含药血清具有抑制经LPS诱导的RAW264.7细胞的生长活性,抑制RAW264.7细胞的增殖。RAW264.7细胞经LPS诱导后促进LTB4的生成,三草素含药血清具有抑制LTB4生成的作用;RAW264.7细胞经LPS诱导后促进IL-1β、IL-6、TNF-α细胞因子的产生,三草素含药血清具有抑制IL-1β、IL-6、TNF-α细胞因子产生的作用。结论本研究结果初步表明三草素可能是通过降低上述炎症介质的分泌而发挥抗炎作用。     

银翘解毒口服液对流感病毒FM1感染胸腺缺陷小鼠NK细胞及TNF-α,TGF-β1含量的影响

目的:观察银翘解毒口服液(YQP)对流感病毒感染胸腺缺陷小鼠自然杀伤细胞(NK细胞)活性和TNF-α,TGF-β1血清含量的影响。方法:以流感病毒亚洲甲型鼠肺适应株(FM1)感染小鼠为模型,以YQP灌胃治疗。LDH法分别检测感染后第1,3,5,7天脾脏细胞NK活性,ELISA法分别检测感染后第1,3,5,7天血清中TNF-α,TGF-β1的含量。结果:模型组NK细胞活性在感染后第1天明显升高,其余各时间点明显降低。YQP各剂量组(5,10,20 g.kg-1)的NK细胞活性在感染后的第3,5,7天较模型组有明显提高,其中YQP20 g.kg-1剂量组作用最强;模型组的TNF-α和TGF-β1血清含量在各时间点较正常组明显升高,YQP3个剂量组各时间点TNF-α和TGF-β1含量较模型组均有不同程度下降,YQP 20 g.kg-1剂量组作用最强,YQP对TGF-β1的含量的抑制作用呈明显的剂量依赖关系。结论:YQP对流感病毒感染小鼠NK活性有增强作用,对TNF-α和TGF-β1的分泌有抑制作用。     

犀角地黄汤治疗带状疱疹的疗效观察

目的:观察是犀角地黄汤治疗带状疱疹的临床疗效。方法:将100例诊断为带状疱疹的患者随机分为两组,分为犀角地黄汤组(60例)与对照组(40例),观察治疗前后带状疱疹症状的改善情况。结果:犀角地黄汤在改善带状疱疹症状方面优于对照组(P<0.05),疗效显著。结论:犀角地黄汤治疗带状疱疹的临床疗效显著。     

急性肝衰竭模型中医证型探讨

目的 应用小鼠急性肝衰竭模型,筛选有效方剂,以方测证探讨该模型的中医证型。     

清化湿热法治疗难治性特发性血小板减少性紫癜30例

目的观察清化湿热法治疗难治性ITP的临床疗效。方法将60例患儿按就诊顺序分为两组,对照组30例按血热妄行,脾不统血,阴虚火旺,气血两虚,气滞血瘀等型,分别选用犀角地黄汤、归脾汤、知柏地黄汤、八珍汤、桃红四物汤加减治疗。治疗组30例,采用加减三仁汤治疗。结果治疗组总有效率80％,对照组总有效率60％,两组疗效比较。差异有统计学意义（P〈0．05）。结论清化湿热法治疗难治性ITP效果明显,疗效稳定,复发率低。     

地黄饮子加减方对D-半乳糖致衰老模型小鼠抗氧化作用的影响

目的:观察地黄饮子加减方对D-半乳糖致衰老模型小鼠抗氧化能力的影响,探讨地黄饮子加减方的抗衰老作用。方法:①采用7月龄ICR雄性小鼠40只为研究对象,采用D-半乳糖腹腔注射制备亚急性衰老小鼠模型,随机分为模型组、模型VE组、模型地黄组,每组保证10只,并设置正常组10只为对照。②利用跳台实验方法检测各组小鼠的学习、记忆能力。③采用HE染色观察各组小鼠脑组织形态改变。④检测各组小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、乙酰胆碱酯酶(AchE)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)指标数值。结果:①模型组经地黄饮子加减方干预后,学习能力测试,小鼠跳台实验的错误次数减少(P0.01);记忆能力测试,小鼠跳台的错误次数减少(P0.01)。②与模型组比较,地黄饮子加减方能够有效缓解小鼠脑组织病理损伤状况。③与模型组比较,地黄饮子加减方能够使小鼠血清中SOD及GSH-Px含量显著提高(P0.01),使血清中AchE的含量明显降低(P0.01)。结论:地黄饮子加减方能够改善模型小鼠的学习记忆能力,减轻模型小鼠脑组织神经元脱失状况,提高抗氧化能力,从而起到减缓衰老的作用。     

六味地黄汤、补中益气汤、复方丹参饮对骨髓抑制小鼠保护的作用机制

目的 :进一步研究补肾阴、补气、活血中药方对骨髓抑制小鼠保护的作用机制。 方法 :使用实时荧光定量RT-PCR检测小鼠脾脏促血小板生成素(thrombopoietin,TPO) mRNA、促血小板生成素受体(c-Mpl)mRNA及转录因子GATA-1 mRNA表达水平。 结果 :六味地黄汤、补中益气汤均能明显升高骨髓抑制小鼠TPO,c-Mpl及GATA-1 mRNA的表达。复方丹参饮对小鼠脾脏TPO,c-Mpl及GATA-1 mRNA表达影响不明显。 结论 :六味地黄汤、补中益气汤均能通过升高骨髓抑制小鼠TPO,c-Mpl及GATA-1 mRNA的表达水平从而促进骨髓抑制小鼠的外周血恢复。     

六味地黄汤对实验性骨关节炎兔软骨细胞凋亡与增殖的体内实验

目的:探讨六味地黄汤对实验性膝骨关节炎兔软骨细胞增殖、凋亡的影响。方法:20只新西兰兔用Hu lth法造骨关节炎动物模型,随机分成空白对照组、实验组;实验组用六味地黄汤灌胃,空白对照组用生理盐水,治疗第4、8、12、24周后每组各取2只动物,用亚硝酸盐还原酶法测定关节滑液NO水平,关节软骨组织HE染色,光镜观察形态学变化、电镜观察软骨细胞内结构变化及原位末端标记(TUNEL)法观察软骨细胞凋亡病理改变,进行组织病理学评估。结果:空白对照组NO活性在不同时期均高于实验组(8周,P<0.05;12、24周,P<0.01),两组间比较有显著性差异(P<0.05,0.01);实验组的关节软骨病理变化总积分、软骨细胞病理改变积分和软骨表层病理改变积分均明显低于空白对照组(P<0.05);实验组的软骨细胞凋亡指数与对照组的软骨细胞凋亡有显著性差异(P<0.05),与关节液中NO含量显著相关。结论:六味地黄汤对兔膝关节实验性骨关节炎软骨退变具有保护作用,通过NO诱导途径减少软骨细胞的凋亡,可能是其作用机制之一。     

加味犀角地黄汤在脂多糖诱导的兔内毒素血症中的防治作用

目的:通过比较加味犀角地黄汤与桃红四物汤对细菌脂多糖诱导的兔内毒素血症中ET-1、vWF、TNF-α、CD62P表达及球结膜微循环的影响,评价凉血化瘀法在内毒素血症中的治疗作用。方法:将32只新西兰大白兔按随机分为正常对照组、模型对照组、活血组、凉血组,每组各8只。活血组及凉血组采用脂多糖诱导内毒素血症并分别给以桃红四物汤及加味犀角地黄汤灌胃。治疗中注射脂多糖后分别于3 h、24 h、7 d时ELISA检测兔血清ET-1、vWF、TNF-α水平,细胞流式法检测CD62P变化,记录球结膜微循环图像。结果:凉血组、活血组及模型对照组在注射脂多糖后3 h兔血清ET-1、vWF、TNF-α、CD62P水平及球结膜微循环积分明显高于正常对照组(P<0.05-0.01),注射后3 h及24 h时,凉血组所有观察指标及活血组除TNF-α外的其他指标与模型对照组相比均有明显下降(P<0.05)。各时间点凉血组各指标下降较活血组更为明显。结论:活血化瘀在脂多糖诱导的内毒素血症中具有抗炎、抑制血小板活化、防治内皮损伤及改善微循环等作用,加味犀角地黄汤具有更强抗炎作用。     

扶正解毒化瘀方对脂多糖诱导大鼠肺巨噬细胞的调控作用

目的:观察扶正解毒化瘀方对脂多糖诱导的大鼠肺巨噬细胞中NLRP3炎性体通路及相关炎性反应递质的作用。方法:将大鼠NR8383细胞分为空白组、模型组、扶正解毒化瘀方组、哌拉西林他唑巴坦(TZP)组以及中药+TZP组。用制备扶正解毒化瘀方中药原液作用于脂多糖诱导的大鼠NR8383细胞,采用qPCR和Western blotting分别检测NLRP3炎性体通路的mRNA表达和蛋白水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测干预前后炎性反应递质的水平。结果:扶正解毒化瘀方组和TZP组均能明显降低NLRP3、Caspase-1和ASC的mRNA表达,2组NLRP3和ASC的蛋白水平明显下降,Caspase-1和IL-1β蛋白水平也有下降趋势。扶正解毒化瘀方组和TZP组均能明显降低IL-18和IL-1β炎性反应递质水平,联合用药有增效作用。结论:扶正解毒化瘀方对NLRP3炎性体作用明确,可能通过NLRP3炎性体通路延缓机体免疫炎性损伤。     

羌活地黄汤对佐剂性类风湿性关节炎大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6的影响

目的：观察羌活地黄汤对氟氏完全佐剂诱导的类风湿性关节炎（AA）大鼠血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）的影响,探讨羌活地黄汤治疗类风湿性关节炎的可能机制,为羌活地黄汤在临床上的应用提供实验依据。方法：建立大鼠佐剂性类风湿性关节炎动物模型,将SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、羌活地黄汤及甲氨喋呤组。采用灌胃给药方式进行治疗。采用酶联免疫吸附法检测AA大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6的水平。结果：佐剂性关节炎大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平均高于正常对照组（P〈0．01）;经羌活地黄汤及甲氨喋呤治疗后,羌活地黄汤组及甲氨喋呤组的TNF-α、IL-1β、IL-6水平低于模型组（P〈0．01）,羌活地黄汤组与甲氨喋呤组血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：羌活地黄汤具有抑制AA大鼠TNF-α、IL-1β、IL-6的异常分泌的作用,可以阻止AA大鼠免疫性炎症的发展。提示羌活地黄汤对AA大鼠TNF-α、IL-1β、IL-6的影响是其治疗RA的可能机制。     

犀角地黄汤对庆大霉素致视网膜血管损伤的疗效观察

目的通过观察犀角地黄汤对庆大霉素引起视网膜血管损伤的影响来评价其疗效，为中药治疗视网膜血管性疾病尤其是视网膜血管炎提供新的研究思路和方法。方法用犀角地黄汤、地塞米松和生理盐水作为处理因素，玻璃体腔注射500ug庆大霉素的青紫蓝兔作为处理对象，通过眼底彩照、荧光素眼底血管造影、视网膜血管消化铺片、光镜及电镜标本制作、免疫组织化学检测细胞间黏附分子一1含量来观察不同处理因素作用后7天及14天各组兔视网膜及血管等变化。结果中药中剂量对500ug庆大霉素致视网膜及血管的损伤有明显的治疗作用，能有效减轻视网膜出血、缓解炎症反应以及降低细胞间黏附分子-1的表达，且随时间延长疗效稳定。中药大、小剂量仅能改善视网膜出血情况。地塞米松早期可明显减少出血及抑制炎症细胞数量，但长时间应用后加重了炎症反应。结论犀角地黄汤作为凉血清热，化斑散瘀的经典方，能有效控制庆大霉素致家兔视网膜出血及炎症反应，且没有明显副作用，这为临床相关疾病．尤其是视网膜血管炎的中医药治疗提供了实验研究基础。