基于代谢组学分析青蒿琥酯治疗肝癌的作用机制

目的:采用GC-MS联用技术探索青蒿琥酯治疗肝癌的作用机制,为该药物在肝癌治疗中的临床应用提供实验依据。方法:应用发光法细胞活力检测试剂盒(Cell Titer-Glo~? Luminescent Cell Viability Assay)检测不同浓度青蒿琥酯(0,12. 5,25,50,100μmol·L~(-1))作用于人肝癌Huh7,SMMC-7721细胞24,48,72 h的活性。采用GC-MS联用技术分析青蒿琥酯作用于2种肝癌细胞(Huh7,SMMC-7721) 24 h后代谢物的变化,利用Postrun Analysis 4. 41工作站对数据进行预处理,采用偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)对两组差异代谢物进行分析,通过Metabo Analyst 3. 0软件对差异代谢物进行代谢通路分析。结果:与正常组相比,青蒿琥酯作用于2种肝癌细胞后,细胞内相同代谢物共有39种发生了显著变化,主要涉及到氨基酰-转运RNA(tRNA)生物合成,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢,精氨酸和脯氨酸代谢,谷胱甘肽代谢5条代谢通路。结论:青蒿琥酯(12. 5～100μmol·L~(-1))均能够抑制肝癌细胞(Huh7,SMMC-7721)的生长,主要涉及到5条代谢通路,这可能是青蒿琥酯抗肝癌的作用途径。     

青蒿琥酯抗肿瘤作用实验研究

目的:探讨青蒿琥酯(artesunate,Art)的体内抗肿瘤活性。方法:接种S180肉瘤的小鼠随机分为模型组、5-氟尿嘧啶组(20mg/kg)、Art组(20mg/kg),每组10只,腹腔注射给药10天后,各组称体质量,计算抑瘤率、脾指数、胸腺指数。结果:Art组的瘤质量与模型组相比明显降低(P<0.01),抑瘤率达到43%。Art可提高脾指数和胸腺指数,对S180肉瘤所致的免疫器官功能低下有一定保护作用。结论:Art具备较好的体内抗肿瘤活性。     

青蒿琥酯抗牛血清白蛋白免疫性大鼠肝纤维化作用的研究

目的：研究青蒿琥酯抗实验性肝纤维化的作用。方法：采用牛血清白蛋白免疫性肝纤维化大鼠模型，观察肝组织病理变化，检测肝组织中羟脯氨酸的含量及动物血清肝功能指标和血清MDA水平。结果：青蒿琥酯组能减轻假小叶形成和肝组织羟脯氨酸含量升高，并能使GPT下降。结论：青蒿琥酯具有抗肝纤维化的作用。     

青蒿琥酯抗牛血清白蛋白免疫性大鼠肝纤维化作用的研究

目的:研究青蒿琥酯抗实验性肝纤维化的作用。方法:采用牛血清白蛋白免疫性肝纤维化大鼠模型,观察肝组织病理变化,检测肝组织中羟脯氨酸的含量及动物血清肝功能指标和血清MDA水平。结果:青蒿琥酯组能减轻假小叶形成和肝组织羟脯氨酸含量升高,并能使GPT下降。结论:青蒿琥酯具有抗肝纤维化的作用。     

青蒿琥酯抗肿瘤作用观察

目的:对抗疟药青蒿琥酯进行抗肿瘤活性实验研究.方法:采用体内抗肿瘤实验方法,观察青蒿琥酯对小鼠移植性肿瘤的抑制作用.结果:青蒿琥酯能明显的抑制小鼠移植性S180肉瘤的生长,延长艾氏腹水瘤小鼠的生存时间.结论:青蒿琥酯对小鼠移植性肿瘤具有明显的抑制作用.     

青蒿琥酯抑制人肝癌细胞株HepG2细胞生长及其机制的初步研究

目的：研究青蒿琥酯对人肝癌细胞株HepG2细胞增殖和survivin表达的影响,探讨青蒿琥酯影响肝癌细胞增殖的可能机制.方法：常规培养人肝癌细胞株HepG2,设立空白对照组;青蒿琥酯不同浓度组（3.125μg/ml、6.25μg/ml、12.5μg/ml、50μg/ml）,作用不同时间后用MTT法检测青蒿琥酯对人肝癌细胞株HepG2细胞增殖的影响,应用RT-PCR检测细胞survivin在mRNA水平的表达.结果：青蒿琥酯作用人肝癌细胞株HepG2后,与对照组比较细胞生长明显受到抑制（P〈0.05）,当青蒿琥酯浓度在12.5μg/ml时,survivin的表达（相对表达量为（0.75＋0.01）显著降低（P〈0.05）.结论：青蒿琥酯可通过下调survivin的表达来抑制肝癌细胞HepG2的生长.     

青蒿琥酯对人肝癌HEPG-2细胞增殖作用的研究

目的 研究青蒿琥酯(Artesunate,Art)对肿瘤细胞增殖抑制作用.方法 MTT法测定Art,与铁剂联用,以及与5-FU联用对人肝癌细胞系HEPG-2的增殖抑制作用.结果 Art能够明显抑制HEPG-2细胞的生长,并呈现明显的时间-剂量效应.24,48,72 h的IC50值分别为103.1,75.3,65.7 μg/m.当Art(10μg/ml)与5-氟尿嘧啶(5-Fu)(5μg/ml)联合使用时,表现出明显的协同作用.结论 Art对人肝癌细胞系HEPG-2细胞有显著的抑制作用,有可能开发为临床抗癌治疗的辅助药物.     

青蒿琥酯纳米脂质体抗肝癌作用及其与肝脏中药物含量关系研究

目的与青蒿琥酯原料药作对比,观察青蒿琥酯纳米脂质体在肝癌裸鼠模型中抗肝癌作用及肝脏中的药物百分含量,观察其对肝癌的靶向性及对正常肝脏的影响。方法用青蒿琥酯原料药与青蒿琥酯纳米脂质体两种剂型给人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型进行腹腔注射给药,观察青蒿琥酯的抗肝癌作用,用紫外分光光度法测定不同剂型青蒿琥酯在肝癌裸鼠模型肝脏中的百分含量,并分析肝脏中药物含量与抗肿瘤作用的关系。肝脏HE染色显微镜下观察各处理组肝脏的病理变化。结果青蒿琥酯纳米脂质体对人肝癌裸鼠皮下移植瘤的抑瘤率为32.7%,原料药的抑瘤率为20.5%。青蒿琥酯纳米脂质体组药物在肝脏中的百分含量为0.53%,青蒿琥酯原料药组肝脏中药物百分含量为0.28%。且肝脏HE染色结果青蒿琥酯纳米脂质体组与原料药组和生理盐水组均对肝脏无明显损伤作用。结论青蒿琥酯纳米脂质体抗肝癌作用优于原料药组,有较明显的肝脏肿瘤靶向性,且对肝脏无明显损伤作用。     

青蒿琥酯抗肿瘤作用研究进展

青蒿琥酯是青蒿素的衍生物之一,具有水溶性好、抗疟活性高等特点。临床上用来治疗疟疾,取得了较好的疗效。近年来,有学者发现,青蒿琥酯除了具有较好的抗疟活性之外,还具有抗多种肿瘤细胞的作用,并且还具有毒性低,不存在交叉耐药,可以逆转肿瘤细胞的多耐药性等优势。故综述了近年来青蒿琥酯对人慢性粒细胞白血病细胞株K562、肝癌细胞、人皮肤鳞癌A431细胞、人前列腺癌PC-3细胞、肺腺癌A549细胞等细胞的活性作用,以期对其抗癌活性的研究有所帮助。     

青蒿琥酯治疗肝癌的机理初探

目的：研究青蒿琥酯抗肝癌的作用机理。方法：检测拓扑异构酶活性，甲基绿－派络宁染色检测凋亡细胞，免疫组化方法观察Bax、Bcl-2的表达。结果：经青蒿琥酯处理的SMMC－7721细胞拓扑异构酶活性增强，青蒿琥酯处理后，凋亡细胞明显增加，免疫组化显示，青蒿琥酯组肿瘤标本Bax蛋白阳性细胞数增多，Bcl-2蛋白阳性细胞数减少。结论：青蒿琥酯抗肝癌作用机理可能为上调Bax基因，下调Bcl-2基因， 诱导癌细胞凋亡，同时影响拓扑异构酶活性。     

青蒿酯钠抗人肝癌(BEL-7402)与诱导凋亡

应用体内外抑瘤实验、细胞形态学观察、流式细胞仪、Westernblot实验进行检测和观察，探讨青蒿酯钠抗肿瘤作用及机制。结果表明，青蒿酯钠对人肝癌有体内、外抗肿瘤作用；诱导人肝癌细胞凋亡，可能是其抗肿瘤作用机制之一；诱导体外人肝癌细胞凋亡通过P53非依赖性途径。     

青蒿琥酯纳米脂质体对人肝癌HepG2细胞抗血管生成作用的研究

目的: 探讨在青蒿琥纳米脂质体的干预下,血管内皮生长因子(VEGF)及血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)在HepG2中的表达,为肝癌的治疗提供理论依据。 方法: 取对数生长期HepG2细胞制成3×10⁵/mL单细胞悬液,接种于35 cm²培养皿中培养24 h后给药,分别设生理盐水对照组、青蒿琥酯原料药组、青蒿琥酯纳米脂质体组(浓度均为μmol·L^-1),药物作用24 h。采用RT-PCR法检测各处理组HepG2细胞中VEGF mRNA及VEGFR2 mRNA的表达水平;Western blotting法检测各处理组HepG2细胞中VEGF及VEGFR2的蛋白表达水平。 结果: 青蒿琥酯纳米脂质体组VEGF及VEGFR2 mRNA相对表达量为0.22±0.02,0.09±0.02;对照组为0.55±0.03,0.53±0.02;青蒿琥酯纳米脂质体组VEGF,VEGFR2蛋白相对表达量为0.33±0.06,0.25±0.06,对照组为0.95±0.03,0.78±0.03,(P<0.05)。青蒿琥酯纳米脂质体组与原料药组的VEGF及VEGFR2 mRNA表达和蛋白表达均低于对照组,且纳米脂质体组表达量低于原料药组。 结论: 青蒿琥酯纳米脂质体能够抑制肿瘤血管的生成达到抗肿瘤作用,且作用强于青蒿琥酯原料药,有应用于肝癌治疗的潜在价值。     

番荔枝内酯化合物对人肝癌细胞株HepG2的作用

目的研究番荔枝内酯AS-4在体外对人肝癌细胞株HepG2生长的抑制作用。方法设AS-4不同浓度组(6.25、12.5、25、50μg/mL)、顺铂阳性对照组(25μg/mL)和空白对照组,常规培养24、48h,进行MTT比色试验和倒置相差显微镜观察。结果AS-4可明显抑制HepG2细胞的生长,最高抑制效应达到91.68%,且有细胞毒性的时间和剂量依赖关系,48hIC50为6.67μg/mL。结论番荔枝内酯AS-4在体外对人肝癌细胞株HepG2有杀伤作用,显示出较强的细胞毒活性。     

华蟾素诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的实验研究

目的:探讨华蟾素诱导人肝癌细胞凋亡及作用机理。方法:采用 MTT 法、AO/EB 荧光染色法、流式细胞仪及免疫组化等方法,观察华蟾素对人肝癌 SMMC-7721细胞株的作用。结果:华蟾素可显著抑制SMMC-7721细胞的生长;经药物处理后,AO/EB 染色时,肝癌细胞在显微镜下呈现出典型的凋亡形态学改变;在流式细胞仪上可见华蟾素能将细胞周期阻断在 S 期;对抗凋亡基因 bcl-2表达有一定的抑制作用。结论:华蟾素能抑制人肝癌 SMMC-7721细胞生长;能诱导人肝癌细胞凋亡;其诱导细胞凋亡的机理与其能阻断细胞周期、抑制 bcl-2基因表达有关。     

乳香挥发油抑制人肝癌SMMC-7721细胞株增殖及诱导凋亡的作用

目的探讨乳香挥发油体外抑制人肝癌SMMC-7721细胞株增殖及诱导凋亡的作用。方法使用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察乳香挥发油对SMMC-7721的增殖抑制作用;通过吖啶橙染色,观察SMMC-7721的形态学变化;使用琼脂糖凝胶电泳法检测乳香挥发油对细胞DNA降解的影响;利用流式细胞术分析乳香挥发油诱导SMMC-7721凋亡的凋亡率及对细胞周期的影响;应用间接免疫荧光法观察凋亡调控基因bax和bcl-2蛋白的表达变化。结果乳香挥发油浓度为0.7、0.07、0.007、0.0007、0.00007mg.mL-1作用24h时,能抑制SMMC-7721的生长,并呈浓度依赖性。在浓度为0.07mg.mL-1时,作用48h或72h,电泳结果显示了DNA梯状条带,流式细胞仪检测到凋亡峰,且细胞被阻滞于G1期。间接免疫荧光法的结果表明,促凋亡蛋白bax的表达增强,抗凋亡蛋白bcl-2的表达无明显变化。结论乳香挥发油能抑制肝癌细胞株SMMC-7721的增殖,并可能通过上调线粒体内bax/bcl-2的表达比例诱导SMMC-7721细胞的凋亡,而且其诱导的凋亡具有细胞周期依赖性。     

镰形棘豆对SMMC-7721肝癌细胞增殖及MMP-2表达的影响

目的:观察镰形棘豆对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖及其基质金属蛋白酶-2(MMP-2)分泌量的影响.方法:以不同质量浓度(25,50,100,250,500 mg·L-1)的镰形棘豆挥发油、总多糖、总黄酮、总生物碱和总皂苷部位处理SMMC-7721细胞24 h后,采用MTT法检测各部位对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用;采用ELISA法测定挥发油部位和总黄酮部位处理SMMC-7721肝癌细胞24 h后细胞上清中MMP-2的分泌量;Real-time PCR法检测处理24 h后MMP-2 mRNA的转录情况.结果:MTT实验结果表明,挥发油和总黄酮部位抑制SMMC-7721细胞的增殖,并表现出一定的浓度依赖性.ELISA实验表明挥发油部位显著性地抑制MMP-2分泌量;Real-time PCR实验表明挥发油和总黄酮均显著抑制MMP-2 mRNA的表达.结论:镰形棘豆挥发油和总黄酮部位抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖活性,可能与其下调MMP-2的分泌量和转录水平有关.     

青龙衣提取物对人肝癌细胞株抑制作用的实验研究

目的：通过青龙衣提取物对人肝癌细胞株SMMC-7721的抑制作用,筛选出其抑瘤活性成分并探讨其机制。方法：青龙衣抑瘤活性成分胡桃醌与氟尿嘧啶、奥沙利铂、亚砷酸注射液分别作用于人肝癌细胞株SMMC-7721,分别于24h、48h、72h收集细胞,采用MTT法比较胡桃醌与其他组药物的抑瘤率,借助电镜观察胡桃醌作用于人肝癌细胞株SMMC-7721后细胞微细结构的形态变化,于激光共聚焦显微镜下检测细胞内Ca2＋浓度变化。结果：MTT结果显示胡桃醌抑瘤具有剂量依赖性;0．01mg／mL剂量24、48 hMTT结果显示胡桃醌的抑瘤强度高于亚砷酸注射液,与氟尿嘧啶相当,低于奥沙利铂;电镜结果显示肝癌细胞染色质凝聚,核固缩,游离核糖体减少,出现大溶酶体颗粒,线粒体数量增多形成髓样变,部分细胞坏死;激光共聚焦显微镜检测结果显示胡桃醌作用于肝癌细胞SMMC-7721后细胞内Ca2＋浓度增加。结论：青龙衣提取物抑瘤活性成分为化合物胡桃醌;胡桃醌对人肝癌细胞株SMMC-7721的抑制作用可能是直接杀伤肿瘤细胞。     

青蒿琥酯对人结肠癌细胞HCT-8细胞凋亡和细胞周期的影响

目的:研究青蒿琥酯对人结肠癌HCT-8细胞凋亡和细胞周期的影响.方法:实验分为10,20,30 μmol·L-1青蒿琥酯处理组,阴性对照组和空白对照组.采用透射电镜和流式细胞仪检测青蒿琥酯对HCT-8细胞的凋亡诱导效果;采用流式细胞仪分析青蒿琥酯对HCT-8细胞周期的影响;采用Western blot印迹法检测青蒿琥酯对细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达的影响.结果:经青蒿琥酯处理后,电镜下可见HCT-8细胞膜皱缩、染色质凝聚、核碎裂、凋亡小体形成.10,20,30 μmol·L-1青蒿琥酯处理组凋亡率分别为17.1％±3.8％,29.5％±5.1％,41.4％±5.8％,显著高于空白对照组5.1％±1.4％.P＜0.05.在20 μmol· L-1青蒿琥酯处理组,HCT-8细胞G0/G1期所占比例随着药物作用时间延长而增加,S期与G2/M期细胞所占比例则下降.10,20,30 μmol·L -1青蒿琥酯处理组Bax蛋白表达水平分别为0.20±0.03,0.40±0.05和0.50±0.08显著高于空白对照组(0.06 ±0.02),P＜0.05;Bcl-2蛋白表达水平未见明显变化,Bcl-2/Bax呈下降趋势.结论:青蒿琥酯可以抑制人结肠癌细胞HCT-8增殖,诱导细胞凋亡,其诱导凋亡作用机制可能与其阻滞结肠癌细胞周期和上调促癌基因Bax表达有关.     

镰形棘豆提取物抗肝癌的体内外活性研究

目的：探讨镰形棘豆提取物的体内外抗肝癌活性,并探讨其可能的机制。方法：采用MTT法检测镰形棘豆提取物对SMMC-7721细胞的增殖抑制,采用PI单染法和AnnexinV-FITC／PI双染法进行流式细胞仪检测,测定细胞周期和凋亡率,观察H22荷瘤小鼠的体内肿瘤抑制作用。结果：MTT实验表明,镰形棘豆提取物EOOF和FOF有效抑制肿瘤细胞SMMC-7721的增殖,并呈一定的剂量依赖性,其IC50值分别为0．115和0．097mg·mL^-1。TFOF作用SMMC-7721细胞后可使细胞周期停滞于G1期,凋亡细胞的比例升高,并且呈浓度依赖性。镰形棘豆提取物FOF能明显抑制H22荷瘤小鼠肿瘤的生长,低、高剂量组的抑制率分别为56．1％和70．8％（P〈0．01）。结论：镰形棘豆提取物FOF能抑制SMMC-7721细胞的增殖,诱导其凋亡,并对H22荷瘤小鼠有肿瘤生长抑制作用。显示镰形棘豆具有较好的发展为抗肝癌药物的前景。