银柴胡提取物对兔脊髓慢性渐进性压迫后基质金属蛋白酶MMP-2、12的表达及神经功能的影响

目的：探讨银柴胡提取物对兔脊髓慢性渐进性压迫后基质金属蛋白酶2、12（MMP-2、12）表达及神经功能的影响。方法：家兔随机分为脊髓损伤后应用生理盐水对照组（A组）和银柴胡提取物干预治疗组（B组）,损伤后不同时间取材,HE染色观察损伤脊髓组织病理变化;免疫组化染色检测MMP-2及Real-Time PCR检测MMP-12的表达变化;采用Tarlov评分评价神经功能。结果：HE染色镜检发现脊髓组织病理学改变B组明显轻于A组。2组均发现MMP-2、12的表达,MMP-2、12表达A组〉B组（P〈0.05）。B组神经功能改善优于A组。结论：银柴胡提取物可有效抑制家兔脊髓慢性渐进性压迫后MMP-2、12表达,促进神经功能恢复。     

红花注射液对兔脊髓慢性损伤治疗作用的实验研究

目的:观察不同剂量红花注射液对兔脊髓慢性损伤后的治疗作用。方法:将60只健康青紫蓝家兔随机分为低剂量组(A组)、中剂量组(B组)、高剂量组(C组)、盐水对照组(D组),正常饲养1个月,采用螺钉植入法建立慢性脊髓损伤动物模型。造模成功后,实验组各组分别通过耳缘静脉注射不同剂量的红花注射液,连续注射2周,对照组注射生理盐水。治疗后每组分别于术前1个月、术后6个月、给药后2周随机抽取5只家兔,以伤处为中心取出1.0cm的脊髓组织,通过免疫组化进行MMP-2检测。同时对每组随机抽取的5只家兔进行心脏采血,通过ELISA法检测血清中MMP-12的表达变化,并于不同时间点分别通过斜板试验、改良Tarlov评分评价家兔行为学变化。结果:1)各组在造模后MMP-2,MMP-12的表达以及行为学评价较造模前比较,差异有统计学意义(P<0.05)。2)给药后A,B,C组MMP-2,MMP-12表达及行为学评价较D组比较,差异有统计学意义(P<0.05),中剂量组MMP-2,MMP-12的表达以及行为学评价较高,与低剂量组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:中剂量红花注射液对治疗脊髓慢性损伤较其它剂量效果显著提高,此剂量可作为红花注射液治疗脊髓慢性损伤的参考剂量。     

MMP-2、12的表达与兔脊髓慢性渐进性损伤后的关联性研究

目的:观察兔脊髓慢性渐进性压迫后损伤段脊髓内MMP-2、12的表达及与损伤程度的相关性。方法:将50只健康青紫蓝家兔随机分为A组(假手术组)25只、B组(SCI组)25只。A组切开皮肤后即可缝合作为对照,B组采用颈入路经C4、C5椎体分别置入直径4mm的螺钉,每隔4周拧进0.75~1mm。经4次手术,造成25只兔颈髓腹侧的慢性渐进性压迫,椎管侵占率约为50%,术后饲养3~6个月。两组脊髓组织取材时间分为术前1月、术后1月、术后2月、术后4月、术后6月。以伤处为中心取出的脊髓组织分为两部分,一部分做石蜡包埋和切片,采用免疫组化检测MMP-2的表达,另一部分组织进行PCR检测MMP-12的表达,观察脊髓慢性渐进性压迫后MMP-2、12的表达变化与脊髓损伤程度的相关性;并于每次手术后通过斜板试验、改良Tarlov评分、BBB评分评价家兔行为学变化。结果:(1)两组术前MMP-2、12的表达、行为学评定等比较差异无统计学意义(P0.05)。(2)手术后各时间点均有MMP-2、12表达,但同一时间节点A与B组比较差异有统计学意义(P0.05);随着压迫程度的加重,B组MMP-2、12表达明显高于A组,差异有统计学意义(P0.05),A组各时间点表达均维持在相对稳定水平。(3)各时间点兔后肢运动功能评分及斜扳试验评分A组明显高于B组,B组同时间点评分低于A组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:兔慢性脊髓损伤后MMP-2、12的表达明显升高,并随着脊髓压迫程度的加重,MMP-2、12的表达也相应增高。     

红花注射液对脊髓缺血再灌注损伤后体感诱发电位的影响

目的:观察红花注射液对脊髓缺血再灌注损伤后体感诱发电位(SEP)的影响。方法:将12只新西兰大白兔随机分成A组(红花注射液组)、B组(生理盐水组),每组6只。参照Zivin法建立兔脊髓缺血再灌注损伤动物模型。A组于腹主动脉夹闭前10min静脉注射红花注射液2.0m1/kg,B组采用等容量生理盐水代替。在缺血前、缺血后30min、再灌注后30min、1h、2h、3h、4h对动物行体感诱发电位(SEP)监测;于再灌注后1h、2h、4h对A、B组动物行功能评分。结果:在缺血(25.3±2.5)min时,B组电位消失,A组电位仍存在;在缺血及再灌注后各时相点A组的潜伏期明显短于B组(P<0.01),且波幅明显长于B组(P<0.01);再灌注lh、2h、4h,A组的神经功能评分均高于B组(P<0.05)。结论:红花注射液具有减轻兔脊髓缺血再灌注损伤及保护神经功能作用。     

红花注射液对家兔脊髓缺血再灌注损伤血清MDA和SOD的影响

目的观察红花注射液对家兔脊髓缺血再灌注损伤(SCIRI)血清中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平的影响,并探讨红花注射液脊髓保护的机制。方法采用改良Zivin法建立脊髓缺血再灌注模型。24只新西兰兔随机分为假手术组(C组)、模型组(I/R组)、红花注射液后处理组(P组),每组8只。术后各组分别于再灌注0 h、4 h、12 h、24h、48 h股静脉取血,测定血清中MDA、SOD含量。再灌注48 h后取实验动物L2—5段脊髓行病理学检查,采用HE染色观察脊髓标本的一般病理学改变。结果 P组再灌注4 h、12 h、24 h、48 h血清MDA含量均低于I/R组(P均<0.05),而血清SOD活性均高于I/R组(P均<0.05)。结论红花注射液可显著提高脊髓缺血再灌注损伤后家兔血清SOD活性,降低MDA含量,明显改善脂质过氧化反应的程度。这可能是其发挥脊髓保护作用的一个重要机制。     

丹参与红花有效成分配伍对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的探究丹参与红花有效成分的不同配伍组方对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法选取成年雄性SD大鼠,通过大脑中动脉线栓法建立脑缺血再灌注模型,随机分成假手术组、模型组、阳性对照组(丹红注射液2 m L/kg)以及采用正交试验法L9(34)对丹参与红花主要有效成分[丹参素、丹酚酸A、丹酚酸B、羟基红花黄色素A(HYSA)]剂量配伍9组。大鼠尾iv给药,每天1次,连续给药3 d后进行神经功能缺损评分;实时荧光定量PCR法检测大鼠大脑皮层中葡萄糖调控蛋白78(GRP-78)、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)、内质网源性转录因子(CHOP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)m RNA表达;HE染色检测大鼠大脑皮层病理变化;免疫组化法检测大鼠大脑皮层中NF-κB p65蛋白的表达情况。结果与模型组比较,丹红注射液、丹参与红花主要有效成分配伍可显著降低脑缺血再灌注大鼠的神经功能评分,使大鼠大脑皮层GRP-78 m RNA表达水平升高,NF-κB p65、CHOP、TNF-a、IL-6 m RNA表达水平降低,抑制大脑皮层中NF-κB p65蛋白表达。丹参与红花主要有效成分配伍9组中第4组(丹参素30 mg/kg、丹酚酸A 2.5 mg/kg、丹酚酸B 16mg/kg、HYSA 8 mg/kg)、第6组(丹参素30 mg/kg、丹酚酸A 10 mg/kg、丹酚酸B 8 mg/kg、HYSA 4 mg/kg)对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用更为显著。结论丹参与红花有效成分各配伍组方均能对脑缺血再灌注损伤大鼠内质网应激、炎症等方面起良好的保护作用。     

回医烙灸疗法对大鼠脊髓损伤后神经修复机制研究

目的探讨回医烙灸疗法对大鼠脊髓损伤后神经修复功能的影响。方法采用Allen's法制备急性脊髓损伤模型。实验动物分为假手术组(A组)、单纯损伤组(B组)、西药组(C组)、造模2h烙灸组(D组)、造模6h烙灸组(E组),其中50只于1、2、4、6、8周采用脊髓损伤运动功能BBB法及感觉功能Reuter法评分,另外25只取损伤脊髓组织,作HE及尼氏体染色,观察脊髓损伤后组织形态的变化。结果 BBB及Reuter评分表明D、E组效果优于A、B、C组,且D组疗效最显著。HE及尼氏体染色图像显示,D、E组脊髓形态好于B、C组。结论回医烙灸疗法对脊髓损伤大鼠神经功能的恢复有促进作用,且前期回医烙灸干预的效果好于后期干预。     

夹脊电针联合甲基强的松龙对大鼠急性脊髓损伤后神经细胞凋亡表达的实验研究

目的:探讨夹脊电针联合甲基强的松龙治疗对大鼠急性脊髓损伤后受损组织的病理学改变及神经细胞凋亡表达的影响。方法:Wistar大鼠随机分为6组,用改良Allen's打击法制成脊髓损伤模型,分别进行HE和TUNEL染色,检测大鼠受损组织病理形态学的改变及神经细胞凋亡的表达。结果:HE染色显示,急性脊髓损伤组大鼠1 d时出血明显,3 d时神经细胞破坏最明显,7 d时神经细胞凋亡有所减轻,14 d时凋亡已不明显,尤以夹脊电针联合甲基强的松龙组神经细胞保存较完好。TUNEL染色显示,与急性脊髓损伤组相比,术后3 d、7 d、14 d,急性脊髓损伤+夹脊电针组、急性脊髓损伤+甲基强的松龙组、急性脊髓损伤+夹脊电针治疗+甲基强的松龙组、急性脊髓损伤+抑制剂组神经细胞凋亡均减少(P0.05)。术后7 d、14 d,急性脊髓损伤+夹脊电针治疗+甲基强的松龙组神经细胞凋亡减少明显(P0.05)。结论:急性脊髓损伤后7 d、14 d时,夹脊电针联合甲基强的松龙可以抑制大鼠急性脊髓损伤后神经细胞凋亡及神经细胞病理形态学异常改变。     

参芎葡萄糖注射液对大鼠急性脊髓损伤后后肢功能及NF-κB表达的影响

目的 探讨参芎葡萄糖注射液对大鼠急性脊髓损伤后后肢功能及NF-Κb表达的影响.方法 应用斜板试验、BBB评分法、免疫组化方法对各组大鼠脊髓损伤后神经功能及脊髓内NF-κB在各个时点表迭变化进行比较.结果 两治疗组大鼠神经功能较损伤组明显提高(P<0.05),NIP组与参芎葡萄糖组恢复无显著性差异(P>0.05).损伤组有大量的NF-出表达,MP组同参芎葡萄糖注射液组NF-κB的表达明显减少(P>0.05).结论 参芎葡萄糖注射液可抑制大鼠急性脊髓损伤后NF-κB表迭,对后肢功能具有明显的改善作用,有效促进神经功能恢复.     

复方丹参合甲基强的松龙对急性脊髓损伤大鼠后肢运动功能及iNOS表达的影响

目的：观察复方丹参（SM）和甲基强的松龙（MP）联合治疗对急性脊髓损伤大鼠后肢运动功能及脊髓前角诱导型一氧化氯合酶表达的影响。方法：用30只2月龄Wistar大鼠随机均分为MP治疗组（A）、MP＋SM治疗组（B）；用改良Allen＇s法致伤脊髓，3周后对大鼠进行斜板试验、行为学评分和HE染色厦免疫组织化学染色检测脊髓前角NOS阳性细胞表达，结果：斜板试验和行为学评分以厦脊髓前角内的iNOS阳性细胞率表达，A、B两组比较有显著性差异。结论：复方丹参联合甲基强的松龙治疗可以进一步促进急性脊髓损伤大鼠后肢运动功能的恢复；其机制可能与复方丹参提高大鼠损伤脊髓前角内iNOS表达有关。     

消肿止痛合剂对大鼠急性脊髓损伤的影响

目的：观察消肿止痛合剂对大鼠急性脊髓损伤的保护作用。方法：采用胥少汀脊髓半横切法制作大鼠T8-T9脊髓损伤模型,根据性别、体质量将60只大鼠随机分为6组,空白组（A）,消肿止痛合剂低、中、高剂量组（B、C、D）,甲基强的松龙组（E）,模型组（F）,每组10只,B、C、D组子消肿止痛合剂,每日用药量分别按成人等效剂量的5、10、20倍,每日用药3次,术后第8天开始改为每日2次,剂量不变;E组于术后开始肌注甲基强的松龙（0．03g／kg）;A组和F组分别给予等量生理盐水。给药14天后,用放免法检测血清IL-6、NOS含量;免疫组化法测定Caspasc-3的表达;观察各组大鼠HE染色脊髓损伤组织的病理变化。结果：HE染色提示脊髓损伤组织改善情况D组优于C组,且与E组相似;损伤脊髓组织中IL-6、NOS含量F组显著增高,D、C组与E组相比有显著性差异（P〈0．01）;Caspasc-3的表达在F组中升高,C组与E组、D组相比Caspasc-3表达有统计学意义（P〈0．01）。结论：消肿止痛合剂能降低IL-6、NOS在损伤脊髓组织中的含量,可抑制caspase-3在急性脊髓损伤后的表达。     

消肿止痛合剂对大鼠急性脊髓损伤后NOS及MMP-9表达的影响

目的：观察消肿止痛合剂对大鼠急性脊髓损伤后细胞凋亡率、一氧化氮合成酶（NOS）及基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的影响,探讨消肿止痛合剂治疗急性脊髓损伤的作用机理。方法：40只SD大鼠随机分为4组：空白对照组（A）、空白模型组（B）、甲基强的松龙组（C）、消肿止痛合剂组（D）。A组不做任何处理,B组、C组、D组采用脊髓半横切法造模后,B组给予生理盐水灌胃;C组给予肌注甲基强的松龙（30 mg/kg）;D组给予消肿止痛合剂,每日用量为成人等效剂量10倍,3次/d,术后第8日起,2次/d,剂量不变。造模后14天,TUNEL染色法检测细胞凋亡率,大鼠尾静脉采血,放免法检测NOS含量,免疫组化法测定MMP-9的表达。结果：D组动物脊髓损伤部位细胞凋亡率明显低于B组（P〈0.01）,NOS含量低于B型组（P〈0.01）,同时B组大鼠脊髓组织中MMP-9表达明显高于D剂组（P〈0.01）。结论：消肿止痛合剂对脊髓损伤具有保护作用,可能是通过降低动物脊髓损伤部位NOS,维持TIMPs/MMP-9平衡,抑制MMP-9表达,从而调节细胞凋亡,保护脊髓功能。     

丹酚酸B联合骨髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤修复作用研究

目的探讨丹酚酸B联合骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植对大鼠脊髓损伤（SCI）模型的修复作用,以期为脊髓损伤修复提供新的治疗方案。方法采用改良Allen打击法制作SCI模型,利用BBB评分法评价大鼠神经功能恢复情况,并用HE法和免疫组化法分别对脊髓组织病理形态及GFAP和NGF的表达情况进行分析。结果术后大鼠后肢运动功能逐渐改善,C、D组BBB评分明显高于B组（P〈0.01）。脊髓组织病理切片显示受损脊髓较模型组有明显修复,胶质细胞增生活跃,损伤周围可见相对完整的神经细胞。从免疫组化的结果来看,各组大鼠的GFAP和NGF均有表达,A组GFAP和NGF阳性细胞面积高于B、C、D组;C、D组高于B组（P〈0.01）;D组又高于C组（P〈0.05）。结论 BMSCs移植对损伤后的大鼠脊髓有保护作用,丹酚酸B能协同BMSCs促进对大鼠脊髓损伤的修复。     

丹参酮对脊髓缺血再灌注损伤HIF1-1α和VEGF的作用及机制

目的:从组织形态学观察丹参酮对脊髓缺血再灌注损伤的作用;探讨丹参酮对脊髓缺血再灌注损伤血管内皮生长因子和HIF-1α的作用及机制?椒?1.脊髓缺血再灌注损伤模型建立与鉴定后,将120只大鼠随机分为丹参酮组(A组)、对照组(B组)和假手术组(C组),每组40只。造模成功后,A组术前30min腹腔注射丹参酮注射液,B组术前30min腹腔注射等量的生理盐水,C组,麻醉和手术操作同上,不阻断腹主动脉即终止手术,逐层缝合。室温下自然苏醒。上述大鼠缺血30min后分为再灌注0.5h、1h、4h、8h、12h,共5个时间点,每组每个时间点8只。取各组大鼠的脊髓组织,随机抽取大鼠2只,切取脊髓标本。制备成光学显微镜观察标本,运用光镜观察各组脊髓组织病理改变。2.采用RT-PCR检测脊髓组织中VEGFmRNA和HIF-1α的表达?峁?1.脊髓组织病理改变显示:丹参酮组神经细胞肿胀程度、核仁萎缩程度等均损害表现较对照组轻。2.脊髓缺血再灌注损伤0.5～4h,3组之间VEGFmRNA表达比较差异无统计学意义,脊髓缺血损伤8～12h,VEGFmRNA表达呈时间依赖性升高,8h和12h,丹参酮与对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。3.对照组和丹参酮组,脊髓缺血再灌注损伤0.5～1h,HIF-1αmRNA表达呈时间依赖性下降,丹参酮组明显低于对照组,差异有统计学意义,随后不再下降。结论:丹参酮注射液可能通过促进血管内皮生长因子表达,减少HIF-1α的表达,改善脊髓缺血再灌注损伤组织局部缺氧环境,对减轻脊髓缺血再灌注损伤起到积极的防治作用。     

电针对SNI大鼠痛觉过敏及脊髓背角NOS阳性神经元表达的影响

目的：探讨电针对SNI大鼠痛觉过敏及脊髓背角NOS阳性神经元表达的影响。方法：SD大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组（n=8）。采用坐骨神经分支选择性损伤模型,电针＂委中＂和＂环跳＂穴,观察其对大鼠机械痛阈和热痛阈的影响,以还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶（NADPH-d）法,观察各组大鼠脊髓背角NOS阳性神经元的变化,并用平均光密度来定量表示脊髓背角NOS的阳性神经元表达。结果：SNI手术可显著降低大鼠机械痛阈,损伤侧脊髓背角NOS阳性神经元表达显著升高,与假手术组及非伤侧相比,差异均有显著性（P〈0.05或0.01）;电针干预后大鼠伤侧脊髓背角的NOS阳性神经元表达降低,与模型组比较差异有显著性（P〈0.05）,与此同时大鼠机械痛敏状态显著改善,甚至痛行为消失。结论：电针减轻神经病理性痛的痛过敏可能与其调控脊髓NOS的功能有关。     

不同治疗周期夹脊电针对急性脊髓损伤大鼠运动功能及细胞凋亡的影响

目的:观察夹脊电针不同治疗周期对急性脊髓损伤(ASCI)大鼠运动功能及神经细胞凋亡的影响,探讨夹脊电针治疗ASCI的时效关系。方法:将雌性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组和夹脊电针组,每组分1、3、7、14d4个亚组,每个亚组6只。NYU打击器制备ASCI模型。夹脊电针组造模后给予夹脊电针治疗,每次30min,每日1次。用BBB评分观察ASCI大鼠肢体运动功能,HE染色观察大鼠脊髓损伤不同时间点病理形态学变化,TUNEL染色检测脊髓组织神经细胞凋亡情况。结果:模型组大鼠BBB评分较假手术组显著降低(P0.05);经电针治疗后,夹脊电针组3、7、14d组BBB评分较模型组显著升高(P0.05),且14d组评分高于3d组(P0.05)。HE染色可见,模型组1d的脊髓组织广泛出血;3d的脊髓组织结构破坏较明显,神经细胞死亡数量增多;7d的组织结构破坏严重,正常神经元减少;14d的脊髓组织形成大量空泡,炎性细胞浸润。夹脊电针组从3d开始可见神经元数量增多;7、14d两个时间点可见较大神经元,结构较好。TUNEL检测结果可见,模型组细胞凋亡数量较假手术组显著增加(P0.05);经电针治疗后,夹脊电针组3、7、14d组细胞凋亡数量显著降低(P0.05),尤以14d组降低更加明显(P0.05)。结论:夹脊电针可以显著改善ASCI大鼠运动功能及神经细胞凋亡情况,且治疗3d后即有显著疗效,并随着治疗周期的延长疗效更佳。     

川芎嗪对脊髓急性损伤大鼠神经营养因子表达的影响

目的探讨川芎嗪(TMP)对大鼠脊髓急性损伤(ASCI)模型脊髓神经生长因子(NGF)、脑源性神经生长因子(BDNF)表达的影响及其对脊髓损伤后脊髓功能的保护作用。方法取SD大鼠随机分为正常对照组、假治疗组和川芎嗪组并给予相应处理。采用改良Allen’s法造模,BBB评分对实验大鼠脊髓功能进行行为学评分;SABC法检测造模后大鼠损伤段脊髓NGF和BDNF的表达。结果随时间延长,术后SD大鼠BBB评分逐渐升高,术后7 d、14 d和21 d川芎嗪组BBB评分值均较假治疗组高(P均0.05);川芎嗪组术后3 d7、d和14 d时NGF、BDNF阳性细胞数表达均较假治疗组明显增加(P均0.05)。结论川芎嗪对脊髓继发性损伤有保护作用,这种保护作用可能与其能促进损伤段脊髓NGF、BDNF的表达有关。     

活血通督汤对脊髓缺血再灌注损伤神经细胞凋亡的影响

目的:通过观察活血通督汤对脊髓缺血再灌注损伤脊髓神经细胞凋亡的影响,探讨活血通督汤改善脊髓缺血再灌注损伤的机制。方法:66只新西兰家兔随机分为假手术组、模型组、活血通督汤组。模型组、活血通督汤组采用夹闭腰动脉法制作脊髓缺血再灌注损伤模型。假手术组不夹闭腰动脉,其它步骤同模型组。采用TUNEL法检测神经细胞凋亡水平。结果:(1)苏木精-伊红染色显示:假手术组脊髓神经细胞形态基本正常;模型组和活血通督汤组各时间点可见脊髓神经细胞核固缩、深染、结构模糊,间质可见出血点;活血通督汤组各时间点脊髓神经细胞形态优于模型组。(2)TUNEL染色显示:假手术组神经细胞凋亡较少;模型组和活血通督汤组各时间点神经细胞凋亡较假手术组明显增高,再灌注24h神经细胞凋亡最多;活血通督汤组各时间点脊髓神经细胞凋亡少于模型组。结论:活血通督汤可通过减少脊髓缺血再灌注损伤中脊髓神经细胞的凋亡,从而减轻脊髓缺血再灌注损伤。     

火针对脊髓损伤模型大鼠凋亡相关蛋白表达的影响

目的:观察火针改善脊髓损伤大鼠凋亡相关蛋白的表达情况,为临床治疗脊髓损伤提供实验依据;方法:本研究以随机对照盲法进行动物分组,采用改良的Allen’s法制备脊髓损伤模型,以火针、毫针分别进行干预,采用westen-blot法观察大鼠IL-1β、Caspase3、p38蛋白的变化;结果:造模后组织中IL-1β蛋白表达于6h达高峰,磷酸化的p38MAPK表达于24h达高峰,Caspase-3表达于24h达高峰;火针组、毫针组与模型组比较,72h、1w的Caspase-3表达量存在显著性差异(P0.05);火针组、毫针组与模型组比较,72 h、1w的IL-1β表达量存在显著性差异(P0.05);结论:火针能较好的改善脊髓损伤大鼠凋亡相关蛋白的表达,值得在临床治疗脊髓损伤推广。