半边旗提取物5F对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PMETS-1mRNA和VEGF蛋白表达的影响

目的:研究半边旗提取物5F(以下简称5F)对HO-8910PM细胞内VEGF蛋白及ETS-1mRNA表达的影响,探讨其抗肿瘤侵袭转移的作用机制.方法:RT-PCR分析ETS-1mRNA的表达;Western blot分析VEGF蛋白的表达.结果:25～100 μmol/L 5F作用HO-8910PM细胞24 h后,明显下调ETS-1mRNA的表达;5F明显下调VEGF蛋白表达水平.结论:5F抗肿瘤侵袭转移能力与ETS-1mRNA和VEGF蛋白的表达有关.     

半边旗提取物5F影响高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞周期的实验研究

目的:探讨半边旗提取物5F对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞周期的影响及其作用机制.方法:以MTT法检测5F对高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞增殖的影响;流式细胞术分析5F对HO-8910PM细胞周期的影响;Western blot法分析NF-κB(P65)、FAK的表达及FAK酪氨酸磷酸化水平.结果:不同浓度的5F分别处理细胞24 h后,对HO-8910PM细胞增殖有明显的抑制作用;流式细胞术分析表明5F使G0/G1期的细胞减少,阻断细胞于G2/M期;同时,5F可使NF-κB(P65)的表达下调,上调FAK的表达,并降低FAK酪氨酸磷酸化水平.结论:5F对HO-8910PM细胞周期的影响与NF-κB(P65)表达下调及FAK的表达上调有关.     

冬凌草甲素对卵巢癌细胞紫杉醇耐药性的拮抗作用及其机制研究

目的探讨冬凌草甲素体内外对卵巢癌细胞紫杉醇耐药性的拮抗作用及其机制。方法通过大剂量冲击法,诱导制备耐紫杉醇的人卵巢癌HO-8910PM细胞株(HO-8910PM/PIX),用不同浓度冬凌草甲素处理HO-8910PM/PIX细胞;或在冬凌草甲素作用HO-8910PM/PIX细胞前以NF-κB激活剂TPA进行预处理。给药后,细胞经DAPI染色,荧光显微镜下观察细胞形态变化;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Western blotting检测卵巢癌细胞中NF-κB蛋白的表达。建立裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型。接种后8周,观察冬凌草甲素对裸鼠皮下移植瘤生长的影响;免疫组织化学法检测肿瘤组织中NF-κB的阳性表达。结果与对照组相比,冬凌草甲素呈浓度相关性抑制卵巢癌HO-8910PM/PIX细胞增殖,显著诱导细胞凋亡,而TPA可显著削弱冬凌草甲素诱导细胞凋亡的作用。与HO-8910PM细胞相比,NF-κB在HO-8910PM/PIX细胞中表达显著上调,冬凌草甲素可抑制HO-8910PM/PIX细胞中NF-κB的表达。冬凌草甲素可显著抑制裸鼠卵巢癌皮下移植瘤生长,明显减弱移植瘤组织中NF-κB的阳性表达。结论冬凌草甲素体内外对卵巢癌细胞紫杉醇耐药性具有拮抗作用,该作用可能通过抑制NF-κB的表达而实现。     

Genistein影响高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞周期的实验研究

目的：探讨三羟异黄酮（genistein）对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞周期的影响及其作用机制。方法：以台盼蓝拒染法检测genistein对高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞增殖的影响；流式细胞术分析genistein对HO-8910PM细胞周期的影响；Westemblot法分析NF-KB（P65）、VEGF的表达。结果：不同浓度的genistein分别处理细胞24h后，对HO-8910PM细胞增殖有明显的抑制作用；流式细胞术分析表明各浓度genistein组G，期细胞明显升高，50i,xmol／L组和100μmol／L组与对照组相比差异显著（P〈0．05），而25μmol／L组与对照组比较无显著差异（P〉0．05）；同时genistein可使NF-κB（P65）和VEGF的表达下调。结论：Genistein对HO-8910PM细胞增殖有抑制作用，其作用机制可能与NF-κB（P65）和VEGF表达下调有关。     

基于NF-κB信号通路探讨散寒化痰方外敷对兔模型膝骨关节炎的影响

目的基于NF-κB信号通路探讨散寒化痰方外敷对兔模型膝骨关节炎的影响。方法以改良Hulth法制备兔KOA模型。将36只新西兰兔随机分为正常组、模型组、阳性对照组(扶他林软膏)及散寒化痰方低、中、高剂量组,每组6只,外敷给药6周。HE染色、MASSON染色法及电镜分别观察家兔膝关节软骨组织形态学及软骨细胞超微结构变化;ELISA法测兔血清IL-1β、TNF-α水平;Western blot及RT-PCR检测MMP-3、MMP-13、ADAMTS-5、CollagenⅡ蛋白及mRNA表达;免疫组化法检测NF-κB p65入核表达。结果与正常组比较,模型组兔膝关节软骨细胞结构破坏严重;血清IL-1β、TNF-α水平上升(P0.01),MMP-3、MMP-13、ADAMTS-5蛋白及mRNA表达上调(P0.05,P0.01),CollagenⅡ蛋白及mRNA表达下调(P0.01),NF-κB p65入核表达升高(P0.05)。与模型组比较,散寒化痰方各剂量组兔膝关节软骨细胞结构仅轻度损伤,血清IL-1β、TNF-α水平降低(P0.01),MMP-3、MMP-13、ADAMTS-5蛋白及mRNA表达下调(P0.05,P0.01),NF-κB p65入核表达降低(P0.05,P0.01);散寒化痰方低、高剂量组兔膝关节软骨组织中CollagenⅡ蛋白及mRNA表达均上调(P0.05,P0.01)。结论散寒化痰方可能通过抑制膝关节软骨细胞NF-κB p65入核表达,阻止NF-κB信号通路激活,下调MMP-3、MMP-13、ADAMTS-5及上调CollagenⅡ表达,抑制兔血清IL-1β、TNF-α水平升高,进而保护膝骨关节软组织,延缓KOA发生与发展。     

半边旗二萜化合物5F对HO-8910PM细胞中Nr1d1表达的影响

目的:研究半边旗二萜化合物5F(5F from Pteris semipinnata L,PsL5F)对人高转移卵巢癌HO-8910PM细胞中核受体超家族成员1d1(nuclear receptor subfamily 1,group D,member 1,Nr1d1)表达的影响,探讨其抗肿瘤的可能作用机制.方法:培养HO-8910PM细胞,用0.1%DMSO,100 μmol~(-1) PsL5F分别处理HO-8910PM细胞24 h后,提取RNA和总蛋白,应用肿瘤基因芯片和荧光定量实时PCR检测PsL5F对Nr1d1 mRNA表达的影响;Western blot法分析PsL5F对Nr1d1蛋白表达水平的影响.结果:肿瘤基因芯片结果显示,100μmol·L~(-1) PsL5F处理组中Nr1d1 mRNA表达水平是对照组的26.17倍,荧光定量实时PCR结果与芯片结果吻合,PsL5F处理组中Nr1d1 mRNA表达水平是对照组的(35.34±1.07)倍(P<0.01),并且PsL5F处理组中Nr1d1蛋白表达水平是对照组的(7.71±0.43)倍(P<0.01).结论:PsL5F能明显上调HO-8910PM细胞中Nr1d1的表达,提示其与PsL5F抗肿瘤作用密切相关.     

半边旗活性物质5F对非小细胞肺癌 NCI-H460 细胞κKβ、IκB、p65及 p50 mRNA 表达的影响

目的 从 NF-κB 信号通路着手探讨半边旗活性物质 5F 诱导非小细胞肺癌 NCI-H460 细胞凋亡发生的机制。方法 MTT 法检测 5F 对 NCI-H460 细胞的生长抑制作用；用半定量 RT-PCR 方法检测 NCI-H460 细胞 IκKβ、IκB、p65 及 p50 mRNA 表达水平的变化。结果 5F 抑制 NCI-H460 细胞的生长，其效果与 5F 的质量浓度和作用时间相关，24、48、72 h 的 IC５０ 分别为：21.40、4.52、1.02 μg/mL；100 μg/mL 5F 作用 NCI-H460 细胞 6 h 后能引起 IκKβ 和 IκB mRNA 表达水平显著降低 (P＜0.05)；p65 和 p50 mRNA 水平在作用 3 h 就发生明显减少 (P＜0.05)。结论 5F 诱导 NCI-H460 细胞凋亡的机制可能是通过抑制核因子-κB (NF-κB) 信号通路来实现的。     

半边旗活性物质5F对非小细胞肺癌NCI-H460细胞IκKβ、IκB、p65及p50 mRNA表达的影响

目的从NF-κB信号通路着手探讨半边旗活性物质5F诱导非小细胞肺癌NCI-H460细胞凋亡发生的机制。方法MTT法检测5F对NCI-H460细胞的生长抑制作用;用半定量RT-PCR方法检测NCI-H460细胞IκKβ、IκB、p65及p50mRNA表达水平的变化。结果5F抑制NCI-H460细胞的生长,其效果与5F的质量浓度和作用时间相关,24、48、72h的IC50分别为:21.40、4.52、1.02μg/mL;100μg/mL5F作用NCI-H460细胞6h后能引起IκKβ和IκBmRNA表达水平显著降低(P0.05);p65和p50mRNA水平在作用3h就发生明显减少(P0.05)。结论5F诱导NCI-H460细胞凋亡的机制可能是通过抑制核因子-κB(NF-κB)信号通路来实现的。     

基于NF-κB P65/IκBα信号通路探讨养阴益气活血方治疗干燥综合征作用机制北大核心CSCD

目的研究养阴益气活血方对干燥综合征非肥胖糖尿病(NOD)小鼠颌下腺组织核因子-κB P65蛋白(NF-κB P65)/核因子κB抑制蛋白α(IκBα)信号通路的影响。方法取NOD小鼠24只随机分为4组,每组6只。模型组灌服去离子水0.4 mL(3 mg/mL),西药组灌服羟氯喹0.4 mL(2.5 mg/mL),中药组灌服中药养阴益气活血方0.4 mL,中西药组灌服中药养阴益气活血方及羟氯喹各0.4 mL,选取6只同龄Balb/c小鼠作为正常组灌服去离子水0.4 mL。给药8周后摘取双侧颌下腺组织进行PCR检测,镜下观察各组小鼠颌下腺组织免疫组化后蛋白变化。结果与正常组比较,模型组小鼠颌下腺组织P65mRNA表达著增高,IκBαmRNA表达降低(P<0.05)。与模型组比较,西药组、中药组、中西药组P65 mRNA表达降低,IκBαmRNA表达升高(P<0.05)。与西药组比较,中西药组P65 mRNA表达降低(P<0.05),中药组IκBαmRNA相对表达量降低(P<0.05)。镜下,模型组小鼠颌下腺组织P65蛋白呈高表达,IκBα蛋白呈低表达,中药组、西药组和中西药组P65蛋白散在表达,正常组表达最弱;IκBα蛋白在其余三组高表达,正常组表达最强。与正常组比较,模型组P65平均吸光度增高,IκBα平均吸光度减少(P<0.05);与模型组比较,中药组、西药组和中西药组P65平均吸光度降低,IκBα平均吸光度增加(P<0.05)。从药效比较,中西药组抑制NF-κB/IκBα通路中P65表达的疗效最好,西药组和中药组次之,且疗效相近;中西药组抑制IκBα磷酸化的效果最佳,其次是西药组,中药组最次。结论联合使用养阴益气活血方和羟氯喹能通过减少P65 mRNA及蛋白表达,维持IκBαmRNA及蛋白高表达,抑制NF-κB P65/IκBα信号通路,减少颌下腺炎症反应,从而发挥治疗干燥综合征的作用。     

黄芩汤对湿热型溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中NF-κB p65和ICAM-1表达的影响

目的观察黄芩汤对湿热型溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠结肠组织中NF-κB p65和ICAM-1表达的影响,探讨黄芩汤治疗UC的作用机理。方法将80只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、黄芩汤组、柳氮磺吡啶组,除对照组外,采用高脂高糖辛辣饮食加2,4,6三硝基苯磺酸(TNBS)诱导法构建湿热型UC大鼠模型,造模成功后,分别给予20 mL·kg~(-1)体质量的黄芩汤和8%浓度的柳氮磺砒啶混悬液灌胃治疗,正常对照组和模型组给予等量的生理盐水,连续治疗2周,实时荧光定量聚合酶链式反应检测结肠组织中NF-κB p65和ICAM-1 mRNA表达。免疫组化检测结肠组织中NF-κB p65和ICAM-1蛋白表达。结果与正常对照组比较,模型组NF-κB p65和ICAM-1 mRNA及蛋白表达量明显升高(P0.05);与模型组比较,黄芩汤组和柳氮磺砒啶组NF-κB p65和ICAM-1 mRNA及蛋白表达量显著下降(P0.05);黄芩汤组NF-κB p65和ICAM-1 mRNA表达量及蛋白阳性表达率显著低于柳氮磺砒啶组,2组比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论黄芩汤对湿热型溃疡性结肠炎的治疗作用可能是通过下调NF-κB p65、ICAM-1的表达来实现。     

苦参碱对人卵巢癌细胞株HO-8910PM增殖及侵袭运动能力的影响

目的 研究苦参碱对人高转移卵巢癌细胞系HO-8910PM增殖及转移相关能力的影响及其作用机制.方法 以MTT法和台盼蓝拒染法检测苦参碱对人高转移卵巢癌HO-8910PM细胞增殖的影响;Transwell小室法检测其对HO-8910PM细胞侵袭运动能力的影响;考马斯亮蓝染色法检测不同质量浓度苦参碱对H0-8910PM细胞细胞骨架的改变及免疫细胞化学方法检测药物作用前后HO-8910PM细胞Ezrin蛋白的表达.结果 苦参碱对HO-8910PM细胞增殖抑制呈明显剂量和时间效应;1.5 g/L苦参碱能明显抑制细胞的增殖,作用6 h后能抑制HO-8910PM细胞体外侵袭人工基底膜和运动能力,抑制率分别为(41.52±10.76)%和(39.73±10.67)%;1.0、1.5g/L苦参碱作用HO-8910PM细胞24 h后使细胞骨架明显改变,并上调Ezrin蛋白的表达.结论 苦参碱能抑制高转移性人卵巢癌细胞HO-8910PM的增殖能力和侵袭运动能力,其抗肿瘤侵袭运动的机制与细胞骨架和Ezrin蛋白表达的改变有关.     

大黄素对人高转移卵巢癌细胞中癌相关基因表达的影响

目的探讨大黄素对人高转移卵巢癌抗肿瘤的可能作用机制。方法应用肿瘤基因芯片检测大黄素(40μmol/L)对人高转移卵巢癌HO-8910PM细胞中癌相关基因表达的影响,并且实时定量PCR和Western blotting进行验证。结果共筛选出表达差异基因69个,其中33个基因表达水平上调,36个基因表达水平下调,涉及细胞凋亡、细胞周期、细胞生长与分化、细胞运动、信号转导、基因转录和细胞代谢等7大类相关基因。结论基因芯片结果提示大黄素抗肿瘤作用可能与转化生长因子-β(TGF-β)信号转导通路密切相关。     

半边旗二萜化合物5F和大黄素影响HO-8910PM细胞中GDF15表达的研究

目的:研究半边旗二萜化合物5F(简称PsL5F)和大黄素对人高转移卵巢癌HO-8910PM细胞中生长分化因子15(GDF15)表达的影响,探讨它们抗肿瘤的作用机制。方法:应用肿瘤基因芯片、荧光定量实时PCR和Western blot法检测PsL5F和大黄素对GDF15表达的影响。结果:PsL5F和大黄素都能明显上调GDF15表达。结论:PsL5F和大黄素的抗肿瘤作用与GDF15高表达有关。     

黄芩素通过激活Caspases和Bcl-2家族蛋白诱导卵巢癌HO-8910细胞凋亡

目的研究黄芩素对卵巢癌HO-8910细胞凋亡的调控作用及其可能的作用机制。方法选取人卵巢癌细胞系HO-8910细胞,经黄芩素不同浓度及不同时间处理后,分别采用噻唑蓝(MTT)法测定对细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期;采用Westernblotting法检测Bcl-2家族蛋白表达情况。结果黄芩素对HO-8910细胞有明显的增殖抑制作用,呈浓度-时间依赖性。与对照组比较,黄芩素组细胞凋亡率明显升高(P0.05、0.01)。黄芩素上调Bax/Bcl-2值,上调cleaved Caspase-3及cleaved Caspase-9的蛋白表达量,呈浓度依赖性。结论黄芩素通过激活Caspase和Bcl-2家族蛋白对卵巢癌HO-8910细胞发挥抗增殖及诱导凋亡活性。     

矢车菊素-3-葡萄糖苷抑制体内外卵巢癌生长的作用

目的:探讨矢车菊素-3-葡萄糖苷对体内外卵巢癌生长的影响及其机制。方法:矢车菊素-3-葡萄糖苷作用人卵巢癌细胞株HO-8910PM后,CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blotting检测卵巢癌细胞中Mucin-4蛋白表达;建立起裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型,观察矢车菊素-3-葡萄糖苷对裸鼠卵巢癌皮下移植瘤生长的影响;免疫组织化学法检测肿瘤组织中Ki-67和Mucin-4的阳性表达。结果:与对照组相比较,矢车菊素-3-葡萄糖苷可显著抑制体外卵巢癌HO-8910PM细胞生长,并明显诱导细胞凋亡;可显著下调卵巢癌细胞中Mucin-4的表达。矢车菊素-3-葡萄糖苷可显著抑制裸鼠卵巢癌皮下移植瘤生长;可明显降低卵巢癌肿瘤组织中Ki-67和Mucin-4的阳性表达。结论:矢车菊素-3-葡萄糖苷可显著抑制体内外卵巢癌生长,该作用可能通过抑制Mucin-4蛋白表达而实现。