川芎嗪预处理对心肌缺血再灌注损伤保护作用机制的研究

以低氧 3h/再给氧 1h期间心肌细胞的生存率、搏动频率、乳酸脱氢酶、丙二醛和超氧化物歧化酶释放为指标 ,观察了蛋白激酶C阻断剂staurosporine和Gi/o蛋白失活剂PTX在低氧预处理和川芎嗪预处理心肌保护中的作用 ,以探讨川芎嗪预处理对心肌缺血再灌注损伤保护作用的机制。结果表明 :分别用staurosporine和PTX处理细胞 10min和 5h后 ,给予低氧预处理和川芎嗪 (2 0 μg/ml)预处理 ,心肌细胞在低氧 3h/再给氧 1h后期间 ,其细胞搏动频率、细胞生存率均下降 ;培养液中乳酸脱氢酶和丙二醛释放增多 ,而超氧化物歧化含量下降 ,与单纯低氧 /再给氧组相比均无显著性差异。表明PKC阻断剂和Gi/o蛋白失活剂可取消低氧预处理和川芎嗪预处理对心肌细胞的保护作用 ,提示川芎嗪预处理保护作用的机制可能与PKC和Gi/o蛋白介导有关     

川芎嗪预处理对心肌缺血再灌注损伤保护作用机制的研究

以低氧3h/再给氧1h期间心肌细胞的生存率、搏动频率、乳酸脱氢酶、丙二醛和超氧化物歧化酶释放为指标,观察了蛋白激酶C阻断剂staurosporine和Gi/o蛋白失活剂PTX在低氧预处理和川芎嗪预处理心肌保护中的作用,以探讨川芎嗪预处理对心肌缺血再灌注损伤保护作用的机制。结果表明：分别用staurosporine和PTX处理细胞10min和5h后,给予低氧预处理和川芎嗪（20μg/ml)预处理,心肌细胞在低氧3h／再给氧1h后期间,其细胞搏动频率、细胞生存率均下降;培养液中乳酸脱氢酶和丙二醛释放增多,而超氧化物歧化含量下降,与单纯低氧／再给氧组相比均无显著性差异。表明PKC阻断剂和Gi/o蛋白失活剂可取消低氧预处理和川芎嗪预处理对心肌细胞的保护作用,提示川芎嗪预处理保护作用的机制可能与PKC和Gi/o蛋白介导有关。     

大黄素对硫酸吲哚酚诱导的心肌细胞损伤的保护作用

目的观察大黄素对硫酸吲哚酚（IS）诱导的H9c2细胞损伤的保护作用，探讨大黄素对尿毒症心肌病细胞模型保护作用的机制。方法体外培养大鼠心肌细胞H9c2后，IS刺激H9c2细胞为细胞损伤模型，以大黄素为干预药物，将细胞随机分为空白组，IS组以及不同浓度大黄素组（20、40、60μmol/L）。采用MTT法测定各组细胞活力，流式细胞术测定各组细胞间的活性氧（ROS）以及细胞凋亡水平，RT-qPCR、WesternBlot检测各组细胞中Bcl-2、BAX、Caspase-3和Caspase-9mRNA及蛋白表达水平。结果与空白组比较，IS组细胞活力降低（P<0.01），ROS水平及凋亡率升高（P<0.01），细胞内BAX、Caspase-3、Caspase-9mRNA及蛋白表达水平升高（P<0.01），Bcl-2mRNA及蛋白表达水平降低（P<0.01）；与IS组比较，不同浓度大黄素组细胞活力升高（P<0.05，P<0.01），ROS水平及凋亡率降低，细胞内BAX、Caspase-3、Caspase-9mRNA及蛋白表达水平降低（P<0.01），Bcl-2mRNA及蛋白表达水平升高（P<0.01）。结论大黄素可能通过抗氧化应激以及抑制凋亡等途径对IS诱导的心肌损伤起到一定的保护作用。     

川芎嗪抗缺氧致脑细胞损伤作用的实验研究

目的:观察川芎嗪对缺氧状态下离体大脑皮层细胞脂质过氧化物(LRO)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响。方法:将4～5日龄 Wistar 大鼠大脑皮层分离并制成细胞悬液(5×10~6个细胞/ml),在 CO_2培养箱内孵育2h 之后观测单纯缺氧1h(细胞悬液通以95％N_2加5％CO_2),以及预先向细胞悬液加入磷酸川芎嗪(分10~(-5)、10~(-4)和10~(-3)mol/L3个剂量组),再缺氧1h 细胞 LPO 含量与 SOD 活性的改变。结果:缺氧可使 LPO 显著增加、SOD 活性明显降低;预先加入川芎嗪能有效防止缺氧所致的 LPO 升高和 SOD 活性降低。结论:川芎嗪对缺氧致细胞脂质过氧化损伤具有保护作用,其机制可能是通过增强内源性 SOD 活性、清除氧自由基,进而降低了细胞脂质过氧化程度。     

大黄素抗大鼠脑缺血损伤及对炎性因子反应的影响

目的:评价大黄素抗脑缺血损伤作用,并从细胞因子水平及表达方面探讨其抑制炎性级联反应机制。方法:将大鼠分为假手术组、模型组、川芎嗪组、大黄素组(低、中、高剂量)。线栓法制备局灶性脑缺血6 h模型。观察神经症状积分、脑组织含水量、梗死面积变化,放射免疫法测定脑组织TNF-α,IL-1β,TGF-β水平,免疫组织化学法测定TNF,VCAM-1表达,原位杂交法测定VCAM-1-mRNA表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠神经症状积分和脑含水量及梗死面积增加,脑组织TNF-α和IL-1β水平增高、TGF-β水平降低,TNF和VCAM-1的表达增强(P<0.01);大黄素各组神经症状积分和脑含水量及梗死面积明显降低,以低剂量组尤为显著;大黄素低剂量组和川芎嗪组TNF-α和IL-1β水平及TNF,ICAM-1表达明显降低(P<0.01),TGF-β水平增高(P<0.01),大黄素低剂量组较川芎嗪组尤为显著。结论:由多种细胞因子介导的炎性级联反应增强和TGF的保护作用减弱是脑缺血损伤的重要机制。大黄素抗脑缺血损伤作用机制可能是通过抑制脑组织炎性级联反应和提高脑保护因子如TGF水平而实现的。     

盐酸川芎嗪对同型半胱氨酸致ECV304 细胞损伤的保护作用

目的:研究盐酸川芎嗪对同型半胱氨酸损伤的ECV304细胞的保护作用。方法:选择人脐静脉内皮细胞ECV304作为体外研究对象,同型半胱氨酸作为造模剂,监测NOS和NO含量的变化判断其损伤程度。确定同型半胱氨酸损伤ECV304细胞时最佳浓度,最佳作用时间,建立内皮细胞损伤模型。在此基础上检测盐酸川芎嗪作用损伤内皮细胞NO和NOS含量,研究其对内皮细胞的保护作用。结果:同型半胱氨酸损伤ECV304细胞的最适浓度为1 mmol.L-1,最佳作用时间为48h,建立内皮细胞损伤模型。阳性药物硝酸甘油和盐酸川芎嗪对ECV304细胞的损伤具有保护作用,NOS和NO生成量与模型组相比显著升高。结论:盐酸川芎嗪具有ECV304细胞保护作用,本实验所建模型可用于筛选以内皮细胞保护剂为靶点的抗心肌缺血药物。     

补肾活血泄浊汤有效成分对大鼠系膜细胞TGF-βmRNA表达的影响

目的:研究补肾活血泄浊汤有效成分对体外培养大鼠系膜细胞 TGF-β基因表达的影响,以探讨补肾活血泄浊汤治疗肾小球肾炎的机制。方法:应用20%胎牛血清刺激系膜细胞,分别加入补肾活血泄浊汤有效成分川芎嗪、大黄素、灵芝多糖,应用 Northern 杂交技术,观察上述几种中药有效成分对大鼠系膜细胞 TGF-β基因表达的影响。结果:川芎嗪、大黄素、灵芝多糖均可抑制 TGF-β基因的表达,其中以川芎嗪作用最为显著。结论:补肾活血泄浊汤可能通过抑制 TGF-β基因的表达而减轻肾小球硬化。     

磷酸川芎嗪通过激活AMPK对HT22细胞在氧糖剥夺损伤中的保护作用

目的观察磷酸川芎嗪在离体水平对糖氧剥夺(OGD)诱导HT22细胞损伤的保护作用。方法磷酸川芎嗪(5、10、15μg/mL)预处理HT22细胞24 h,OGD处理4 h,HT22细胞分为空白对照组、模型组、5μg/mL磷酸川芎嗪组、10μg/mL磷酸川芎嗪组及15μg/mL磷酸川芎嗪组。CCK-8法检测HT22细胞存活率,荧光显微镜下观察神经元形态改变,利用荧光酶标仪检测各组细胞2-脱氧荧光葡萄糖(2-NBDG)的摄取能力,利用Western blot检测AMPK、p-AMPK蛋白表达。结果从细胞形态学上,磷酸川芎嗪对OGD损伤HT22细胞具有保护用;15μg/mL磷酸川芎嗪保护OGD诱导损伤的活性最大。对2-NBDG摄取量的影响,与剂量呈正相关。AMPK磷酸化随磷酸川芎嗪浓度的增加而增加。结论磷酸川芎嗪可能通过激活AMPK对HT22细胞在氧糖剥夺损伤中发挥重要的保护作用。     

川芎嗪对皮质神经元在氧糖剥夺损伤中的保护作用

目的:探讨川芎嗪对培养大鼠皮质神经元在氧糖剥夺损伤中的保护作用及可能机制。方法:原代培养新生大鼠皮质神经元,利用氧糖剥夺建立皮质神经元缺血再灌损伤模型。应用四甲基偶氮唑盐(MTT)测定细胞活力。应用乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)试剂盒分别检测LDH、SOD活性及MDA含量。应用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:氧糖剥夺损伤后细胞存活率降低,LDH释放上升,SOD活性下降,MDA含量明显增加,细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。川芎嗪可浓度依赖性地提高细胞的存活率和SOD水平,减少LDH释放和MDA含量,抑制细胞凋亡(P<0.05)。结论:川芎嗪对培养大鼠皮质神经元在氧糖剥夺损伤中有保护作用,其保护机制可能与葛根素稳定细胞膜,减轻氧化损伤,及抑制细胞凋亡有关。     

川芎嗪预处理对体外培养乳鼠心肌细胞低氧再给氧损伤的保护作用

用体外培养乳鼠心肌细胞观察了川芎嗪预处理对低氧／再给氧损伤的保护作用。结果表明：川芎嗪20μg/ml能明显提高低氧3小时／再给氧0、30、60、120分钟时细胞搏动和细胞生存率,使乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醇（MDA）释放减少,超氧化物歧化酶（SOD）释放增多。这种保护作用与低氧预处理（HP）产生的结果一致。上述结果表明川芎嗪预处理对体外培养乳鼠心肌细胞低氧／再给氧所致损伤具有保护作用,其机制可能与提高心肌细胞抗氧化酶活性,清除氧自由基有关。     

恶性肿瘤患者甲床紫晕与舌下络脉变化的对比观察

甲床紫晕指甲半月远侧甲床上的紫色晕带,宽约2mm以上。伴指压反应延迟者,多见于肺癌、肺转移癌、肝癌、全身转移癌等重症肿瘤及肺心病、支气管哮喘及慢性支气管炎等阻塞性肺疾患,辨证均属血瘀证。铸型标本显示甲床有三级血管弓,第一级弓发出直行血管,血流为瀑布样直流,不易瘀滞;第二级弓发出的微血管互相交叉吻合形成网眼,血流变缓,其弓正当甲半月远侧,在气滞血瘀微循环障碍时易形成甲床紫晕。通过与吉下络脉同步观察,认为两者均可作血瘀证体征。     

中药外敷治疗恶性胸水50例

应用中药外敷治疗恶性肿瘤胸水５０例，取得胸水完全吸收１０例，部分减２１例的良好疗效，该方法对缓解临床症状，改善生存质量也有较好作用。     

更年安的抗氧化作用

更年安７ｇ、３．５ｇ／（ｋｇ．ｄ）灌服小鼠，连续３０ｄ，能抑制动物脑、心、肝组织内和血清中过氧化脂质及脑、心、肝组织内脂褐质的生成，并提高小鼠红细胞内超氧化物歧化酶的活性，对小鼠全血中谷胱甘让过氧化物酶活性也有升高作用。上述结果说明，更年安有抗氧化作用。     

心肌康临床应用及实验研究

一文报告应用心肌康治疗病毒性心肌炎，原发性扩张型心肌病，冠心病（心绞痛）气阴两虚证１１９例的临床结果，并随机设对照组８６例进行对照观察。结果表明，心肌康疗效满意，对３种病疗效优于对照组，尤其在治疗和改善心气阴两两虚证方面，疗效明显优于对照组（Ｐ＜０．００５）。通过心肌康的药效学实验，说明该药对大鼠实验性钴心肌病模型有一定的保护和治疗作用，通过急，慢毒安全性实验评实其无任何毒性，临床应用安全可靠。     

芍药甘草汤配伍意义的药动学研究

目的：通过检测给予芍药、甘草单方或合剂芍药甘草汤后，动物血浆中芍药苷、甘草次酸的药动学参数，探索芍药甘草汤配伍的合理性。方法：将芍药、甘草及芍药甘草汤制成水煎液，分别灌胃给予SD大鼠，采用HPLC／MS／MS法测定大鼠血浆中芍药苷、甘草次酸的血药浓度，并计算主要药动学参数。结果：与单方相比，给予芍药甘草汤后大鼠血浆中甘草次酸的达峰时间提前，峰浓度增加；芍药苷达峰浓度提高、相对生物利用度增加；两成分均出现半衰期缩短现象。结论：臣药甘草促进了君药芍药中芍药苷的吸收，提高了它的体内浓度与含量，这可能是复方芍药甘草汤解痉、镇痛、镇静等功效强劲有力的体内药动学依据。君药芍药提前助燃了臣药甘草中甘草次酸在体内出现的时间和数量，这也可能是复方芍药甘草汤抗溃疡、解痉、抗炎等功效迅速高效的体内药动学依据。本实验从药动学角度证明了芍药甘草汤配伍的合理性。     

LC/MS/MS法鉴别神速宁胶囊中添加的盐酸氯丙嗪成分

目的:建立神速宁胶囊中非法添加盐酸氯丙嗪成分的鉴别方法。方法:采用色谱柱C18(250mm×2.0mm);乙腈-10mmol.L-1醋酸铵-三乙胺(65∶35∶0.5)(用醋酸调pH6.2)为流动相;流速:0.2mL.min-1;电喷雾离子化(ESI)扫描方式;二级质谱母离子m/z319,碰撞能量15V。结果:在高效液相色谱、紫外光谱、质谱中,样品出现与盐酸氯丙嗪成分一致的色谱峰、光谱图、质谱峰。结论:本方法简单可行,结果准确可靠,可用于神速宁胶囊中添加盐酸氯丙嗪成分的定性鉴别。     

密花石斛与马鞭石斛不同药用部位的色谱指纹图谱研究

目的:研究并比较密花石斛、马鞭石斛药材不同部位的指纹图谱.方法:采用HPLC/UV与HPLC/MS技术对二药的不同部位(茎、根、苗)进行色谱指纹图谱研究.结果:建立了密花石斛茎、根、苗与马鞭石斛茎、苗的HPLC/UV指纹图谱,并用HPLC/MS对其色谱峰进行了初步归属.结论:所建立的方法可用于密花石斛、马鞭石斛茎、根、苗指纹图谱的测定,并为其全面质量控制及化学成分研究提供参考.     

大叶紫薇叶和果实中三萜酸的HPLC/UV/MS指纹图谱比较

目的:采用HPLC/UV/MS对大叶紫薇叶和果实中三萜酸类成分指纹图谱进行了比较.方法:采用LunaC18柱(2.6mm×250 mm,5μ);乙腈与0.1%甲酸为流动相进行梯度洗脱;流速为1.0 mL·min-1.结果:大叶紫薇叶和果实中都含有2α-羟基熊果酸和2α-羟基齐墩果酸,大叶紫薇叶中含有熊果酸,而果实中含有齐墩果酸.结论:本方法可用于大叶紫薇叶和果实的质量控制.     

LC/MS/MS测定龙胆苦苷的尿药浓度

目的建立龙胆苦苷尿药浓度的液质联用测定方法(LC/MS/MS).方法以咖啡因作内标,固相萃取法处理尿样.色谱柱:RESCEK C8柱(150 mm×2.1 mm,5 μm),流动相为甲醇-10 mmol·L-1醋酸铵缓冲液(pH=6.5)-乙腈(50:40:10),流速为0.2 mL·min-1.样品经电喷雾离子源(ESI)正离子化后,通过三级四极杆串联质谱仪,采用多反应离子监测方式测定龙胆苦苷(m/z 374.1→195.2)和咖啡因(m/z 195.2→138.2)浓度.结果尿液中龙胆苦苷在30～9000 ng·mL-1浓度范围内线性关系良好(r=0.9980),方法回收率为91.10%～96.21%,提取回收率为100.52%～103.83%,日内、日间精密度均＜10%.结论该方法灵敏、准确、快速、特异性强.     

LC／MS／MS法测定大鼠血浆中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯及药动学研究

目的：建立测定血浆中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的LC／MS／MS法，研究单体穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的药代动力学。方法：测定大鼠血浆中的穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯时，血浆样品经沉淀蛋白处理后，以甲醇-水（85：15）为流动相，采用Lichrospher C18柱分离。选用电喷雾离子源，选择反应监测方式扫描，负离子方式检测。结果：穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯在该条件下分离良好，保留时间分别为3．57min和4．51min。穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的线性范围均为0．02～10μg·mL^-1。定量下限均为0．02μg·mL^-1，最低检出量为0．003ng。结论：该方法简便、灵敏、专属性强，适合于穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯在大鼠体内的药代动力学研究。