山茱萸多糖对肺癌细胞的凋亡作用及Bcl-2、Bax表达的影响

目的 探讨山茱萸多糖对人肺癌A549细胞凋亡的作用及凋亡相关基因表达的影响.方法 采用MTT法、DNA琼脂糖凝胶电泳法、免疫组化SP法检测山茱萸多糖对A549细胞凋亡作用及Bcl-2、Bax蛋白表达的变化.结果 山茱萸多糖对A549细胞抑制作用明显,抑制程度与质量浓度呈正相关;DNA琼脂糖凝胶电泳出现相差约200 bp的DNA梯形条带,免疫组化SP法染色显示Bcl-2的表达下降,Bax的表达上升.结论 山茱萸多糖对人肺癌A549细胞的增殖有较强抑制作用,能诱导细胞凋亡,其机制与下调Bcl-2的表达,上调Bax的表达有关.     

刺五加多糖对人宫颈癌HeLa细胞体外增殖和凋亡作用的实验研究

目的探讨刺五加多糖对人宫颈癌HeLa细胞体外增殖的抑制作用及凋亡的影响。方法采用MTT法、DNA琼脂糖凝胶电泳法、免疫组化SP法检测刺五加多糖对HeLa细胞增殖、凋亡作用及促凋亡蛋白Bax的表达情况。结果刺五加多糖对HeLa细胞抑制作用显著,其抑制程度随剂量增加而增强;琼脂糖凝胶电泳显现细胞凋亡的特征性DNA梯形条带,免疫组化显示细胞中Bax蛋白的表达增强。结论刺五加多糖对HeLa细胞有较强的抑制作用,能诱导其凋亡,其机制之一与Bax蛋白的表达增强有关。     

斑蝥提取物诱导宫颈癌细胞凋亡机制的实验研究

目的研究斑蝥提取物(cantharis extract,CTE)诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡作用及其分子机制。方法体外培养人宫颈癌细胞系Hela,利用CCK-8法检测CTE对Hela细胞增殖抑制作用;光学显微镜及荧光显微镜下观察不同浓度CTE诱导细胞凋亡的形态学改变;AnnexinⅤ/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞增殖和凋亡相关蛋白表达变化。结果 CTE显著抑制Hela细胞增殖,呈浓度及时间依赖型,处理48 h的IC50为3.94μg/mL。经光学显微镜下观察可见随着药物浓度增加细胞出现明显离巢凋亡。Hoechst 33258染色后发现,随着药物浓度的增加,核固缩、核碎裂等典型凋亡改变的细胞数目逐渐增多,呈浓度依赖型。AnnexinⅤ/PI双染流式凋亡检测示,随着药物浓度的增加凋亡细胞数量逐渐增加,药物处理组(1.25、2.5、5.0μg/mL)的凋亡率分别为14.73%、29.75%、53.33%;与对照组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。Western blot检测显示,与对照组比较,药物处理组细胞增殖相关蛋白PCNA蛋白表达降低(P0.05);促凋亡蛋白Bax、Bak、Bid表达增加,2、5、5.0μg/mL组Bax表达及1.25、2.5、5.0μg/mL组Bid表达有效期异有统计学意义(P0.05)。而抗凋亡蛋白Bcl-2、Mcl-1、Survivin表达降低(P0.05),Bcl-XL表达无显著改变;凋亡蛋白激酶Caspase-3蛋白表达下降(P0.05),而Caspase-3底物凋亡相关蛋白PARP出现明显切割带,Cleaved-PARP蛋白表达增加(P0.05)。结论 CTE显著抑制Hela细胞增殖,诱导Hela细胞凋亡,其可能机制与下调抗凋亡蛋白、上调促凋亡相关蛋白表达相关。     

自噬在蝙蝠葛碱诱导宫颈癌Hela细胞凋亡中的作用

目的探讨自噬在蝙蝠葛碱诱导宫颈癌Hela细胞凋亡中的作用。方法采用MTT法检测蝙蝠葛碱(3.2,6.4,12.8,25.6μmol·L~(-1))以及蝙蝠葛碱与3-MA联合用药对宫颈癌Hela细胞增殖的影响,应用流式细胞术观察自噬在蝙蝠葛碱诱导宫颈癌Hela细胞凋亡中的作用;Western blot检测蝙蝠葛碱和3-MA对宫颈癌Hela细胞Cleaved caspase-3、Bcl-2、Bax和Beclin-1表达的影响。结果蝙蝠葛碱显著抑制宫颈癌Hela细胞增殖,其抑制作用随着药物浓度的增加和作用时间的延长而增加;而3-MA与蝙蝠葛碱联合应用后,HeLa细胞凋亡率明显减少;蝙蝠葛碱上调Hela细胞Cleaved caspase-3、Bax和Beclin-1的表达(P0.05),下调Bcl-2蛋白表达(P0.05);与蝙蝠葛碱组比较,3-MA与蝙蝠葛碱联合应用组Cleaved caspase-3、Beclin-1、Bax表达均明显降低(P0.05),而Bcl-2蛋白的表达明显升高(P0.05)。结论蝙蝠葛碱能够抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖,上调凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3、Bax和自噬相关蛋白Beclin-1的表达、下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达,从而诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡和自噬性死亡。     

ERK信号途径介导五味子多糖对Hela细胞凋亡和侵袭的作用

目的探讨细胞外信号调节激酶(ERK)信号途径在五味子多糖对人宫颈癌Hela细胞凋亡和侵袭过程中的作用。方法将Hela细胞分为对照组,五味子多糖低剂量组(2.5mg·ml-1)、五味子多糖中剂量组(5mg·ml-1)和五味子多糖高剂量组(10mg·ml-1)等四组。用不同剂量的五味子多糖处理Hela细胞24 h后,MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪Annexin V-FITC检测细胞凋亡,transwell法检测Hela细胞的侵袭情况,Western blot检测Hela细胞中凋亡相关蛋白及p-ERK和ERK等蛋白的表达。结果与对照组比较,五味子多糖高、中、低剂量组均能不同程度抑制Hela细胞的生长,诱导细胞凋亡,抑制肿瘤细胞的侵袭活性,降低p-ERK和Bcl-2蛋白的表达,增加Bax蛋白表达,并具有一定的剂量依赖关系。结论五味子多糖能够抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖和侵袭,促进细胞的凋亡,ERK信号途径可能参与了五味子多糖对肿瘤细胞的抑制作用,为进一步研究五味子多糖抗宫颈癌打下了基础。     

桑皮素对人宫颈癌Hela细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨桑皮素对人宫颈癌Hela细胞的增殖抑制及其凋亡诱导作用。方法用10、15、20μmol/L桑皮素作用Hela细胞24 h后,在扫描电镜、透射电镜及倒置显微镜下观察细胞形态学变化;利用MTT法检测桑皮素对Hela细胞的增殖的影响;应用Hoechst单染实验检测Hela细胞的凋亡情况;采用qRT⁃PCR和Western blot检测Bax、Bcl⁃2 mRNA及蛋白的表达。结果桑皮素(2.5、5、7.5、10、15、20、25μmol/L)处理Hela细胞24、48 h,能明显的抑制Hela细胞增殖(P<0.05),且呈浓度依赖性。桑皮素(10、15、20μmol/L)处理Hela细胞24 h,细胞呈现早期凋亡。与0μmol/L桑皮素组比较,桑皮素(10、15、20μmol/L)能显著上调Bax mRNA及蛋白表达(P<0.05),下调Bcl⁃2 mRNA及蛋白表达(P<0.05)。结论桑皮素通过上调Bax表达和下调Bcl⁃2表达,从而诱导Hela细胞发生凋亡。     

五味子多糖对环磷酰胺诱导的小鼠胸腺细胞凋亡的保护作用

目的探讨五味子多糖对环磷酰胺(Cyclophosphamide,CY)诱导小鼠胸腺细胞凋亡的保护作用及相关机制。方法小鼠腹腔注射CY,建立胸腺细胞凋亡模型,施以不同浓度五味子多糖灌胃,利用流式细胞仪、末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL染色)及Bcl-2、Bax免疫组化分别观察不同剂量的五味子多糖对CY诱导的胸腺细胞凋亡的影响及机制。结果流式细胞仪和TUNEL染色显示CY组与对照组相比的细胞凋亡率明显增高,五味子多糖治疗组与CY组比较凋亡率明显降低(P<0.01)。CY组bcl-2基因表达明显下降,bax基因表达明显增加,Bcl-2/Bax比值下降。五味子多糖组与之相反,二者比值升高(P<0.01)。结论五味子多糖能够抑制CY诱导的胸腺细胞凋亡,降低胸腺细胞的损伤,其抑制作用可能通过促进Bcl-2表达、抑制Bax蛋白表达实现的。     

大黄素通过内源性线粒体途径和外源性死亡受体途径诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡的研究

目的:观察大黄素对Hela细胞增殖的抑制作用并探讨其作用机制.方法:倒置显微镜观察细胞形态变化,MTT法检测大黄素对Hela细胞增殖的抑制情况,流式细胞仪检测Hela细胞凋亡,Western blot检测Hela细胞中凋亡相关蛋白Cytochome c、Apaf-1、Fas、FasL、FADD的表达.结果:空白组Hela细胞呈现典型的多边形和鹅卵形细胞,胞体丰满,边缘清晰,而大黄素处理过的Hela细胞边缘变钝,出现很多皱缩和细小的碎片,表明大黄素对Hela细胞的生长具有毒性作用.MTT法检测结果显示大黄素对Hela细胞的增殖具有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性.流式细胞仪定量检测Hela细胞的凋亡结果显示,大黄素在0、20、40、80 μM时诱导Hela细胞凋亡率分别为0.8%、8.2%、22.1%、43.7%.Western blot法检测结果显示,在内源性线粒体途径中,大黄素能够浓度依赖性地增加Cytochrome c 和Apaf-1蛋白表达;在外源性死亡受体途径中大黄素能够浓度依赖性地增加Fas、FasL和FADD表达.结论:大黄素通过内源性线粒体途径和外源性死亡受体途径诱导Hela细胞凋亡.     

花旗松素对人宫颈癌Hela细胞的体外抗肿瘤活性及其机理研究

目的观察和探索花旗松素对人宫颈癌Hela细胞的体外抗肿瘤活性及其作用机理。方法结晶紫染色法检测花旗松素对人宫颈癌Hela细胞的增殖抑制作用;RT-PCR法检测与肿瘤细胞凋亡相关基因的表达。结果花旗松素能够抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,呈剂量依赖关系;花旗松素不能诱导Bcl-2 mRNA和Bax mRNA的表达,但能使P53和P21的mRNA表达量增加。结论花旗松素具有良好的体外抑制人宫颈癌Hela细胞增殖作用;花旗松素诱导Hela细胞死亡与细胞凋亡相关,其分子机制可能与升高P53和P21mRNA表达有关,而与Bcl-2和Bax的蛋白转录无关。     

紫草素诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡及其机制的研究

目的:研究紫草素诱导体外培养的子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡作用及其机制。方法:流式细胞术分析细胞周期分布及凋亡率变化;免疫组化法(SABC法)检测Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果:紫草素可诱导细胞凋亡,改变细胞周期分布,多数细胞周期阻滞于G1期,细胞凋亡率差异有统计学意义(P<0.05);紫草素可上调Bax和下调Bcl-2基因蛋白的表达,与空白组对照差异有统计学意义(P<0.05)。结论:紫草素能够诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡,其凋亡机制可能与促进Ishikawa细胞中Bax上调,Bcl-2下调相关。     

苦参碱对宫颈癌细胞中Bcl-2/Bax表达水平及生物学行为的影响

目的:探讨苦参碱对宫颈癌细胞中Bcl-2/Bax表达水平及生物学行为的影响。方法:将宫颈癌Hela细胞分为宫颈癌组和药物组,宫颈癌组无药物干预,药物组采用三种1.0、1.5、2.0 g/L浓度干预,采用MTT法、Transwell法、流式细胞仪及免疫印迹分别检测Hela细胞活性抑制率、细胞侵袭数目、细胞凋亡及细胞中Bcl-2/Bax蛋白表达。结果:MTT结果显示,宫颈癌组Hela细胞活性抑制率低于药物组(P<0.05),2 g/L药物组Hela细胞活性抑制率高于1、1.5 g/L药物组(P<0.05),同一组中,72 h Hela细胞活性抑制率高于24、48 h(P<0.05),随着药物浓度及时间延长Hela细胞活性抑制率逐渐升高; 1 g/L药物组Hela细胞侵袭数目低于宫颈癌组(P<0.05),2 g/L药物组Hela细胞侵袭数目低于1、2 g/L药物组(P<0.05),四组细胞侵袭数目比较,差异有统计学意义(P<0.05); G₀-G₁期宫颈癌组细胞凋亡与药物组比较,具有统计学差异(P<0.05),G₀-G₁期、G₂-M期各组相差较小(P>0.05),2 g/L药物组Hela细胞凋亡率最高,宫颈癌组细胞凋亡率最低,四组Hela细胞凋亡率比较,差异有统计学意义(P<0.05); 1 g/L药物组Hela细胞下Bcl-2蛋白水平低于宫颈癌组(P<0.05),2 g/L药物组Hela细胞下Bcl-2蛋白水平低于1、1.5 g/L药物组(P<0.05),Bax表达与Bcl-2相反。结论:苦参碱抑制宫颈癌Hela细胞活性,加快Hela凋亡,减少Hela细胞侵袭,并具有浓度依赖性,其作用机制可能与抑制Bcl-2表达,增加Bax水平相关。     

山茱萸不同极性提取物降糖作用的研究

目的:对山茱萸不同极性的提取物进行初步药理学评价,探讨其对正常小鼠、四氧嘧啶糖尿病模型小鼠血糖、血脂及胰岛素的影响。方法:(1)将山茱萸的水提取物、醇提取物、乙酸乙酯提取物、石油醚提取物(浓度皆为1g生药材/mL溶液)以7.5g生药材.kg-1对正常小鼠灌胃,连续7天,观察其降血糖作用。(2)通过灌胃四氧嘧啶(Alloxan)50mg.kg-1×3天分次注射造模建立的小鼠糖尿病模型,以相同剂量的山茱萸不同极性提取物连续7天灌胃,观察其降血糖作用及对胆固醇、甘油三酯和胰岛素水平的影响。结果:山茱萸不同极性提取物对正常小鼠的血糖水平无明显影响。山茱萸醇提取物、乙酸乙酯提取物组与模型组相比,可显著降低四氧嘧啶糖尿病模型小鼠的血糖值(P<0.05),其中山茱萸醇提取物可显著提高血清胰岛素水平(P<0.05);山茱萸乙酸乙酯提取物可显著降低糖尿病模型小鼠血清中甘油三酯含量(P<0.01),山茱萸醇提取物对甘油三酯有降低趋势。结论:山茱萸醇提取物、乙酸乙酯提取物对糖尿病模型动物具有较好的降血糖和降血脂作用。     

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??OBJECTIVE To investigate the apoptosis of the auction and mechanism of the hepatoma BEL-7402 cells induced by the ginseng polysaccharides(GPS). METHODS The hematoma cells BEL-7402 were incubated with GPS, cell viability was measured by CCK8, cell cycle distribution was assessed by fluorescence-activated cell sorting(FACS), the cell morphological changes were traced with TUNEL and scanning electron microscope, TNFR1, BCL-2 and Bax protein expression and ERK phosphorylation are tested by Western blot. RESULTS CCK8 results showed that GPS inhibited cells growth of BEL-7402 in dose-dependent and time-dependent. Flow cytometry found that S phase arrest was increased upon GPS concentrations. Obviously apoptotic sub-g peak was also found. And the peak was gradually enhanced with the concentration increased. TUNEL staining and SEM results showed that GPS led to significant cell morphology changes in hepatoma cells BEL-7402.And the apoptosis effect was increased upon the GPS concentrations. Western blot showed that level of apoptosis related protein Bax was increased, the expression of apoptosis-antagonizing protein Bcl-2 was decreased and the expression of death receptor TNFR1 appeared with GPS concentrations increased gradually,raise ERK phosphorylation. CONCLUSION GPS can induce apoptosis of hepatoma cells BEL-7402 by the mitochondrial pathway and the death receptor dependent pathway and ERK pathway.     

白英提取液对Hela细胞凋亡及Fas/FasL基因表达的影响

目的:探讨白英提取液对Hela细胞凋亡及Fas/FasL基因表达的影响。方法:采用MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测凋亡,二步法免疫组化检测Fas蛋白表达,半定量RT-PCR检测Fas和FasL mRNA表达。结果:白英提取液对Hela细胞增殖有较强的抑制作用,且这种作用呈一定的剂量-时间依赖性;细胞凋亡率明显升高;Fas基因mRNA和蛋白表达显著上升,FasL mRNA表达明显下降。结论:白英提取液通过上调Fas基因和下调FasL基因表达,诱导细胞凋亡,从而抑制Hela细胞增殖。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对Hela细胞的诱导凋亡作用及靶点蛋白质研究

目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)对Hela细胞的诱导凋亡作用,寻找其可能的靶点蛋白质。方法:用50、1002、00、400μg/mL梯度浓度的EGCG孵育Hela细胞24h和48h,荧光显微镜下观察Hela细胞凋亡形态,用MTT检测其生长抑制率,用Annexin V-FITC/PI染色观察其凋亡率,鬼笔环肽染色观察其肌动蛋白聚合体(F-actin)降解程度。然后利用偶联EGCG的微球与Hela细胞裂解液孵育,结合靶点蛋白,靶点蛋白经考马斯蓝染色后,切下目标条带进行质谱鉴定。结果:EGCG能诱导Hela细胞凋亡和F-actin的破坏,并呈时间和剂量依赖性。EGCG结合的靶带蛋白为actin类蛋白。结论:直接结合于actin类蛋白并破坏细胞骨架可能是EGCG诱导Hela凋亡的途径之一。     

蜈蚣多糖对Hela细胞的增殖抑制作用研究

目的 研究蜈蚣多糖对人宫颈癌细胞Hela细胞的抑制作用及作用机制.方法 用MTT法检测蜈蚣多糖对Hela细胞生长的抑制作用;流式细胞仪和Annexin V-FITC/PI双荧光染色分别检测蜈蚣多糖对Hela细胞周期及凋亡情况的影响.结果 在一定浓度范围内蜈蚣多糖可显著抑制Hela细胞的增殖,改变Hela细胞的细胞周期,使细胞阻滞于G2/M期,并能诱导细胞凋亡.结论 蜈蚣多糖可能通过改变Hela细胞的细胞周期,诱导细胞凋亡,从而对Hela细胞的增殖有一定的抑制作用.     

姜黄素抑制人胃癌BGC-823细胞生长并诱导其凋亡的机制研究

目的:探讨姜黄素抑制人胃癌BGC-823细胞生长并促人胃癌BGC-823细胞凋亡的生物学作用及其调控机制。方法:常规体外培养对数生长期胃癌BGC-823细胞,细胞分为对照组,低、中、高姜黄素处理组四组,姜黄素浓度分别为0mg/L5,mg/L1,0mg/L,20mg/L。姜黄素处理24h后,采用甲基噻唑(MTT)比色法及流式细胞仪测定细胞增殖水平及细胞凋亡率;采用免疫组化法测定细胞内Bax、Bcl-2蛋白表达;采用PCR检测Caspase-3的mRNA表达水平。结果:MTT检测显示姜黄素能抑制人胃癌BGC-823细胞増殖,呈现浓度依赖性;流式细胞仪显示姜黄素能有效诱导细胞的凋亡,呈现浓度依赖性,其中20mg/L姜黄素处理24h后细胞凋亡率为48.3%;免疫组化试验表明姜黄素处理使人胃癌BGC-823细胞中Bax表达水平上调,同时Bcl-2蛋白表达水平下调;且细胞中Caspase-3的mRNA表达水平受姜黄素诱导而增高。结论:姜黄素对人胃癌BGC-823细胞的增殖具有明显抑制作用,呈浓度依赖性促进细胞凋亡,这种生物学效应可能与激活Bax蛋白表达、抑制Bcl-2蛋白表达而活化Caspase-3的信号通路有关。该研究为深入探讨姜黄素诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡的机制提供了重要依据。     

天花粉蛋白对子宫颈癌Hela细胞Survivin基因的影响

目的:研究天花粉蛋白(TCS)对子宫颈癌Hela细胞Survivin基因表达的影响,以探讨TCS诱导Hela细胞凋亡的机制。方法:MTT法检测TCS对Hela细胞增殖的影响,倒置显微镜观察细胞形态;RT-PCR和Western blot分析TCS对Hela细胞Survivin基因表达的影响;流式细胞仪分析TCS对Hela细胞周期的影响。结果:①TCS显著性抑制Hela细胞增殖;②TCS处理后Hela细胞Survivin mRNA水平无明显改变,但蛋白表达水平显著降低;③TCS降低Hela细胞周期中G2/M期细胞比率,但增加S期细胞的数量。结论:通过下调凋亡抑制因子Survivin的表达而诱发Hela细胞凋亡,可能是TCS抑制Hela细胞增殖的分子机制。