芪贝复元饮对甲减大鼠心肌细胞凋亡及Fas FasL和Caspase-3蛋白表达的影响

目的:观察芪贝复元饮对甲减大鼠心肌细胞凋亡及Fas,FasL和Caspase-3表达的影响。方法:采用Kolaja法制备大鼠甲状腺功能减退模型。健康wistar大鼠120只随机分成4组:正常对照组、模型组、芪贝复元饮组、L-T4组。光镜和电镜观察心肌形态学和超微结构变化,TUNEL法检测心肌凋亡细胞,免疫组化检测凋亡相关基因蛋白Fas,FasL,Caspase-3的表达。结果:与正常组相比,模型组心肌细胞凋亡指数及Fas,FasL,Caspase-3的表达均达高峰,治疗后芪贝复元饮组和L-T4组显著降低,且芪贝复元饮组的疗效优于L-T4组(P0.05)。结论:甲状腺功能减退引起Fas,FasL及Caspase-3蛋白的表达升高,心肌细胞凋亡增多。芪贝复元饮能减少促凋亡基因Fas、FasL和Caspase-3蛋白的表达,降低心肌细胞凋亡率。     

补中益气法对甲减大鼠心肌α-MHC和β-MHCmRNA表达的影响

目的:研究补中益气法对甲状腺功能减退(甲减)大鼠心肌肌球蛋白重链α和β(myosin heavy chain alpha and beta,α-MHC和β-MHC)mRNA表达的影响。方法:将甲减Wistar大鼠随机分为模型对照组、L-T4组、补中益气汤组。实时定量RT-PCR法测心肌α-MHC和β-MHC mRNA。结果:给处理因素8周,L-T4组、补中益气汤组的α-MHCmRNA的表达分别为正常组的1.77倍、2.32倍,补中益气汤组较L-T4组上升明显(P<0.05);L-T4组、补中益气汤组β-MHCmRNA的表达分别为正常组的2.61倍、1.17倍,补中益气汤组下调明显(P<0.05)。结论:补中益气法在甲减心肌损伤的修复中起重要作用,其机制与其提高心肌α-MHC mRNA的表达、降低β-MHCmRNA的表达有关。     

补中益气汤对甲状腺功能减退大鼠心肌TRα1 mRNA表达的影响

目的：研究补中益气汤对甲状腺功能减退（以下简称甲减）大鼠心肌甲状腺激素受体（Thyroid Hormone Receptor,TR）TRα1 mRNA表达的影响。方法：将Wistar大鼠随机分为正常对照组、甲减模型对照组、西药左旋甲状腺素钠片对照组（简称L—T4组）、补中益气汤组,每组30只。正常对照组大鼠子普通饲料,双蒸水;予模型对照组大鼠低碘饲料,双蒸水;L-T4组大鼠予低碘饲料,灌服2mL／d,含量为0．52μg／kg左旋甲状腺素钠片的混悬液,并灌服2mL双蒸水;予补中益气汤组大鼠低碘饲料,灌服2mL／d含生药量为18．9g／kg的补中益气汤煎剂。酶联免疫吸附测定法测大鼠血清促甲状腺激素（Thyroid Stimulating Hormone,TSH）,放射免疫分析法测定三碘甲状腺原氨酸（Total Triiodothyronine,TT3）,总甲状腺素（Serum Total Thyroxine,TT4）。实时定量聚合酶链反应检测大鼠心肌TRα1 mRNA的表达,获得基因扩增结果后,再用参照基因的ΔCT法计算每个样本中参照基因与目的基因的CT值差异,能衡量基因表达水平。砷铈分光光度法测定尿碘含量。光镜下观察大鼠心肌形态。心电图机记录大鼠心电变化。结果：与模型组相比,L-T4组和补中益气汤组大鼠血清TT3值均明显升高（P〈0．01）;与模型组相比,L-T4组和补中益气汤组大鼠血清TT4值均也明显升高（P〈O．001）;L—T4组与补中益气汤组大鼠血清TT3、TT4值比较,两组无明显差异。与模型组比较,L-T4组和补中益气汤组大鼠TSH值明显降低（P〈0．01）,其中补中益气汤组较L-T4组血清TSH值降低明显。补中益气汤组心率及低电压恢复明显好于L-T4组（P〈0．05）;补中益气汤组心肌TRα1 mRNA的表达较L—T4组高1．08倍（P〈0．05）;心肌细胞形态观察发现补中益气汤组较L-T4组恢复得明显。结论：补中益气汤能使甲减大鼠心肌损害恢复得更好,其作     

补中益气汤对甲减肾损害模型大鼠肾脏功能、形态及VEGF表达的影响

[目的]拟观察甲状腺功能减退时肾脏功能、形态及血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达变化及补中益气汤对其的影响。[方法]将大鼠按随机数字表法随机分组,56 d后测定血清甲状腺功能[总三碘甲状腺原氨酸(TT3)、总甲状腺素(TT4)及促甲状腺激素(TSH)]、血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)水平;光镜下观察肾脏形态,以免疫组化检测VEGF表达水平。[结果]1)与正常对照组相比左旋甲状腺素(L-T4)组及模型组血清BUN均增高(P<0.05),SCr也均增高(P<0.05)。2)肾脏VEGF光密度:与正常对照组相比各组均无明显差异,与模型组相比只有补中益气汤组光密度明显升高(P<0.01)。3)PAS染色比较:处理21 d时,模型组呈轻度系膜增生,用药56 d后模型组有中度增生,有部分毛细血管扩张,两用药组以补中益气组增生最轻,L-T4组增生较模型组明显减轻,仍可见毛细血管扩张。[结论]补中益气汤能够促进VEGF分泌,VEGF升高对甲减肾损害具有保护作用。     

心肌康对慢性病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡及Fas/FasL蛋白表达影响的实验研究

目的:观察心肌康对慢性病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡及Fas/FasL蛋白表达的影响,探讨心肌康的作用机制。方法:给Balb/c小鼠多次接种嗜鼠心肌柯萨奇B3病毒制作慢性VMC模型,首次感染病毒50天后将存活小鼠分为模型组、心肌康组及氯沙坦组,同时设正常对照组,分别予以相应药物干预30天,采用原位末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡及免疫组化方法检测Fas/FasL蛋白表达。结果:正常组未见到心肌细胞凋亡,模型组心肌细胞凋亡,凋亡率较正常组显著增加(P<0.05),心肌康组和氯沙坦组凋亡率较模型组显著降低(P<0.05)。模型组Fas/FasL蛋白表达较正常组显著增多(P<0.01),心肌康组和氯沙坦组较模型组显著降低(P<0.01)。结论:心肌细胞凋亡参与了慢性病毒性心肌炎的发病,心肌康能够抑制VMC心肌细胞的凋亡,通过下调Fas/FasL蛋白表达,对心肌细胞起到保护作用。     

冠心合剂减少大鼠心肌梗死边缘区凋亡及对Fas、FasL、Caspase-8、Caspase-3蛋白表达的影响

目的：观察不同剂量冠心合剂对大鼠急性心肌梗死边缘区细胞凋亡及探讨可能作用途径。方法：取雄性SD大鼠80只,随机分为模型组、冠心合剂高剂量组、中剂量组、低剂量组和对照组。连续灌胃7d后,结扎冠状动脉左前降支造成急性心肌梗死模型,对照组不结扎冠状动脉左前降支,手术后4．5h留取心脏标本。检测梗死边缘区细胞凋亡以及Fas,FasL,Caspase-8,Caspase-3蛋白表达量。结果：与模型组比较,冠心合剂组可明显减少心肌细胞凋亡,并能减少Fas,FasL,Caspase-8,Caspase-3的蛋白表达量。其中冠心合剂大剂量组减少心肌细胞凋亡效果最明显。结论：冠心合剂能够保护缺血诱导的心肌细胞凋亡,其作用机制Fas,FasL,Caspase-8,Caspase-3蛋白表达水平有关。     

精元康胶囊对骨髓抑制小鼠骨髓细胞凋亡相关基因表达水平的影响

目的:通过观察精元康胶囊对骨髓细胞凋亡相关基因Caspase-3,Fas,FasL等mRNA表达水平的影响,以深入研究、探讨该药的作用机制。方法:60只小鼠分为空白组、模型组、阳性对照利可君32 mg·kg-1组和贞芪扶正3 g·kg-1组、精元康4 g·kg-1组,以环磷酰胺100 mg·kg-1,ip连续3 d造模,同时各组开始ig连续7 d,实时荧光定量PCR检测骨髓抑制模型小鼠骨髓细胞表达Caspase-3,Fas,FasL mRNA的情况。结果:Caspase-3,Fas,FasL mRNA的表达水平精元康胶囊组最低,模型组表达的12与模型组比较有显著差异,与空白组比较无明显差异。结论:精元康胶囊降低促凋亡基因Caspase-3,Fas,FasL的表达,对骨髓细胞凋亡相关通路产生影响,可能是精元康胶囊对化疗致骨髓抑制影响的重要机制。     

温肾方对亚临床甲状腺功能减退模型大鼠心肌细胞内钙离子浓度及细胞凋亡的影响

目的:探讨亚临床甲状腺功能减退对亚临床甲状腺功能减退模型大鼠心肌细胞内钙离子浓度及细胞凋亡的影响.方法:采用“甲状腺全切术+术后皮下注射L-T4”法制备亚临床甲减大鼠模型,设定空白对照组、模型组、中药低剂量组、西药组、中西药组及中药高剂量组,测定心肌细胞内钙离子浓度的变化,TUNEL法按照试剂盒说明测定心肌细胞凋亡,同时观察温肾方对其指标的干预情况.结果:与空白对照组比较,模型组心肌细胞Ca2+浓度显著升高(P＜0.01);与模型组比较,中药高剂量组心肌细胞Ca2+浓度降低(P＜0.05);中药高剂量组心肌细胞Ca2+浓度接近于空白对照组(P＞0.05).大鼠心肌组织切片,染色标记后400倍放大,模型组可见棕黄色细胞核明显增多,空白对照组偶见,中药低剂量组及西药组颗粒低、中西药组及中药高剂量组均较少.结论:亚临床甲状腺功能减退引起心肌细胞内钙离子浓度的改变,导致细胞凋亡,温肾方能逆转这些变化,从而具有防治亚临床甲减心脏并发症的作用,为中药治疗亚临床甲减防治并发症提供实验依据,温阳补虚法可能为有效治疗亚临床甲状腺功能减退的方法之一.     

蕨麻乙醇提取物抑制大鼠急性心肌缺血再灌注损伤导致的心肌细胞凋亡

目的:观察蕨麻乙醇提取物对大鼠结扎冠状动脉所致急性心肌缺血再灌注损伤导致的心肌细胞凋亡的保护作用,以及对心肌细胞凋亡信号通路中天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶9、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-9,Caspase-3)表达的影响。方法:选取雄性SD大鼠96只随机分为手术对照组,模型组,蕨麻乙醇提取物0.9,1.8,3.6 g.kg-1干预组,阳性药物恬尔心组(盐酸地尔硫卓,diltiazem,30 mg.kg-1)。通过结扎大鼠冠状动脉左前降支建立急性心肌缺血再灌注模型。采用原位末端标记法检测心肌细胞凋亡;RT-PCR检测心肌组织Caspase-3,Caspase-9 mRNA水平;免疫组化染色半定量检测Caspase-3,Caspase-9蛋白水平。结果:TUNEL结果提示心肌缺血再灌注损伤后,心肌细胞出现大量凋亡,模型组凋亡指数为(31.5±3.6)%;各组蕨麻乙醇提取物均明显抑制缺血再灌注损伤所致的心肌细胞凋亡。模型组细胞凋亡导致Caspase-3,Caspase-9 mRNA及蛋白大量表达,而给予蕨麻乙醇提取物后,1.8,3.6 g.kg-1剂量组缺氧损伤心肌Caspase-9mRNA水平显著降低(P<0.05),0.9 g.kg-1剂量组与模型组相比未见明显差异。各剂量组蕨麻乙醇提取物均可显著降低心肌组织Caspase-3 mRNA水平(P<0.05)。免疫组化分析提示各干预组蕨麻乙醇提取物均可显著抑制Caspase-3,Caspase-9蛋白的表达(P<0.05)。结论:蕨麻乙醇提取物能够显著抑制急性心肌缺血再灌注所致心肌细胞凋亡,并抑制Caspase-3,Caspase-9 mRNA水平及蛋白水平的表达。     

心肌康对慢性病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡及Fas／FasL蛋白表达影响的实验研究

目的：观察心肌康对慢性病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡及Fas／FasL蛋白表达的影响，探讨心肌康的作用机制。方法：给Balb／c小鼠多次接种嗜鼠心肌柯萨奇B3病毒制作慢性VMC模型，首次感染病毒50天后将存活小鼠分为模型组、心肌康组及氯沙坦组，同时设正常对照组，分别予以相应药物干预30天，采用原位末端标记法（TUNEL）检测心肌细胞凋亡及免疫组化方法检测Fas／FasL蛋白表达。结果：正常组未见到心肌细胞凋亡，模型组心肌细胞凋亡，凋亡率较正常组显著增加（P〈0．05），心肌康组和氯沙坦组凋亡率较模型组显著降低（P〈0．05）。模型组Fas／FasL蛋白表达较正常组显著增多（P〈0．01），心肌康组和氯沙坦组较模型组显著降低（P〈0．01）。结论：心肌细胞凋亡参与了慢性病毒性心肌炎的发病，心肌康能够抑制VMC心肌细胞的凋亡，通过下调Fas／FasL蛋白表达，对心肌细胞起到保护作用。     

益气软坚散结法对甲减大鼠心肌TRα1mRNA表达的影响

目的:研究益气软坚散结法对甲状腺功能减退大鼠心肌TRα1mRNA表达的影响。方法:(1)将Wist-ar大鼠随机分为正常组、模型组、L-T4组、益气软坚散结组(自拟芪贝复元饮)4组,每组30只。(2)正常组:普通饲料,双蒸水;模型组:低碘饲料,双蒸水。(3)酶联免疫吸附测定法(Elisa法)测大鼠血清促甲状腺激素(TSH),放射免疫分析法(RIA)测血清总T3(TT3),总T4(TT4)。实时荧光定量PCR(Real-time PCR法)检测大鼠心肌TRα1mRNA的表达。砷铈分光光度法测定尿碘含量。光镜下观察大鼠心肌心肌形态。心电图机记录大鼠心电变化。结果:56天时予处理因素的L-T4组和芪贝复元饮组大鼠血清TT3值均升高(P0.01),二组之间比较无差异;血清TT4值均升高(P0.001),二组之间比较无差异;TSH值明显降低(P0.01),其中较L-T4组血清TSH值降低明显。心电图描记发现芪贝复元饮组与L-T4组比较有差异(P0.05),心率及低电压表现有恢复;芪贝复元饮组心肌TRα1mRNA的表达较L-T4组高0.81倍(P0.05);心肌细胞形态观察发现芪贝复元饮组较L-T4组恢复的明显。结论:与L-T4比较益气软坚散结法能使甲减心肌损害得到恢复,其作用机制与TRα1mRNA在心肌细胞上的表达有关。     

益气强心饮对慢性心衰大鼠心肌细胞凋亡及Fas FasL基因蛋白表达影响的实验研究

目的：本实验旨在通过动物实验观测中药益气强心饮对慢性心衰大鼠细胞凋亡及Fas、FasL基因蛋白表达的影响。材料与方法：采用腹主动脉缩窄法结合皮质激素造模法建立慢性心衰阳虚水泛证大鼠模型,随机分为模型组、西药对照组、中药对照组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、假手术组,用药8周后,观察各组大鼠的心肌细胞凋亡及Fas、FasL基因蛋白表达。结果：益气强心饮能明显下调慢性心衰大鼠心肌组织Fas、FasL基因蛋白表达,疗效等同西药对照组。结论：益气强心饮可调控慢性心衰大鼠的心肌细胞凋亡,具有治疗及延缓心衰的发展等作用。     

补中益气汤对阿霉素诱导心衰大鼠的保护作用

目的:探讨补中益气汤对阿霉素所致心肌损伤的保护作用及其作用机制.方法:50只SD大鼠随机分为5组:正常对照组,心衰模型组,补中益气汤低、高剂量组和卡托普利组.观察不同剂量补中益气汤干预对大鼠血流动力学指标及心肌组织中抗氧化能力的影响;病理学观察补中益气汤对心肌组织的保护作用;以流式细胞术测定补中益气汤对心肌组织凋亡的影响.结果:阿霉素导致心肌纤维肿胀、断裂,补中益气汤组心肌病变明显轻于模型组.补中益气汤显著升高心衰大鼠抗氧化能力,抑制阿霉素诱导的心肌细胞凋亡.结论:补中益气汤可显著减轻阿霉素对大鼠心肌的毒性作用,其作用机制与抗氧化和抑制凋亡有关.     

补中益气汤退热作用及机制的探讨

目的:探讨补中益气汤退热作用机制.方法:雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、脾虚发热组、补中益气汤组共3组,每组10只.采用饮食失节+过度疲劳+注射LPS法复制脾虚发热模型.每周测体温1次.第18天开始补中益气汤组每天ig(6.83 g·kg-1),正常组和脾虚发热组给予同体积蒸馏水,每天1次,连续5d.第22天AM 8:00脾虚发热组和补中益气汤2组大鼠ip脂多糖(LPS,80μg·kg-1)诱导发热,正常组ip等体积生理盐水.测量各组大鼠ip LPS后30,60,120,180,220 min肛温及绘制体温曲线,测定下丘脑环磷酸腺苷(cAMP)、前列腺素E2(PGE2).结果:与正常对照组相比,脾虚发热组大鼠体温曲线明显上抬,各观察点体温均明显升高,下丘脑PGE2和cAMP明显升高(P＜0.05或P＜0.01).与脾虚发热组比较,补中益气汤组大鼠体温曲线明显下移,下丘脑PGE2和cAMP均明显下降(P＜0.05或P＜0.01).结论:补中益气汤对脾虚发热模型大鼠具有明显的退热效用,其退热作用可能与降低中枢发热介质PGE2和cAMP有关.     

补中益气汤治疗脾气虚证大鼠肌无力的机制研究

目的:研究脾气虚证大鼠体重、肛温、耐寒冷存活百分率、游泳时间和骨骼肌磷酸化肌球蛋白轻链表达变化,明确补中益气汤治疗脾气虚证大鼠肌无力的可能机制。方法:清洁级Wistar大鼠,采用饮食不节和劳倦过度结合法建立脾气虚证模型,单日喂食甘蓝15~20 g/只,双日胃饲猪油脂3 m L/只,共15 d。造模成功后,实验分为正常组、脾气虚组和补中益气汤组(高、中、低3个剂量组,剂量分别为7.10,3.55,1.78 g·kg-1),灌胃给药10 d。分别检测大鼠体重、肛温、耐寒冷存活率、游泳时间,Western blot检测骨骼肌中磷酸化肌球蛋白轻链的表达,比较实验结束前后数值变化。结果:与正常组相比,脾气虚组大鼠的体重、肛温、耐寒冷存活率、游泳时间及磷酸化肌球蛋白轻链表达均显著下降(P0.05);与脾气虚组相比,中、高剂量补中益气汤组的体重、肛温、耐寒冷存活率、游泳时间及磷酸化肌球蛋白轻链表达均显著上升(P0.05)。结论:补中益气汤使磷酸化肌球蛋白轻链均表达升高可能是其治疗脾气虚大鼠肌无力的一个重要机制。     

康莱特注射液对人肺腺癌细胞A549凋亡的影响及机制

目的观察薏苡仁注射液(康莱特注射液)对人肺腺癌细胞A594凋亡的影响,并探讨康莱特抗肺腺癌细胞的作用及机制。方法体外培养人肺腺癌细胞株A549,分别加入5,10,15,20,25 mL/L康莱特注射液,对照组加等量生理盐水,孵育48 h后,采用流式细胞术(FCM)测定细胞周期的变化;20 mL/L康莱特注射液孵育48 h后,收集细胞,FCM测定细胞凋亡率,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法、免疫印迹(Western blot)法分别测定Caspase-3、Bcl-2、Bax、Fas、FasL mRNA和蛋白的表达情况。结果康莱特注射液处理后,G1期的细胞均显著增加,S期细胞明显减少;20 mL/L康莱特注射液处理A549细胞48 h后,细胞凋亡率、Caspase-3、Bax、Fas、FasL mRNA和蛋白表达显著升高,Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平下降,Bcl-2/Bax比值显著降低。结论康莱特注射液可通过上调A549细胞Caspase-3、Fas和FasL的表达,降低Bcl-2/Bax比值,诱导其凋亡,产生抗肿瘤作用。