中药注射剂类过敏反应临床前评价:动物品系和性别差异研究

类过敏反应在首次用药后发生,与过敏反应需要抗原致敏后再次激发2个阶段的致病机制不同。该研究探讨2种中药注射剂诱导不同品系和性别小鼠发生的类过敏反应,为小鼠类过敏反应检测模型在动物品系和性别上的选择提供依据。用ICR,昆明,BALB/C,C57小鼠进行2种中药注射剂的类过敏试验,比较4种小鼠的敏感性,并比较雌雄性动物的差异。各小鼠均一次性静脉注射含有0.8%伊文思蓝(EB)的受试物,以耳廓蓝染发生率和EB渗出量作为类过敏反应评价指标。在ICR和昆明小鼠上,2种中药注射剂通过静脉注射给药均在一定剂量下诱导出类过敏反应,在同种注射剂同剂量下ICR的类过敏反应更明显,说明ICR小鼠更敏感。只有1种注射剂在BALB/C小鼠上呈现出了类过敏反应,且反应程度较ICR和昆明小鼠明显减弱;2种注射剂在C57小鼠上均未诱导出类过敏反应。雌雄动物比较结果显示,1种注射剂雌雄动物未见明显差异,而另一种注射剂雄性动物比雌性动物敏感。因此,进行中药注射剂小鼠类过敏试验,ICR小鼠是较为理想的试验品系,应该作为首选动物;其次可选用昆明小鼠。BALB/C和C57小鼠敏感性较低,不建议用于中药注射剂类过敏试验。中药注射剂对小鼠类过敏反应显示有一定雌雄性别差异,雄性小鼠更为敏感。     

不同品系小鼠异种被动皮肤过敏试验反应耳廓蓝染与血液抗体IgE和IgG水平的研究

目的观察卵白蛋白(OVA)致大鼠过敏抗血清对不同品系小鼠被动皮肤过敏试验(PCA)及血液免疫球蛋白E(IgE)和免疫球蛋白G(IgG)抗体水平变化的影响。方法 Wistar大鼠随机分为生理盐水(NS)组、NS佐剂组、OVA组、OVA佐剂组,采用皮下注射方式给予相应药物致敏,制备大鼠OVA抗体血清,并分别将其注入不同品系小鼠耳廓内,于致敏后3 h或48 h以相应药物激发,观察各组小鼠耳廓蓝染情况,并用酶联免疫吸附剂测定(ELISA)检测小鼠体内抗体水平变化。结果各品系小鼠(KM、BALB/c、ICR、C57BL/6、B6;129S-Fcgr2btm1Ttk/J)NS组、NS佐剂组、OVA组耳廓蓝染阴性,OVA佐剂组耳廓蓝染阳性,其中各品系间存在差异,小鼠耳异种PCA敏感程度强度依次为KM、BALB/c>ICR、C57BL/6、B6;129S-Fcgr2btm1Ttk/J。结论小鼠异种PCA试验中,不同品系动物对OVA抗血清的敏感性存在差异,其中KM,BALB/c小鼠较为敏感,但PCA强度与血液IgE水平无明显的相关性。     

黄连解毒汤对apoE基因敲除小鼠单核细胞发育的影响

目的观察野生型C57BL/6小鼠和apoE基因敲除(apoE~(-/-))小鼠外周血单核细胞(monocyte,Mo)发育情况及黄连解毒汤对apoE~(-/-)小鼠外周血Mo发育的影响。方法 4、8、12、16周龄雌性C57BL/6为不同周龄对照组,4、8、12、16周龄雌性apoE~(-/-)小鼠为不同周龄高脂血症组。4周龄C57BL/6雌性小鼠为空白组,4周龄apoE~(-/-)雌性小鼠采用配对比较法随机分为对照组、西药组和中药组,每组5只。给药小鼠根据体重给予临床等效剂量,西药组灌胃阿托伐他汀[10mg/(kg·d)],中药组灌胃黄连解毒汤[5g/(kg·d)]。每周检测体重,4周后检测TG、TC、LDL-C和HDL-C水平、Mo及其亚型Ly6chi比例变化。结果与同种小鼠4周龄组比较,C57BL/6 16周龄组Mo比例降低(P0.05),apoE~(-/-)8周龄小鼠TC、TG、Ly6c~(hi)比例升高(P0.05),Mo比例降低(P0.05);12周龄小鼠TC、TG和LDL-C升高(P0.05),16周龄小鼠TC、TG、LDL-C及HDL-C升高(P0.05,P0.01)。与同种小鼠8周龄组比较,C57BL/6 16周龄组Mo比例降低(P0.05);12周龄apoE~(-/-)小鼠TC和LDL-C升高(P0.05),16周龄小鼠TC和HDL-C升高(P0.05,P0.01)。与同周龄C57BL/6组比较,4、8周龄apoE~(-/-)小鼠TC、TG升高(P0.01),HDL-C降低(P0.01),12、16周龄小鼠TC、TG、LDL-C升高,HDL-C降低(P0.05,P0.01);apoE~(-/-)4周龄小鼠Mo比例升高(P0.05),8周龄小鼠Mo、Ly6c~(hi)比例升高(P0.05)。与空白组比较,对照组小鼠干预后TC、TG、LDL-C、Mo及Ly6chi比例升高(P0.01,P0.05),HDL-C降低(P0.01)。与对照组比较,西药组和中药组小鼠体重增长降低(P0.05),中药组Ly6chi比例降低(P0.05)。结论在发育过程中apoE~(-/-)小鼠的血脂水平不仅与周龄相关,由其引发的天然免疫系统的发育改变也与周龄有关。发育早期用黄连解毒汤干预apoE~(-/-)小鼠可纠正这种独特免疫效应。     

基于动物热活性检测系统分析动物热活性影响因素

目的基于动物热活性监测系统进行动物热活性影响因素分析,以期对中药寒热药性评价进行方法学探索。方法采用动物热活性监测系统,考察品种、性别及适应时间对ICR、BALB/c及KM种小鼠在不同温区停留时间比例(RTR)的影响。结果 ICR、BALB/c种小鼠可耐受最低温度为15℃,最高为40℃;与适应前比较,15℃温区内ICR、BALB/c、KM种小鼠分别在6、8、4h,30℃温区内分别在6、6、4h,40℃温区内分别在4、6、8h,RTR值均开始减少(P<0.05);雌、雄性KM小鼠在15~40℃温区的RTR值差异无统计学意义(P>0.05)。结论在动物热活性监测系统中,3个品种小鼠的可耐受温度范围大致为15~40℃,累计适应4~8h后对温区间温差能形成相对稳定的记忆,且雌、雄性KM小鼠对同一温度的感知基本一致。     

补中益气汤对肠管出血性大肠杆菌感染症动物模型的免疫调节作用

目的:用以地塞米松诱导免疫功能抑制状态的小鼠制作大肠杆菌O157:H7感染模型,探讨补中益气汤对感染的防御作用。 方法:实验动物选用8周龄的近交系C57BL/6、BALB/c、A/J及C3H/HeN小鼠。①C57BL/6小鼠经腰背部皮下给予地塞米松,诱导免疫功能抑制状态。将补中益气汤提取物粉末(500mg·kg~(-1)·d~(-1))溶于0.1ml的蒸馏水中,1日1次口饲,连续6日。在     

C57BL/6和ICR品系小鼠在大脑中动脉栓塞（MCAO）模型中差异的研究＊

目的 探讨C57BL/6与ICR小鼠在大脑中动脉栓塞模型（middle cerebral artery occlusion，MCAO）中的品系间差异。方法 设C57BL/6正常组和ICR正常组为5只，C57BL/6模型组和ICR模型组分别设10只，模型组采用相同的MCAO方法进行造模，观察每组小鼠体重变化率、神经行为学、脑指数、脑含水量、脑梗死面积、生存率。结果 ①C57BL/6与ICR小鼠分别于术前和脑缺血后24 h进行统计，体重变化率具有显著的统计学差异（P<0.01）；②C57BL/6与ICR小鼠的生存率分别为90.91%和72.72%；③C57BL/6与ICR小鼠的神经行为学评分无显著的统计学差异；④C57BL/6与ICR小鼠的脑指数分别为1.91%±1.34%、2.06%±1.76%，两组间的差异具有统计学意义（P<0.05）；⑤C57BL/6与ICR小鼠的脑含水量分别为82.32%±1.34%、85.83%±1.76%，两组间具有显著的统计学差异（P<0.01）；⑥C57BL/6与ICR小鼠的脑梗死面积分别为13.85%±4.32%、28.18%±8.29%，两组间具有显著的统计学差异（P<0.01）。结论 采用相同的MCAO造模方法均可成功制作大脑中动脉栓塞模型，但在C57BL/6与ICR小鼠间存在较为显著的品系间差异。     

越鞠丸对Balb/c 小鼠和C57BL/6J 小鼠抗抑郁作用与前额叶场电位差异性分析

目的：比较Balb/c小鼠和C57BL/6J小鼠中越鞠丸抗抑郁作用的差异并分析其对小鼠前额皮层（prefontal cortex,PFC）突触传递的影响。方法：成年健康的雄性Balb/c小鼠和C57BL/6J小鼠随机分为对照组和越鞠丸组,给药30 min后进行强迫游泳测试（forced swimming test,FST）,运用电生理实验（electrophysiologicalexperiment）检测小鼠前额皮层的场电位（field excitatory postsynaptic potential,fEPSP）及长时程增强（long termpotentiation,LTP）。结果：强迫游泳测试中,Balb/c小鼠的越鞠丸组不动时间较对照组明显降低（P < 0.01）,C57BL/6J小鼠的的越鞠丸组和对照组在不动时间上没有明显差异（P > 0.05）。电生理实验中,Balb/c小鼠的越鞠丸组与对照组相比,场电位斜率百分比显著升高（P < 0.01）,而C57BL/6J小鼠的越鞠丸组和对照组的场电位斜率百分比无显著性差异（P > 0.05）;Balb/c小鼠的越鞠丸组与对照组相比,长时程增强显著升高（P < 0.01）,而C57BL/6J小鼠的越鞠丸组和对照组的长时程增强无显著性差异（P > 0.05）。结论：越鞠丸可能通过增加Balb/c小鼠前额皮层的场电位及长时程增强以提高突触传递效能,从而产生抗抑郁作用。     

汉方方剂对移植物抗宿主反应模型小鼠的作用

对4周龄雌性(C57BL/6×DBA/2)F_1(BDF_1)小鼠,静脉投与亲系6周龄雌性C57BL/6小鼠的脾细胞混悬液(4×10~7cells/mouse),每隔6日1次,投与3次,制成急性GVHR(移植物抗宿主反应)模型。与制作急性GVHR模型一样,对BDF_1小鼠静脉投与亲系7周龄雌性DBA/2小鼠的脾细胞混悬液(4×10~7cells/mouse),投与3次,制成慢性GVHR模型。实验用小鼠以10只为1组。将人参养荣汤、当归芍药散、     

清开灵注射液类过敏反应特点及致敏物质初步筛选研究

采用小鼠类过敏实验模型,研究清开灵注射液（Qingkailing injection,QKLI）的类过敏反应特点以及影响其类过敏反应的因素,并对其致敏物质初步筛选。结果显示,不同品系的小鼠（ICR,昆明,BALB/c,C57）在静脉注射QKLI后产生的类过敏反应有所不同,其中ICR和昆明小鼠的类过敏反应较BALB/c,C57强。用生理盐水配制的QKLI较5%葡萄糖注射液配制的QKLI诱导ICR小鼠产生的类过敏反应更强。当其剂量为临床2倍剂量时,部分批号QKLI可诱发明显或可疑类过敏反应,当剂量降低至临床等倍剂量时,所有批号QKLI均不诱发小鼠类过敏反应。不同批号的QKLI诱发的小鼠类过敏反应程度有所不同。因此QKLI的类过敏反应发生可能与机体不同体质有一定联系。不同溶媒可能影响QKLI的安全性。QKIL诱发类过敏反应具有批间差异性。另外临床使用时也应严格控制剂量。最后通过比较QKLI中不同成分和中间体诱发的小鼠类过敏反应,初步认为致类过敏物质可能主要存在于中间体板蓝根提取物和栀子提取物中。     

ICR小鼠与昆明种小鼠常用血液生化值和脏器系数的比较

目的:测定并比较ICR小鼠和昆明种小鼠常用血液生化值与主要脏器系数的差异。方法:用全自动生化分析仪测定了血清BUN、CR、TP、ALB、GLU、TC、TG等项指标,并用电子天平分别测定了ICR小鼠和昆明种小鼠的心、肝、脾、肺、肾、子宫和睾丸等脏器系数。结果:ICR雌性小鼠GLU值比雄性小,ICR和昆明种雌性小鼠TG值均比雄性大;昆明种雄性小鼠GLU、TG值比ICR雄性小鼠小。ICR雌性小鼠肾脏脏器系数比雄性小,脑脏器系数比雄性大;昆明种雌性和雄性小鼠心、胸腺脏器系数均比ICR小鼠大,昆明种雌性小鼠脾、子宫脏器系数均比ICR小鼠小。结论ICR小鼠和昆明种小鼠的血液生化GLU、TG值和心、胸腺等脏器系数因品种和性别的不同而有差异。     

龙葵甾体类生物碱对S180及Lewis肺癌移植瘤小鼠的影响

目的：观察龙葵甾体类生物碱对荷瘤（S180）小鼠及对Lewis肺癌移植瘤小鼠的影响，探讨部分作用机理。方法：分别采用接种S180移植性实体瘤及Lewis肺癌瘤株的方法造成两种荷瘤小鼠。注射给予药物后，观测荷瘤（S180）小鼠瘤重及抑瘤率、血清TNF-α及IL-2水平、胸腺及脾指数指标；观测Lewis肺癌移植瘤小鼠瘤重及抑瘤率、血清IL-6及IL-8水平。结果：ICR小鼠接种S180移植性实体瘤后，模型组肿瘤平均重量大于1g，血清TNF-α含量明显低于正常对照组；龙葵甾体类生物碱各组小鼠肿瘤浸润范围均小于模型组，瘤体易剥离，瘤重明显减轻，龙葵甾体类生物碱各组均可以升高血清TNF-α、IL-2含量；C57BL／6J小鼠接种Lewis肺癌细胞后，4天皮下可见肿瘤。模型组小鼠血清IL-6和IL-8水平均明显下降，龙葵甾体类生物碱各给药组瘤重均低于模型组，并可以显著增加模型小鼠血清中IL-6和IL-8水平。结论：龙葵甾体类生物碱不仅具有抑制肿瘤增长的作用，还可以显著提高荷瘤小鼠血清TNF-α、IL-2、IL-6、IL-8的水平，对肿瘤的治疗具有积极意义，这可能是其发挥抗肿瘤作用的机理之一。     

A Mineral Extract from red Algae Ameliorates Chronic Spontaneous Colitis in IL‐10 Deficient Mice in a Mouse Strain Dependent Manner

Inflammatory bowel disease is an urgent public health problem with a high incidence in developed countries. Alterations of lifestyle or dietary interventions may attenuate the disease progression and increase the efficacy of current therapies. Here we tested the effect of chronic supplementation with a mineral extract from red marine algae – rich in calcium (34%), magnesium, phosphorus, selenium and other trace minerals – in a clinically relevant model of spontaneous enterocolitis, interleukin (IL)‐10^‐/‐ mice. The mineral extract was administered in the drinking water of Il10^‐/‐ mice on C57BL/6 J and BALB/c strain backgrounds for 25 weeks commencing from 3 to 4 weeks of age. The mineral extract ameliorated the spontaneous development of colitis and severity of disease in Il10^‐/‐ mice on a C57BL/6 J background. Mineral extract‐treated Il10^‐/‐ C57BL/6 J strain mice had significantly reduced mortality, circulating levels of serum Amyloid A and reduced colonic tissue damage. In contrast, comparable treatment of Il10^‐/‐ mice on a BALB/c background with the mineral extract did not alter the course of colitis. These data demonstrate that chronic supplementation with a natural mineral extract selectively ameliorates spontaneous mild–moderate colitis in Il10^‐/‐ mice on a C57BL/6 J, but does not attenuate more moderate–severe colitis in BALB/c strain animals. Copyright © 2013 John Wiley & Sons, Ltd.     

Effect of ninjin-youei-to on Th1/Th2 type cytokine production in different mouse strains

Ninjin-youei-to (NYT; ren-shen-yang-rong-tang in Chinese) is a traditional herbal formula, which is widely used in Japan, Korea and China to modulate physiological immunity. The effects of oral administration of NYT on cytokine production from splenocytes were investigated in both C57BL/6 and BALB/c mice in which Th1 and Th2 were dominant, respectively. Splenocytes from C57BL/6 and BALB/c mice, which took NYT orally forfour weeks, were cultured with anti-mouse CD3 mAb, and the supernatant was examined for cytokine production using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Administration of NYT to C57BL/6 mice, increased the production of interleukin-4 (IL-4) significantly, and slightly decreased interferon-y (IFN-gamma) production from splenocytes. In contrast, the same treatment significantly increased IFN-gamma secretion from splenocytes of BALB/c mice. No remarkable changes of IL-12 production from splenocytes were observed in either strain of mice. These results suggest that oral administration of NYT ameliorates the excessive inclination of Th1 and Th2 type cytokine production, and NYT may provide a beneficial effects for the treatment of diseases caused by a skewed Th1-Th2 balance in the immune system.     

滑膜炎颗粒对2种品系小鼠镇痛作用研究

目的：比较滑膜炎颗粒在昆明小鼠和BALB/c小鼠中的镇痛作用。方法80只昆明小鼠、80只BALB/c小鼠各分为对照组、布洛芬组（0.078 g/kg）、滑膜炎颗粒大剂量组（13.98 g/kg）、滑膜炎颗粒中剂量组（6.99 g/kg）、滑膜炎颗粒小剂量组（3.50 g/kg）,每组16只,雌雄各半。连续灌胃给药5 d,1次/d。第4天给药后1 h应用鼠尾光照仪,观察鼠尾受热后出现甩尾反应的潜伏期。末次给药后1 h腹腔注射醋酸制备疼痛模型,观察小鼠扭体潜伏期及扭体次数。结果滑膜炎颗粒各剂量组对昆明小鼠痛阈潜伏期、扭体次数无明显影响,滑膜炎颗粒中剂量组可减少雄性BALB/c小鼠痛阈潜伏期（3.93±0.76）min,与对照组的（4.84±1.16）min 比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。滑膜炎颗粒小、中、大剂量组均能减少BALB/c小鼠扭体次数[分别为（8.56±6.19）次、（5.73±3.17）次、（6.88±4.59）次],与对照组的（19.06±6.34）次比较,差异有统计学意义（P＜0.01）。结论滑膜炎颗粒各剂量组对化学刺激所致疼痛呈较好镇痛作用,镇痛作用无性别差异;昆明小鼠个体差异较大,不适宜镇痛药的药效学评价,应选用个体差异小的BALB/c小鼠制备疼痛动物模型。     

二次免疫诱导C57BL/6J小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎动物模型的建立

目的:探讨C57BL/6J小鼠建立实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的可能性及其发病特点。方法:使用小鼠脑脊髓匀浆(spinal cord homogenate,SCH)免疫C57BL/6J小鼠,完全福(氏)免疫佐剂为免疫佐剂,并在尾静脉注射百日咳杆菌,建立EAE模型。结果:自制SCH免疫C57BL/6J小鼠可见明显脱髓鞘改变。两次免疫法与一次免疫法相比,发病率较高(P>0.05),神经功能评分较高(P>0.05),发病时间延长(P>0.05)。结论:SCH免疫C57BL/6J小鼠的EAE动物模型,主要表现为急性单相病程,从临床表现和病理学特点来看符合人类MS的病理特点,值得在以后的研究中进一步研究探讨。     

补肾健脾胶囊延缓老年性耳蜗毛细胞凋亡的实验研究

目的:观察补肾健脾胶囊对C57小鼠老年性耳蜗毛细胞损害的保护作用并探讨其作用机制。方法:选择刚出生的C57 BL/6J小鼠30只,随机分为对照组10只,补肾健脾胶囊组20只,其中对照组小鼠为常规饲料喂养;中药组小鼠常规饲料至出生后1个月时开始饮用补肾健脾胶囊溶液以代替日常饮水。两组至7月龄时终止实验。取出小鼠耳蜗,制作成耳蜗铺片,在光学显微镜下观察并比较两组小鼠耳蜗毛细胞退行性改变状况。结果:对照组C57 BL/6J小鼠出现耳蜗毛细胞损伤加重的趋势,且这种随着年龄增长而发生的耳蜗损害遵循着从底回逐渐向顶回发展的规律,同时外毛细胞的损害比同区域的内毛细胞严重。服用复方补肾健脾胶囊的小鼠与同龄对照组小鼠相比,耳蜗毛细胞损害则相对较轻。结论:补肾健脾胶囊可以延缓C57 BL/6J小鼠随着年龄增长而发生的耳蜗毛细胞凋亡,提示该中药胶囊可能具有对抗老年性耳聋的药理效应,其作用机制可能与提高细胞环核苷酸含量,调节核酸代谢,保护和稳定DNA结构等有关。     

注射用双黄连类过敏反应与特异性免疫细胞之间关系的探讨

目的:将ICR小鼠、SCID小鼠和BALB/C裸鼠用于注射用双黄连(SHLI)类过敏反应研究,以探讨SHLI类过敏反应的发生与特异性免疫细胞之间的关系。方法:ICR小鼠、SCID小鼠和BALB/C裸鼠耳廓血管通透性分析:小鼠随机分成不同实验组,不同组的小鼠分别一次性静脉注射含有0.4%伊文思蓝的不同浓度的Compound 48/80溶液、注射用双黄连(SHLI)、生理盐水,给药后30 min记录各组动物耳廓血管通透性增高反应的阳性率,进行耳廓蓝染程度评分,并定量测定耳廓伊文思蓝渗出量。结果:SHLI 300,600 mg.kg-1(分别相当于临床剂量的等效剂量和2倍剂量)静脉注射均可引起ICR小鼠耳廓血管通透性增高,耳廓明显蓝染。以上剂量的SHLI均未引起SCID小鼠和BALB/C裸鼠小鼠耳廓蓝染。结论:SHLI在临床等效剂量和2倍临床剂量下有明显增高血管通透性的作用,提示有致ICR小鼠类过敏作用;相同剂量的SHLI对于免疫缺陷小鼠没有致类过敏作用,提示特异性免疫细胞可能参与了SHLI的致类过敏反应。     

昆明地区小儿慢性咳嗽中医证型与体质关系探讨

目的探讨昆明地区慢性咳嗽患儿证型与体质之间的关系。方法对166例本地慢性咳嗽患儿进行辨证分型及体质调查,通过统计分析研究证型、体质、年龄间的相互关系。结果发生慢性咳嗽的年龄段以3岁以上最多,其证型以风邪久恋、痰热咳嗽多见;在体质类型上,不均衡质较均衡质更易发生慢性咳嗽,其中以肺脾质阳多阴少型为多;发生慢性咳嗽的年龄与证型、年龄与体质、证型与体质具有相关性。结论体质是决定证候类型的重要因素之一。辨治小儿慢性咳嗽,应根据不同年龄段,结合其体质特点施治及调理。