槲皮素对高糖诱导的系膜细胞活性氧簇类及单核细胞趋化蛋白1表达影响的研究

目的观察槲皮素(QUE)对高糖诱导的大鼠系膜细胞氧化应激、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)及细胞外基质表达的影响,探讨QUE治疗糖尿病肾脏疾病(DKD)的理论基础。方法培养大鼠系膜细胞,将系膜细胞分为对照组(Con)、高糖组(HG)和高糖+QUE组(HG+QUE)。采用流式细胞术检测细胞内活性氧簇(ROS)的表达,采用ELISA检测细胞培养上清MCP-1、转化生长因子β1(TGF-β1)和纤连蛋白(FN)的表达。结果培养48h,HG组FN、TGF-β1、MCP-1及ROS表达量均高于HG+QUE组及Con组(P0.01);与HG组比较,QUE可抑制高糖条件下系膜细胞FN、TGF-β1、MCP-1及ROS的表达(P0.01)。结论 QUE可通过抑制高糖条件下系膜细胞氧化应激和炎症因子的表达,减少细胞外基质的合成,发挥肾脏保护作用。     

丝胶对糖尿病大鼠肾脏转化生长因子-β_1表达的影响

目的观察丝胶对糖尿病大鼠肾脏转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法 48只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组、丝胶治疗组和阳性对照组,每组12只。链脲佐菌素腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型,丝胶治疗组大鼠给予丝胶(2.4 g/kg)灌胃、阳性对照组大鼠给予二甲双胍(55.33 mg/kg)灌胃。分别检测各组大鼠的血肌酐和尿素氮,SP免疫组织化学染色法观察大鼠肾脏TGF-β1的表达。结果糖尿病模型组大鼠的血尿素氮和肌酐明显高于正常对照组大鼠(P<0.01),丝胶治疗组、阳性对照组大鼠的血尿素氮和肌酐明显低于糖尿病模型组大鼠(P<0.01,P<0.05)。TGF-β1蛋白免疫阳性产物呈棕黄色细腻颗粒状,位于肾小囊壁层上皮细胞、足细胞和球内系膜细胞的胞浆。糖尿病模型组大鼠肾脏TGF-β1蛋白的表达明显高于正常对照组大鼠(P<0.01);丝胶治疗组、阳性对照组大鼠肾脏TGF-β1蛋白的表达明显低于糖尿病模型组大鼠(P<0.01)。结论丝胶可通过下调糖尿病大鼠肾脏TGF-β1的表达减轻肾脏肥大和细胞外基质积聚,对糖尿病时肾脏损伤具有一定的保护作用。     

灵芝多糖对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞转化生长因子-β1和Ⅳ型胶原的影响

目的探讨灵芝多糖对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞表达转化生长因子β1(TGF-β1)和Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)的影响。方法用不同浓度的灵芝多糖加入高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)中测不同时间TGF-β1、Col-Ⅳ蛋白的表达。结果高糖可使系膜细胞TGF-β1、Col-Ⅳ的表达明显增加(P<0.01),而灵芝多糖干预后TGF-β1、Col-Ⅳ表达降低,并呈剂量依赖性(P<0.01)。结论灵芝多糖可抑制高糖环境下肾小球系膜细胞的TGF-β1、Col-Ⅳ过度表达,并呈剂量依赖性,这可能是其延缓及减轻糖尿病肾病的初步机制。     

沉默信息调节因子1对高糖诱导的系膜细胞内皮素-1和转化生长因子β1的影响

目的探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)对高糖诱导的系膜细胞内皮素-1(ET-1)和转化生长因子β1(TGF-β1)的影响。方法体外培养系膜细胞分为:(1)高糖组(高糖培养液);(2)SIRT1激动剂(白藜芦醇)+高糖组,含1μmol/L白藜芦醇的高糖培养液;(3)SIRT1 RNAi干扰+高糖组,加入pTRC-shSIRT1慢病毒感染;(4)正常对照(NC)组。检测各组细胞SIRT1基因表达,以及ET-1和TGF-β1水平。结果高糖组、SIRT1激动剂+高糖组、SIRT1RNAi干扰+高糖组及NC组ET-1含量分别为(56.1±6.3)、(31.9±5.1)、(105.63±8.2)和(17.3±3.4)pg/ml;TGF-β1含量分别为(43.3±5.7)、(27.5±4.9)、(87.4±7.3)和(15.6±3.6)ng/ml。高糖抑制SIRT1表达,上调ET-1和TGF-β1表达(P0.05);SIRT1激动剂可改善高糖对SIRT1的抑制,下调ET-1和TGF-β1表达(P0.05);沉默SIRT1,可上调ET-1和TGF-β1表达(P0.05)。结论 SIRT1基因对高糖诱导的系膜细胞ET-1和TGF-β1可能起负调控作用。     

舒洛地特对糖尿病大鼠肾脏转化生子因子β1与结缔组织生长因子表达的影响

目的 探讨舒洛地特对糖尿病大鼠肾组织转化生长因子β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响.方法 将SD雄性大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立早期糖尿病肾病(DN)模型,成模20只,随机分为DN组、糖尿病肾病治疗组(DNS组),各10只,另有10只为对照组.DNS组予以舒洛地特(10 mg·kg-1·d-1)肌肉注射.8 w后,检测各组大鼠的24 h尿白蛋白定量、体重、肾重、肾肥大指数、血糖、血尿素氮、血肌酐,通过免疫组化及Western 印迹观察肾TGF-β1、CTGF的蛋白表达.结果 DN组大鼠的24 h尿白蛋白定量、肾脏肥大指数在糖尿病早期较对照组明显增加(P＜0.01),而DNS组大鼠较DN组明显减少(P＜0.01).DN组大鼠TGF-β1、CTGF表达较对照组明显增加(P＜0.01),DNS组较DN组明显减弱(P＜0.01).结论 早期应用舒洛地特可降低24 h尿白蛋白,抑制糖尿病大鼠早期肾脏肥大,抑制TGF-β1、CTGF表达.舒洛地特对DN的保护机制可能与抑制肾小球细胞外基质积聚有关.     

雷帕霉素对早期糖尿病大鼠肾脏TGF-β1、FN表达的影响

目的利用小剂量雷帕霉素治疗糖尿病肾病(DN)大鼠,观察雷帕霉素对DN的保护作用。方法应用链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型。24只SD大鼠随机分为:对照组、DN组、雷帕霉素干预组。第5周起雷帕霉素干预组予雷帕霉素1 mg·kg-1·d-1干预8 w。12 w末观察各组大鼠血糖、内生肌酐清除率(Ccr)、24 h尿微量白蛋白(24 h Ualb)、肾重/体重等的变化。光镜观察肾组织病理变化并测定肾小球平均体积及系膜基质扩张指数。RT-PCR及免疫组化法检测肾皮质转化生长因子-β1(TGF-β1)、纤维连接蛋白(FN)mRNA及蛋白表达。结果与对照组相比,DN组及雷帕霉素干预组大鼠血糖、Ccr、24 h Ualb均显著上升,大鼠肾脏明显肥大,肾小球平均体积、系膜基质扩张指数、毛细血管基底膜厚度均显著增加;肾皮质TGF-β1、FN mRNA及蛋白表达显著上调。雷帕霉素干预后,上述指标除血糖外均部分被抑制。结论小剂量雷帕霉素能够减轻肾脏肥大,抑制系膜外基质聚集,下调TGF-β1、FN的表达,延缓DN的进展。     

黄芩苷对糖尿病大鼠组织醛糖还原酶活性及肾脏细胞凋亡的影响

目的研究醛糖还原酶(AR)、凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax与糖尿病肾病(DN)的关系,探讨醛糖还原酶抑制剂(ARIs)对DN的治疗作用。方法雄性Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组、糖尿病组、依帕司他组、黄芩苷组,每组10只。除正常对照组外,其余各组大鼠腹腔注射STZ(60mg/kg),72h后建立糖尿病大鼠模型。依帕司他组灌胃依帕司他10mg.kg-1.d-1,黄芩苷组灌胃黄芩苷150mg.kg-1.d-1。16w后处死大鼠,测定晶体、肾脏组织AR活性,观察Bcl-2、Bax的表达,取部分肾皮质病理观察、电镜观察细胞凋亡的形态学变化。结果与正常对照组相比,糖尿病组晶体、肾脏皮质AR活性明显升高(P<0.001),两治疗组AR活性明显较糖尿病组降低(P<0.01),而血糖无明显变化。糖尿病组肾脏Bcl-2、Bax蛋白表达增加,治疗组的Bcl-2蛋白表达较糖尿病组增多,而Bax蛋白表达较糖尿病组减少。透射电镜下见糖尿病组肾脏肾小管上皮细胞呈典型的凋亡形态学改变,治疗组大鼠肾组织细胞凋亡改变明显减轻。糖尿病组肾小球基底膜增厚,系膜区域扩大,治疗组病变减轻。结论ARIs通过抑制AR活性,调节Bax、Bcl-2的表达抑制细胞凋亡,延缓DN的发展。黄芩苷对AR抑制作用与依帕司他相似。     

银杏达莫注射液对实验性2型糖尿病大鼠肾脏TGF-β1表达的影响

目的 探讨银杏达莫注射液对2型糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏转化生长因子(TGF)-β1表达的影响,从而探讨银杏达莫注射液对DN的治疗作用.方法 选取实验大鼠60只,以高热量饲料加小剂量链脲佐菌素(STZ)建立DN大鼠模型,将大鼠随机分为正常组、DN组和治疗组(每组各10只),观察各组大鼠一般情况及24 h蛋白尿、血糖、肾脏病理改变;采用免疫组化法检测TGF-β1的表达.结果 糖尿病组表现为大量蛋白尿、肾组织病理损害、TGF-β1高表达,与正常组有显著差异;治疗组24 h尿蛋白与正常组相比显著增高,与DN组相比有显著降低,肾组织病理损害明显减轻,TGF-β1表达高于正常组,低于ND组,差异显著.结论 银杏达莫注射液可以通过降低TGF-β1表达对2型糖尿病DN大鼠肾脏起到保护作用,延缓DN发展.     

肝细胞生长因子对糖尿病肾病不同阶段的治疗作用

目的通过检测转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA、CTGFmRNA、c-metmRNA的表达及其病理变化,研究肝细胞生长因子(HGF)对2型糖尿病肾病不同阶段的治疗作用。方法雄性Wistar大鼠随机分为对照组、糖尿病肾病组、治疗组(HGF组),HGF组于注射链尿佐菌素后2个月和6个月时给予HGF500μg/(kg.d),连续1个月,处死。取一侧肾脏HE染色作病理切片,另一侧肾脏用反转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测TGF-β1mRNA、CTGFmRNA、c-metmRNA的表达。结果在3个月和7个月时,HGF组c-metmRNA表达较DN组高,TGF-β1及CTGFmRNA表达较DN组低(P0.05)。结论HGF可抑制早期糖尿病肾病进一步发展,减轻临床糖尿病肾病的蛋白尿,使肾小球系膜明显变薄和系膜基质降解从而改善并逆转临床糖尿病肾病大鼠肾脏的功能和形态的变化。     

PPAR-γ激活对糖基化终末产物引起的大鼠肾系膜细胞TGF-β及CTGF mRNA表达的影响

目的 观察过氧化物酶体增殖体激活受体-γ(PPAR-γ)激活对糖基化终末产物(AGEs)引起的大鼠肾系膜细胞TGF-β及CTGF mRNA表达的影响.方法 体外培养正常大鼠肾系膜细胞,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测不同浓度AGEs(0～400 μg/ml-1)及不同浓度PPAP-γ)激活剂(罗格列酮)和PPAR-γ阻断剂(GW9662)对AGEs(100 μg/ml-1)引起的TGF-β及CTGF mRNA表达的影响.结果 给予PPAR-γ激活剂可明显减轻AGEs引起的大鼠系膜细胞TGF-β、CTGF mRNA的表达.结论 PPAR-γ激活剂可以明显减轻AGEs对系膜细胞TGF-β、CTGF mRNA的表达影响,从而改善肾小球细胞外基质积聚,在糖尿病时起到肾脏保护作用.     

银杏总黄酮对糖尿病大鼠心肌转化生长因子-β1表达的影响

目的探讨银杏总黄酮对糖尿病大鼠的抗氧化作用及对心肌转化生长因子(TGF)-β1表达的影响。方法 SD大鼠随机分为:正常对照组、糖尿病模型组、银杏总黄酮组,采用腹腔注射链脲佐菌素(STE)法建立糖尿病大鼠模型,生化方法检测血糖,血及心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)的活性及丙二醛(MDA)的含量;ELISA法检测各组心肌TGF-β1水平;光镜观察心肌组织形态改变。结果与糖尿病模型组相比,银杏总黄酮组大鼠血糖水平明显降低,血清及心肌组织SOD活性升高,MDA含量显著降低,心肌组织TGF-β1蛋白水平与糖尿病模型组相比明显下降。结论银杏总黄酮能够减轻STZ诱导的糖尿病大鼠心肌氧化应激程度,降低心肌TGF-β1蛋白表达水平,对糖尿病心肌具有一定的保护作用。     

棉酚对糖尿病大鼠肾脏转化生长因子β1和纤维连接蛋白及11β类固醇脱氢酶表达的影响

目的 观察棉酚对2型糖尿病大鼠肾脏病理变化影响,并探讨其作用机制. 方法 雄性SD大鼠随机分成正常组、糖尿肾病组及棉酚干预组.检测各组的血糖、胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平;用光镜及电镜观察大鼠肾脏的组织形态学改变;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肾脏组织转化生长因子β1(TGF-β1)、纤维连接蛋白(FN)、11β类固醇脱氢酶(11β-HSD1)、11β-HSD2mRNA含量;免疫组织化学法测定大鼠肾脏TGF-β1、FN表达水平. 结果 糖尿病组大鼠血糖、胆固醇、血低密度脂蛋白胆固醇水平高于正常组(P<0.01),肾小球体积增大,肾小球毛细血管基底膜不规则增厚,足细胞突起、肿胀,可见足突融合,阳性基质增多.肾组织TGF-β1、FN基因mRNA表达及蛋白表达高于正常组(P<0.01),11β-HSD2mRNA表达低于正常组(P<0.05);棉酚干预组血糖低于糖尿病组(P<0.01),血胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平有下降趋势;肾脏组织病理改变减轻,TGF-β1、FNmRNA表达及蛋白低于糖尿病组(0.16±0.02、0.22±0.05和0.24±0.06、0.33±0.07,P<0.05),11β-HSD1、11β-HSD2mRNA表达与糖尿病组比较无明显改变. 结论 棉酚可改善2型糖尿病大鼠肾脏的病理改变,其作用机制与降血糖,进而抑制糖尿病大鼠肾脏TGF-β1、FN表达,阻止细胞外基质的堆积有关.     

贝那普利对糖尿病肾病大鼠肾组织MCP-1表达的影响

目的 观察单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)在早期糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织的表达、尿中的排泄情况及贝那普利的干预效果.方法成年雄性Wistar大鼠分为对照组(NC)、DN模型组(DN)和DN 治疗组(DN 贝那普利).DN 贝那普利组给予贝那普利灌胃,NC和DN组以等量蒸馏水灌胃.饲养4 w后观察大鼠生理生化指标的变化、尿中的MCP-1在排泄量、肾脏组织病理学变化及肾脏组织中MCP-1的表达水平.将第5代培养的肾小球系膜细胞分为对照组(NC)、高糖组(HG)和高糖 治疗组(HG 贝那普利),观察系膜细胞内MCP-1 mRNA表达.结果 DN组和DN 贝那普利组大鼠血糖较NC组显著升高(P＜0.01). DN组大鼠肾重、肾脏肥大指数、尿白蛋白(UAlb)/尿肌酐(Ucr)、尿MCP-1/Ucr及肾组织内MCP-1的水平均明显高于NC组;与DN组比较,上述指标在DN 贝那普利组明显下降,差异有统计学意义.肾脏病理显示DN组病理改变较DN 贝那普利组重.细胞实验显示,HG组所培养的系膜细胞内MCP-1 mRNA表达水平显著高于NC组,但用贝那普利处理后MCP-1 mRNA表达水平明显降低(P＜0.01).结论 MCP-1在早期DN大鼠肾组织中的表达及尿中的排泄均增加,MCP-1的监测有望成为早期DN的预测指标.     

糖尿病大鼠组织非酶糖化、细胞凋亡与糖尿病肾病的关系

目的 探讨非酶糖化、凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax与糖尿病肾病(DN)的关系.方法 雄性Wistar大鼠30只,随机平均分为3组,正常对照组、DN组、糖尿病氨基胍(10mg·kg<'-1>·d<'-1>)治疗组,腹腔注射链脲佐菌素(60 mg/kg)诱发糖尿病.16 w后,处死大鼠,分离肾脏,测定组织非酶糖化,观察Bcl-2、Bax的表达,取部分肾皮质电镜细胞计量、观察细胞凋亡的形态学变化.结果 ①与正常对照组相比,DN组肾脏皮质非酶糖化明显升高(P<0.001),氨基胍治疗组非酶糖化明显较DN组降低(P<0.01),而血糖无明显变化.②DN组肾脏Bcl-2蛋白表达减少、Bax蛋白表达增加,治疗组的Bcl-2蛋白表达较DN组增多,而Bax蛋白表达较DN组减少.③透射电镜下见DN组肾脏肾小管上皮细胞呈典型的凋亡形态学改变,治疗组大鼠肾组织细胞凋亡改变明显减轻.④DN组肾小球基底膜增厚,系膜区域扩大,治疗组病变减轻.结论 ①非酶糖化通过调节Bcl-2,Bax蛋白的表达诱导细胞凋亡,而参与DN的发生与发展.②非酶糖化抑制剂可调节Bax,Bcl-2的表达抑制细胞凋亡,明显改善糖尿病大鼠肾脏结构与功能,延缓DN的发展.     

辛伐他汀和西拉普利对人肾小球系膜细胞TGF-β1和IGF-Ⅰ表达的影响

目的 探讨辛伐他汀和西拉普利对人肾小球系膜细胞转化生长因子β1(TGF-β1)和胰岛素样生长因子Ⅰ(ICF-Ⅰ)表达的影响。方法 体外培养人胎肾小球系膜细胞，在低糖(5．6mmol／L)和高糖(30mmol／L)环境下，加入辛伐他汀(10μmol／L)、西拉普利(10μmol／L)及辛伐他汀 西拉普利培养48h后，分别测定细胞上清液中TGF-β1、纤维连接蛋白、层粘连蛋白和Ⅳ型胶原(酶免法和放免法)浓度及系膜细胞TGF-β1和IGF-Ⅰ mRNA表达水平(RT-PCR法)。结果 与低糖比较，高糖环境中系膜细胞过度增殖，TGF-β1和IGF-Ⅰ mRNA表达明显增高，细胞上清液中TGF-β1、纤维连接蛋白、层粘连蛋白和Ⅳ型胶原含量也显著升高。加入辛伐他汀和西拉普利后，高糖环境下系膜细胞TGF-β1和ICF-Ⅰ mRNA的表达明显降低，细胞上清液中TGF-β1和基质蛋白含量也亦显著下降。合用辛伐他汀和西拉普利对系膜细胞TGF-β1表达的抑制作用较单独用上述两药更强。结论 高糖可促进系膜细胞TGF-β1和IGF-Ⅰ的表达，辛伐他汀和西拉普利可一定程度逆转高糖环境中系膜细胞TGF-β1和IGF-Ⅰ的过度表达，并降低细胞上清液中TGF-β1和基质蛋白的含量。     

环氧合酶-2在高糖刺激的系膜细胞和糖尿病肾病模型大鼠肾皮质的表达及意义

目的探讨环氧合酶-2(COX-2)与糖尿病肾脏病变的关系及在糖尿病肾病发病中的意义。方法Westernblot检测了STZ诱导的糖尿病肾病模型大鼠(DN模型组)肾皮质COX-2的表达,以正常大鼠(对照组)肾皮质做对照;并检测了高糖(HG组)及前列腺素E2(PGE2组)刺激的大鼠肾小球系膜细胞COX-2表达,同时还检测了HG组和PGE2组分别刺激及共同刺激(HG PGE2组)后肾小球系膜细胞的总蛋白量,以正常培养的大鼠肾小球系膜细胞(NG组)作为对照。结果HG组COX-2蛋白表达较NG组明显增加(P<0.01);PGE2也可诱导COX-2的表达增加(P<0.01)。STZ组大鼠肾脏COX-2表达均较CTR组增加(P<0.01);HG组和PGE2组细胞内总蛋白量均较NG组增高(P<0.05),HG PGE2组细胞内总蛋白量较NG组明显增加(P<0.01),HG PGE2组与单纯PGE2刺激组比较也增加(P<0.05)。结论COX-2在高糖和PGE2刺激的肾小球系膜细胞及糖尿病肾病大鼠肾皮质的表达增加,高糖和PGE2可导致肾小球系膜细胞肥大,COX-2可能是导致糖尿病早期肾脏肥大的主要因素之一。     

蛋白激酶C和TGF-β1在糖尿病大鼠肾脏中的表达

目的研究糖尿病大鼠肾小球中蛋白激酶C（PKC）活性变化和转化生长因子-β1（TGF-β1）的动态变化，探讨二者之间相互关系及其与糖尿病肾病（DN）发生发展的关系。方法用链脲佐菌素制备糖尿病大鼠实验模型，将大鼠随机分为正常对照组（N）、糖碌病2w组（DM2）和糖尿病4w组（DM4）。断头处死，分离肾小球，提取纯化胞浆及胞膜蛋白，利用（γ-32^P）-ATP底物磷酸化的方法检测胞浆及胞膜PKC括性。用免疫组织化学和400倍光镜检测TGF-β1在各组大鼠肾脏的表达。结果（1）糖尿病大鼠肾小球细胞内总的PKC活性与对照组无显著性差异，胞浆PKC活性略有下降，相差不显著；肾小球细胞膜PKC活性明显高于正常对照组，膜结合PKC百分比显著增加，且细胞膜PKC活性与肾脏肥大指数及Cer呈正相关。（2）糖尿病组TGF-β1的表达多于正常组。（3）肾小球细胞膜PKC活性与TGF-β1的表达正相关。结论高血糖慢性刺激可引起肾小球PKC活性增高，并诱导TGF-β1的表达。在糖尿病早期肾内血流动力学改变中发挥着重要的调控作用。     

苦参碱对糖尿病大鼠肾脏的保护作用

目的 探讨苦参碱对糖尿病(DM)大鼠肾脏的保护作用及机制.方法 采用单侧肾切除、腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病肾病(DN)大鼠模型,并设立正常对照(NC)组;DN对照(DN)组,苦参碱治疗组(MT)(100 mg·kg~(-1)·d~(-1)),腹腔给药8 w后处死所有大鼠,检测苦参碱对DM大鼠肾功能的影响,病理切片HE染色,观察肾脏病理改变,免疫组化检测肾组织转化生长因子β1(TGF-β1)的表达水平.结果 与NC组大鼠比较,DN组大鼠尿蛋白排泄量增多,肾小球体积增加,血尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)升高,肾组织TGF-β1表达上调(P<0.01).苦参碱明显减少DN大鼠尿蛋白排泄量,降低血清BUN、Cr水平(P<0.05,P<0.01),肾小球体积明显改善,肾组织TGF-β1表达明显下调(P<0.05,P<0.01).结论 苦参碱显著改善抑制肾脏TGF-β1表达,改善肾小球肥大,减轻蛋白尿,对DM大鼠肾损害具有保护作用.     

西格列汀对高糖下系膜细胞细胞外基质表达的影响

目的探讨高糖对肾小球系膜细胞细胞外基质表达的影响,以及西格列汀(SIT)对其的干预作用。方法培养肾小球系膜细胞,分为对照(Con)组、高糖(HG)组,以及高糖联合不同浓度的SIT组(HG+S1组、HG+S5组、HG+S10组和HG+S20组)。培养24 h、48 h后,用MTT法测定细胞增殖程度,ELISA检测细胞培养上清层粘连蛋白(LN)、大鼠Ⅳ型胶原蛋白(Col-Ⅳ)、转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达的变化。结果高糖培养24 h、48 h后,可观察到不同浓度的SIT均可抑制高糖诱导的系膜细胞增殖;SIT组与HG组比较,差异有统计学意义;Con组肾小球系膜细胞可分泌一定量的LN、Col-Ⅳ和TGF-β1,高糖刺激后LN、Col-Ⅳ和TGF-β1分泌增加,而SIT对系膜细胞分泌物的抑制随其浓度的升高而增强。结论SIT可抑制高糖条件下系膜细胞的增殖,且能降低高糖条件下LN、Col-Ⅳ、TGF-β1的表达,SIT可能对糖尿病患者的肾脏有一定的保护作用。     

20(S)人参皂苷Rg3对糖尿病大鼠肾小管上皮细胞TGF-β1表达及凋亡的影响

目的观察20(S)人参皂苷Rg3对糖尿病大鼠肾小管上皮细胞转化生长因子(TGF)-β1表达及凋亡的影响。方法利用高糖高脂喂养联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型。实验分为正常对照组、糖尿病组和Rg3治疗组。Rg3治疗组以20 mg/kg体重每日灌胃给予人参皂苷Rg3。监测大鼠体重和血糖,于12 w结束实验时处死大鼠,留取肾脏。用过碘酸雪夫(PAS)染色检测各实验组大鼠肾脏组织,观察其形态学改变;免疫组化法检测各实验组大鼠肾脏组织中TGF-β1的表达;TUNEL染色观察各实验组大鼠肾脏组织凋亡的情况。结果通过PAS染色可以观察到糖尿病组大鼠肾脏组织中肾小球毛细血管袢开放尚可,部分肾小球体积增大、囊腔裂隙变窄,肾小球系膜基质和系膜细胞弥漫性增生。Rg3治疗组大鼠肾脏组织中肾小球形态接近正常。各实验组大鼠肾脏组织中,TGF-β1均主要表达于肾小管上皮细胞,其中糖尿病组TGF-β1的表达增高,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);Rg3治疗组TGF-β1的表达较糖尿病组明显降低(P0.05),与正常对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。TUNEL染色见糖尿病组肾小管上皮细胞大量凋亡,显著高于对照组与Rg3治疗组;Rg3治疗组与正常对照组之间凋亡阳性率差异有统计学意义(P0.05)。相关性分析结果显示,肾小管上皮细胞TGF-β1的表达与细胞凋亡率呈正相关。结论 20(S)人参皂苷Rg3显著抑制了糖尿病大鼠肾小管上皮细胞的凋亡,这与其下调肾小管上皮细胞TGF-β1的表达相关,该研究证实了20(S)人参皂苷Rg3对糖尿病大鼠肾脏的保护作用。