miR-223-3p在老年结肠癌组织和癌旁组织中的表达水平及其生物学功能作用机制

目的 探讨miR-223-3p在老年结肠癌组织和癌旁组织中的表达水平及其生物学功能作用机制。方法 选取108例初诊为老年结肠癌患者，经手术切除的结肠癌组织标本作为研究标本，癌旁组织标本(距结肠癌组织边缘至少5 cm)作为对照标本。购置人结肠癌细胞(SW480)和人结肠癌细胞(SW620)。通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)测定结肠癌组织、癌旁组织、SW480及SW620细胞中miR-223-3p表达水平，通过敲低或增加SW480及SW620细胞中miR-223-3p表达观察miR-223-3p对细胞增殖、运动、侵袭、凋亡及凋亡蛋白的影响。结果 结肠癌组织中miR-223-3p表达水平显著高于癌旁组织(P<0.001);SW620细胞中miR-223-3p表达水平显著高于SW480细胞(P<0.05);SW480细胞中，转染组miR-223-3p表达水平显著高于未转染组(P<0.001);SW620细胞中，转染组miR-223-3p表达水平显著低于未转染组(P<0.001);转染24、48、72 h后SW480细胞转染组细胞计数显著多于未转染组(P<...     

miR-126在人结肠癌细胞中的表达及其对结肠癌细胞耐药性的影响

目的探讨miR-126在人结肠癌细胞中的表达及其对结肠癌细胞的耐药性影响。方法采集我院肿瘤科2010年7月至2013年8月收治的45例结肠癌患者的癌组织、癌旁组织及30例同期体检健康对象的正常结肠组织(正常组织),采用荧光PCR检测miR-126表达水平;体外培养HCT116细胞,通过转染抑制序列抑制miR-126的表达,检测抑制HCT116细胞miR-126的表达对结肠癌细胞耐药性的影响。结果结肠癌组织的miR-126阳性表达率显著低于癌旁组织、正常组织(P0.05);癌旁组织的miR-126阳性表达率低于正常组织但差异不显著(P0.05);miR-126表达在年龄、性别、分化程度、肿瘤大小间差异不显著(P0.05),不具统计学意义;miR-126表达与淋巴结转移、Dukes分期、临床分期具有显著的相关性,且miR-126表达水平在各个层之间差异显著(P0.05);在0、5、10、20 mg/L的奥沙利铂培养基中,miR-126阳性组的癌细胞活性(吸光度值)均显著低于miR-126阴性组且差异具有统计学意义(P0.05)。结论结肠癌组织中的miR-126阳性表达率较低,癌细胞组织中的miR-126阳性表达有利于降低癌细胞的耐药性,有利于对结肠癌的治疗效果。     

miR-613靶向KLF4对结肠癌增殖及迁移的影响及其分子机制

[目的]确定miR-613在结肠癌组织和结肠癌细胞系中的表达以及miR-613靶向KrüPPel样因子4(KLF4)对人结肠癌细胞增殖、迁移的影响。[方法]采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测35例结肠癌组织及其癌旁组织中miR-613和KLF4的表达水平,并进行相关性分析。并采用qRT-PCR检测miR-613在结肠癌细胞系(SW480,SW620,HCT116,DLD1,LOVO,NCM460,RKO)中的表达。在HCT116和SW480中分别转染miR-613模拟物和抑制剂。CCK8及EDU实验用于检测转染前后细胞增殖能力的改变。Transwell实验检测细胞迁移能力的改变。使用双荧光素酶报告基因测量miR-613与KLF4的相互作用关系。功能回复实验用于确定miR-613靶向KLF4对结肠癌细胞增殖、迁移的影响。[结果]miR-613 mRNA在结肠癌组织中表达明显高于其癌旁组织(P0.05);KLF4在结肠癌组织中表达明显低于其癌旁组织(P0.05);miR-613与KLF4表达呈负相关(R~2=0.74,P0.001)。在结肠癌细胞系中,HCT116中miR-613的表达水平最低,SW480中miR-613的表达水平最高。在HCT116中,miR-613的表达上调后,细胞增殖活性显著于阴性对照组(P0.05);细胞迁移能力明显升高(P0.05);KLF4蛋白表达水平明显降低(P0.05)。SW480细胞中,抑制miR-613表达后,增殖活性明显低于阴性对照组(P0.05);细胞迁移能力明显降低(P0.05);KLF4蛋白表达水平明显降低(P0.05)。在HCT116细胞中,miR-613模拟物与KLF4 3'UTR野生型质粒共转染,与阴性对照组比较,荧光素酶活性显著增加,差异有统计学意义(P0.05)。miR-613抑制剂和si-KLF4共转染至结肠癌细胞后,si-KLF4可挽救由于miR-613低表达导致的细胞增殖、迁移能力的降低。[结论]miR-613在结肠癌组织中高表达;miR-613通过靶向KLF4基因调控结肠癌细胞的增殖和迁移。     

miR-93在结肠癌中的表达及其意义

目的研究miR-93在结肠癌组织中的表达与临床病理特征的关系,并探讨其对结肠癌细胞的增殖及细胞周期的影响。方法收集108例结肠癌患者的癌组织及癌旁组织,应用原位杂交和荧光定量PCR检测结肠癌组织及癌旁组织中miR-93的表达水平,分析miR-93表达与结肠癌临床病理特征之间的关系。采用反义miR-93转染降低结肠癌细胞SW480和LoVo中miR-93的表达,采用MTT比色法检测结肠癌细胞增殖的变化情况,利用流式细胞仪检测结肠癌细胞周期的变化情况。结果原位杂交检测显示,结肠癌组织miR-93阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05);荧光定量PCR检测显示,61.11%(66/108)的结肠癌组织miR-93表达明显高于癌旁组织(P<0.05);随着结肠癌临床分期的进展,miR-93的表达量逐渐升高,临床Ⅲ/Ⅳ期、Ⅰ/Ⅱ期结肠癌miR-93的表达与癌旁组织相比都显著增高(P<0.05);有淋巴结转移的结肠癌患者的miR-93的表达比无淋巴结转移者显著增加(P<0.05);反义miR-93转染结肠癌细胞SW480和LoVo后,miR-93的表达明显降低,SW480和LoVo结肠癌细胞生长受到明显抑制,其生长主要停滞在G0/G1期,而S期和G2/M期细胞的比例下降。结论 miR-93与结肠癌的发生发展密切相关,其可以通过调节细胞周期中G1/S期的转换而影响结肠癌细胞的生长,为结肠癌治疗提供新的靶点。     

miR-124对人结肠癌SW620细胞生长与侵袭的影响

目的观察miR-124对人结肠癌SW620细胞生物学功能的影响。方法采用MTT实验、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验检测miR-124对人结肠癌SW620细胞的生长、侵袭转移能力的影响。结果 MTT检测发现,过表达miR-124可抑制人结肠癌SW620细胞的生长,且具有时间依赖性;细胞划痕实验显示,转染miR-124成熟体12、24 h后伤口愈合率分别为26.5%±0.7%、37.7%±1.5%,其阴性对照分别为40.6%±2.5%、78.2%±1.6%,P<0.05;Transwell侵袭实验显示,转染miR-124成熟体24 h后穿过基底膜的人结肠癌SW620细胞数为(37±2.6)个,其阴性对照为(80±3.6)个,P<0.05。结论 miR-124可抑制人结肠癌细胞生长与侵袭。     

miR-193b对结肠癌细胞侵袭转移的影响及其机制

目的探讨miR-193b对结肠癌细胞侵袭转移能力的影响及其可能的作用机制。方法 RT-PCR检测高转移细胞系SW620、低转移细胞系中SW480 miR-193b的表达,同时设计miR-193b siRNA及miR-193b利用脂质体2000转染入细胞内,并通过RT-PCR检测其转染效率,利用体外划痕及Transwell实验验证转染miR-193b siRNA及miR-193b后对肿瘤细胞的侵袭转移能力的影响,利用Western印迹验证miR-193b对尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)的影响。结果 RT-PCR结果显示miR-193b在高转移细胞系SW620中表达水平显著低于转移细胞系SW480;RT-PCR检测转染效率的结果显示转染miR-193b-siRNA的SW480细胞中miR-193b的表达较对照显著降低,而在转染mimic-miR-193b的SW620细胞中其表达水平明显升高;体外划痕实验结果显示SW480-miR-193b-siRNA细胞体外迁移能力显著升高,而在转染mimic-miR-193b的SW620细胞中其迁移能力较对照组显著降低;Transwell小室结果显示体外细胞侵袭及迁移实验中过表达miR-193b均可明显抑制SW620细胞的侵袭转移能力,而抑制miR-193b的表达可显著增加SW480侵袭转移潜能;Western印迹显示过表达miR-193b可显著降低SW620细胞中uPA蛋白的表达,抑制miR-193b可明显提高SW480中uPA蛋白的表达水平。结论 miR-193b通过下调uPA可抑制结肠癌细胞的侵袭和转移。     

miR-346及分泌型卷曲相关蛋白4在结肠癌中的表达及其对结肠癌细胞增殖的作用

目的检测结肠癌组织及细胞中miR-346及人分泌型卷曲相关蛋白4(SFRP4)的表达,观察其对结肠癌细胞增殖的作用及可能的机制。方法选取30例经手术切除的结肠癌组织及其相应的癌旁正常组织(距离肿瘤边缘5cm),另选取结肠癌细胞株及正常结肠上皮细胞株,采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及免疫印迹(Western blot)方法检测组织及细胞中的miR-346、SFRP4mRNA及蛋白的表达,采用Pearson rank检验miR-346与SFRP4的相关性,采用Target Scan及Find Tar软件预测两者的靶向调节作用。转染miR-346拟似物(mimics)或抑制物(inhibitor)以上调或下调miR-346的表达,MTT法检测结肠癌细胞的增殖,qRT-PCR及Western blot检测SFRP4mRNA和蛋白的表达。结果 miR-346在结肠癌组织中的表达高于癌旁正常组织(t=12.871,P0.001)。SFRP4mRNA及蛋白在结肠癌组织中的表达低于癌旁正常组织(t=8.609,P0.001;t=20.892,P0.001)。miR-346在结肠癌细胞株(SW480、SW620、HCT116、CaCo-2、LoVo、HT29)中的表达高于正常结肠上皮细胞株FHC(F=10.17,P0.001)。SFRP4mRNA及蛋白在结肠癌细胞株中的表达低于正常结肠上皮细胞株(F=39.01,P0.001;F=16.25,P0.001)。结肠癌组织中miR-346与SFRP4mRNA的表达呈负相关(r=-0.55,95%CI:-0.757～-0.230,P=0.001 8)。与miRNA阴性对照(miR-NC)组比较,给予miR-346mimics后,MTT显示在72h、96h时间点miR-346组细胞存活率升高(t=3.484,P0.05;t=5.868,P0.001),SFRP4mRNA及蛋白表达下降(t=2.267,P0.05;t=5.889,P0.01);给予miR-346inhibitor后,MTT显示在72h、96h时间点miR-346组细胞存活率下降(t=4.400,P0.001;t=3.591,P0.001),SFRP4mRNA及蛋白表达升高(t=4.495,P0.01;t=7.130,P0.01)。结论 miR-346在结肠癌中高表达,SFRP4低表达,miR-346通过靶向作用于SFRP4来调控结肠癌细胞的增殖。     

LncRNA LINC01224/miR-513b-5p对结肠癌细胞SW1116增殖、迁移及侵袭的影响

背景我国结肠癌发病率与死亡率逐年上升,目前结肠癌的发病机制尚未阐明, LncRNA 在结肠癌等肿瘤发生过程中可发挥重要调控作用,其主要通过竞争性结合miRNA而发挥作用,已知LncRNA LINC01224在肿瘤中可能发挥癌基因作用,但LINC01224在结肠癌形成及发展过程中的作用机制尚未阐明.目的探讨LncRNA LINC01224/miR-513b-5p对结肠癌细胞SW1116增殖、迁移、侵袭的影响及其可能作用机制.方法采用qRT-PCR法检测癌旁组织与结肠癌组织中LINC01224、miR-513b-5p的表达量;si-NC、siLINC01224、si-LINC01224与anti-miR-NC、siLINC01224与anti-miR-513b-5p分别转染入人结肠癌细胞SW1116;采用qRT-PCR法检测SW1116细胞中LINC01224、miR-513b-5p的表达量;采用MTT实验检测细胞存活率;应用流式细胞仪检测细胞周期;采用Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭;双荧光素酶报告实验检测LINC01224与miR-513b-5p的靶向关系;Westernblot法检测E-cadherin、N-cadherin蛋白表达量.结果与癌旁组织比较,结肠癌组织中LINC01224的表达水平升高(P0.05),miR-513b-5p的表达水平降低(P0.05);与si-NC组比较,si-LINC01224组细胞存活率降低(P0.05),G0-G1期细胞比例升高(P0.05),S期细胞比例降低(P0.05),迁移及侵袭细胞数减少(P0.05),E-cadherin蛋白水平升高(P0.05),N-cadherin蛋白水平降低(P0.05);双荧光素酶报告实验证实LINC01224可靶向结合miR-513b-5p;与siLINC01224+anti-miR-NC组比较,si-LINC01224+antimiR-513b-5p组细胞存活率升高(P0.05),G0-G1期细胞比例降低(P0.05),S期细胞比例升高(P0.05),迁移及侵袭细胞数增多(P0.05),E-cadherin蛋白水平降低(P0.05),N-cadherin蛋白水平升高(P0.05).结论干扰LINC01224表达可通过上调miR-513b-5p而减弱结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭能力,并可诱导细胞周期阻滞于G0-G1期.     

miR-381通过下调SETDB1抑制结肠癌细胞转移

目的探讨人结肠癌组织中miR-381的临床意义及对结肠癌转移能力的影响。方法荧光实时定量聚合酶链反应(PCR)检测结肠癌及癌旁组织中miR-381的表达量;通过人工合成的miR-381模拟物在SW480细胞中构建miR-381过表达细胞株;通过划痕愈合试验、Transwell侵袭小室检测细胞迁移及侵袭情况;PCR及蛋白免疫印迹检测miR-381潜在靶点组蛋白赖氨酸N端甲基转移酶SET结构域分支型(SETDB)1的表达变化;免疫组化染色检测SETDB1在结肠癌组织中的表达及与miR-381的表达相关性。结果 miR-381在结肠癌组织中表达水平明显低于癌旁组织(t=10.080,P0.001);过表达miR-381能够抑制结肠癌SW480细胞的迁移(t=4.223,P=0.027)及侵袭能力(t=3.651,P=0.033);提高SW480细胞内miR-381的表达后显著下调了SETDB1 mRNA(t=10.521,P=0.008)及蛋白(t=4.811,P=0.027)在SW480细胞内的表达水平,并抑制了MMP-2的表达水平(t=3.472,P=0.036)。结肠癌组织内SETDB1表达升高(t=4.811,P=0.027),且与miR-381的表达水平呈负相关关系(r=-0.325,P=0.021)。结论 miR-381在结肠癌中表达降低,miR-381能够通过抑制结肠癌中SETDB1而发挥抗肿瘤转移作用。     

结肠癌细胞增殖和侵袭过程中miR-92a和miR-29c的表达及其意义

目的探讨miR-92a和miR-29c表达水平对结肠癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法应用miR-92ainhibitor、miR-29c mimic在体外转染结肠癌细胞系SW480,分别构建miR-92a的干扰表达和miR-29c的过表达,设置转染无义序列组作为对照组。(1)采用反转录合成cDNA和荧光定量PCR,以U6表达作为内对照,检测细胞中miR-92a和miR-29c的表达水平;(2)采用CCK-8法,通过检测转染结肠癌细胞后不同时期的450nm处吸光度值,测定细胞增殖能力;(3)采用Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力,分析miR-92a和miR-29c的相对表达量与结肠癌细胞增殖和侵袭的关系。结果 (1)与对照组相比,转染miR-92ainhibitor后,结肠癌细胞系SW480的miR-92a表达水平明显降低(P0.01),增殖能力和侵袭能力均受到明显抑制(P0.01);(2)转染miR-29cmimic后,结肠癌细胞系SW480中miR-29c表达水平明显升高(P0.01),但SW480细胞系的增殖能力和侵袭能力均受到明显抑制(P0.01)。结论 miR-92a在结肠癌细胞中过表达能提高肿瘤细胞的增殖能力和侵袭能力,miR-29c则发挥着相反的作用。     

微小RNA-144对人结肠癌细胞株增殖、侵袭迁移影响及其与同源盒基因A10结合力

目的 观察微小RNA-144(miR-144)对人结肠癌细胞株增殖、迁移、侵袭的影响及其与同源盒基因A10(homeobox gene A10,HOXA10)的结合力。方法 (1)人结肠癌细胞株HCT116、SW480、CL-11和永生化正常人结肠上皮细胞株FHC中miR-144及HOXA10 mRNA检测：采用实时荧光定量PCR法检测HCT116、SW480、CL-11及FHC中miR-144与HOXA10 mRNA，观察人结肠癌细胞和人结肠上皮细胞miR-144、HOXA10 mRNA表达变化，选择miR-144相对表达量最低HCT116细胞为后续研究对象。(2)miR-144对人结肠癌细胞株增殖、侵袭及迁移的影响观察：取对数生长期HCT116细胞分为3组，1组细胞顺序转染miR-144模拟物（miR-144 mimics）和HOXA10过表达质粒pcDNA3.1-HOXA10,2组细胞转染miR-144 mimics,3组细胞转染空白质粒。转染24 h时测算各组细胞增殖活性、观察各组细胞的侵袭及迁移情况、检测各组细胞miR-144及HOXA10蛋白。(3)HCT116细胞中miR...     

circPUM1通过调控miR-524-5p表达对结肠癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨环状RNA PUM1(circPUM1)对结肠癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其分子机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测结肠癌组织、癌旁组织中circPUM1、微小RNA-524-5p(miR-524-5p)的表达量。体外培养人结肠癌细胞株SW620,分别将si-NC、si-circPUM1、miR-NC、miR-524-5p mimics、si-circPUM1与anti-miR-NC、si-circPUM1与anti-miR-524-5p转染至SW620细胞。甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证circPUM1是否能够结合miR-524-5p;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测细胞周期蛋白1(Cyclin D1)、p21、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)表达量。结果结肠癌组织circPUM1的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05),miR-524-5p的表达水平显著降低(P<0.05);干扰circPUM1表达或miR-524-5p过表达后,细胞活力显著降低(P<0.05),迁移细胞数与侵袭细胞数显著减少(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),Cyclin D1、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05),p21、Bax蛋白表达显著升高(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实circPUM1可靶向结合miR-524-5p的作用位点;抑制miR-524-5p表达可减弱干扰circPUM1表达对SW620细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的作用。结论circPUM1可通过海绵吸附miR-524-5p促进结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭,抑制细胞凋亡。     

miR-144-5p对人结肠癌细胞生长和转移的抑制作用及机制

目的检测miR-144-5p在结肠癌中的表达,并研究其对结肠癌细胞生长和转移的抑制作用和机制。方法采用RT-qPCR技术检测结肠癌标本、癌旁组织及癌旁细胞中miR-144-5p的表达。使用噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,并使用Transwell分析评估细胞侵袭和迁移。结果 miR-144-5p在结肠癌组织和细胞系中显著下调(P0.01)。MTT检测发现,miR-144-5p可抑制细胞增殖。且miR-144-5p可以明显抑制小鼠荷瘤模型中结肠癌的生长。通过划痕实验发现,miR-144-5p可抑制肿瘤细胞迁移,且miR-144-5p还可以明显抑制结肠癌细胞在体外的侵袭。结论 miR-144-5p可抑制结肠癌细胞的增殖和转移,并促进其凋亡,有望作为靶点用于结肠癌的临床治疗。     

长链非编码RNA CASC2通过靶基因miR-514b-5p调控结直肠癌细胞增殖、侵袭、迁移的作用机制

目的探讨肿瘤易感候选基因(CASC)2对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及潜在的作用机制。方法运用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测人正常结肠黏膜上皮细胞NCM460和结直肠癌细胞SW480中CASC2和miR-514b-5p的表达水平;将pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-CASC2组(转染pcDNA-CASC2 mimics)、si-NC组(转染si-NC)、si-CASC2组(转染si-CASC2)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-514b-5p组(转染anti-miR-514b-5p)、pcDNA-CASC2+miR-NC组(共转染pcDNA-CASC2 mimics和miR-NC)、pcDNA-CASC2+miR-514b-5p组(共转染pcDNA-CASC2 mimics和miR-514b-5p)、WT-CASC2+miR-NC组(共转染WT-CASC2和miR-NC)、WT-CASC2+miR-514b-5p组(共转染WT-CASC2和miR-514b-5p mimics)、MUT-CASC2+miR-NC组(共转染MUT-UCA1和miR-NC)、MUT-CASC2+miR-514b-5p组(共转染MUT-CASC2和miR-514b-5p mimics)均用脂质体法转染至SW480细胞;采用细胞计数试剂盒(CCK)-8法检测各组细胞增殖;Transwell检测各组细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因实验检测荧光活性。结果结直肠癌SW480细胞于正常结肠黏膜上皮细胞NCM460、CASC2的表达水平显著降低,miR-514b-5p的表达水平显著升高(P0.05);过表达CASC2、抑制表达miR-514b-5p均可抑制SW480细胞增殖、迁移和侵袭;CASC2可靶向调控miR-514b-5p的表达。miR-514b-5p过表达可部分逆转CASC2过表达对结直肠癌SW480细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论长链非编码RNA CASC2可抑制结直肠癌SW480细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与靶向miR-514b-5p基因有关,将可为结直肠癌的预防和治疗提供新靶点。     

Syndecan-1对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

背景:Syndecan-1是表达于上皮细胞表面的一种硫酸乙酰肝素蛋白聚糖,在多种肿瘤细胞中的表达下降,与肿瘤的多种生物学行为密切相关,但其在细胞水平上对结直肠癌发展的作用目前尚无深入的研究。目的:评估Syndecan-1对人结肠癌细胞株增殖、迁移和侵袭能力的影响,并初步探讨可能的分子机制。方法:分别将Syndecan-1高表达质粒和Syndecan-1 siRNA转染人结肠癌细胞株SW620和SW480,分别以转染空载质粒或无关序列作为阴性对照。采用CCK-8法检测细胞增殖,Transwell细胞迁移实验和Matrigel细胞侵袭实验分别检测细胞迁移、侵袭能力,蛋白质印迹法检测上皮细胞间质转化主要分子标记物E-cadherin的蛋白表达。结果:与阴性对照组相比,转染Syndecan-1高表达质粒的SW620细胞生长速度、迁移细胞数和侵袭细胞数均明显降低,同时E-cadherin表达升高;转染Syndecan-1 siRNA的SW480细胞生长速度、迁移细胞数和侵袭细胞数均明显升高,同时E-cadherin表达降低。结论:Syndecan-1能抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其机制可能与上皮细胞间质转化有关。     

miR-140靶向调控SOX2在结肠癌中的作用机制研究

目的分析miR-140在结肠癌中的作用机制。方法qRT-PCR检测miR-140在结肠癌细胞和组织中的表达;CCK8法、细胞划痕实验检测miR-140对结肠癌HT29细胞增殖和迁移的影响。TargetScan筛选miR-140的潜在靶基因并通过双荧光素酶报告基因试验进行验证;采用qRT-PCR和Western blot检测miR-140对SOX2表达的影响;检测SOX2在结肠癌细胞和组织中的表达;裸鼠皮下成瘤实验研究miR-140和SOX2对肿瘤生长的影响。结果miR-140在结肠癌组织和细胞中表达降低(P<0.01)。过表达miR-140能明显抑制结肠癌细胞HT29的增殖和迁移。SOX2是miR-140靶基因,并在结肠癌组织和细胞株表达升高(P<0.01);体内实验发现miR-140过表达能抑制SOX2的表达,以及细胞增殖及肿瘤生长(P<0.05)。结论miR-140通过靶向调控SOX2,从而抑制结肠癌细胞的增殖和迁移及裸鼠移植瘤的生长,在结肠癌中起抑癌作用。     

miR-130a调控肿瘤抑制因子对结直肠癌细胞生物学行为的影响

目的通过检测miR-130a的表达情况及miR-130a与肿瘤抑制因子(CYLD)的靶向关系,探讨miR-130a是否可通过调控CYLD对结直肠癌SW480细胞生物学行为产生影响。方法将结直肠癌SW480细胞设置为对照组、阴性转染组、miR-130a inhibitor组,采用qRT-PCR检测各组miR-130a的表达; MTT法、Transwell法、流式细胞术分别检测各组SW480细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移情况;双荧光素酶报告基因检测miR-130a与CYLD靶向关系; Western blot检测各组细胞CYLD、增殖、凋亡、侵袭迁移相关蛋白表达情况。结果与对照组相比,miR-130a inhibitor组的miR-130a表达水平显著降低(P 0.05)。与对照组相比,miR-130a inhibitor组SW480细胞凋亡率显著增加,而存活率、侵袭迁移数显著降低(P 0.05)。与对照组相比,miR-130a inhibitor组c-Myc、CyclinD1、MMP7、Bcl-2表达水平显著降低,Bax、Caspase-3、CYLD表达水平显著增加(P 0.05)。靶基因预测结果显示,CYLD是miR-130a的潜在目标基因,与pmirGLO-CYLD-wt+miR-NC组相比,pmirGLO-CYLD-wt+miR-130a mimics组荧光素酶活性显著降低。结论 miR-130a表达沉默可能通过促进CYLD表达抑制SW480细胞的增殖、侵袭、迁移,促进细胞凋亡。     

PLAGL2与结肠癌侵袭能力的相关性研究

目的探讨多形性腺瘤基因样因子2（PLAGL2）在结肠癌和癌旁组织中的表达水平以及与结肠癌临床病理因素之间的关系,研究PLAGL2对结肠癌细胞侵袭能力的影响及其机制。 方法通过免疫组化检测40例新鲜结肠癌组织及40例癌旁组织中PLAGL2的表达情况,根据术前影像检查结果及术后组织病理结果判断病人分期情况,分析PLAGL2与临床病理因素之间的关系。构建重组质粒pcDNA3.1-PLAGL2,利用转染试剂脂质体2000对SW480细胞进行转染PLAGL2质粒及对照组空载体质粒,分SW480、Vector、PLAGL2三组进行细胞培养,通过Transwell侵袭实验比较三组细胞侵袭能力的差异,并通Western-blot方法检测三组细胞中E-cadherin、vimentin及MMP-7的表达情况。 结果PLAGL2在Ⅲ~Ⅳ期、Ⅰ~Ⅱ期结肠癌组织与癌旁组织中的免疫组化评分（IS值）分别为8.12±2.997、5.71±2.494、2.17±0.984,差异有统计学意义（F=64.225,P<0.01）。卡方检验结果提示PLAGL2表达增高的病例临床分期较晚（χ²=5.700,P=0.017）、肿瘤较大（χ²=8.174,P=0.008）以及更易发生远隔脏器转移（χ²=13.610,P<0.001）;Transwell侵袭实验比较细胞侵袭个数,PLAGL2组明显高于SW480和Vector两组,差异有统计学意义（F=27.997,P<0.01）;Western-blot方法检测PLAGL2组细胞中E-cadherin表达明显降低（F=38.461,P<0.01）、vimentin（F=28.741,P<0.01）及MMP-7表达升高（F=24.520,P<0.01）,差异有统计学意义。 结论PLAGL2的表达上调与结肠癌的发生、发展密切相关,并且能够促进结肠癌细胞的侵袭能力,可能机制与诱发上皮间质化（EMT）形成有关。     

miR-383靶向Notch1对结肠癌HCT116细胞增殖和迁移的影响

目的分析miR-383和Notch1在结肠癌中的作用及机制。方法选择2017年4月至2020年3月在河北北方学院附属第一医院经病理检查确诊为结肠癌的74例患者,收集其经手术切除的肿瘤组织及癌旁正常组织(距肿瘤边缘>3 cm)。采用TargetScan预测miR-383的潜在靶基因,采用双荧光素酶报告基因实验、逆转录定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western Blot)验证这一预测。采用免疫组织化学法、Western Blot和qRT-PCR检测Notch1在结肠癌组织和癌旁正常组织中的表达水平。分别在结肠癌HCT116细胞中转染阴性对照(NC)、miR-383模拟物、Notch1及共转染miR-383模拟物+Notch1,对应分为miR-NC组、miR-383组、Notch1组及miR-383+Notch1组;另设一组空白对照组。采用CCK8法和Tranwell实验检测miR-383模拟物和Notch1对结肠癌细胞增殖和迁移能力的影响。构建结肠癌裸鼠移植瘤模型,将裸鼠随机分为miR-NC模型组(n=3)和miR-383模型组(n=3),观察miR-383模拟物对裸鼠肿瘤生长的影响。结果双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-383组的Notch1野生型质粒荧光素酶活性较miR-NC组明显降低(20.07±0.12比13.61±0.19,P<0.01)。与miR-NC组相比,miR-383组中Notch1 mRNA和蛋白表达均明显降低(P均<0.01)。结肠癌组织中的Notch1 mRNA和蛋白表达水平均明显高于癌旁正常组织(P均<0.01)。细胞实验显示,与miR-NC组相比,Notch1组细胞的增殖、迁移能力明显升高,miR-383组细胞的增殖、迁移能力降低;miR-383+Notch1组的细胞增殖、迁移能力较miR-383组明显升高。在结肠癌移植瘤裸鼠模型中,miR-383模型组肿瘤组织中Ki67和Notch1蛋白表达水平均明显低于miR-NC模型组。结论Notch1具有促进结肠癌细胞增殖和迁移的作用,而miR-383能靶向调控Notch1以抑制结肠癌细胞的生物学行为并减缓裸鼠肿瘤的生长。miR-383具有抑制结肠癌的作用。     

结肠癌组织MTH1表达及下调MTH1通过诱导自噬逆转结肠癌细胞对安罗替尼耐药性研究

目的探究MutT同源蛋白1(MutT homolog protein 1,MTH1)在结肠癌组织中的表达情况,以及下调MTH1对人结肠癌细胞SW480安罗替尼耐药的作用及其与自噬的关系。方法免疫组化染色法和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结肠癌组织和癌旁组织中MTH1表达;通过低剂量反复刺激法构建安罗替尼的SW480耐药细胞株(SW480/Anl细胞);利用RNA干扰技术下调SW480/Anl细胞中MTH1表达;CCK-8法检测细胞增殖能力;Annexin V-FITC/PI双染法测定细胞凋亡率;免疫荧光染色检测细胞中LC-3表达;蛋白质印迹法(Western blotting)检测MTH1蛋白及自噬蛋白表达水平。结果结肠癌组织中MTH1表达水平较癌旁组织显著升高(P0.05);经不同浓度安罗替尼处理后,SW480/Anl细胞存活率较SW480细胞显著升高(P0.05)。与对照组比较,转染siRNA-MTH1后SW480/Anl细胞中MTH1 mRNA与蛋白表达显著下降(P0.05),在安罗替尼(浓度为25、50、100、150、200μmol/L)作用下细胞存活率均显著下降(P0.05),细胞凋亡率升高(P0.05),LC3荧光染色较弱,P62蛋白表达水平显著增加,同时LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达水平显著下降(P0.05)。结论 MTH1在结肠癌组织中高表达,下调MTH1表达可抑制自噬的发生,从而逆转SW480细胞对安罗替尼的耐药。