抗污染PCR与斑点杂交检测血清HBVDNA的比较

目的探讨含dUTP/尿嘧啶DNA糖基化酶的PCR扩增(dUTP/UDG-PCR,抗污染PCR)和斑点杂交检测血清HBVDNA的敏感性和特异性.方法慢性病毒性肝炎患者178例,应用尿嘧啶DNA糖基化酶的PCR扩增及斑点杂交方法分别检测其血清HBVDNA.结果经抗污染PCR检测出HBVDNA阳性标本69份,阳性率为37.86%;经斑点杂交检测出HBVDNA阳性标本54份,阳性率为30.34%.两者比较差异没有显著性(x2=2.79,P>0.05),但可以看出抗污染PCR检测HBVDNA的阳性率高于斑点杂交.两种方法同时检出阳性标本52份,同时检出阴性标本107份,抗污染PCR与斑点杂交检测血清HBVDNA的符合率为89.32%(159/178)结论抗污染PCR的特异性高,其敏感性高于斑点杂交.     

PCR检测血清中HBV—DNA及其临床意义

应用聚合酶链反应(PCR)结合Southern blot核酸杂交和DNA直接杂交技术,检测50例乙型肝炎病毒(HBV)感染后不同血清学标志的血清标本及5例无任何HBV血清学标志的血清标本中的HBV DNA,并与血清学检查结果比较。结果发现PCR结合Southern blot核酸杂交的灵敏度明显高于DNA直接杂交技术,而且还能直接反映患者血液是否有感染性。此外,前者还能直接反映病毒在体内的复制情况,澄清模棱两可的血清学结果。     

斑点杂交法检测肝病患者TTV感染状况初探

目的 探讨斑点杂交法在检测肝病患者ＴＴ病毒（ＴＴＶ）感染状况中的应用价值。方法 提抽患者血清中ＤＮＡ,分别采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）及斑点杂交技术检测其中的ＴＴＶ病毒ＤＮＡ。结果 在３０份非甲～非戊型肝炎患者血清中,ＰＣＲ方法检出１１份为ＴＴＶ阳性,检出率为３６．７％。采用斑点杂交法检出３份阳性血清,阳性率为１０％。制备的探针具有ＴＴＶ特异性,可检出相当于１０＾６拷贝的病毒ＤＮＡ。结论 以地高辛标     

原位杂交检测肝组织中TTV DNA研究

目的:研究输血传播病毒(transfusion transmitted virus,TTV)DNA在肝炎患者肝组织中的存在,证实TTV是一种新型嗜肝病毒。方法:用地高辛标记TTV DNA(Dig-TTV DNA)探针,以原位杂交技术进行血清PCR检测,发现单一TTV感染13例,TTV、HBV混合感染4例,非甲～非庚和非TTV感染的肝炎患者6例。与此同时对肝组织进行检测,进行肝组织学、免疫组化、肝功能和临床特点等分析。结果:23例肝组织中TTV DNA阳性15例(65.22％),其中单一TTV感染11例(84.62％),TTV DNA混合感染者3例(75.00％),非甲～非庚和非TTV感染1例,临床分型急性肝炎5例(55.56％),慢性肝炎10例(71.43％)。TTV DNA阳性细胞在急性肝炎患者系弥漫分布于肝小叶内,在慢性肝炎于汇管区附近较为密集。TTV DNA主要存在于肝细胞核,少数位于肝细胞浆内,以核型为主。23例肝组织都有不同程度病理改变,大多数较轻,12例肝组织免疫组化检测HBsAg、HBcAg、HCVNS_3、HGVNS_5均阴性,肝功能均有轻～中度损害,大多数病人有乏力、纳差、尿黄症状,部分病人有肝脾肿大、皮肤或巩膜黄染体征。结论:TTV可能是一种新型嗜肝病毒。     

分级定量PCR检测血清HBV DNA

目的利用竞争ＰＣＲ法建立分级测定ＨＢＶＤＮＡ含量的定量方法．方法设立３个标准竞争模板（１０２ｃｏｐ,１０４ｃｏｐ,１０６ｃｏｐ）,分别和恒量的待测模板混合,分别进行４０,３０,２０次循环的ＰＣＲ扩增,最后凝胶电泳分离待测模板和竞争模板的ＰＣＲ产物,测定两者的荧光强度的比值,计算待测模板的初始量．结果对乙型肝炎血清ＨＢＶＤＮＡ定量表明,１２份ＨＢｅＡｇ阳性血清,ＨＢＶＤＮＡ的血清浓度在６×１０７～１×１０１１ｃｏｐ／Ｌ,而１２份ＨＢｅＡｂ阳性血清只有７份可检出ＨＢＶＤＮＡ,它们的血清浓度均在３×１０８ｃｏｐ／Ｌ以下,其余５份用该ＰＣＲ方法,检测不到．结论该方法可用于ＨＢＶＤＮＡ以及其他病原体ＤＮＡ的定量     

定量PCR检测血清中乙型肝炎病毒DNA及其意义

目的检测血清中乙型肝炎病毒DNA拷贝数,并了解HBV感染的不同血清学指标组合相应的HBV DNA含量分布,以指导临床。方法 采用定量PCR和定性PCR方法,检测216份不同临床类型血清标本的HBV DNA,再用ELISA方法测定HBV-M,统计不同免疫指标组合的HBV DNA平均含量。结果病毒量分为高、中、低三度,大于107拷贝mL-1为高滴度:107-105拷贝mL-1为中等滴度;105拷贝mL-1以下为低滴度。60例HBsAg(+)HBeAg(+)HBcAb(+)血清,HBV DNA全部阳性,平均含量为1.9×108拷贝mL-1。51例HBsAg(+)HBeAb(+)HBcAb(+)血清,HBV DNA平均含量为5.4×106拷贝mL-1;33例HBsAg(+)HBeAb(+)血清,HBV DNA平均含量为7.5×105拷贝mL-1;114例HBsAb(+)HBeAb(+)HBeAb(+)血清,HBV DNA平均含量为1.8×105拷贝mL-1。定性和定量PCR阳生率分别为59.3％和61.6％。两种方法相对符合率为94.5％。结论定量PCR可真实反应HBV感染、复制及病程变化,对乙型肝炎临床诊断及治疗均有较大的指导意义。     

原位杂交检测肝组织中TTV DNA的研究

研究ＴＴＶＤＮＡ在肝炎患者肝组织中的表达 ,证实ＴＴＶ是一种新型肝炎病毒。用地高辛标记ＴＴＶＤＮＡ探针 ,以原位杂交技术对血清ＰＣＲ检测为单一ＴＴＶ感染者 13例 ,ＴＴＶ、ＨＢＶ混合感染者 4例和非甲～庚型、非ＴＴＶ感染的肝炎患者 6例的肝组织进行检测 ,同时进行肝组织学、免疫组织化学、肝功能和临床特点等分析。结果表明 ,2 3例肝组织中ＴＴＶＤＮＡ阳性 15例 ( 65.2 % ) ,其中单一ＴＴＶ感染者11例 ( 84 .6% ) ,ＴＴＶ、ＨＢＶ混合感染者 3例 ( 75.0 % ) ,非甲～庚型、非ＴＴＶ型肝炎 1例 ( 16.7% )。按肝炎临床分型 ,急性肝炎…     

血液透析患者血清和外周血单个核细胞中TTV DNA检测的意义

一、资料与方法 采集广州中山医科大学第二附属医院等３所综合性大医院血液净化中心７４例血液透析患者血清,并提取外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）,抽检部分末次洗涤液ＴＴＶＤＮＡ均阴性。所有患者均诊断为慢性肾功能衰竭,男４４例,女３０例,平均年龄（５３±１２）岁,平均透析次数（２２６±３４４）次。 血清肝炎病毒标志物的检测ＨＢｓＡｇ、抗－ＨＣＶ采用第二代酶免疫分析（ＥＩＡ）技术检测;ＴＴＶ　ＤＮＡ的检测采用ＰＣＲ方法。 统计学分析：计数资料的分析采用ｘ２检验。 二、结果 １．血清及ＰＢＭＣ中 ＴＴＶ ＤＮＡ检测…     

急性非甲-庚型肝炎病人血清TTV DNA检测分析

目的为了解非甲-庚型肝炎的病原学感染状况,对献血员24例、急性非甲-庚型肝炎31例血清采用PCR技术进行输血传播病毒(TTV)检测。结果献血员TTV DNA阳性率为12.5％(3/24);急性非甲-庚型肝炎阳性率为41.94％(13/31),两者差异有非常显著意义(P<0.001)。结论 TTV除导致肝炎外还能以携带方式存在,深入研究TTV对肝炎和携带者的防治具有重要意义。     

各型病毒性肝炎TTV DNA检测结果

各型肝炎中及献血者中ＴＴＶ合并感染情况。设计特异性引物,采用半套式ＰＣＲ法,对辽沈地区２０例散发性非甲－非庚型肝炎,２０例慢性乙型肝炎,２０例慢性丙型肝炎及４０例重型肝炎与５０例献血者血清进行ＴＴＶ ＤＮＡ检测。非甲－非庚型肝炎血清阳性１例（５％）;重型肝炎阳性９例（２２．５％）;慢性乙肝阳性５例（２５％）;慢性丙肝阳性３例（１５％）;献血者未查出ＴＴＶ ＤＮＡ阳性者。二株ＴＴＶ ＤＮＡ扩增产物的     

慢性活动性肝炎血清HBV DNA的PCR检测

应用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction PCR)对抗—HBs、抗—HBc 单项和联合阳性及乙肝五项标志物全阴性共49例慢性活动性肝炎患者,进行 HBV DNA 检测。结果总阳性率59.1％(29/49)。其中单项抗—HBs 阳性17例中检出5例(29.6％);抗—HBc 15例中检出14例(93.0％);两项均阳性11例中检出9例(88.8％);乙肝标志物全阴6例中检出1例。提示慢性活动型肝炎病例,即使抗—HBs 阳性、乙肝标志物全阴性仍可能潜在地存在低水平的 HBV 复制,只能用 PCR 法测出其阳性。这可能是其它的检测法认为慢性活动型肝炎病情不稳定的原因。     

PCR检测石蜡切片中HBV DNA

目前,PCR检测乙肝病毒DNA多为血清标本,而对肝组织尤其是石蜡包埋组织方面应用报道甚少。我们尝试把此项技术用于检测石蜡包埋组织中HBV DNA,并与血清检测进行了对照研究。     

PCR和DNA斑点杂交分析贝氏柯克斯体的核酸标识

目的确认贝氏柯克斯体特异的核酸标识。方法用PCR法特异扩增贝氏柯克斯体24kDa,27kDa、30kDa、34kDa、热休克蛋白B等表面蛋白基因,以及23SrRNA插入序列和16S23SrRNA间区序列等基因片段,从DNA电泳凝胶中回收纯化PCR扩增的目的DNA片段,用地高辛随机引物标记法标记目的DNA片段作探针,行DNA斑点杂交。结果PCR扩得的7个贝氏柯克斯体DNA片段探针只能与贝氏柯克斯体基因组DNA杂交而不能与其他种属的立克次体的基因组杂交,每种探针检测同源目的基因的灵敏度可达到10pg。结论这7种贝氏柯克斯体DNA片段是贝氏柯克斯体特异的DNA片段,可作为贝氏柯克斯体的核酸标识,基于它们的序列设计的引物和探针具有极高的贝氏柯克斯体种特异性。     

肝组织中TTV DNA原位检测及临床病理分析

目的：探讨非甲－非庚型急慢性病毒性肝炎患者肝细胞中ＴＴＶ（ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ－ｔｒａｎｓ－ｍｉｔｔｅｄ ｖｉｒｕｓ，ＴＴＶ）ＤＮＡ表达与临床病理的关系．方法：采用地高辛素标记ＴＴＶ ＤＮＡ探针以原位杂交技术对１９例血清学病毒标记非甲－非戊型、免疫组化检测肝细胞中ＨＧＶ ＮＳ５阴性的病毒性肝炎患者石蜡炎患者石蜡包埋肝组织进行了检测，并对其中７例相应血清进行了ＰＣＲ检测。结果：急慢性病毒性肝炎肝组     

定量PCR检测乙型肝炎患者血清HBV DNA及其临床意义

目的:了解不同临床类型乙型肝炎患者HBV DNA含量并探讨其临床意义。方法:应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测163例乙型肝炎患者血清HBV DNA含量,应用ELISA法检测上述患者HBV感染血清免疫学标志物(HBV-M),并对两者进行比较。结果:血清HBV DNA水平在不同乙型肝炎临床类型中无显著性差异(P>0.05);与HBV-M对比,HBsAg、HBeAg、抗-HBc阳性病人的检出率为87.76％,HBsAg、抗-HBe、抗HBc病人的检出率为45.71％,HBsAg、抗-HBc病人的检出率为42.86％,抗-HBc单项阳性病人的检出率亦达40.00％;血清HBVDNA含量与黄疸的程度及转氨酶水平的高低未见相关。结论:提示HBV DNA的复制状态与不同乙型肝炎临床类型无明显相关关系;HBV DNA含量高低与肝功能受损程度亦无相关关系。     

PCR检测HBV感染患者血清HBV DNA的临床意义

目的探讨急、慢性乙型肝炎及与ＨＢＶ感染相关的肝硬变和肝癌患者血清ＨＢＶＤＮＡ的临床意义．方法应用ＰＣＲ技术检测不同ＨＢＶ感染２０５例，患者血清ＨＢＶＤＮＡ，并与正常人２０例作比较．结果ＨＢＶ感染患者２０５例血清ＨＢＶＤＮＡ阳性率为６９３％，慢性乙肝、乙肝后肝硬变和肝癌患者的阳性率分别为７６４％，７１９％和７００％，显著高于急性乙肝患者２１７％的阳性率（Ｐ＜００１）；ＨＢｅＡｇ（＋）患者血清ＨＢＶＤＮＡ阳性率为９３６％，显著高于ＨＢｅＡｇ（－）抗ＨＢｅ（＋）／（－）和ＨＢｓＡｇ（－）患者的阳性率（４５６％，２５０％和１２５％，Ｐ＜００１）；血清ＨＢＶＤＮＡ阳性和阴性两组患者的血清ＡＬＴ水平无明显差异（Ｐ＞００５）．结论血清中ＨＢＶＤＮＡ持续存在可能与乙型肝炎的慢性化有关，而与ＨＢＶ感染患者的肝损伤无明显关系     

PCR快速检测临床标本中结核杆菌的研究

本文用PCR(聚合酶链反应)技术检测238份临床标本中结核杆菌,并与培养及ELISA法进行对比观察。结果:用PCR扩增出123bp区带者142份(59.7％);培养出结核杆菌者55份(23.2％)。139份体腔液及尿标本还同时检测了抗PPD抗体,其中50份标本阳性(36％)。PCR检出率明显高于培养及ELISA(P<0.005)方法简便,快速,是一种检测结核杆菌的实用技术。