SH-SY5Y神经细胞中α3尼古丁受体基因表达沉默对β分泌酶蛋白表达的影响

目的 研究α3神经型尼古丁受体(nAChR)基因沉默对β分泌酶(BACE)蛋白表达的影响.方法 稳定转染α3 nAChR siRNA表达质粒及空质粒的SH-SY5Y神经细胞与正常对照组细胞用Real time-PCR和Western印迹法检测α3 nAChR mRNA表达和蛋白水平表达,以评价RNA的干扰效率;用蛋白质印迹方法 分别检测细胞中β分泌酶两个亚型(BACE1和BACE2)蛋白表达水平的变化.结果 稳定转染α3 nAChR siRNA表达质粒的细胞克隆株,与空质粒和正常对照组相比BACE1蛋白表达水平增加,BACE2蛋白表达水平减少.结论 α3 nAChR可以通过增加BACE2蛋白表达水平及减少BACE1蛋白表达水平,影响Aβ生成从而减少Aβ的神经毒性作用,发挥神经保护作用.     

β-淀粉样蛋白对大鼠大脑α7尼古丁受体表达和学习记忆能力的影响

目的研究β-淀粉样蛋白(Aβ1~42)对大鼠大脑神经型尼古丁受体α7亚单位表达及学习记忆能力的影响,探讨这些改变在阿尔茨海默病(AD)发病机制中的作用。方法用立体定向法将Aβ1~42(1mg/ml,5μl)注入Wistar大鼠侧脑室,用免疫组化方法测定大鼠大脑中Aβ1~42的沉积,用Western印迹法和RT-PCR方法分别测定神经型尼古丁受体α7亚单位在蛋白和基因水平的表达,用水迷宫法检测大鼠的学习记忆能力。结果与对照组比较,经Aβ1~42侧脑室注射后的大鼠大脑皮层出现明显Aβ1~42沉积;神经型尼古丁受体α7亚单位蛋白质表达水平明显降低;α7亚单位mRNA表达水平明显升高;大鼠学习记忆能力明显降低。结论Aβ1~42引起神经型尼古丁受体α7亚单位的表达明显改变,并导致大鼠学习记忆力降低,可能是AD发病机制中的重要因素。     

Notch信号通路阻断对SH-SY5Y细胞α3神经型尼古丁受体水平的影响

目的研究Notch信号通路阻断对SH-SY5Y细胞α3神经型尼古丁受体(nAChR)水平的影响。方法用Notch信号通路阻断剂DAPT阻断细胞Notch信号通路后用Real Time PCR和Western印迹方法分别检测细胞中α3神经型尼古丁受体mRNA和蛋白水平的变化。结果 Notch信号通路阻断之后α3神经型尼古丁受体蛋白和mRNA表达都增加。结论 DAPT能抑制SH-SY5Y细胞Notch信号转导通路,Notch信号转导通路的活化可能与神经细胞α3神经型尼古丁受体的正常分泌及胆碱能信号传递密切相关。Notch信号通路阻断也可能通过减少γ-分泌酶导致SHSY5Y细胞中Aβ1⁴2/43的表达量减少,最终通过反馈调节导致α3神经型尼古丁受体水平表达增加。     

α7尼古丁受体mRNA表达抑制对SH-SY5Y细胞氧化应激水平的影响

目的探讨通过RNA干扰技术抑制神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)中α7尼古丁乙酰胆碱受体(nAChR)基因表达后细胞氧化应激水平的变化,以了解该受体的神经保护作用。方法 SH-SY5Y细胞转染针对α7 nAChR的小分子干扰RNA,Real-time PCR法检测转染细胞中α7 nAChR mRNA水平蛋白质印迹方法检测蛋白表达水平;并用Aβ1～42处理培养细胞,比色法测定细胞脂质过氧化产物水平、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性。结果转染siRNA后,α7 nAChR mRNA水平和蛋白表达水平分别降低了81.7%和76.9%;细胞脂质过氧化水平升高38.4%;SOD和GSH-PX活性分别降低30.3%和21.1%。用Aβ1～42处理细胞后氧化应激水平升高,且转染siRNA后能增强Aβ的神经毒性作用。结论α7 nAChR基因表达抑制后能增强细胞氧化应激水平,同时增强Aβ的神经毒性作用。     

尼莫地平对胎鼠神经元烟碱型胆碱能受体缺损的干预及意义

采用β-淀粉样多肽(Aβ1-40)诱导神经元烟碱型胆碱能受体(nAChR)缺损模型,观察尼莫地平干预后模型α4、α7nAChR亚单位蛋白水平及神经元细胞变化。结果,尼莫地平干预后胎鼠皮质细胞、胎鼠海马细胞、PC12细胞的细胞活性分别升高至0.464±0.052、0.329±0.032及0.369±0.029(P<0.01、<0.01、<0.05);α4、α7nAChR亚单位蛋白灰度植分别为0.478±0.04,0.455±0.048(P均<0.05)。提示尼莫地平可显著抑制Aβ诱导的nAChR缺损,其机理为阻断钙离子内流,抑制Aβ的神经毒性作用,上调nAChR。     

EGFR在TGFβ1诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞转分化中的作用

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)在转分化因子β1(TGFβ1)体外诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞转分化中的作用。方法体外培养Ⅱ型肺泡上皮细胞系细胞-A549细胞,以TGFβ1刺激,倒置相差显微镜观察细胞形态学的变化;收集不同时段的细胞,应用RT-PCR检测TGFβ1干预前后E-钙黏蛋白(E-cadherin)和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA表达变化;Western blot观察E-cad、α-SMA和信号转导蛋白EGFR表达的变化。结果倒置相差显微镜观察到TGFβ1刺激后A549细胞由鹅卵石状变为梭形,形态如同肌成纤维细胞;TGFβ1刺激A549细胞能导致E-cadherin mRNA和蛋白表达下调;α-SMA mRNA和蛋白表达上调;磷酸化EGFR(p-EGFR)表达上调。结论 TGFβ1能在体外诱导肺泡上皮细胞向间质细胞转分化,其机制与EGFR信号通路的活化相关。抑制EGFR的活化可能为临床防治肺纤维化提供新的途径。     

钙离子调节Aβ淀粉样蛋白堆积的作用机制

<正>老年痴呆(AD)是一种常见的神经退行性疾病,主要特征是β淀粉样蛋白(Aβ)堆积和神经纤维缠结,主要区域是内嗅皮质和海马区〔1〕。临床表现为认知功能下降,包括远近期记忆力障碍,分析判断能力衰退,情绪改变,行为失常,记忆损害等,目前还没有效的治疗方法〔2〕。Aβ可以通过激活钙敏感受体,引起的AD激活神经细胞释放Aβ42,导致星形胶质细胞聚集和Aβ42聚集。早老蛋白(PS-1)在雌激素受体(ER)引起钙流出,     

SH-SY5Y细胞α7尼古丁受体基因抑制对APP代谢的影响

目的采用RNA干扰技术抑制神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)中α7神经型尼古丁乙酰胆碱受体(nAChR)基因表达,了解对β淀粉样前体蛋白(APP)代谢中的γ-分泌酶两个重要组分早老蛋白(PS)及单过性跨膜蛋白(NCT)水平的影响。方法 SH-SY5Y细胞转染针对α7nAChR的小干扰RNA(siRNA),用实时PCR法和Western印迹法分别测定细胞中α7 nAChR、PS及NCT在mRNA和蛋白表达水平的变化。结果转染α7 nAChR siRNA后,与对照组相比,α7 nAChR mRNA及蛋白表达水平明显降低;PS蛋白mRNA及蛋白水平均升高,而NCT水平无明显变化。结论α7 nAChR基因表达抑制后γ-分泌酶组分之一PS的水平明显升高,这种改变可能与α7 nAChR基因表达抑制后β-淀粉样蛋白(Aβ)的产生增多有关,可能与阿尔茨海默氏病(AD)的发病有一定的关系。     

当归芍药散神经保护作用的实验研究

目的 观察当归芍药散(DSS)的神经保护作用,为阿尔茨海默病(AD)防治提供理论依据.方法 按DSS经典方制备DSS水煎剂后以5%、10%、20%三种体积分数分别灌服家兔1 d和10 d(观察1组～观察6组),对照组灌服等量生理盐水.末次灌胃给药1 h后处死家兔,由枕骨大孔处抽取脑脊液(DSS脑脊液和空白脑脊液).分别采用上述各组脑脊液及Aβ1-40处理嗜铬细胞瘤细胞株PC12细胞,MTT比色法观察细胞活性变化,免疫组化法观察α4烟碱型乙酰胆碱能受体(α7nAchR)阳性表达情况.结果 Aβ1-40处理者PC12细胞活性和α7nAchR阳性细胞数明显小于空白脑脊液处理者(P<0.01);灌服20%DSS脑脊液处理者PC12细胞活性及α74nAchR阳性细胞数明显高于Aβ1～40处理者.结论 DSS可能通过抑制β-淀粉样多肽的神经毒性作用而改善AD患者的学习记忆功能,机制为调节细胞α7nAChR表达.     

α1整合素活化在β淀粉样蛋白诱导神经细胞死亡中的作用

目的探讨神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)中β淀粉样蛋白(Aβ)诱导丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路活化的上游影响因素。方法选择SH-SY5Y为靶细胞,首先用MAPK信号通路上游抑制剂处理细胞,待细胞培养1 h之后,加入Aβ42纤维聚集体,细胞培养24 h后进行检测。首先采用甲氮甲唑蓝(MTT)法测定了细胞的存活率,然后利用Western印迹检测磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶(p-ERK)和ERK的蛋白表达水平,从而检测MAPK信号通路的激活水平。结果用锯鳞血抑肽或α1整合素蛋白封闭性抗体可以有效抑制Aβ引起的细胞死亡,并且阻止Aβ成纤维诱导MAPK的激活水平的提高(P<0.05)。用α1和β1整合素蛋白封闭抗体同时作用细胞时,得到了相似的结果。但是如果只用β1整合素蛋白封闭抗体单独作用细胞时,不能阻止Aβ成纤维诱导细胞死亡和MAPK的激活水平的提高。结论α1整合素,α1和β1整合素复合体是Aβ诱导SH-SY5Y细胞中MAPK信号通路激活从而介导细胞死亡的重要因素。推测α1整合素蛋白和α1、β1复合体可以作为治疗性干扰Aβ信号通路的靶点。