淫羊藿苷对阿尔茨海默病细胞模型糖原合成酶激酶-3β表达的影响及机制

目的研究淫羊藿苷(ICA)对阿尔茨海默病(AD)细胞模型糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)表达的影响及机制。方法以Aβ25~35孵育PC12细胞制备的AD细胞模型为研究对象,分为对照组、β-淀粉样蛋白(Aβ)组、ICA组、PI3K/Akt信号通路的经典抑制剂(LY)组、ICA+LY组,Western印迹法检测各组的蛋白激酶B(Akt)、p-Akt、GSK-3β、p-GSK-3β的表达。结果与对照组相比,Aβ组的p-Akt水平、p-GSK-3β水平明显下降(P0.01)。与Aβ组相比,ICA组的p-Akt水平、p-GSK-3β水平明显增高(P0.01)。与ICA组相比,ICA+LY组p-Akt水平、p-GSK-3β水平明显下降(P0.01)。结论 ICA可能通过PI3K/Akt信号通路,上调p-Akt、p-GSK-3β蛋白表达,发挥其保护作用。     

苦酸通调方对HepG2细胞胰岛素抵抗模型中IRS-1、PI3K、Akt蛋白表达的影响

目的观察苦酸通调方对HepG2细胞胰岛素抵抗(IR)模型中内胰岛素受体底物(IRS)-1、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)信号分子的影响并探讨相关机制。方法通过0.25 mmol/L棕榈酸联合30 mmol/L高糖孵育24 h诱导HepG2 IR细胞模型,予以不同浓度的苦酸通调方(50,100,200μg/ml)。葡萄糖试剂盒检测细胞培养液上清葡萄糖含量,肝糖原试剂盒测定HepG2细胞内肝糖原含量,蛋白免疫印迹法(Western印迹)检测细胞内IRS-1、PI3K、Akt的蛋白表达。结果与模型组相比,苦酸通调方干预后,呈剂量依赖性增加IR HepG2细胞的葡萄糖消耗量及细胞内肝糖原含量(P<0.05),上调IRS-1、PI3K、Akt蛋白磷酸活化水平(P<0.05)。结论苦酸通调方改善2型糖尿病IR作用可能与影响IRS-1、PI3K、Akt蛋白表达相关。     

氧化苦参碱对高果糖饮食诱导小鼠脂肪肝和肝胰岛素抵抗的影响

目的 观察氧化苦参碱对高果糖饮食诱导小鼠肝脏脂质沉积和肝胰岛素敏感性的影响.方法 雄性C57BL/J6小鼠分为对照组、高果糖组和氧化苦参碱组(自高果糖喂养第4周后给予氧化苦参碱40 mg/kg),喂养8 w后对小鼠行腹膜下葡萄糖耐量试验(ipGTT),处死小鼠后测定各组空腹血糖、血胰岛素及肝脏甘油三酯(TG)含量,通过比较各组小鼠注射胰岛素后肝脏的磷酸化Akt/总Akt (p-Akt/t-Akt)和磷酸化GSK-3α/β/总GSK-3 α/β(p-GSK-3 α/β/t-GSK-3α/β)表达的比值变化评估肝脏胰岛素敏感性.结果 与对照组相比,高果糖组的血葡萄糖、血胰岛素、ipGTT曲线下面积及肝TG均显著增加(均P＜0.01);氧化苦参碱干预组的血葡萄糖、血胰岛素、葡萄糖耐量试验曲线下面积及肝TG均较高果糖组减低(均P＜0.01);与对照组相比,高果糖组胰岛素注射肝内的p-Akt/t-Akt及p-GSK-3 α/β/t-GSK-3 α/β均显著降低(均P＜0.01),而氧化苦参碱组胰岛素注射后肝内的p-Akt/t-Akt及p-GSK-3β/t-GSK-3β较高果糖组显著升高(均P＜0.01).结论 慢性高果糖喂养可引起小鼠肝脏脂质沉积和肝胰岛素抵抗,氧化苦参碱治疗可改善高果糖喂养诱导的脂肪肝和肝胰岛素敏感性.     

nesfatin-1在胰岛素抵抗骨骼肌细胞中对PI3K/AKT信号通路的影响

目的探讨过表达新型饱食分子蛋白(nesfatin-1)对L6骨骼肌胰岛素抵抗及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路和下游糖原合成酶激酶(GSK)-3β、葡萄糖转运蛋白(GLUT)-4表达的影响。方法建立L6细胞胰岛素抵抗模型后,用过表达nesfatin-1的腺相关病毒(AAV)和空载对照腺相关病毒(PC)感染L6细胞,将细胞分为四组,分别为空载对照腺相关病毒组(PC组),PC+棕榈酸(PA)组,过表达nesfatin-1组,nesfatin-1+PA组,四组均加入100 nmol/L重组人胰岛素(Insulin),PC+PA组和nesfatin-1+PA组再加入250μmol/L PA处理24 h后收集培养基上清,用葡萄糖过氧化物酶方法测定上清液中葡萄糖含量,用Western印迹检测PI3K、AKT及其下游信号分子GSK-3β、GLUT-4的蛋白表达变化。结果与PC组比较,过表达nesfatin-1组p-AKT、GSK-3β、GLUT-4蛋白表达水平明显增高(P<0.05);与PC+PA组相比,nesfatin-1+PA组p-AKT、GSK-3β、GLUT-4蛋白表达水平明显增高(P<0.05);与nesfatin-1组相比,nesfatin-1+PA组p-AKT、GSK-3β、GLUT-4蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。结论过表达nesfatin-1可显著增加骨骼肌细胞对葡萄糖的摄取,减轻胰岛素抵抗,并经PI3K-AKT通路上调下游GSK-3β、GLUT-4的表达。     

苦酸通调方对HepG2细胞胰岛素抵抗模型中脂代谢及AMPK、ACC、SREBP-1蛋白的影响

目的观察苦酸通调方对胰岛素抵抗HepG2细胞内AMP活化蛋白激酶(AMPK)/乙酰辅酶A羟化酶(ACC)/固醇调节元件结合蛋白(SREBP)-1信号分子的影响。方法通过0.25 mmol/L棕榈酸联合30 mmol/L高糖孵育24 h诱导HepG2胰岛素抵抗细胞模型。噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞存活率确定给药浓度。荧光标记2-脱氧葡萄糖(2-NBDG)法检测细胞葡萄糖摄取能力,油红O染色观察细胞内脂质累积情况,三酰甘油试剂盒检测细胞内三酰甘油含量,Western印迹法检测细胞内AMPK、ACC、SREBP-1的蛋白表达水平。结果与模型组相比,苦酸通调方干预后,呈剂量依赖性增加胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖摄取量,减少细胞内三酰甘油含量(P<0.05),上调AMPK、ACC蛋白磷酸活化水平,减少SREBP-1蛋白表达(P<0.05)。结论苦酸通调方可能通过调控AMPK/ACC/SREBP-1信号转导过程,增强肝细胞葡萄糖摄取能力,减少细胞内三酰甘油蓄积,从而改善HepG2细胞的胰岛素抵抗状态。     

蛋白激酶C在软脂酸诱导HepG2细胞胰岛素抵抗中的作用

目的从蛋白激酶C(PKC)信号通路角度,探讨游离脂肪酸(FFA)引起肝脏胰岛素抵抗(IR)的可能机制。方法培养HepG2细胞,同时设立对照组、软脂酸(PA)组、高胰岛素组。软脂酸组、高胰岛素组分别用250μmol/L PA、5×10-7mol/L胰岛素处理24h。然后对照组、软脂酸组再根据胰岛素刺激前加( )与不加(-)PKC抑制剂白屈菜红碱盐酸盐(chelerythrine chloride,CC)5μmol/L预处理1h,随机分为两亚组:对照组(-)、对照组( )、PA组(-)、PA组( )。葡萄糖氧化酶法测定胰岛素刺激后12h葡萄糖消耗量,蒽酮法测定胰岛素刺激后3h点细胞内糖原含量,Western blotting技术检测15min点细胞内P-Ser473PKB、P-Ser21/9GSK-3α/β水平。结果PA组(-)与高胰岛素组葡萄糖消耗量无统计学差异(P=0.523)。葡萄糖消耗量、细胞内糖原含量、P-Ser473PKB、P-Ser21GSK-3α、P-Ser9GSK-3β水平均显示,PA组(-)与对照组(-)比较显著降低(P值依次为0.000,0.000,0.004,0.004,0.028),对照组( )与对照组(-)比较略有升高但无显著性差异;PA组( )与PA组(-)比较显著升高(P值依次为0.000,0.014,0.043,0.041,0.035)。结论PA(250μmol/L)体外成功诱导了HepG2细胞产生IR,PKC信号通路在FFA引起肝脏IR中起着重要作用。     

白藜芦醇通过PI3K/Akt/GSK-3β通路对6-OHDA致帕金森病小鼠神经退行性病变改善的作用研究

目的探讨白藜芦醇通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶(Akt)/糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)通路改善6-羟基多巴胺(6-OHDA)所致帕金森病小鼠神经退行性病变。方法将30只SPF级C57BL/6小鼠随机分为3组,其中6-OHDA致病组和白藜芦醇治疗组(Res治疗组)脑内分别注射6-OHDA诱导帕金森病模型,正常组注射等量生理盐水,造模后Res治疗组给予Res灌胃治疗(20 mg/kg),6-OHDA致病组和正常组给予等量生理盐水灌胃,14 d后腹腔注射吗啡,观察小鼠行为学变化,TUNEL染色观察脑黑质内多巴胺神经元凋亡,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测小鼠脑黑质内Caspase-3表达,蛋白印迹法(Western Blot)检测实验小鼠脑黑质内PI3K、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化糖原合酶激酶3(p-GSK-3β)蛋白含量。结果 Res治疗组小鼠30 min内向右旋转圈数低于6-OHDA致病组;6-OHDA致病组小鼠脑黑质内多巴胺神经元凋亡率高于正常组(P0.05),Res治疗组小鼠脑黑质内多巴胺神经元凋亡率低于6-OHDA致病组(P0.05);6-OHDA致病组小鼠脑黑质内Caspase-3较正常组增加,Res治疗组小鼠脑黑质内Caspase-3含量较6-OHDA致病组降低(P0.05)。6-OHDA致病组小鼠脑黑质内PI3K、p-Akt、p-GSK-3β蛋白含量均低于正常组(P0.05),且Res治疗组PI3K、p-Akt、p-GSK-3β蛋白含量较6-OHDA致病组升高(P0.05)。结论白藜芦醇可有效改善由6-OHDA诱导的帕金森病小鼠运动功能障碍,并降低脑黑质内多巴胺神经元凋亡,这种抑制作用可能通过激活PI3K/Akt/GSK-3β信号通路,抑制GSK-3β活性实现。     

丝裂原活化蛋白激酶通路在GSK-3β对于巨噬细胞活化过程中的作用

目的探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路在GSK-3β对于巨噬细胞活化过程中可能的作用。方法生长状态良好的RAW264.7细胞分为3组:对照组、脂多糖(LPS)组及GSK-3抑制剂SB216763干预组。在两个时间点(12 h、24 h),采用Western blotting法检测GSK-3β、p-GSK-3βser9、MAPK(c-jun氨基端激酶、细胞外信号调节激酶、p-38)表达情况,Elisa法检测细胞上清中TNF-α的变化,RT-PCR检测细胞中5-LO mRNA变化,电镜下观察RAW264.7细胞形态变化。结果 LPS组与对照组比较,p-GSK-3βser9/GSK-3β比值降低,活性升高;MAPK 3条信号通路:磷酸化的c-jun氨基端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)、p38表达增多;TNF-α和5-LO mRNA表达增多(P0.05);电镜下观察RAW264.7细胞出现形态改变,可见大量坏死物质。SB216763组与LPS组比较,p-GSK-3βser9/GSK-3β比值升高,活性降低;磷酸化JNK、ERK、p38表达出现不同时间不同程度改变;TNF-α和5-LO mRNA表达降低(P0.05);电镜下观察RAW264.7细胞形态较规则,仅见少量坏死物质。结论 MAPK通路在GSK-3β对于RAW264.7细胞活化过程中发挥一定的作用。     

软脂酸诱导HepG2细胞胰岛素抵抗及花生四烯酸防治作用的机制研究

目的 探讨高浓度软脂酸(PA)诱导HepG2细胞胰岛素抵抗(IR)的机制及花生四烯酸(AA)对IR的防治作用。方法 (1)用高浓度软脂酸(PA)或10^-7mol／L高胰岛素(HI)培养HepG2细胞建立具有IR的细胞模型，测定培养液中葡萄糖含量及细胞内糖原含量作为鉴定指标；(2)用Western blot检测胞内糖原合酶(GS)和蛋白激酶B(PKB)蛋白水平；(3)用磷脂酰肌醇3激酶(P13K)抑制剂Wortmannin(WT)探讨其对胰岛素信号通路的影响；(4)观察AA是否对PA引起的IR有防治作用。结果 (1)0．20mmol／L PA或川培养HepG2细胞36h后，培养液中葡萄糖含量极显著增高，细胞内糖原含量极显著减少；(2)高浓度PA使磷酸化的PKB(P-Ser473)蛋白水平显著减少，磷酸化的糖原合酶(P-Ser641 GS)蛋白水平极显著增加；(3)WT使对照组GS活性及胞内糖原含量极显著减少，HI组和PA组胞内糖原含量均无统计学差异，但各实验组PKB活性都极显著减少；(4)PA AA组培养液中葡萄糖含量显著低于PA组，GS和PKB活性及胞内糖原含量显著增加。结论 高浓度PA或HI培养HepG2细胞能够诱导IR，其机制可能是其引起胰岛素信号传递途径中自PKB下游到GS之间的信号通路受阻所致。AA能改善PA引起的IR。     

Urocortin-I通过激活Akt/GSK-3β改善I/R心肌单相动作电位及氧化炎症反应

目的研究Urocortin-I通过激活蛋白激酶B(Akt)/糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)通路,对缺血再灌注(I/R)心肌单相动作电位及氧化炎症反应的作用。方法制备离体心肌Langendorff灌注模型,并分为对照组、I/R组、Urocortin-I组、Urocortin-I+LY组。对照组进行常规灌流;I/R组给予常规预处理、Urocortin-I组给予Urocortin-I预处理、Urocortin-I+LY组给予Urocortin-I+LY294002预处理后,均进行缺血再灌注处理。比较4组间心肌酶、心肌梗死面积、单相动作电位、炎症因子、氧化应激产物、Akt/GSK-3β通路分子的差异。结果与对照组比较,I/R组乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、活性氧簇(ROS)、丙二醛(MDA)的含量及心肌梗死面积明显增加,APA、APD50、APD90的水平及p-Akt、p-GSK-3β的含量明显减少(P0.05)。与I/R组比较,Urocortin-I组LDH、CK-MB、TNF-α、IL-6、ICAM-1、ROS、MDA的含量及心肌梗死面积明显减少,APA、APD50、APD90的水平及p-Akt、p-GSK-3β的含量明显增加(P0.05)。与Urocortin-I组比较,Urocortin-I+LY组LDH、CK-MB、TNF-α、IL-6、ICAM-1、ROS、MDA的含量及心肌梗死面积明显增加,APA、APD50、APD90的水平及p-Akt、p-GSK-3β的含量明显减少(P0.05)。结论 Urocortin-I通过激活Akt/GSK-3β通路改善I/R心肌的单相动作电位及氧化炎症反应。