α-干扰素对活化的肝星状细胞早期凋亡的影响

目的:研究IFN-α对活化的大鼠肝星状细胞(HSC)凋亡的影响,进一步探讨IFN-α抗肝纤维化的机制.方法:将体外培养大鼠HSC分别给予不同浓度的IFN-α作用24 h后,采用四甲基偶氮唑蓝实验(MTT)测定活细胞数及应用流式细胞仪(flow cytometry)AnnexinV和PI双染方法将早期凋亡与中晚期凋亡和死细胞区分开,从而测定HSC的早期凋亡情况.结果:MTT实验观察到IFN-α作用于大鼠活化的HSC后,作用组活细胞数目减少,1×10~7及1×10~8U/L两个作用浓度组与对照组的A值比较有显著性差异(t=2.82,5.44,均P<0.05).流式细胞仪结果示HSC的早期凋亡率随干扰素浓度的增加而提高,1×10~7及1×10~8U/L两个作用浓度组与对照组比较早期凋亡率有显著性差异(t=4.31,5.07,均P<0.05).结论:诱导肝星状细胞早期凋亡可能是IFN-α抗肝纤维化的机制之一.     

α干扰素对肝星状细胞凋亡及其基因表达的影响

临床研究发现,α干扰素(IFN-α)有特异的抗肝纤维化作用而不依赖于其抗病毒作用,但其抗纤维化机制尚不清楚。目前IFN-α对活化的肝星状细胞(HSC)凋亡的影响未见报道。以体外培养的鼠HSC为研究对象,观察IFN-α对活化状态的HSC凋亡及其相关基因表达的影响     

大黄蔗虫丸对大鼠肝星状细胞活化及增殖的影响

目的观察大黄蔗虫丸对大鼠肝星状细胞活化及增殖的影响。方法用链酶蛋白酶和胶原酶原位灌注消化正常大鼠肝脏,Nycodenz密度梯度离心分离肝星状细胞(HSC),在制备大黄蔗虫丸大鼠药物血清的基础上,温育HSC。MTT比色法测定细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡及增殖周期情况。结果药物血清对体外培养的HSC有抑制作用,且存在浓度剂量依赖关系,但作用较弱,需在20%以上方见到显著性差异(P<0.05),对HSC凋亡及细胞增殖周期则无显著影响(P>0.05)。结论大黄蔗虫丸对HSC增殖有一定抑制作用,但可能不是其抗肝纤维化作用的主要途径,其抗肝纤维化作用与诱导细胞凋亡无关。     

肝星状细胞凋亡及中医药干预作用的研究进展

越来越多的临床与实验数据表明,肝纤维化是可以逆转的。在这一逆转过程中,肝星状细胞(HSC)凋亡是研究热点之一。我们就HSC凋亡与肝纤维化、HSC凋亡的调节机制及中医药的干预作用等方面进行回顾与总结。 1 肝星状细胞的活化、凋亡与肝纤维化 1.1 HSC活化是肝纤维化形成的中心环节 活化的HSC形态与静息态不同,主要体现在:维生素A脂滴减少,     

胆管结扎大鼠肝纤维化模型中HSC的分离和培养及PARs的表达

目的探讨胆管结扎诱导的大鼠肝纤维化模型的制备和改良的Friedman方法分离和培养肝星状细胞(HSC),以及HSC蛋白酶活化受体(PARS)的表达与HSC活化的关系。方法采用结扎大鼠胆管诱导肝纤维化动物模型,应用改良的Friedman方法和Nycodenz一步密度梯度离心法分离肝纤维化大鼠HSC。病理学检测大鼠肝纤维化分级,免疫组化检测Desmin、α-SMA和PARS在HSC的表达,实验同时设立阴性对照。结果模型组大鼠肝纤维化病理学分级第1周为0,第2~3周多为1~2级,第4、5周为2~3级,第6周肝组织结构破坏,肝细胞变性坏死,炎性细胞浸润,病理学分级多为4级。改良的Friedman方法大鼠肝脏可获得5×106~1×107个细胞,存活率在96%以上,纯度平均为95%~96%。免疫组化检测α-SMA和PARS在培养的HSC于7、14天其表达逐渐增多,二者表达呈一致关系。结论结扎大鼠胆管建立的肝纤维化模型形成时间较短,实验中无有毒物质接触,是肝纤维化的理想模型;改良的Friedman方法分离和培养HSC,在保证HSC纯度的同时,提高了产量和活率,是研究HSC的有效方法;PARS的表达与HSC活化相关。     

姜黄素预防肝纤维化作用与肝星状细胞的关系

目的观察姜黄素预防大鼠肝纤维化作用及活化肝星状细胞(HSC)的数目、分布、凋亡等变化,并探讨两者间的关系。方法以四氯化碳制作大鼠肝纤维化模型,同时按每100 g体重分别给予20、10、5 mg姜黄素灌胃处理,设立正常对照组、肝纤维化组和阳性对照组;8周后处死大鼠,留取肝左叶行HE、Masson染色,参照肝纤维化半定量计分系统进行肝纤维化程度评分,免疫组织化学方法检测α-平滑肌肌动蛋白以了解活化HSC的数量变化, TUNEL与肌源性特异性标志物结合蛋白(Desmin)免疫组织化学双染法检测HSC凋亡。结果姜黄素可明显改善四氯化碳所致大鼠肝纤维化的病理学改变;α-平滑肌肌动蛋白在肝纤维化时表达明显增多,姜黄素使活化HSC数量减少, }[SC凋亡增加,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0．05),且具有量效关系。结论姜黄素可抑制HSC活化、增殖,诱导HSC凋亡,可能为预防肝纤维化的作用机制之一。     

抗血管生成药苏拉明对大鼠肝星状细胞的影响

目的 探讨抗血管生成药苏拉明(Suramin)对体外培养肝星状细胞(HSC)的影响及其抗纤维化的作用.方法 将大鼠HSC-T6体外培养,用MTT法初测细胞增殖趋势、流式细胞仪定性及定量检测HSC的细胞周期和增殖指数;免疫组织化学检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA);ELISA法测定细胞上清液中Ⅲ型胶原含量.结果 与对照组相比,不同浓度Suramin组的HSC增殖均受抑制,阻抑在细胞周期G1期,呈时间和剂量依赖性(P＜0.05).各浓度组α-SMA灰度值亦低于对照组(P＜0.05).不同浓度Suramin组的上清液中Ⅲ型胶原均低于对照组,TGF-β1,+Suramin组的含量介于TGF-β1组和Suramin组之间.结论 抗血管生成药Suramin抑制HSC增殖和活化,从而减轻Ⅲ型胶原沉积,起到抗肝纤维化作用,即Suramin在临床应用上有多靶点抗肝纤维化的优势,但其具体机制有待进一步研究.     

蕲艾提取液药物血清对大鼠肝星状细胞凋亡的影响

目的：研究蕲艾提取液药物血清对大鼠肝星状细胞（HSC）凋亡的影响。方法：传代培养的HSC—T6与蕲艾提取液药物血清共同培养24小时后,采用Annexin V／PI对双染结合流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：蕲艾提取液药物血清组早期细胞凋亡率显著高于空白对照组及生理盐水血清组（P〈0．01）,并且随着血清浓度的增加,HSC—T6早期细胞凋亡率逐渐增高,呈剂量依赖关系。结论：蕲艾提取液药物血清促进HSC凋亡,这可能是蕲艾提取液药物血清抗肝纤维化作用机制之一。     

肝纤维化的治疗

1.抗肝纤维化治疗某些新的认识:(1)肝星状细胞(HSC) 的活化过程,细胞因子、多肽、细胞外基质(ECM)等均能致HSC的活化。有报道丙型肝炎病毒(HCV)的核心蛋白与HBxAg也有直接激活HSC的作用。Canbay等指出肝细胞的凋亡能诱导HSC的活化,抑制肝细胞凋亡的一个小分子半胱氨酸-天门冬氨酸蛋白酶抑制剂近年已开始临床试用;还可以通过RNA干扰技术阻止肝细胞凋亡而达抗肝纤维化治疗目的。凋     

丹芍化纤胶囊对肝纤维化大鼠肝星状细胞增殖、活化及凋亡的影响

肝纤维化的发生机制主要是肝内细胞外基质（ECM）合成与降解失衡，表现为ECM大量沉积，肝星状细胞（HSC）在此过程中起关键作用。在肝纤维化恢复期，HSC的减少不是由于其表型从活化状态向静息状态转变，而是由于细胞凋亡的结果。本研究采用猪血清腹腔注射诱导免疫性肝纤维化大鼠模型，通过对结蛋白和α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）染色及TUNEL法来观察丹芍化纤胶囊对HSC增殖、活化和细胞凋亡的影响。     

丹参素治疗肝纤维化及其作用机制研究

目的 研究丹参素对大鼠免疫性肝纤维化的治疗作用及其怍用机制。 方法 用猪血清制作大鼠肝纤维化动物模型,自第8周起给予丹参素组大鼠腹腔注射丹参素300 mg·kg-1·d-1,同时给予模型对照组和正常对照组相同体积的双蒸水腹腔注射。第12周动物实验结束时,除留取一只模型组大鼠用原位循环灌流法提取肝星状细胞(HSC)外,其余大鼠全部处死提取血清检测透明质酸(HA)以及取肝脏标本切片做HE、VG染色。以MTT法观察不同浓度丹参素对HSC的增殖抑制作用,用流式细胞仪分析丹参素作用后HSC所处周期。 结果 丹参素干预组HA为(231.4±41.1)ng/ml,模型组(398.7±54.5)ng/ml,F=154.796,P<0.05。HE及VG染色示丹参素干预组肝纤维化程度明显轻于模型组;细胞试验表明50、100、200 mg/L丹参素对HSC作用后的MTT值(A值)分别为1.60×102±8.17×10-4、1.10×10-2±1.41×10-3和6.75×10-3±3.30×10-3,细胞对照组A值为7.18×10-2±1.71×10-3,F=1154.221,P<0.05。 结论丹参素对大鼠免疫性肝纤维化有明显的防治怍用。其主要机制为丹参素对HSC明显的增殖抑制作用。     

C/EBPα基因与PARs在肝星状细胞激活中的作用及关系

蛋白酶活化受体家族(protease activated receptors,PARs)可通过MAPK/ERK信号通路激活细胞内部分转录因子,从而参与肝纤维化的形成,是肝纤维化自动放大循环过程中主要炎症和纤维化受体.肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)的活化是肝纤维化的关键,HSC活化的显著变化是细胞内维生素A和脂滴的减少和消失,而转录因子CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)在维持脂肪细胞分化中起着重要作用,因此其对肝纤维化形成过程中肝星状细胞的活化具有负性调控作用,上调其表达可以抑制肝星状细胞增殖和活化,并诱导肝星状细胞的凋亡.深入研究PARs与C/EBPα的关系,将有助于对肝纤维化发生机制的理解,从而为抗肝纤维化治疗提供新的理论依据.     

黄芩甙抗肝星状细胞增殖及胶原合成的作用

目的研究黄芩甙对大鼠肝星状细胞活化、增殖及细胞外基质合成的作用,探讨黄芩甙抗肝纤维化的机制。方法采用胶原酶循环灌流法和密度梯度离心法分离肝星状细胞。不同浓度黄芩甙作用后,通过观察细胞贴壁及细胞形态变化情况来检测细胞活化：采用MTT法检测细胞增殖;免疫细胞化学法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原及层粘连蛋白的合成。结果黄芩甙（75～1200μg/mL）可抑制HSC活化,MTT法示75μg／mL、150μg／mL、300μmL、600μg／mL、1200μg／mL黄芩甙作用于HSC的A值分别为（0．060±6．53）×10^-2、（0．052±7．38）×10^9、（0．036±1．26）×10^-3、（0．023±1．72）×10^-3、（0．013±4．01）×10^-3,空白对照组A值为（0．065±1．32）×10^4,F值=1147．611,P〈0．05。黄芩甙可抑制活化的HSC增殖,减少HSCⅠ、Ⅲ型胶原及层粘连蛋白合成。结论黄芩甙抗肝纤维化作用主要机制可能为黄芩甙抑制肝星状细胞活化、增殖,抑制细胞胶原蛋白及糖蛋“等细胞外基质合成.     

清肝活血方对酒精性肝纤维化大鼠肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的:观察酒精性肝纤维化大鼠肝星状细胞(HSC)的增殖与凋亡以及清肝活血方的调节作用。方法:雄性Wistar大鼠60只,随机分为空白对照组、模型对照组以及清肝活血方高、中、低剂量组,采用复合因素制备酒精性肝纤维化动物模型。观察清肝活血方对酒精性肝纤维化大鼠肝功能、病理、α-平滑肌动蛋白(α-SMA)以及HSC增殖与凋亡的影响。结果:清肝活血方各剂量组能显著降低酒精性肝纤维化大鼠血清ALT、AST水平(P<0.05);清肝活血方高剂量组能显著降低血清γ-GT水平(P<0.05);各药物组均能在不同程度上减轻肝脏炎症和纤维化,减少肝组织α-SMA的表达(P<0.05),抑制HSC增殖并提高HSC的凋亡率。结论:清肝活血方能有效改善酒精性肝纤维化大鼠肝功能,减轻纤维化程度。其作用机制可能是通过抑制HSC的增殖并促进活化HSC凋亡实现的。     

脂联素对肝星状细胞增殖和活化的影响

目的 观察外源性脂联素对体外培养大鼠肝星状细胞(HSC)增殖和活化的影响,探讨脂联素对肝纤维化的影响.方法 外源性脂联素(0.1 μtg/mL、1μtg/mL、10 μg/mL)处理体外培养的HSC-T6,MTT法分析其对HSC-T6增殖的影响,Western blot法检测HSC-T6细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达.结果 脂联素对HSC的抑制作用随药物浓度的增加而增强,α-SMA的蛋白表达随脂联素浓度增加而下降.结论 脂联素能抑制HSC-T6的增殖,从而发挥抗肝纤维化作用.     

抗纤软肝颗粒对大鼠肝星状细胞增殖的影响

目的:探讨抗纤软肝颗粒(KXRG)对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖的影响。方法:传代培养的HSC-T6(肝星状细胞系)与KXRG(1.25mg/ml、2.5mg/ml、5mg/ml)及其药物血清(5%、10%、20%)共同培养72小时后,应用MTT法测定细胞增殖、流式细胞仪测定HSC细胞周期各时相的DNA含量。结果:KXRG及药物血清均能显著抑制HSC的增殖,使细胞周期阻滞于S期,且2.5mg/ml药物和10%药物血清作用最强(P0.01)。结论:KXRG通过抑制HSC的活化,阻滞其细胞周期的正常进行,进而抑制HSC增殖,从而起到抗肝纤维化的作用。     

干扰素α对实验大鼠肝内纤维组织及肝星状细胞的影响

目的 探讨干扰素(IFN)α防治肝纤维化作用机制。方法 雄性SD大鼠54只分成A组(正常对照组)6只、B组(模型对照组)12只、C组(IFNα预防组)12只、D组(IFNα治疗组)12只和E组(生理盐水对照组)12只。分别于实验6～12周末处死,取肝组织行病理组织学与电镜下同步观察。结果 B组大鼠肝内纤维组织广泛增生,假小叶形成,活化的肝星状细胞(HSC)明显增多,C组和D组肝内纤维组织明显减轻,活化HSC数量减少,凋亡数目明显增多。结论 IFNα通过抑制HSC活化并诱导其凋亡防治肝纤维化形成。     

抗纤软肝颗粒对肝星状细胞凋亡的影响

探讨抗纤软肝颗粒对肝星状细胞(HSC)凋亡的影响.方法:传代培养的大鼠肝星状细胞系HSC-T6与中药复方抗纤软肝颗粒(终浓度为5mg/ml、2.5mg/ml、1.25mg/ml)及药物血清(5%、10%、20%)共同培养48小时后,应用TUNEL法及流式细胞仪测定细胞凋亡、免疫组化检测Bcl-2/Bax.结果:TUNEL法及流式细胞仪测定结果显示抗纤软肝颗粒药物及含药血清均可诱导HSC凋亡(P＜0.05);并能下调凋亡抑制分子Bcl-2,上调促凋亡分子Bax(P＜0.01).结论:抗纤软肝颗粒可下调Bcl-2/Bax比率,以增加细胞对凋亡的敏感性,从而促进HSC凋亡.     

抗纤方对肝星状细胞活化增殖、凋亡和基质金属蛋白酶-1及其抑制剂表达的影响

目的:观察抗纤方抗肝纤维化的药效学作用。方法:分离培养大鼠HSC,制备抗纤方大鼠药物血清,温育HSC。MTT比色法测定细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡。原位杂交法观察MMP-1、TIMP-1的表达。结果:抗纤方可抑制体外培养的HSC增殖,经抗纤方作用后,HSC的凋亡明显增多,并促进MMP-1表达。抑制TIMP-1的表达。结论:抗纤方抗肝纤维化可能机理为抑制HSC增殖,促进其凋亡,促进HSC表达MMP-1,抑制TIMP-1的表达。     

生存素基因与肝纤维化

在急性和慢性肝损伤中,肝星状细胞(HSC)活化并转化为肌成纤维细胞样细胞是导致肝纤维化的关键.生存素(survivin)基因是近年发现的凋亡抑制蛋白家族成员之一,有研究报道survivin基因在活化的HSC中高表达,而抑制survivin基因可促进HSC凋亡,有望逆转肝纤维化.此文就survivin基因功能、作用机制及...