食管鳞癌细胞分化状态对内源性光敏剂PpIX产量的影响及对PDT的应答

目的:研究食管癌细胞的分化状态对ALA产生的内源性光敏剂PpIX累积水平的影响,及对PDT的应答敏感程度.方法:以高分化食管鳞癌细胞KYSE-450和低分化食管鳞癌细胞KYSE-70为研究对象,利用荧光分光光度法测定不同浓度ALA处理后细胞内PpIX的浓度;分别使用不同剂量的红光和蓝光对细胞进行照射处理,MTS法测定PDT对细胞的光毒毒性;TdT-流式细胞法测定PDT诱导的凋亡水平,并观察凋亡细胞的胞核形态.结果:高分化KYSE-450细胞比低分化KYSE-70细胞具有更强的PpIX合成或累积水平,两者PpIX绝对浓度值在高于0.5mmol/LALA时差异显著(315.2±88.3vs156.9±79.2,P<0.05);虽然高分化细胞PpIX产量高于低分化细胞,但无论是红光PDT还是蓝光PDT,其敏感性均明显差于低分化细胞,光剂量为3.6J/cm2(红光)和0.16J/cm2(蓝光)时,两者细胞存活率有极显著差异(88.0±7.4vs25.2±4.9,红光;97.4±7.3vs40.8±4.2,蓝光;P<0.01);KYSE-450凋亡率(12.5%)亦低于KYSE-70(23.2%),细胞主要以坏死方式为主.结论:食管鳞癌细胞的分化影响了内源性光敏剂PpIX的细胞内水平;PDT效应并不单纯依赖于细胞内的光敏剂含量,细胞的生物学特征如分化状态也影响了PDT的效果;高分化细胞部分通过抑制凋亡抵制了PDT作用.     

ALA-PDT对人食管癌Eca-109细胞相关凋亡蛋白表达的影响

目的 探讨5-氨基乙酰丙酸—光动力疗法(ALA-PDT)对人食管癌Eca-109细胞相关凋亡蛋白表达的影响.方法 将人食管癌Eca-109细胞经过培养、处理后分为两组,ALA-PDT组(PDT组)细胞用ALA孵育6h后在光动力治疗系统下进行光照,光照后24h提取细胞总蛋白和胞质蛋白;对照组细胞不进行光动力治疗.采用Western blot法检测两组细胞中的Bcl-2、Cytc蛋白表达.结果 ALA-PDT作用于人食管癌Eca-109细胞后,与对照组比较,PDT组胞质中的Bcl-2蛋白表达量明显降低,Cytc蛋白表达量明显升高(P均＜0.05).结论 线粒体凋亡通路可能是ALA-PDT诱导Eca-109细胞凋亡的主要通路,Bcl-2可能为该凋亡通路的靶基因之一,释放Cytc进而诱导细胞凋亡可能为ALA-PDT诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡的线粒体通路终末效应之一.     

JNK信号通路在δ氨基酮戊酸-光动力疗法诱导SW480细胞凋亡中的作用机制

目的:探讨JNK信号通路在δ氨基酮戊酸(ALA)-光动力疗法((PDT)诱导SW480细胞凋亡中的作用.方法:将SW480细胞分为空白对照组、激光照射组、ALA组及ALA-PDT组.Western blot 检测各组细胞c-Jun氨基末端激酶(JNK)的表达;用SP600125(JNK抑制剂)预孵育ALAPDT组细胞,Western blot检测各组细胞的多聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)的表达.结果:磷酸化JND在空白对照组、激光照射组及ALA组几乎无表达,ALA-PDT后30-90min细胞表达显著高于空白对照组、激光照射组及ALA组(F=12.314,P＜0.001),其中ALAPDT后60及90min的磷酸化JNK表达显著高于ALA-PDT后30min(F=9.782,P＜0.001),各组细胞总的JNK表达无显著差异.JNK的激活能抑制ALA-PDT诱导sw480细胞凋亡.结论:JNK信号通路的激活抑制ALA-PDT诱导SW480细凋亡;JNK通路可能成为增强ALA-PDT治疗结肠癌的新靶点.     

ALA-PDT诱导SW480细胞凋亡和胞内Ca2+浓度变化的关系

目的:探讨ALA-PDT诱导人结肠癌细胞SW480凋亡和游离钙浓度变化关系.方法:将SW480细胞分为四组:空白对照组、激光照射照组、ALA组和ALA-PDT组,用DNA片段分析和TUNEL法检测细胞凋亡;用激光共聚焦显微镜观测各组细胞内游离钙离子浓度的变化.结果:ALA-PDT组的人结肠癌细胞在1、2h有大量的DNA片段,TUNEL法显示ALA-PDT组的人结肠癌细胞在PDT后30minAI为25.26±5.04%,PDT后60minAI为50.45%±7.85%,均高于其他3组(AI均<10%,P<0.01);激光共聚焦结果为ALA-PDT组细胞内游离钙离子浓度在20min达高峰(荧光强度:185.40±18.90),与10min(荧光强度:100.00±19.83)相比有显著差异(P<0.01),之后又逐渐下降.结论:细胞内Ca2 浓度的逐渐增加在PDT诱导的细胞凋亡过程中可能起着重要作用.     

食管鳞癌细胞KYSE-70的分化诱导对光动力学应答敏感性的抑制

目的:研究全反式维甲酸(ATRA)对低分化食管鳞癌细胞系KYSE-70的分化诱导作用及对光动力学疗法(photodynamic therapy,PDT)的应答敏感程度.方法:以高分化食管鳞癌细胞KYSE-450和低分化食管鳞癌细胞KYSE-70为研究对象,用1μmol/LATRA为诱导剂,诱导KYSE-70细胞从低分化状态向高分化状态分化,通过细胞形态学、增殖实验来验证;细胞以1mmol/LALA处理,不同剂量的450nm蓝光照射,MTT法测定PDT对细胞的光毒毒性;流式细胞法测定PDT诱导的凋亡水平,Hoechst33342染色后观察凋亡细胞的胞核形态.结果:经ATRA处理后,诱导组与对照组相比,细胞变扁平、体积增大、胞质密度减低、核变大、核密度亦减低、细胞生长缓慢.高分化KYSE-450、分化诱导后的KYSE-70细胞和未诱导KYSE-70细胞用ALA处理后进行蓝光PDT,MTT结果显示高分化KYSE-450和分化诱导后KYSE-70的细胞存活率明显高于未诱导细胞,而高分化KYSE-450细胞敏感性略微低于分化诱导后的KYSE-70细胞.当光剂量为225mJ/cm2时,诱导前后细胞存活率分别为36.23%...     

灰树花多糖对人肺腺癌细胞株A549线粒体的影响

目的检测人肺癌细胞株A549的细胞增殖、线粒体呼吸水平及线粒体膜电位,观察灰树花多糖对A549线粒体的影响。方法CCK-8法检测A549细胞增殖,线粒体呼吸系统检测细胞线粒体呼吸水平,Mito Tracker Red CMXRosb线粒体荧光探针、罗丹明123(Rh123)检测线粒体膜电位。结果 CCK-8检测细胞增殖显示0.4%的灰树花多糖即可抑制A549细胞的增殖,0.6%灰树花多糖作用4 h后,绝大多数A549细胞死亡,其结果与对照组相比较有显著差异(P<0.05);线粒体呼吸系统结果显示,0.4%灰树花多糖作用于A549细胞4 h后细胞呼吸微弱;荧光显微镜观察细胞状态、线粒体荧光探针染色显示,0.4%、0.6%灰树花多糖组部分细胞凋亡,细胞收缩呈圆形,强荧光表达;流式细胞仪检测线粒体膜电位显示,0.4%、0.6%灰树花多糖组荧光信号增强。结论灰树花多糖可以抑制A549的增殖,其作用机制与线粒体膜电位的耗散相关。     

血卟啉衍生物光动力治疗人胰腺癌细胞的实验研究

目的 研究血卟啉衍生物光动力治疗(photodynamic therapy,PDT)对体外培养的人胰腺癌细胞株PANC1的杀伤效应及其规律.方法 以Biolitec PDT 630半导体激光治疗仪为光源,用不同浓度的血卟啉衍生物Photosan(0.5、1、2、4 mg/L)作为光敏剂孵育PANC1细胞8 h后,分别给予不同剂量(1、5、10 J/cm~2)630nm激光照射,用MTT法测定PDT后各组的A_(492)值,以流式细胞仪测定10 J/cm2光照后细胞凋亡情况.结果 不加光敏剂Photosan或不进行光照,对细胞均无杀伤效应;添加1 mg/LPhotosan时,10 J/cm~2 的光照对细胞产生杀伤效应(0.140±0.013对0.213±0.008,P＜0.05);添加2 mg/L Photosan时,5 J/cm~2 和10 J/cm~2 的光照对细胞产生杀伤效应(0.081±0.024和0.049±0.013对0.211±0.031,P＜0.05和P＜0.01);添加4 mg/L Photosan时,所有光照剂量均对细胞产生明显的杀伤效应.但5 J/cm~2与10 J/cm~2光照对细胞的杀伤效应无显著差异.用10J/cm~2光照,0、2、4mg/LPhotosan时的细胞凋亡率分别为(13.8±1.8)%、(40.9±1.6)%、(62.5±2.0)%,差别具有统计学意义(P＜0.05).结论 单纯给予光敏剂或光照对PANC1均不产生PDT效应.光敏剂达到一定浓度,光照达到一定剂量后,PDT效应随其增加而增强.     

CDHS801光动力诱导膀胱癌细胞凋亡的机制探讨

目的探讨光敏剂CDHS801光动力诱导膀胱癌细胞凋亡的机制。方法将膀胱癌T24细胞分成A、B、C、D组。A组为空白对照组;B组与CDHS801避光孵育;C组仅予激光照射;D组与CDHS801共同孵育后接受激光照射。倒置相差显微镜和电镜下观察各组细胞凋亡情况,激光共聚焦显微镜检测JC-1荧光探针标记的线粒体膜电位,Western blot法检测细胞质中的细胞色素C。结果 D组细胞变小变圆,染色质浓缩,染色质凝集边集、有新月体形成;其余三组细胞正常。细胞JC-1探针检测显示D组发出绿色荧光,其余三组细胞发出橙红色荧光。Westernblot结果显示仅D组细胞质中检出了细胞色素C。结论 CDHS801光动力诱导膀胱癌T24细胞凋亡的机制是治疗后线粒体膜电位下降,线粒体通透性增加,细胞色素C由线粒体移位到胞质中,启动了线粒体途径的细胞快速凋亡。     

5-氨基酮戊酸介导的声动力疗法诱导巨噬细胞和泡沫细胞凋亡

目的探讨5-氨基酮戊酸(ALA)介导的声动力疗法(SDT)对巨噬细胞和泡沫细胞的作用,并进行比较。方法使用佛波酯诱导人急性单核白血病细胞(THP-1)成为巨噬细胞,再使用氧化型低密度脂蛋白诱导巨噬细胞成为泡沫细胞,使用这两种细胞进行实验研究。给予ALA共孵育后观察细胞内生成原卟啉Ⅸ(PpⅨ)的荧光强度;将两种细胞分别分为空白对照组和SDT组,并检测以下指标:DCFH-DA探针检测细胞内活性氧水平;线粒体膜电位探针(JC-1)检测细胞线粒体膜电位;Annexin V-PI染色后使用流式细胞仪检测细胞凋亡;酶活性探针检测细胞Caspase-9和Caspase-3的活性。结果给予ALA后3 h巨噬细胞和泡沫细胞均呈现较强的红色荧光,泡沫细胞荧光强度略高于巨噬细胞,但无统计学差异(P0.05);SDT后巨噬细胞和泡沫细胞内活性氧分别增加1.84倍(P0.01)和1.44倍(P0.001);低线粒体膜电位的细胞分别增加1.96倍(P0.001)和1.55倍(P0.001);凋亡率分别升高1.36倍(P0.001)和2.78倍(P0.001);Caspase-9的酶活性分别升高1.34倍(P0.05)和2.59倍(P0.001);Caspase-3的酶活性分别升高2.97倍(P0.01)和4.88倍(P0.001)。结论 SDT通过超声作用于ALA-PpⅨ产生活性氧,损伤线粒体激活Caspase凋亡通路诱导巨噬细胞和泡沫细胞凋亡,对于泡沫细胞的作用更为显著,ALA介导的SDT可能成为减缓动脉粥样硬化斑块进程的一种新手段。     

拓扑替康诱导肺癌细胞HTB-56凋亡早期线粒体膜电位的变化

目的探讨拓扑替康诱导肺癌细胞HTB-56凋亡早期线粒体膜电位的改变。方法选择人肺癌细胞HTB-56细胞株,JC-1荧光染色标记线粒体,用早期流式细胞仪检测拓扑替康作用于HTB．56细胞不同时间细胞线粒体膜电位。采用琼脂糖凝胶电泳检测拓扑替康作用不同时间引起HTB-56细胞凋亡情况。结果经拓扑替康处理后48h、72hHTB-56细胞出现了明显的凋亡带,对照组未见明显亮带影。4h后细胞线粒体膜电位下降,8h后细胞膜电位明显下降,且下降程度随时间延长而增大。且药物组绿／红荧光比值与对照组比较均有显著性差异（P〈0．05）。结论拓扑替康诱导肺癌细胞HTB-56可使之凋亡,其机制可能与线粒体膜电位在凋亡极早期发生改变有关。     

高血压降压治疗目标的再认识

根据传统的高血压水平的定义,1993年WHO高血压治疗指南提出血压控制目标为<140/90mm Hg(1mm Hg=0.133kPa),但是并非所有患者都必须将血压降至同一水平,而应根据患者情况进行个体化治疗。Framingham进行的一项长达10～12年的心血管事件研究发现,第5年后,正常上限血压[收缩压(SBP     

Complex of genotypes of cytokines as a genetic factor of risk of development of myocardial infarction of in Europien population of Russia men

Cytokines as regulators of activity of inflammation play significant role in mechanisms of formation of atherosclerotic plaques and in processes of their destabilization. One of leading genetic factors determining level of their production appears to be polymorphism of cytokine genes structure at their promoter loci. We have conducted an analysis of distribution in groups of healthy male and female survivors of myocardial infarction (MI) of combined genetic signs represented as a complex of genotypes of a number of studied cytokine genes : TNF-A863C; TNF-A308G; TNF-A238G; IL1B-C511T; IL1B-C-31T; IL4-C590T; IL6-C174G; IL10A-1082G IL10-A592C. Among these homozygous combinations of cytokine genotypes characterizing a group of men who have lived up to middle and old age without development of MI there are widely represented genotypes associated with high levels of production of both cytokines with pronounced proinflammatory (IL-1) and antiinflammatory (IL-4, IL-10) activity. Absence of such multidirectional combinations in genome of patients with myocardial infarction can be considered one of genetic factors of risk of development of acute distirbances of coronary circulation.