不同地理种群白纹伊蚊线粒体基因COI的遗传多样性分析

目的探讨白纹伊蚊不同地理种群间的进化关系和遗传分化情况,为白纹伊蚊防制和蚊媒病防控提供基础资料。方法在广泛采集样品的基础上,通过PCR扩增、测序获取线粒体基因COI片段,并从GenBank下载了部分序列,比对、剪切后的598bp用于后续分析。结果系统发育分析的结果表明所有白纹伊蚊的COI序列聚成一支,没有明显的遗传差异;60条COI序列分属于19个单倍型,其中4个为共享单倍型;单倍型多样性(Hd)为0.737,核苷酸多样性(π)为0.20%;海南的白纹伊蚊种群与绝大部分地理种群间出现了明显的分化(P0.05);H1和H6形成了2个辐射中心,是较为原始的单倍型。结论我国的白纹伊蚊种群正处于扩张的趋势,海南的白纹伊蚊种群与其它地理种群间出现了明显分化。     

浙江省不同地理株白纹伊蚊mtDNA-COⅠ基因多态性研究

目的比较浙江省不同地理区域白纹伊蚊种群线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(mtDNA-COⅠ)序列的多态性,探讨其遗传特征。方法采集登革热历史流行区和非流行区的白纹伊蚊雌性成蚊,PCR扩增COⅠ基因,测序后结合Genbank中获得的各地白纹伊蚊序列进行比对,分析基因特征和种群分化并构建系统进化树。结果用于分析的线粒体COⅠ基因长度为686bp,碱基A+T平均含量为67.8%,G+C平均含量为32.2%,变异位点中包括15个碱基转换位点和3个颠换位点。96个个体中存在20个单倍型,整体单倍型多样性为0.497,核酸多样性为0.717,核酸平均差异数为0.001 05。衢州、温州苍南和丽水的白纹伊蚊COⅠ序列多态性高于其它地区,且温州苍南和衢州白纹伊蚊种群与其它地区白纹伊蚊种群存在中等遗传分化。结论浙江省不同地理株白纹伊蚊COⅠ序列表现出一定程度的遗传多态性和的遗传分化,可能由环境、气候和人文因素综合所致。     

福建省白纹伊蚊mtDNA-CO1基因的系统发育分析

目的调查福建省不同地域白纹伊蚊线粒体细胞色素C氧化酶亚基I(mtDNA-CO1)基因的遗传多态性和系统发育关系。方法 2015-2017年采集福建省15个媒介监测点的白纹伊蚊成蚊和幼虫样品,提取基因组DNA,扩增全长mtDNA-CO1基因片段并测序,应用Mega6.0和DnaSP5.0软件做基因特征分析和系统发育分析。结果新得到54份白纹伊蚊mtDNA-CO1基因片段序列,用于分析的片段长度为1388 bp。样本间多序列比对显示8个核苷酸差异位点,单倍型多样性为0.746,核苷酸多样性为0.126%。根据单倍型参考序列构建系统发育树,确定福建省白纹伊蚊存在9种单倍型,即:H01、H02、H03、H04、H08、H09、H12、H17、H23,另有6条序列无法确定单倍型。结论根据mtDNA-CO1基因多样性,2015-2017年福建省媒介监测点采集白纹伊蚊分属9种单倍型,这对于当地白纹伊蚊的种群进化研究及相关虫媒病毒病防控具有重要参考价值。     

基于wsp基因探讨白纹伊蚊种群感染沃尔巴克氏体的系统发育关系北大核心CSCD

目的本研究基于Wolbachia表面蛋白基因(Wolbachia Surface Protein,wsp)初步探讨白纹伊蚊感染Wolba-chia的系统发育关系。方法利用wsp基因对我国23个地理种群的白纹伊蚊种群中感染的Wolbachia进行遗传距离和系统发育分析。结果 wAlbA和wAlbB的种群间的遗传距离分别为0～0.006和0～0.001,系统发育分析也表明白纹伊蚊23个地理种群感染的Wolbachia株系没有分化。结论白纹伊蚊的扩散、取食以及生境影响了Wolba-chia的传播和感染途径,宿主间频繁的基因流和物理接触均为Wolbachia的水平转移提供了条件,使得Wolbachia与其宿主白纹伊蚊间没有明显的协同进化关系。这也为利用Wolbachia开展蚊媒病的防控提供了有利条件,确保防控效力不会因Wolbachia株系间的遗传差异而受到影响。     

基于wsp基因探讨白纹伊蚊种群感染沃尔巴克氏体的系统发育关系

目的本研究基于Wolbachia表面蛋白基因(Wolbachia Surface Protein,wsp)初步探讨白纹伊蚊感染Wolba-chia的系统发育关系。方法利用wsp基因对我国23个地理种群的白纹伊蚊种群中感染的Wolbachia进行遗传距离和系统发育分析。结果 wAlbA和wAlbB的种群间的遗传距离分别为0～0.006和0～0.001,系统发育分析也表明白纹伊蚊23个地理种群感染的Wolbachia株系没有分化。结论白纹伊蚊的扩散、取食以及生境影响了Wolba-chia的传播和感染途径,宿主间频繁的基因流和物理接触均为Wolbachia的水平转移提供了条件,使得Wolbachia与其宿主白纹伊蚊间没有明显的协同进化关系。这也为利用Wolbachia开展蚊媒病的防控提供了有利条件,确保防控效力不会因Wolbachia株系间的遗传差异而受到影响。     

登革热媒介白纹伊蚊mtDNA—ND4基因特征分析

目的研究不同地理种群白纹伊蚊（Aedesalbopictus）线粒体蛋白NADH脱氢酶亚基Ⅳ（mtDNA—ND4）基因多态性,探讨其遗传特征。方法采集不同海拔高度、登革热历史流行区与非流行区的白纹的幼虫,实验室饲养至成蚊,PCR扩增mtDNA—ND4基因并遗传分析。结果获mtDNA—ND4长度为324b,碱基A＋T含量分别为73：2％,17个碱基置换位点,颠换率为62．5％;19个个体存在5个单倍型,单倍型多态性（h）为0．442。结论福建省不同地理株白纹伊蚊出现小程度的遗传分化,可能由遗传漂变引起的。     

基于细胞色素b和内转录间隔区基因序列的4个棕脊足螨地理种群遗传变异分析

目的　分析不同地理种群棕脊足螨（Gohieria fusca）遗传多样性和遗传分化。方法　自安徽省芜湖市（WH）、蚌埠市（BB）、亳州市（BZ）和浙江省嘉兴市（JX）等4个地区采集螨虫标本并筛选出棕脊足螨,采用PCR技术扩增棕脊足螨线粒体细胞色素b（cytochrome b, Cytb）和核糖体DNA内转录间隔区（internal transcribed spacer, ITS）基因并对扩增产物测序。采用Chromas 2和DNASTAR 1.00软件进行序列校对和拼接,采用DnaSP 5.10.00软件计算各种群单倍型多样性（Hd）、核苷酸多态性（Pi）,应用MEGA 10.2软件包计算遗传分化指数（Fst）和基因流（Nm）。采用Arlequin 3.1软件计算Tajima’s D和Fu’s FS值,并进行中性检验和分子方差分析;采用Network 10.2软件基于Median⁃joining法构建单倍型网络图。结果　棕脊足螨样本Cytb基因序列长度为372 bp、ITS基因序列长度为1 301 ~ 1 320 bp。基于线粒体Cytb基因和核糖体ITS基因序列分析发现,4个棕脊足螨地理种群均表现出较高遗传多样性（Hd = 0.804,Pi = 0.006 91）。分子方差分析发现,4个棕脊足螨地理种群间存在遗传分化（Fst = 0.202 40, P < 0.05）,且遗传变异主要来自种群内（79.76%）。基因流分析发现,4个棕脊足螨地理种群间局部存在高水平基因流（Nm > 1）。基于Cytb基因的中性检验发现,棕脊足螨WH种群Tajima’s D值和Fu’s FS值分别为-1.796 31和-3.293 98（P均< 0.05）,表明WH种群可能发生过历史扩张。单倍型网络图和系统发育树分析结果一致,均表明不同棕脊足螨地理种群无明显地理分布格局。基于ITS基因序列分析发现,4个棕脊足螨地理种群单倍型多样性（Hd）与核苷酸多态性（Pi）均较高,整体值分别为0.985和0.011 97,具有较高遗传多样性。分子方差分析发现,棕脊足螨Fst值为0.104 62（P < 0.05）,种群间存在中等程度遗传分化。基于ITS基因的中性检验发现,棕脊足螨整体Tajima’s D值和Fu’s FS值分别为-6.088 20和-1.935 99（P均> 0.05）,无明显历史扩张。结论　4个棕脊足螨地理种群遗传多样性较高,存在显著遗传分化。由于不同棕脊足螨地理种群间局部发生高水平基因流,未发现其明显地理分布格局。     

利用ssr标记浅析云南登革热重点地区埃及伊蚊种群遗传特征

目的 通过研究云南省不同地理来源的埃及伊蚊自然种群遗传结构,探究不同群体间的遗传特征与联系。方法 捕获景洪、勐腊、勐海、耿马、瑞丽的埃及伊蚊,提取DNA并采用12对荧光标记的微卫星引物进行PCR扩增,用毛细管电泳检测扩增片段,分析5个埃及伊蚊自然种群的遗传相关指标。结果 在5个采集点共采集234个有伊蚊幼虫的容器,采集埃及伊蚊603只,随机选取149只提取DNA,进行扩增分析。12个微卫星位点的平均N_a、N_e、H_o、H_e、PIC分别为18、4.653、0.711、0.728、0.778,12个微卫星位点的PIC指数均>0.25,高度多态。每个种群的平均Na、Ne、Ho、He、PIC分别为7.750~10.583、3.606~5.309、0.661~0.741、0.629~0.774、0.588~0.750。12个微卫星位点的F_st,F_is,N_m的平均值分别为0.078、0.028、3.321。5个自然种群埃及伊蚊的成对指数Fast为0.057~0.148,各种群间遗传分化和地理距离未发现显著相关,Nei’s标准遗传距离在0.162~0.527之间,对应的遗传相似度在0.590~0.850之间。 云南省埃及伊蚊遗传多样性比较丰富,种群间存在一定的遗传分化和基因交流。     

广州市白纹伊蚊细胞色素C氧化酶亚基Ι基因遗传多态性分析

目的 探索广州市白纹伊蚊线粒体细胞色素C氧化酶亚基I基因（COI）序列的特征,分析同一城市不同环境下白纹伊蚊的遗传变异。方法 单蚊抽提广州市不同点采集的白纹伊蚊基因组DNA,扩增细胞色素C氧化酶亚基I基因片段,联合单链构象多态性PCR（PCR-SSCP）技术分析COI基因片段多态性并筛选部分样品进行克隆测序,用软件比对分析序列的差异。结果 广州市不同采样点白纹伊蚊PCR扩增后获得709bp的COI基因部分序列,序列分析出现12个变异位点,变异率为1.69%。聚类分析显示广州株白纹伊蚊不同采样点的群体间出现部分分化。结论 广州市不同采样点的白纹伊蚊线粒体COI基因出现部分遗传多态性,可能与城市化发展下白纹伊蚊孳生环境的变化有一定关系。     

长江下游3省湖北钉螺不同地理种群的群体遗传结构研究

目的 目的 对长江下游江西、 安徽和江苏3省湖北钉螺的不同地理种群进行群体遗传结构分析, 以探讨rDNA?ITS分 子标记在钉螺扩散路径监测中的应用价值。 方法 方法 采集3省9个种群的钉螺样本, 提取基因组DNA, PCR特异性扩增rD? NA?ITS基因并克隆测序, 统计分析群体间的遗传分化系数 （Fst ）、 遗传距离和种群遗传多样性等参数, 利用单倍型构建家系 网络图。结果 结果 9个种群共获得有效序列93条, 检测到78个单倍型, 平均单倍型多样性、 核苷酸多样性分别为0.988和 0.012 88, 表明钉螺种群的遗传多样性水平较高; 其遗传变异主要来自群体内, 种群间遗传距离为0.001 6～0.002 3, 显示钉 螺种群间遗传分化程度较高; 家系网络图显示所有单倍型虽可形成3个主要的家系分支, 但各地理种群在家系网络图中无 明显分化。结论 结论 长江下游江西、 安徽和江苏3省沿长江分布的湖北钉螺群体遗传多样性主要存在个体间, 群体间未形成 明显的遗传分化。rDNA?ITS分子标记在钉螺扩散路径监测中的应用价值值得进一步探讨。     

Large genetic differentiation and low variation in vector competence for dengue and yellow fever viruses of Aedes albopictus from Brazil,the United States,and the Cayman Islands

We conducted a population genetic analysis of Aedes albopictus collected from 20 sites in Brazil, the United States (Florida, Georgia, and Illinois), and the Cayman Islands. Using isoenzyme analysis, we examined genetic diversity and patterns of gene flow. High genetic differentiation was found among Brazilian samples, and between them and North American samples. Regression analysis of genetic differentiation according to geographic distances indicated that Ae. albopictus samples from Florida were genetically isolated by distance. Infection rates with dengue and yellow fever viruses showed greater differences between two Brazilian samples than between the two North American samples or between a Brazilian sample and a North American sample. Introductions and establishments of new Ae. albopictus populations in the Americas are still in progress, shaping population genetic composition and potentially modifying both dengue and yellow fever transmission patterns.     

Population genetic structure and competence as a vector for dengue type 2 virus of Aedes aegypti and Aedes albopictus from Madagascar.

Starch gel electrophoresis was used to assess the polymorphism of 7 isoenzymes in single mosquitoes (field-collected F0 or F1 generation) for Aedes albopictus (8 strains) from northern Madagascar. Mosquitoes of the F2 generation (3 strains of Aedes aegypti and 10 strains of Ae. albopictus) were tested for oral susceptibility to dengue type 2 virus. Aedes aegypti was less susceptible to viral infection than Ae. albopictus. The genetic differentiation was less high between Ae. albopictus populations collected in agglomerations connected by highly frequented roads, indicating that human ground transportation favors mosquito dispersal. These results have implications for the ecology, pattern of migration, and relative importance in epidemic transmission of dengue viruses between the 2 Aedes species.     

白纹伊蚊AL-100 30 ku蛋白基因的克隆及其原核表达载体的构建

目的克隆白纹伊蚊主要过敏原AL-100 30 ku蛋白基因,并构建其原核表达载体。方法RT-PCR克隆白纹伊蚊主要过敏原AL-100 30 ku的全长基因,设计简并引物,扩增白蚊伊蚊30ku的完整开放阅读框,与pET-28a载体连接,构建原核表达载体。结果成功克隆白纹伊蚊主要过敏原30ku基因并构建其原核表达载体。该基因含有长度为816bp的开放阅读框,编码271个氨基酸。该蛋白质的分子质量单位为28.33ku,等电点为4.04,编码序列与数据库中已知的白纹伊蚊30ku基因的同源性为99％。结论成功克隆了白蚊伊蚊主要过敏原30ku基因并构建了原核表达载体,为白纹伊蚊主要过敏原30ku蛋白的重组表达和免疫活性鉴定等奠定了基础。     

中山市白纹伊蚊现场种群击倒抗性基因检测分析

目的 检测广东省中山市不同生境白纹伊蚊现场种群的击倒抗性(kdr)基因突变,了解其抗药性水平,探讨kdr基因突变与性别间抗药性差异的关系,为蚊虫的抗性机制研究以及科学防制提供依据。方法 2019年8-11月在中山市选择5个生境采集白纹伊蚊幼虫和蛹569只,实验室饲养至成虫,提取单只成蚊基因组DNA,扩增并测序分析kdr基因突变情况,并应用χ²检验比较不同性别成蚊kdr基因突变的差异。结果 共检测中山市5个生境的白纹伊蚊569只。kdr基因1 532位点未发生突变,等位基因为野生型ATC/I,基因型为F/F。1 534位点存在突变,有5种等位基因,分别为野生型TTC/F,突变型TTG/L、TCC/S、TCG/S、TGC/C;8种基因型分别为野生型纯合子F/F,野生突变型杂合子F/L、F/S和F/C,突变型纯合子L/L和S/S,突变型杂合子L/S和L/C。雌雄蚊个体间kdr基因1 534位点的突变差异无统计学意义(χ²=0.798,P>0.05)。 中山市白纹伊蚊kdr基因突变频率较高,提示对拟除虫菊酯类杀虫剂已产生抗性,雌雄蚊在kdr基因突变上没有明显的差异。     

Aedes aegypti in Senegal: genetic diversity and genetic structure of domestic and sylvatic populations

Aedes aegypti is the main vector of dengue viruses. The epidemiology of dengue fever remains poorly understood in Senegal. A sylvatic transmission seems to predominate. However, despite the sylvatic circulation of the dengue virus and the presence of vectors in urban areas, only sporadic cases have been reported. Ae. aegypti is a polytypic species. In Senegal, a purely sylvatic form is found in the forest gallery areas and a domestic form is found in the villages in savannah and sahelian areas and in urban areas. Using allozymes, we analyzed the genetic diversity and the genetic structure of Ae. aegypti populations differing in their ecological characteristics. Populations from Senegal were significantly structured but with a low level of genetic differentiation. Ae. aegypti from the "domestic" populations show a decreased genetic diversity and a lower genetic differentiation compared with "sylvatic" populations. These findings suggest that environmental conditions, ecological factors, and human activities may impact the genetic structure of Ae. aegypti populations in Senegal.