肾透明细胞癌miRNA-34a、Notch1和Hes1的表达及意义

目的观察miRNA-34a、Notch1和Hes1在肾透明细胞癌组织的表达，探讨其与肾癌发生发展的关系及可能的临床意义。方法运用实时荧光定量PCR方法检测miRNA-34a、Notch1和Hes1在肾透明细胞癌组织及其相应的癌旁正常组织的表达，并分析其与临床病理特征的关系。结果与正常组织相比，miRNA．34a在肾癌组织中高表达（P〈0．05），Notch1、Hes1在肾癌组织中低表达（P〈0．05）；miRNA-34a随着肾癌病理分级的增高而增高，Notch1的表达则随着肾癌病理分级的增高而降低（P均〈0．05）。结论高表达的miRNA-34a通过下调其靶基因Notch1参与肾透明细胞癌的发生发展，此有望成为肾癌诊断的分子标志物及潜在的治疗靶点。     

WNT10A在肾细胞癌组织中的表达及意义

目的 探讨Wnt信号通路分子WNT10A在肾细胞癌(RCC)发生、发展中的作用.方法 选择50例RCC患者的手术标本(RCC组,其中肾透明细胞癌38例、非透明细胞癌12例,临床病理分期Ⅰ期14例、Ⅱ期13例、Ⅲ期13例、Ⅳ期10例);取其癌旁组织标本作为癌旁组;另选15例因外伤、输尿管癌行肾切除术患者的正常肾组织标本作为对照组.采用Real-time RT-PCR法检测各组WNT10A表达,比较不同病理类型及病理分期组织中WNT10A表达的差异.结果 RCC组WNT10A表达量高于癌旁组、对照组(P＜0.01).透明细胞癌组织中WNT10A mRNA的表达量高于非透明细胞癌(P＜0.05).肾癌组织中WNT10A mRNA的表达随病理分期升高呈升高趋势.结论 WNT10A mRNA在RCC中的表达量随病理分期的增高而增高,且在肾透明细胞癌组织中的表达量高于非透明细胞癌.WNT10A mRNA表达可作为诊断RCC的指标.     

肾透明细胞癌组织中Id4因子的表达变化及意义

目的观察分化抑制因子4（Id4因子）在肾透明细胞癌组织中的表达,并探讨其临床意义。方法采用免疫组化法检测30例肾透明细胞癌（肾癌组）、10例癌旁（癌旁组）和10例正常肾组织（正常组）中Id4因子,并分析其与肾透明细胞癌病理分级、临床分期的关系。结果肾癌组Id4因子阳性表达率为70％,明显高于癌旁组的30％和正常组的20％（P均〈0．05）;Id4因子的阳性表达率随肾透明细胞癌病理分级、TNM分期的增高而增加,但P〉0．05。结论Id4因子在肾透明细胞癌的组织中表达增强,可能在本病的发病机制中起重要作用。     

葡萄糖转运因子1蛋白在肾癌组织中的表达及意义

目的探讨葡萄糖转运因子1(Glut-1)蛋白在肾透明细胞癌发生、发展中的作用。方法采用免疫组化法检测50份肾透明细胞癌和10份同期距肾癌组织5 cm远的正常肾组织标本中Glut-1蛋白表达。结果 Glut-1蛋白在正常肾组织中无表达,在肾透明细胞癌组织中表达显著增强,阳性表达率为100%,但Glut-1表达与肾癌分级、分期无关。结论 Glut-1在肾癌组织中呈高表达,可能是参与肾癌发生的一个早期指标。     

肾透明细胞癌中Rac1和WAVE2的表达及其相关性

目的研究Rac1和WAVE2蛋白在肾透明细胞癌中的表达及其相关性。方法采用免疫组织化学SP法对肾透明细胞癌标本Rac1和WAVE2的表达进行检测。结果肾癌组Rac1和WAVE2表达阳性率明显高于癌旁组。且Rac1和WAVE2的表达水平与患者年龄、性别无明显关联,而与肿瘤转移有关。Rac1和WAVE2在肾癌中的表达呈正相关。结论肾癌中Rac1和WAVE2蛋白阳性表达率高于正常肾组织,并呈正相关性,可能在肾透明细胞癌的发生发展过程中起关键作用。     

肾透明细胞癌肿瘤相关基因的表达

目的 观察肾透明细胞癌组织与癌旁正常肾组织的基因表达谱差异,探讨肾透明细胞癌的肿瘤相关基因.方法 采用Agilent Human 1B寡核苷酸基因芯片检测3例肾透明细胞癌患者的癌组织和1例肾透明细胞癌的癌旁正常肾组织的基因表达谱.结果 在检测的基因中,共筛选出差异表达基因204个,癌组织中共同上调基因31个,共同下调基因173 个,包括6个尚未被Genebank收录的人类新基因.结论 肾透明细胞癌的发生与染色体基因的异常相关,异常基因有相对集中区域,如3p、14q和5q等.     

巨噬细胞移动抑制因子在肾透明细胞癌组织中的表达与意义

目的探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在肾透明细胞癌组织中的表达与意义。方法采用免疫组化法检测52例肾透明细胞癌组织及相应癌旁正常组织中MIF的表达,并分析其表达与临床病理特征的关系。结果肾透明细胞癌组织中MIF的阳性率(40/52)显著高于癌旁正常组织(8/52)(P<0.05)。MIF阳性表达率与分化程度无关(P>0.05)。Ⅲ~Ⅳ期肾透明细胞癌组织中MIF阳性率高于Ⅰ~Ⅱ期。有淋巴结转移者的MIF阳性率高于无淋巴结转移者(P<0.05)。MIF表达与肿瘤直径密切相关(P<0.05),与患者性别及年龄均无关(P>0.5)。结论 MIF在肾透明细胞癌组织中高表达,并促进肾透明细胞癌的发生、发展,可成为肾癌诊断的判断指标。     

肾癌组织中CapG蛋白的表达变化及临床意义

目的观察肾透明细胞癌（肾癌）组织中CapG蛋白的表达变化,并探讨其意义。方法选取132例肾癌标本（观察组）及40例癌旁正常肾组织标本（对照组）,采用免疫组化SP法检测CapG蛋白的表达。结果对照组CapG蛋白阳性表达率为7.5%,明显低于观察组的56.1%,P〈0.001。观察组CapG蛋白表达与淋巴结转移和预后有关（P均〈0.05）,与患者年龄、性别、T分期、病理分级、复发转移无显著相关（P均〉0.05）。结论肾癌组织中CapG蛋白表达上调。其与肾癌的转移和预后有关。     

T1b期肾癌及癌旁组织中PCNA、Bax的表达及意义

目的 探讨T1b期肾癌及癌旁组织中增殖细胞核抗原(PCNA)、Bax蛋白表达及意义,为T1b期肾癌行肾部分切除术中安全边距的选择提供理论依据.方法 选取21例行肾癌根治术的T1b期肾癌患者的癌组织标本,病理诊断均为肾透明细胞癌;分别取其癌组织(A组),癌旁0.2 cm(B组)、0.5 cm(C组)、1.0 cm(D组)处的正常肾组织,采用免疫组织化学染色法检测各组不同组织中的PCNA、Bax蛋白表达情况.结果 A组PCNA阳性表达率最高,明显高于其他各组(P均＜0.05);A组Bax蛋白阳性表达率最低,明显低于其他各组(P均＜0.05).C、D组的PCNA蛋白阳性表达率明显低于B组,Bax蛋白阳性表达率明显高于B组(P均＜0.05).结论 癌旁0.5 cm是T1b期肾癌肾部分切除术的安全切除边距.     

非小细胞肺癌患者外周血外泌体中差异表达的微小RNAs研究

背景目前,临床上尚缺乏早期、有效诊断非小细胞肺癌(NSCLC)的指标,来源于癌组织的外泌体及其内部物质因可反映亲本细胞性质而有望成为早期诊断肿瘤的生物学标志物。目的通过高通量测序技术筛选NSCLC患者外周血外泌体中差异表达的微小RNAs (miRNAs)。方法收集2018年1月—2019年1月于深圳市人民医院就诊的4例NSCLC患者的外周血样品,其中肺腺癌(LUAD) 2例、肺鳞状细胞癌(LUSC) 2例;另收集同期4例健康志愿者的外周血样品作为对照。采用HiSeq 2500高通量测序仪进行miRNAs测序,采用DESeq2软件筛选差异表达的miRNAs;在癌症基因组图谱(TCCGA)中选取并比较39对LUAD组织及其配对癌旁正常组织、45对LUSC组织及其配对癌旁正常组织miRNA-9-3p测序结果。结果 (1)高通量测序结果显示,4例NSCLC患者外周血外泌体中平均检测到776种miRNAs,4例健康志愿者外周血外泌体中平均检测到238种miRNAs。(2) LUAD与LUSC患者外周血外泌体中差异表达最显著的10种miRNAs中有6种是重合的,分别为miRNA-1228-5p、miRNA-129-5p、miRNA-760、miRNA-885-3p、miRNA-9-3p、miRNA-95-3p。(3) LUSC-1、LUSC-2、LUAD-1及LUAD-2外周血外泌体中miRNA-9-3p表达量分别为71.51、15.61、13.99、16.11转录本数,4例健康志愿者外周血外泌体中miRNA-9-3p表达量均为0。TCCGA中LUAD组织和LUSC组织miRNA-9-3p表达量均高于其配对癌旁正常组织(P0.01)。结论通过高通量测序技术发现miRNA-1228-5p、miRNA-129-5p、miRNA-760、miRNA-885-3p、miRNA-9-3p、miRNA-95-3p可能是NSCLC患者潜在的特异性miRNAs,其中miRNA-9-3p主要来源于NSCLC患者癌组织,这为后续通过外周血外泌体miRNAs测序而实现NSCLC的早期、无创诊断奠定了研究基础。     

膀胱移行细胞癌E2F3、miR-17-5p、miR-20a的表达及相关性分析

目的检测E2F3、miR-17-5p、miR-20a在膀胱癌中的表达情况,分析E2F3与miR-17-5p、miR-20a之间是否存在关联性。方法荧光定量RT-PCR法检测不同病理分级膀胱移行细胞癌组织和细胞系5637、T24中miR-17-5p、miR-20a和E2F3基因的表达,Western blot检测E2F3蛋白的表达。结果与正常膀胱黏膜比较,膀胱移行细胞癌组织及5637、T24细胞系中E2F3、miR-17-5p和miR-20a均高表达（P〈0.05）。E2F3表达随着病理分级的升高逐步增多,miR-20a表达随病理分级的升高有降低趋势。5637细胞系相对T24细胞系高表达E2F3（P〈0.05）。结论膀胱移行细胞癌中miR-17-5p、miR-20a和E2F3均高表达,miR-20a和miR-17-5p的表达与E2F3的增高密切相关。     

应用实时荧光定量PCR检测结直肠癌与癌旁组织中miRNA-221的差异表达状况

目的分析结直肠癌与毗邻癌旁组织中miRNA-221差异表达状况。方法常规抽提30例结直肠癌及对照癌旁组织中总RNA,应用实时荧光定量PCR方法检测标本中miRNA-221的表达状况。结果与癌旁组织相比,结直肠癌组织中miRNA-221表达明显上调（P〈0．01）。结论实时荧光定量PCR是一种较精确的miRNA定量检测方法;miRNA-221可能通过转录后基因沉默机制促进结直肠癌的发生发展。     

干扰LINC00707对食管癌细胞生物行为的影响

目的探讨干扰LINC00707对食管癌细胞生物行为的影响及分子机制。方法选取51例食管癌患者癌组织及癌旁正常组织,用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测LINC00707和miR-382-5p的表达水平;将食管癌细胞EC9706随机分为对照(con)组、si-LINC00707组、si-NC组、miR-382-5p组、miR-NC组、anti-miR-382-5p组、anti-miR-NC组、si-LINC00707+anti-miR-382-5p组;用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞活性;克隆形成实验检测细胞克隆形成数;流式细胞术检测细胞凋亡率;划痕实验检测细胞迁移距离;Western印迹法检测蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测LINC00707和miR-382-5p的靶向关系。结果与癌旁正常组织相比,食管癌组织中LINC00707表达水平升高,miR-382-5p表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);且LINC00707和miR-382-5p表达水平呈负相关(P<0.05)。干扰LINC00707或过表达miR-382-5p后,EC9706细胞活性降低,克隆形成数减少,细胞凋亡率升高,细胞迁移距离缩短,Bax表达水平升高,Bcl-2表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。抑制miR-382-5p表达与过表达miR-382-5p对EC9706细胞的作用相反。且抑制miR-382-5p表达逆转了干扰LINC00707对EC9706细胞的作用。LINC00707靶向调控miR-382-5p。结论干扰LINC00707可能通过上调miR-382-5p抑制食管癌细胞的恶性生物学行为。     

食管鳞癌中微小核糖核酸-21的作用及对靶蛋白的影响

目的 探讨微小RNA(miRNA)-21对食管鳞癌细胞Eca109和哈萨克族食管癌的促增殖作用及对程序性细胞死亡基因4(PDCD4)表达的影响。方法将食管鳞癌细胞系Eca109分为miRNA-21 Mimics组（转染序列5′-UCAACAUCAGUCUGAUAAGCUA-3′）、miRNA-21抑制剂组（转染序列5′-UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA-3′）、阴性对照组（转染随机序列）和正常对照组（不予转染等任何处理）。细胞按4.5×105个/孔接种于6孔板,基于RNA干扰(RNAi)技术、使用脂质体2000试剂进行细胞转染。采用细胞计数法检测转染后各组细胞的增殖情况。使用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组细胞的miRNA-21转录水平。采用Western印迹技术检测转染后各组PDCD4蛋白表达情况。检测18对哈萨克族食管癌及其对应的癌旁正常食管组织中miRNA-21转录和PDCD4蛋白表达情况。结果 转染48 h后,与正常对照组比较,miRNA-21Mimics组Eca109细胞数增加36％(P=0.002),miRNA-21抑制剂组细胞数减少28％(P=0.002),阴性对照组细胞数变化不明显(P=0.515)。转染48 h后,miRNA-21抑制剂组、miRNA-21 Mimics 组、阴性对照组、正常对照组miRNA-21的相对表达量分别为0.37±0.10、9.17±1.08、0.74±0.23和1.04±0.34,PDCD4蛋白相对表达量分别为1.47±0.11、0.61±0.09、0.89±0.12、0.79±0.02。与正常对照组比较,miRNA-21抑制剂组miRNA-21相对表达量下降(P=0.031)、PDCD4蛋白相对表达量上调（P=0.001）,miRNA-21 Mimics组miRNA-21相对表达量上升(P=0.001)、PDCD4相对表达量下调(P=0.030),阴性对照组则差异无统计学意义（P值分别=0.272和0.541）。18对哈萨克族食管癌组织中16对的miRNA-21相对表达量(0.11±0.09)高于其对应的癌旁正常食管组织(0.03±0.03,P=0.001),PDCD4蛋白相对表达量（0.92±0.39）低于其对应的癌旁正常食管组织（1.57±0.80,P=0.004）,且癌组织中miRNA-21相对表达水平越高,PDCD4蛋白相对表达水平越低（r=-0.538,P=0.046）。结论miRNA-21可能通过抑制PDCD4蛋白表达而促进食管鳞癌细胞Eca109增殖,并且参与哈萨克族食管癌的发生。     

miRNA-448 inhibits cell growth by targeting BCL-2 in hepatocellular carcinoma

BackgroundIncreasing evidence indicates that aberrant micro (mi)RNA-448 expression plays a critical role in the progression of several human cancers. However, the function of miRNA-448 in hepatocellular carcinoma (HCC) has not been fully investigated.MethodsmiRNA-448 expression levels in HCC tissues, adjacent non-cancerous tissues (ANTs), and HCC cell lines were examined by quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR). HCC cells were treated with a miRNA-448 mimic or inhibitor, followed by cell viability measurements with the CCK-8 assay. Venn diagram analysis predicted, and dual luciferase reporter assays verified, the target gene of miRNA-448. Expression of the target gene was detected by qRT-PCR and immunohistochemistry. Growth of miRNA-448- or target gene-expressing HCC xenograft tumors in nude mice was measured.ResultsmiRNA-448 was expressed at a lower level in HCC tissues than ANTs, and correlated with a larger tumor size, incomplete tumor encapsulation, and advanced Barcelona Clinic Liver Cancer stage. miRNA-448 inhibited HCC cell growth. The downstream target of miRNA-448 was BCL-2, which was highly expressed in HCC tissues and its mRNA level was negatively correlated with miRNA-448 expression. In vivo, BCL-2 attenuated the tumor inhibiting effect of miRNA-448.ConclusionmiRNA-448 functions as a tumor suppressor by targeting BCL-2 in HCC.     

肾细胞癌组织中TOP2α mRNA、蛋白表达变化及意义

目的观察肾细胞癌组织中DNA拓扑异构酶2α(TOP2α)mRNA、蛋白的表达变化,并探讨其意义。方法采用RT-PCR法检测36例肾细胞癌及癌旁正常组织TOP2αmRNA,用免疫组化SP法检测40例肾细胞癌、19例癌旁正常组织中TOP2α蛋白。结果 TOP2α在肾细胞癌和癌旁组织中均有不同程度的表达,但在肾细胞癌的表达显著高于癌旁正常组织(P<0.05)。TOP2α的表达与肿瘤浸润程度成正相关(P<0.05),而与年龄、性别、淋巴结转移、远处转移及复发等无统计学关联(P>0.05)。结论肾细胞癌组织中TOP2αmRNA、蛋白的表达明显高于癌旁正常组织,且与原发肿瘤浸润程度呈正相关。TOP2αmRNA、蛋白的过表达可能促进肾细胞癌的进展。     

腺病毒介导的Akt／mTOR基因沉默抑制肾癌786-O细胞增殖并促进细胞凋亡

目的应用腺病毒技术下调Akt／mTOR表达水平,检测Akt／mTOR基因沉默对人肾癌786-O细胞增殖和凋亡的影响。方法收集人肾癌及癌旁样品,RealtimePCR检测两组样品中Akt和mTOR的mRNA水平。利用病毒包装细胞293A获得靶向Akt／mTOR基因的重组腺病毒,感染人肾癌786-O细胞株。实验分2组：加人靶向Akt／mTOR基因的腺病毒感染的肾癌细胞组（rAd5-Am组）,未处理的腺病毒感染的。肾癌细胞组（NC组）。应用Real timePCR及Western blot检测干扰前后Akt和mTOR mRNA及蛋白表达水平的变化。用细胞增殖及凋亡试剂盒检测Akt和mTOR沉默后,肾癌786-O细胞增殖、凋亡及PCNA表达水平的改变。结果与癌旁组织相比,Akt和mTOR的mRNA水平在肾癌组织中分别上调了2．613和3．254倍。成功获得knockdownAkt／mTOR的rAd5-Am腺病毒及对照腺病毒,感染肾癌786一O细胞。Real time PCR显示rAd5-Am组与NC组相比Akt／mTOR的mRNA水平分别下调65．3％和77．1％,Westernblot结果显示rAd5-Am组与NC组相比Akt／mTOR的蛋白表达水平分别下调78．4％和89．2％。rAd5．Am能显著降低786-O细胞中Akt／mTOR基因的表达。细胞增殖与凋亡实验表明,Akt／mTOR基因沉默后能显著抑制肾癌细胞786-O的增殖,并促进其凋亡（rAd5-Am组细胞凋亡率是NC组的2．57倍）。进一步的实验结果表明,Akt／mTOR下调后能降低PCNA的蛋白量,从而抑制。肾癌细胞的增殖。rAd5-Am感染的。肾癌786-O细胞的增殖和PCNA蛋白量受到抑制,而凋亡率增加。结论构建出能稳定干扰Akt／mTOR基因表达的。肾癌786-O细胞株。Akt／mTOR腺病毒干扰载体可有效沉默肾癌786-O细胞的内源性Akt／mTOR基因,抑制肾癌786-O细胞的增殖,下调PCNA的表达,并促进细胞凋亡。     

Mesothelin在胰腺癌组织的表达及其临床意义

目的研究胰腺癌组织mesothelin的表达及其与临床肿瘤指标的关系。方法(1)通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测5株胰腺癌细胞株mesothelin mRNA的表达;(2)收集54例手术切除的胰腺癌及42例相应癌旁胰腺组织石蜡标本,利用EnVision免疫组化法分别检测癌组织和癌旁胰腺组织Mesothelin的表达情况。结果5株胰腺癌细胞株均有mesothelin mRNA表达;54例胰腺癌中mesothelin阳性表达41例(75.9%),42例癌旁胰腺组织中均无阳性表达;mesothelin阳性率与肿瘤分化程度相关(P<0.005),与肿瘤大小、淋巴及远处转移无关(P>0.05)。结论Mesothelin在胰腺癌组织中有较高的阳性表达率,检测其表达有助于胰腺癌的诊断,并可作为判断胰腺癌恶性程度的重要指标。