雌激素受体家族及其相关的辅助因子

比较了雌激素受体α、β的六个功能区，其中两者AF-2区的中心序列相同，而AF-1区无明显同源性。结构的不同决定了功能上的差异，雌激素受体α在介导雌激素的效应中起着主要的作用，受体β对受体α有抑制作用，且受体α、β在不同组织有不同的优势表达。在雌激素受体信号转导中的辅助因子有共激活因子和共抑制因子两大类。     

核因子-κB调控老年大鼠脾淋巴细胞凋亡及淫羊藿总黄酮对其影响

目的探讨核因子-κB（nuclearfactor—kappaB，NF-κB）对老年大鼠脾淋巴细胞凋亡的调控作用及淫羊藿总黄酮（epimedium total flaonoids，EF）对老年大鼠脾淋巴细胞凋亡的调控作用是否通过NF—κB实现。方法分别给予老年大鼠模型NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC）和EF干预，提取大鼠脾淋巴细胞，用流式细胞仪检测细胞凋亡，Westem blot检测P65蛋白表达，电泳迁移率（electrophoretic mobility shift assay，EMSA）检测NF-κB的活性。结果老年大鼠脾淋巴细胞凋亡率比青年大鼠高（P〈0．01），PDTC使老年大鼠的凋亡率更高，而EF使老年大鼠的凋亡率降低，与老年组相比有显着性差异（P〈0．05），且EF能拮抗PDTC诱导老年大鼠胆淋巴细胞凋亡。与青年大鼠相比老年大鼠脾淋巴细胞P65蛋白表达显著下调（P〈0．01），而使用EF的老年大鼠组P65蛋白表达明显上调，表明EF诱导P65高表达。老年大鼠脾淋巴细胞NF-κB的活性弱于青年大鼠（P〈0．01），而PDTC处理组的NF—κB活性最低与老年大鼠组相比差异明显（P〈0．01），EF干预组的NF-κB的活性最强，与老年大鼠组相比差异非常显著（P〈0．01）。相关分析表明，淋巴细胞NF—κB活性与细胞凋亡率呈负相关（r=-0．57，P〈0．01）。结论NF-κB通过抑制淋巴细胞凋亡而参与老年大鼠免疫衰老调控过程；EF可能通过提高NF-κB的活性和诱导P65高表达来抑制淋巴细胞凋亡从而延缓免疫衰老进程。     

淫羊藿甙对大鼠成骨细胞护骨素、RANKL表达的影响

目的观察淫羊藿甙对体外培养大鼠成骨细胞护骨素(OPG)、核因子-kB受体活化因子配体(RANKL)mRNA表达的影响。方法用酶消化法分离24h内新生SD大鼠颅盖骨成骨细胞,进行原代培养。在培养液中加入不同浓度的淫羊藿甙(10~(10)～10~(14)mol/L),培养48h后,抽提总RNA,采用半定量RT-PCR法检测成骨细胞中OPG和RANKL mRNA表达的变化。结果淫羊藿甙可明显促进成骨细胞OPG mRNA的表达,抑制RANKL mRNA的表达,且呈浓度依赖性,均以10~(-7)mol/L时作用最显著(P＜0.05)。预先用淫羊藿甙干预成骨细胞,可逆转地塞米松的降低OPG mRNA(0.570±0.093vs 1.083±0.081)、升高RANKL mRNA(1.079±0.050vs 0.718±0.082)的作用(均P＜0.05)。结论淫羊藿甙可以上调OPG基因表达,下调RANKL基因表达,从而调节骨吸收,这可能是淫羊藿甙防治骨质疏松症的重要机制之一。     

淫羊藿总黄酮对高脂血症大鼠主动脉脂联素受体表达的影响

目的 探讨淫羊藿总黄酮对高脂血症大鼠主动脉脂联素受体1和2表达的影响.方法 清洁级SD大鼠35只,随机分为高脂饮食组(26只)和对照组(9只).高脂饮食组高脂饮食喂养12周后,随机分为模型组(8只)和高脂饮食加淫羊藿总黄酮低剂量组(9只)、高脂饮食加淫羊藿总黄酮高剂量组(9只),检测血脂水平及观察主动脉病理变化,通过ELISA检测血清脂联素水平,通过荧光定量PCR法检测主动脉脂联素受体1和2基因的表达,Western boltting检测脂联素受体1和2蛋白的表达.结果 造模12周后,高脂饮食组甘油三酯、总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平明显升高;给药4周后,与模型组比较,淫羊藿总黄酮低剂量组和高剂量组甘油三酯和总胆固醇水平明显降低(P<0.05或0.01),淫羊藿总黄酮能减轻高脂饮食所致的内膜增厚和平滑肌细胞增殖,淫羊藿总黄酮组血清脂联素水平明显升高(P<0.05),且淫羊藿总黄酮高剂量组较淫羊藿总黄酮低剂量组明显升高(P<0.05);淫羊藿总黄酮组脂联素受体1和2 mRNA的表达较模型组明显升高(P<0.05或0.01),且淫羊藿总黄酮高剂量组脂联素受体1 mRNA的表达较低剂量组明显升高 (P<0.05);淫羊藿总黄酮组脂联素受体1和2蛋白的表达较模型组明显升高(P<0.05或0.01).结论 淫羊藿总黄酮能降低高脂血症大鼠血脂水平,并升高血清脂联素水平及主动脉脂联素受体1和2的表达.     

巴戟天多糖对去卵巢大鼠核因子-κB受体激活因子配体和骨保护素表达的影响

目的观察巴戟天多糖对去卵巢大鼠骨组织核因子-κB受体激活因子配体(RANKL)和骨保护素(OPG)mRNA表达的影响。方法成年雌性SD大鼠30只,随机分为假手术组、模型组、巴戟天多糖组,采用摘取双侧卵巢法建立骨质疏松模型,造模2 w后开始给药,给药3个月后观察各组大鼠骨密度(BMD),骨钙、骨磷含量,RANKL、OPG mRNA的表达水平。结果给药3个月后巴戟天多糖组能显著提高去卵巢大鼠的BMD和骨钙、磷的含量,上调OPG mRNA表达,下调RANKL mRNA表达,使RANKL/OPG值下降。结论巴戟天多糖对去卵巢所致的大鼠骨质疏松具有良好的防治作用,其机制可能与调控RANKL和OPG mRNA的表达,降低RANKL/OPG值有关。     

淫羊藿女贞子对激素干预哮喘大鼠模型气道炎症的影响研究

目的 比较研究哮喘大鼠模型地塞米松干预撤停不同阶段(撤停前、撤停中、撤停后)合用淫羊藿女贞子的协同抗炎作用.方法 卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)致敏激发建立大鼠哮喘模型,腹腔注射地塞米松模拟激素干预过程,分别在激素干预不同阶段合用中药淫羊藿女贞子,观察比较药物对激素干预各阶段哮喘模型支气管肺泡灌洗液(branchoalveolar lavage fluids,BALF)涂片嗜酸粒细胞(eosinophils,EOS)计数,BALF中γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、白介素(interleukine,IL)-4、IL-5、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量.结果 ①激素撤停前阶段:淫羊藿女贞子合用激素干预组能下调哮喘模型EOS数量和IL-5、IL-4、TNF-α含量,上调IFN-γ表达,调节Th1/Th2失衡.②激素撤停中阶段:淫羊藿合用女贞子合激素干预Ⅰ、Ⅱ组能显著下调哮喘模型大鼠EOS数量、IL-5水平;淫羊藿女贞子合用激素干预Ⅰ组能显著提高IFN-γ/IL-4比值;淫羊藿女贞子合用激素干预Ⅱ组可显著抑制TNF-α含量.③激素撤停后阶段:激素干预组EOS炎症加重;淫羊藿女贞子合用激素干预Ⅰ、Ⅱ组能下调哮喘模型大鼠EOS数量,淫羊藿女贞子合用激素干预Ⅱ组对IL-5也有显著的抑制作用;淫羊藿女贞子合用激素干预Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组均能降低IL-4含量,升高IFN-γ含量,仅淫羊藿女贞子合激素干预Ⅰ组对IFN-γ/IL-4有显著调节作用,还能显著降低TNF-α含量.结论 激素应用可有效地抑制EOS为主的气道炎症.但随着激素用量的撤减及停用,其抗炎作用减弱,气道炎症加重.淫羊藿女贞子在激素撤停早期介入与糖皮质激素的协同增效抗炎作用更优.     

淫羊藿女贞子对激素干预哮喘大鼠模型气道炎症的影响研究

目的比较研究哮喘大鼠模型地塞米松干预撤停不同阶段(撤停前、撤停中、撤停后)合用淫羊藿女贞子的协同抗炎作用。方法卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)致敏激发建立大鼠哮喘模型,腹腔注射地塞米松模拟激素干预过程,分别在激素干预不同阶段合用中药淫羊藿女贞子,观察比较药物对激素干预各阶段哮喘模型支气管肺泡灌洗液(branchoalveolar lavage fluids,BALF)涂片嗜酸粒细胞(eosinophils,EOS)计数,BALF中γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、白介素(interleukine,IL)-4、IL-5、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量。结果①激素撤停前阶段:淫羊藿女贞子合用激素干预组能下调哮喘模型EOS数量和IL-5、IL-4、TNF-α含量,上调IFN-γ表达,调节Th1/Th2失衡。②激素撤停中阶段:淫羊藿合用女贞子合激素干预Ⅰ、Ⅱ组能显著下调哮喘模型大鼠EOS数量、IL-5水平;淫羊藿女贞子合用激素干预Ⅰ组能显著提高IFN-γ/IL-4比值;淫羊藿女贞子合用激素干预Ⅱ组可显著抑制TNF-α含量。③激素撤停后阶段:激素干预组EOS炎症加重;淫羊藿女贞子合用激素干预Ⅰ、Ⅱ组能下调哮喘模型大鼠EOS数量,淫羊藿女贞子合用激素干预Ⅱ组对IL-5也有显著的抑制作用;淫羊藿女贞子合用激素干预Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组均能降低IL-4含量,升高IFN-γ含量,仅淫羊藿女贞子合激素干预Ⅰ组对IFN-γ/IL-4有显著调节作用,还能显著降低TNF-α含量。结论激素应用可有效地抑制EOS为主的气道炎症。但随着激素用量的撤减及停用,其抗炎作用减弱,气道炎症加重。淫羊藿女贞子在激素撤停早期介入与糖皮质激素的协同增效抗炎作用更优。     

脂多糖诱导巨噬细胞中核受体协同抑制因子启动子甲基化对炎症因子的调控作用

目的探讨核受体协同抑制因子(NCOR)在脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞炎症反应中的作用及其调控机制。方法 1μg/ml的LPS分别处理小鼠巨噬细胞RAW264.7 24 h和48 h,应用Western blot和Real time-PCR检测NCOR的表达水平以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)mRNA水平,荧光素酶报告基因检测核因子-κB(NF-κB)的启动子活性。LPS处理细胞48 h后,应用MSP检测NCOR启动子是否发生甲基化以及Western blot检测DNMT3b的表达变化。Real time-PCR检测5'-aza和LPS联合处理细胞后NCOR mRNA的表达水平;转染DNMT3b siRNA后,分别应用Western blot和Real time-PCR检测DNMT3b的表达水平,以及DNMT3b siRNA和LPS联合作用下NCOR、TNF-α、IL-6的表达水平和NF-κB的启动子活性。结果 LPS干预细胞24、48 h后,NCOR蛋白和mRNA表达显著下调(P0.05),而TNF-α、IL-6 mRNA表达水平、DNMT3b蛋白的表达水平以及NF-κB的启动子活性显著上升(P0.05)。MSP检测说明LPS可介导NCOR的启动子甲基化。用5'-aza和LPS联合处理细胞后NCOR mRNA水平较LPS组有显著上升(P0.05)。采用DNMT3b siRNA可显著下调DNMT3b蛋白和mRNA水平,并可部分逆转LPS介导的抑制NCOR表达的效应,抑制TNF-α、IL-6的表达水平和NF-κB的启动子活性(P0.05)。结论 NCOR启动子的甲基化是LPS介导巨噬细胞炎症反应发生、发展的关键步骤,其可作为治疗ALI/ARDS的潜在靶点。     

Toll样受体4/核因子κB和氧化低密度脂蛋白受体LOX-1对单核内皮细胞黏附的影响

目的近年研究表明介导先天免疫反应的受体Toll样受体4（TLR4）参与动脉粥样硬化的发生发展。TLR4激动后通过诱导核因子κB（NF—κB）激活,调控炎症因子的表达。研究观察TLR4／NF—κB激活对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）氧化低密度脂蛋白受体（lectin—like oxidized lowdensity lipoprotein receptor-1,LOX-1）、细胞间黏附分子1（intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1）、E-选择素（E—selectin）表达的调节,以及它们在介导单核内皮细胞黏附中的作用。方法应用脂多糖（LPS,1mg／L）刺激HUVECs 24h。采用RT—PCR方法检测TLR4、LOX-1、ICAM-1、E—selecfin mRNA表达水平;采用蛋白质印迹技术检测TLR4、LOX-1蛋白表达水平及核蛋白NF—κB p65表达的变化;采用直接计数法观察HUVECs与单核细胞的黏附率。结果LPS上调TLR4表达,激活NF—κB,上调HUVECs LOX-1、ICAM-1、E—selectin表达,增加单核细胞与内皮细胞的黏附率;抗LOX-1、ICAM-1、E—selectin抗体均部分抑制LPS介导的单核与内皮细胞黏附率的增加;NF—κB抑制剂一咖啡酸苯乙酯（CAPE）抑制了LPS介导的上述效应。结论TLR4／NF—κB激活上调LOX-1、ICAM-1、E—selectin表达,它们均在LPS介导的单核内皮细胞黏附过程中起部分作用,NF—κB在LPS介导的上述效应中起关键调节作用,干预NF—κB激活可能成为防治动脉粥样硬化的靶目标。     

丹蓝仙硼疗氟胶囊对氟中毒大鼠骨保护素/核因子κβ受体活化因子配体/核因子κβ受体活化因子系统表达水平的影响

目的 观察慢性氟中毒大鼠骨组织中骨保护素(OPG)、核因子κβ受体活化因子配体(RANKL)、核因子κβ受体活化因子(RANK)蛋白表达水平,探讨OPG/RAN KL/RANK系统与慢性氟中毒大鼠骨骼损伤的关系及丹蓝仙硼疗氟胶囊的拮抗作用.方法 将SD大鼠按体质量随机分为6组(组内雌雄各半):氟中毒组、高剂量药物组、中剂量药物组、低剂量药物组、对照组、硼砂(阳性药物对照)组,每组12只.对照组饮用自来水,其余5个实验组饮用含氟水(50 mg/L),而高、中、低剂量药物组另摄入丹蓝仙硼疗氟胶囊,剂量分别为0.8、O.4、O.2 g/kg,硼砂组另摄入硼砂,剂量为0.8 g/kg.6个月时用免疫组织化学方法检测OPG、RANKL、RANK蛋白在大鼠股骨干骺端的表达.结果 与对照组(173.79±5.23、174.17±5.O1、155.63±7.11)比较,氟中毒组大鼠股骨干骺端OPG、RANKL(156.83±5.80、157.74±6.70)表达增高,RANK(173.92±4.37)表达降低,差异有统计学意义(P均＜0.05).与氟中毒组比较,高、中剂量药物组OPG、RANKL(169.67±5.07、168.08±5.05,170.78±5.01、168.41±7.19)表达降低,RANK(162.12±4.24、166.69±5.78)表达增高,差异有统计学意义(P均＜O.05).与硼砂组(167.27±4.08、167.85±5.O1、166.14±3.95)比较,低剂量药物组OPG、RANKL(163.40±4.11、159.49±5.78)表达增高,RANK(171.54±8.06)表达降低,而高剂量药物组RANK(162.12±4.24)表达增高,差异有统计学意义(P均＜0.05).结论 慢性氟中毒可引起成骨与破骨活动均增强的骨转换增高状态,并可通过改变OPG/RANKL/RANK系统表达影响骨吸收的程度.丹蓝仙硼疗氟胶囊能通过OPG/RANKL/RANK系统影响骨重建,对氟致骨损伤有拮抗作用.     

NF-κB在溃疡性结肠炎激素抵抗中的意义

目的:探讨NF-κB与溃疡性结肠炎(UC)发病关系及其在激素抵抗中的意义．方法:选择活动期中度以上UC患者35例,均予强的松治疗(20-40 mg/d)4 wk．根据治疗反应分为激素敏感组和激素耐药组,均作为实验组,检测激素治疗前、治疗后结肠病变黏膜组织中的NF-κB表达水平．设立正常对照组 16例．结果:在激素治疗前,激素敏感组、激素抵抗组NF-κB p65表达水平分别与正常对照组比较,差异有显著性(5．9±2．7,6．1±2．9 vs 1.1± 0．8,P<0．01)．在激素治疗前,激素敏感组和激素抵抗组之间比较,差异无显著性(P>0．05)．在激素治疗后,激素敏感组和激素抵抗组之间比较,差异有显著性(1．3±0．8 vs 5．4± 2．4,P<0．01)．在激素治疗前后,激素敏感组自身比较,差异有显著性(5．9±2．7 vs 1．3±0．8, P<0．01)．而激素抵抗组在前后结果的比较中, 差异无显著性(P>0．05)．结论:NF-κB与UC关系密切,在UC的发病机制中起重要作用．NF-κB在激素治疗前后的变化有助于判断UC患者是否对激素抵抗,可以作为进一步预测激素抵抗的一个较早期的诊断指标．     

辛伐他汀对糖尿病大鼠肾组织Toll样受体4表达的影响

用免疫组化和RT-PCR方法检测糖尿病大鼠肾组织中Toll样受体4(TLR4)的表达.结果显示糖尿病组TLR4表达较正常对照组升高(P＜0.05),而辛伐他汀干预组较糖尿病组低(P＜0.05),提示TLR4可能参与了糖尿病肾病的发生及发展.辛伐他汀可能通过降低TLR4的表达保护肾组织.     

瘦素受体与核转录因子-κB在结直肠腺癌组织中的表达及意义

目的:研究瘦素受体(Ob-R)在结直肠腺癌组织中的表达,探讨Ob-R在肿瘤血管生成中的作用及其可能机制．方法:免疫组织化学方法检测35例结直肠腺癌组织、24例结直肠腺瘤组织和35例正常对照组织中Ob-R、CD105、核转录因子-κBp65(NF-κBp65)的表达,以图像分析软件进行半定量测定．结果:以CD105标记的微血管密度(MVD)在癌症组、腺瘤组、正常对照组间呈递减改变(23．63±2．08 vs 10．83±1．25 vs 1．97±0.37．P<0．05)．Ob-R和NF-κB(p65)的表达部位相似．癌症组中Ob-R和NF-κB(p65)的积分光密度均比对照组高(27．41±2．21 vs 20．45±1．63, 45．88±5．46 vs 29．11±3．89,P<0．05)．癌症组中Ob-R,NF-κBp65的积分光密度,MVDS三者间呈两两正相关．癌症组63．6％的标本中可见Ob-R血管内皮细胞染色阳性,其MVD较阴性者高(38．21±2．78 vs 27．50±2．95,t=2．602, P<0．05);68．6％的癌症标本中可见NF-κBp65血管内皮细胞核表达阳性,其MVD较阴性者高(37．53±3．07 vs 28．42±2．63,t=2．146, P<0．05)．Ob-R和NF-κBp65的表达与结直肠腺癌临床病理因素间未见相关性．结论:结直肠腺癌组织中Ob-R表达增多对肿瘤血管生成起促进作用,并且该作用可能是通过NF-κB途径来实现的．