肿瘤坏死因子α调节人肝癌MHCC-97H细胞中白细胞介素8的分泌

目的 研究肿瘤坏死因子(TNF)α诱导人肝癌细胞系MHCC-97H分泌白细胞介素8(IL-8)及p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和核因子-κB (NF-κ B)信号通路对其的调节作用.方法 酶联免疫吸附法检测不同浓度的TNF α(0、1、5 ng/ml)干预人肝癌细胞MHCC-97H 24 h和相同浓度的TNFα(1 ng/ml)干预不同时间后,细胞上清液中IL-8的浓度; Western blot和免疫荧光方法检测TNFα(1 ng/ml)刺激MHCC-97H细胞后,p38 MAPK磷酸化蛋白的表达及其分布;非放射性NF-κ B p50/p65转录因子活性试剂盒检测TNFα干预MHCC-97H细胞后核蛋白中活性NF-κB p65蛋白的含量.多组均数比较采用单因素方差分析,多个样本均数间两两比较用q检验.结果 TNFα明显促进肝癌细胞分泌IL-8,具有显著的时间和浓度依赖性:TNFα干预0、6、12、18、24h,IL-8的浓度分别为(47.45±9.78)pg/ml、(497.41±52.83)pg/ml、(694.14±44.43)pg/ml、(909.35±97.22) pg/ml、(1093.59±75.72) pg/ml (F=144.04,P＜0.01);TNFα0、1、5、10 ng/ml干预24h,IL-8浓度分别为(47.45±9.12) pg/ml、(1093.59±75.72)pg/ml、(1372.77±85.10) pg/ml和(1614.55±153.52) pg/ml(F=364.14,P＜0.01).TNFα刺激肝癌细胞后,p38 MAPK磷酸化蛋白表达明显上调,给予p38 MAPK通路特异性抑制剂(SB203580)可以显著抑制TNFα诱导的IL-8的分泌(P值均＜0.01)且呈浓度依赖性(F=165.92,P＜0.01).免疫荧光结果显示TNFα促进肝癌细胞NF-κ B p65的核转位,且呈浓度依赖性(TNF α0、1、5、10 ng/ml处理肝癌细胞1h后细胞核蛋白表达NF-κ B p65对应吸光度值分别为0.52±0.04、2.75±0.15、3.13±0.18、3.81±0.14 (F=1266.42,P＜0.05),而SB203580则可以部分抑制NF-κB p65的核转位(F=141.20,P＜0.05).结论 TNFα通过p38 MAPK-NF-κB信号途径调节人肝癌细胞系MHCC-97分泌IL-8.     

不同疾病阶段乙型肝炎病毒感染者的树突状细胞功能及血清细胞因子表达水平

目的 探讨HBV感染后不同疾病阶段(免疫耐受期、肝炎活动期、非活动携带状态)者断面的树突状细胞(DC)亚群功能和血浆细胞因子水平的差异及其可能的原因.方法 30例HBV感染后不同疾病阶段者,分为免疫耐受组、肝炎活动组和非复制携带组,每组10例;另选10名健康人作为对照组.收集研究对象外周血,检测白细胞介素(IL)-12、IL-10、干扰素(IFN)α、IFN γ、肿瘤坏死因子(TNF)α的表达水平,分析髓样树突状细胞(mDC)和浆细胞样树突状细胞(pDC)的功能(以IL-12含量代表mDC的功能,以IFN α含量代表pDC功能)及其他细胞因子在不同组别间表达水平的差异.细胞因子表达水平的比较,总的HBV感染组与健康对照组比较用t检验,4组间两两比较用秩和检验.结果 HBV感染组IL-12总含量及单个核mDC IL-12含量均低于对照组[分别为(153.12±159.30)pg/ml比(338.48±142.92)pg/m和(9.48±9.57)fg比(15.10±6.25)fg,F值分别为0.225和0.684,P值均＜0.01],两组IFN α总含量及单个核pDC IFN α含量差异无统计学意义[分别为(575.87±477.02)pg/ml比(662.37±356.06)pg/ml和(85.14±68.44)fg比(62.11±627)fg,F值分别为1.467和1.804,P直均＞0.05].组间两两比较结果显示,健康对照组IL-12总含量[(338.48±142.92)pg/ml ]高于其他3组(Z值分别为-3.039、-2.967和-2.949,P值均＜0.01),单个核mDC IL-12含量[(15.10±6.25)fg]也高于其他3组(Z值分别为-3.027、-2.671和-2.863,P值均＜0.01);健康对照组IFN α总含量为(662.37±365.06)pg/ml,单个核pDC IFN α含量为(62.11±27.04)fg,均高于肝炎活动组(Z值分别为-3.016和-3.176,P值均＜0.01).HBV感染不同组别中,仅IFNα水平[分别为(86.17±12.02)pg/ml、(91.76±39.64)pg/ml和(139.32±207.35)pg/ml]高于健康对照组[(53.30±23.92)pg/ml],差异有统计学意义(Z值分别为-2.967、-2.896和-3.054,P值均＜0.01).结论 HBV感染后,DC功能和IFN α水平存在不同程度的异常,但是HBV不同转归期DC功能无明显差异.DC功能缺陷和IFN α水平异常可能是HBV感染慢性化的原因之一.     

慢性乙型重型肝炎患者外周血单个核细胞衍生的树突状细胞表型与功能

目的 通过检测慢性乙型重型肝炎(CSHB)患者外周血单个核细胞(PBMC)衍生的树突状细胞(MoDC)经聚肌胞苷酸刺激后表型变化及细胞因子分泌情况,了解MoDC的免疫调节功能及其在慢性乙型肝炎(CHB)重症化中的作用.方法 采集CSHB组患者37例、CHB组患者20例和健康对照者20例的外周血,分离PBMC,免疫磁珠细胞分选法获得纯化的PBMC,体外培养诱导为未成熟树突状细胞(iDC),聚肌胞苷酸刺激为成熟树突状细胞(mDC).流式细胞术检测iDC及mDC细胞表面人类白细胞DR抗原(HLA-DR)、CD83、CD86、CD80的平均荧光强度(MFI);ELISA测定聚肌胞苷酸刺激后12、24、48 h的MoDC培养上清液中IL-12、IL-6、TNF-α分泌水平.多组间比较采用单因素方差分析,并进行方差齐性检验.结果 3组iDC表面HLA-DR、CD83、CD86、CD80的MFI比较,差异无统计学意义.CSHB组患者mDC表面HLA-DR、CD83、CD86、CD80的MFI与CHB组、健康对照组比较,显著低下(F值分别为59.73、13.95、34.80和73.02,均P＜0.05).聚肌胞苷酸刺激12、24、48 h时IL-12分泌量为:健康对照组＞CHB组＞CSHB组(F值分别为151.34、126.65、72.76,均P＜0.05),其中24 h时分泌量最高,分别为(48.2±7.6)、(56.7±11.8)、(97.8±16.2)ng/L.IL-6在上述3个时间点的分泌量为:CSHB组＞CHB组＞健康对照组(F值分别为92.50、86.89、64.57,均P＜0.05),其中12 h分泌量最高,分别为(1698.3±340.4)、(965.8±231.7)、(697.8±213.6)ng/L.TNF-α在上述3个时间点的分泌量为:CSHB组＞CHB组＞健康对照组(F值分别为58.66、122.36、44.73,均P＜0.05),24 h表达量分别为(19 672.7±4214.7)、(9946.1±2586.5)、(6659.2±955.8)ng/L.结论 CSHB患者MoDC成熟障碍,表现为IL-12分泌低下,而IL-6及TNF-α分泌亢进,可能是加剧肝脏炎性反应致重型肝炎的重要因素.     

沉默信息调节因子1在具核梭杆菌诱导肠上皮细胞炎症和凋亡中的作用

目的探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)在具核梭杆菌(Fn)诱导肠上皮细胞炎症和凋亡中的作用。方法建立Fn感染肠上皮细胞模型并分为3组,即Fn感染组、Fn+Sirtinol组(SIRT1抑制剂)、Fn+白藜芦醇组(SIRT1激动剂),另设未感染对照组。在Fn感染肠上皮细胞6 h后,采用qRT-PCR、ELISA、Western blot、流式细胞术检测4组细胞中SIRT1基因mRNA和蛋白表达情况、炎症因子的量、NF-κB信号通路的表达、凋亡率、凋亡相关蛋白的表达。结果与Fn感染组相比,Fn+白藜芦醇组细胞中SIRT1 mRNA和蛋白质的表达升高,Fn+Sirtinol组细胞中SIRT1 mRNA和蛋白质的表达降低(P0.01)。Fn+Sirtinol组上清液中4种炎症因子含量[IL-1β:(35.975±2.995)pg/ml,IL-6:(954.250±37.340)pg/ml,IL-8:(598.500±23.014)pg/ml,TNF-α:(398.296±20.663)pg/ml]显著高于Fn+白藜芦醇组[IL-1β:(6.925±1.053)pg/ml,IL-6:(242.009±18.850)pg/ml,IL-8:(5.375±6.067)pg/ml,TNF-α:(79.537±8.334)pg/ml]和Fn感染组[IL-1β:(11.125±1.374)pg/ml,IL-6:(525.425±21.247)pg/ml,IL-8:(262.000±14.071)pg/ml,TNF-α:(180.412±11.826)pg/ml](P0.01)。Fn+Sirtinol组细胞中3种NF-κB信号通路相关蛋白质的表达量与其余3组比较差异有统计学义(P0.01);Fn感染组细胞中3种蛋白质的表达量明显高于Fn+白藜芦醇组和对照组(P0.01,P0.05)。Fn+Sirtinol组细胞在Fn感染6 h后凋亡率达峰值[(27.028±3.319)%],与其余3组的细胞的凋亡率比较差异有统计学义(P0.01);Fn感染组细胞的凋亡率[(16.864±2.213)%]明显高于Fn+白藜芦醇组[(5.584±1.148)%]和对照组[(2.510±0.763)%](P0.01)。Fn+Sirtinol组细胞中Bax、Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9蛋白高表达,与其余3组比较差异有统计学义(P0.01)。Fn+Sirtinol组细胞中Bcl-2蛋白低表达,与Fn+白藜芦醇组和对照组表达量比较差异有统计学义(P0.01或P0.05),Fn+白藜芦醇组组细胞中Bcl-2蛋白的表达量则明显高于对照组(P0.01)。结论在Fn感染的体外模型中,SIRT1可抑制肠上皮细胞分泌炎症因子,下调NF-κB信号通路的表达,可能通过线粒体凋亡途径抑制细胞的凋亡。     

Toll样受体-2、核因子-κB在Aβ诱导的阿尔茨海默病中的作用

目的探讨Toll样受体2(TLR-2)、核因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β与β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的阿尔茨海默病(AD)中的作用。方法将雄性Wistar大鼠50只,随机分为A、B、C、D、E组,每组10只;A组大鼠双侧海马CA1区注射5μl生理盐水,B~E组双侧海马注射5μl Aβ(分别含Aβ25~350.5、1、5、10μg);ELISA检测TNF-α、IL-1β含量;免疫组化(IHC)检测海马CA1区TLR-2表达;实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)检测TLR-2、NF-κB基因的mRNA表达。结果 IHC检测TLR-2主要聚集在Aβ斑块周围,D组(0.036 6±0.007 3)、E组(0.044 8±0.010 8)TLR-2阳性表达明显高于A组(0.018 7±0.005 8)、B组(0.010 0±0.003 4)、C组(0.015 1±0.006 0)(P0.01);ELISA检测大鼠血清TNF-α含量D组(568.65±44.66)pg/ml、E组(685.06±29.92)pg/ml明显高于A组(426.87±55.91)pg/ml、B组(432.99±28.09)pg/ml、C组(488.14±39.04)pg/ml(P0.01),IL-1β含量D(104.60±9.32)pg/ml、E组(143.38±17.09)pg/ml明显高于A(49.13±8.46)pg/ml、B(60.89±14.71)pg/ml、C(79.81±9.94)pg/ml三组(P0.01);qRT-PCR检测大鼠海马组织内TLR-2 mRNA表达D组(2.185 9±0.381 4)、E组(2.977 7±0.390 7)明显高于A组(1.000 0±0.000 0)、B组(1.178 5±0.106 6)、C组(1.463 3±0.127 3)(P0.01);NF-κB mRNA表达D组(1.747 0±0.125 6)、E组(2.271 9±0.533 2)明显高于A组(1.000 0±0.000 0)、B组(1.274 3±0.165 1)、C组(1.429 1±0.077 7)(P0.01)。结论随着Aβ剂量不断增加,TLR-2促进小胶质细胞吞噬和清除Aβ的能力不足使Aβ积聚体并激活NF-κB,促进更多的TNF-α、IL-1β释放,最终导致大鼠脑内神经元损伤。     

调节性T细胞和辅助性T细胞17的平衡变化在慢性乙型肝炎病毒感染中的作用

目的 研究调节性T细胞(Treg)和辅助性T细胞17(Th17)的平衡变化在慢性HBV感染中的作用.方法 应用ELISA法和流式细胞术分别对34例慢性乙型肝炎(CHB)患者、20例HBV相关慢加急性肝功能衰竭(ACHBLF)患者和20例健康对照者外周血中Treg和Th17分化相关细胞因子及外周血Th17和Treg细胞水平进行检测.计数资料应用Fisher's确切概率法,计量资料应用单因素方差分析和Tukey's多重比较检验.结果 ACHBLF组Th17分化相关因子IL-1β为(3.97±2.85) pg/mL,IL-6为(12.75±8.87)pg/mL,IL-21为(360.0±335.7)pg/mL,比健康对照组的IL-1β[(1.87±0.94)pg/mL,q=4.559,P＜0.01)、IL-6[(5.28±o.72)pg/mL,q=7.309,P＜0.01)和IL-21[(46.68±20.17) pg/mL,q=6.946,P＜0.01)均明显上调.ACHBLF组外周血Th17细胞比例明显高于健康对照组(q=3.972,P＜0.05).与健康对照组和ACHBLF组相比,CHB组Treg细胞分化相关因子TGF-β明显升高(q=4.536、5.323,均P＜0.01),外周血Treg比例也明显升高.ACHBLF组Th17细胞效应因子IL-17A水平最高,ACHBLF患者外周血Th17细胞比例与血清TBil水平呈正相关(γ=0.74,P＜0.01).结论 慢性HBV感染中,宿主免疫存在Th17和Treg失衡,ACHBLF组以Th17细胞活动为主,CHB组以Treg细胞活动为主.     

硫辛酸调节Toll样受体4途径对帕金森病细胞模型的保护作用和机制

目的探究硫辛酸调节Toll样受体4(TLR4)/NF-κB/白细胞介素1β(IL-1β)途径对帕金森病细胞模型的保护作用和机制。方法将PC12细胞分为对照组、脂多糖组、联合组(脂多糖+硫辛酸)。检测各组细胞活力、细胞凋亡率、TLR4、NF-κB mRNA和蛋白表达以及培养液中IL-1β水平。结果各组细胞活力、细胞凋亡率、TLR4、NF-κB mRNA和蛋白及IL-1β表达比较,差异有统计学意义(P<0.01)。脂多糖组和联合组吸光度值显著低于对照组,细胞凋亡率、TLR4、NF-κB mRNA和蛋白表达显著高于对照组(P<0.05)。联合组吸光度值显著高于脂多糖组,细胞凋亡率、TLR4、NF-κB mRNA和蛋白表达显著低于脂多糖组(P<0.05)。脂多糖组和联合组IL-1β水平显著高于对照组[(16.35±2.28)pg/ml、(8.21±0.97)pg/ml vs(2.98±0.32)pg/ml,P<0.05]。联合组IL-1β水平显著低于脂多糖组(P<0.05)。结论硫辛酸可恢复帕金森病模型细胞活力并抑制凋亡,还能够显著抑制TLR4和NF-κB转录和翻译,减少IL-1β分泌。     

非酒精性脂肪性肝病家兔肠上皮细胞紧密连接、肠腔大肠杆菌、肠黏膜Toll样受体4与肿瘤坏死因子α的关系

目的 研究非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)家兔肠上皮细胞紧密连接、肠道大肠杆菌、肠黏膜Toll样受体4(TLR4)与肿瘤坏死因子α(TNF α)的变化,并分析TNF α与这些因素之间的关系. 方法 14只雄性新西兰家兔随机分成对照组及模型组,对照组给予普通饲料,模型组给予高脂饲料,喂养12周后处死.取回肠组织行电镜检查,观察肠上皮细胞间紧密连接长度及宽度的变化,采静脉血行酶联免疫吸附法检测血清TNF α,免疫组织化学法观察肠黏膜TLR4的定位及表达,实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-PCR)检测粪便中大肠杆菌的变化.逐步多元线性回归分析评估血清TNF α与肠腔大肠杆菌数、肠上皮细胞间紧密连接长度、肠黏膜TLR4表达量之间关系. 结果 与对照组相比,模型组家兔肠上皮紧密连接缩短[(0.377±0.045) μm对比(0.518±0.059) μm,t=5.031,P＜0.01]且间隙增宽,肠腔中大肠杆菌数量增多[(54.767±28.467)拷贝/g对比(14.299± 11.400) log10log10拷贝/g,t=-3.492,P＜0.01],肠黏膜TLR4表达升高[0.042±0.014对比0.015±0.01,t=-44.089,P＜0.01],血清TNF α升高[(0.289±0.016)pg/ml对比(0.210±0.013)pg/ml,t=-17.768,P＜0.01].回归分析结果显示,大肠杆菌、肠上皮紧密连接、肠黏膜TLR4与TNF α明显相关(F=17.773,P＜0.01),拟合优度判定系数R2=0.842;血清TNF α水平与紧密连接呈负相关(标准回归系数=-0.385),与大肠杆菌和TLR4呈正相关(标准回归系数分别为0.332和0.427).结论 NAFLD家兔肠道物理屏障、生物屏障及免疫屏障的破坏与TNF α水平关系密切,且免疫屏障对TNF α的影响更为显著.     

CD14和Toll样受体4的表达在内毒素致肝炎重型化中的意义

目的 探讨CD14和Toll样受体4(TLR4)在内毒素(LPS)诱导机体炎性因子分泌过程中的作用,阐明乙型肝炎重型化的机制. 方法 采用流式细胞学方法和逆转录聚合酶链反应等技术,检测30例慢性重型乙型肝炎患者,30例慢性乙型肝炎患者和20名健康者(对照组)的外周血单核细胞的mCD14水平及CD14 mRNA,TLR4 mRNA表达水平,同时应用动态浊度法测定患者血浆LPS水平,应用酶联免疫吸附法检测患者血清肿瘤坏死因子(TNF)α、白细胞介素(IL)-1 β,IL-6的含量.数据的统计分析采用SPSS11.5统计软件完成,分别采用单因素方差分析、非参数检验、Nemenyi法和直线相关分析.结果 外周血单个核细胞mCD14表达水平:慢性重型乙型肝炎组为74.2%±12.3%,慢性乙型肝炎组为63.6%±11.8%,对照组为60.3%±7.20/;CD14mRNA和TLR4 mRNA的相对表达:慢性重型乙型肝炎组分别为2.92±0.67和1.86±0.45,慢性乙型肝炎组分别为1.34±0.51和0.93±0.18,对照组分别为0.92±0.58和0.73±0.16,慢性重型乙型肝炎组均明显高于慢性乙型肝炎组和对照组,F值分别为11.473、85.037和102.328,P值均<0.01,差异有统计学意义.血浆LPS、IL-l,IL-6水平:慢性重型乙型肝炎组分别为(1.87±1.61)Eu/ml,(0.96±0.16)pg/ml和(68.34±48.30)pg/ml,慢性乙型肝炎组分别为(0.11±0.11)Eu/ml、(0.19±0.02)pg/ml,(19.28±4.65)pg/ml,对照组分别为(0.03±0.03)Eu/ml、(0.15±0.01)pg/ml、(12.01±3.88)pg/ml,慢性重型乙型肝炎组均明显高于慢性乙型肝炎组和对照组,χ2值分别为32.065、83.472、36.236,P值均<0.01.外周血TNFα表达水平:慢性重型乙型肝炎组为(19.78±9.25)pg/ml、慢性乙型肝炎组分别为(7.26±6.52)pg/ml、对照组分别为(4.15±4.06)pg/ml、F=35.092,P<0.01.相关分析显示,在慢性重型乙型肝炎组LPS水平与mCD14、CD14:mRNA,TLR4 mRNA表达水平呈明显的相关性,n=0.865、r2=0.415、r3=0.524,P值均<0.05.结论 LPS可能通过以CD14和TLR4为主的LPS受体激活及其信号传导,刺激炎性因子分泌的途径,在肝炎重型化过程中发挥重要作用.     

外周血白细胞IKK-IκB-NFκB通路的激活与胰岛素抵抗关系的临床研究

目的 探讨不同胰岛素敏感性个体炎症因子血浆水平以及炎症通路激活状态的差异.方法 收集体检女性38例,按体重指数分为两组:肥胖组22例,正常对照组16名,稳态模型评估的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)评估研究对象胰岛素敏感性,检测炎症因子白细胞介素6(IL-6)、IL-1β血浆水平,Western印迹法检测外周血白细胞IκB激酶(IKK)、NFκB抑制物(IκB)及其磷酸化水平,以凝胶电泳迁移率分析(EMSA)评价核因子NFκB的结合活性.结果 肥胖组空腹胰岛素[62.2(20.0～127.0)pmol/L对19.15(14.2～47.8)pmol/L,P<0.01]、HOMA-IR[2.32(0.76～5.49)对0.70(0.53～1.7),P<0.01]、HbAIC[(5.42±0.45)%对(5.08±0.38)%,P<0.05]、血甘油三酯[(1.75±0.68对1.22±0.58)mmol/L,P<0.05]、IL-6[3.15(0.03～22.2)pg/ml对1.26(0.74～6.06)pg/ml,P<0.01]和IL-1β[6.53(0.84～36)pg/ml对3.16(1.48-8.86)pg/ml,P<0.01]水平显著高于正常对照组,伴随外周血白细胞胞浆蛋白IKKα、IKKβ表达和IκBα丝氨酸磷酸化水平增高,IκBα表达下调,肥胖组NFκB结合活性较正常对照组显著增加.结论 肥胖组炎症因子IL-6、IL-Iβ血浆水平显著升高.IKK-IκB-NFκB通路的激活与肥胖个体胰岛素抵抗的发生有关.     

粉防己碱抑制心肌细胞磷酸化减轻缺血/再灌注损伤引发的炎症反应

目的:探讨心肌缺血/再灌注过程中粉防己碱(Tet)对核转录因子(NF)-κB的抑制因子(IκB-α)磷酸化及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)表达的影响以及机制。方法:60只SD大鼠被随机分为3组:缺血/再灌注损伤组(I/R)、假手术组、粉防己碱治疗组(Tet)。I/R组结扎大鼠左前降支造成心肌缺血30min后再灌注24h,然后处死大鼠;假手术组只穿针不结扎,余步骤同I/R组;Tet组在缺血前20min腹腔注射Tet,余步骤同I/R组。处死大鼠24h后取心肌标本,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测心肌组织中TNF-α、IL-6表达水平,应用免疫组织化学方法检测磷酸化IκB-α(P-IκB-α)的表达。结果:Tet组与I/R组相比TNF-α、IL-6表达水平明显减低[(208.40±25.12)pg/ml∶(306.65±17.78)pg/ml,(587.40±137.40)pg/ml∶(1003.75±138.33)pg/ml,P均0.01],而Tet组与假手术组相比表达明显增强[(208.40±25.12)pg/ml∶(61.45±9.20)pg/ml,(587.40±137.40)pg/ml∶(229.25±90.13)pg/ml,P均0.01]。Tet组大鼠心肌细胞胞浆中P-IκB-α的表达明显低于I/R组[(0.0817±0.09)pg/ml∶(0.1755±0.01)pg/ml,但明显高于假手术组[(0.0817±0.09)pg/ml∶(0.0513±0.03)pg/ml,P均0.01]。结论:Tet可以抑制IκB-α磷酸化,显著减少前炎症因子TNF-α、IL-6的产生,减轻心肌缺血/再灌注损伤。     

慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞上Toll样受体的表达变化

目的 分析慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞(DC)上Toll样受体3(TLR3)的表达变化及其临床意义.方法 随机筛选慢性乙型肝炎(CHB)患者20例,并以10例健康者作对照,分别从外周血分离单个核细胞,体外诱导培养DC.流式细胞仪(FCM)测定未成熟期DC(imDC)与成熟期DC(mDC)的表型;分别应用流式细胞仪和Western印迹法测定imDC与mDC上TLR3的表达率和受体蛋白的表达.结果 在健康对照组,mDC表面分子CD80、CD86、组织相容性白细胞抗原(HLA)-DR、CD83的表达率分别为(82.35±8.67)%、(79.61±10.08)%、(92.79±8.48)%和(83.76±5.47)%,imDC表面分子表达率分别为(28.31±8.79)%、(31.17±11.23)%、(27.61±10.28)%和(23.46±11.53)%,各组间比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);而在CHB组,mDC与imDC表面分子表达率分别为(42.46±9.22)%、(40.72±11.24)%、(48.57±12.51)%、(22.25±11.22)%和(18.57±10.22)%、(24.16±10.46)%、(17.87±10.38)%、(14.28±6.77)%,各组间比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);健康者组mDC上表面分子的表达率与CHB患者组比较,各组间差异均有统计学意义,而两组受试者imDC上表面分子的表达率比较,差异均无统计学意义.健康对照imDC上TLR3的表达率明显高于mDC(P＜0.01),而CHB患者imDC与mDC上TLR3的表达率差异无统计学意义(P＞0.05);且CHB患者imDC上TLR3的表达率明显低于健康对照(P＜0.01).结论 CHB患者外周血DC上存在TLR3的表达下调,可能是HBV感染慢性化的重要原因.     

Il-6及TNF-α表达与粥样斑块稳定性及冠心病的相关性分析

目的：分析IL - 6和TN F - α的表达与粥样斑块稳定性及冠心病的相关性。方法：收集我科收治的临床诊断为冠心病的患者72例,另外收集健康体检者30例,将其分为稳定性板斑块组、不稳定性斑块组及正常对照组,检测三组患者白细胞介素6及肿瘤坏死因子α的表达情况及观察冠状动脉狭窄程度的Gensini积分与IL-6及TNF-α的相关性。结果：稳定性斑块组血清IL-6为28.43±13.16pg/ml,不稳定性斑块组为38.32±18.74pg/ml,远高于对照组血清IL-6的值3.75±2.42pg/ml,稳定性斑块组血清TNF - α为19.09±7.70pg/ml,不稳定性斑块组为35.26±14.72pg/ml,远高于对照组血清TNF - α的值3.53±1.99pg/ml,差异均具有统计学意义(P<0.05),血清IL - 6值与Gensini积分成正相关(r=0.692,P=0.000),血清TN F - α值与Gensini积分成正相关(r=0.599,P=0.000)。结论：IL-6及TNF-α与粥样斑块稳定性及冠心病之间具有相关性,且IL-6及TNF-α的血清值越高,冠状动脉血管损害越严重。     

LOX-1/NF-κB信号途径对ox-LDL刺激的人脐静脉内皮细胞炎症因子表达的影响及氟伐他汀的干预作用

目的：探讨血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体-1（LOX-1）/核因子（NF）-κB信号途径对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）刺激的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）炎症因子表达的影响及氟伐他汀的干预作用。方法：设立不同浓度的ox-LDL刺激组,LOX-1中和抗体干预组,NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氢基甲酸盐（PDTC）干预组,氟伐他汀干预组及空白对照组;检测细胞上清液中肿瘤坏死因子（TNF）-α,白细胞介素（IL）-6的浓度。结果：25mg/L、50mg/L、100mg/L浓度的ox-LDL刺激组24h后上清液TNF-α浓度分别为：（32.34±2.46）pg/ml、（96.43±8.36）pg/ml、（62.79±4.64）pg/ml,IL-6浓度分别为：（264.71±15.06）pg/ml、（630.70±17.77）pg/ml、（378.62±16.33）pg/ml,均较空白对照组TNF-а（22.99±3.55）pg/ml、IL-6（80.37±8.29）pg/ml水平显著升高（P〈0.05~0.01）;NF-кB抑制剂PDTC和LOX-1中和抗体干预后上清液TNF-α浓度较50mg/L ox-LDL刺激组显著下降（P〈0.01）。不同浓度氟伐他汀（0.01μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L）干预HUVECs 24h后上清液TNF-α浓度分别为（73.84±6.50）pg/ml、（42.59±6.45）pg/ml、（23.55±4.27）pg/ml;IL-6浓度分别为（549.0±20.23）pg/ml、（434.56±22.4）pg/ml、（302.42±21.30）pg/ml,较50mg/L ox-LDL刺激组显著下降（P〈0.05~0.01）。结论：氧化低密度脂蛋白可刺激人脐静脉内皮细胞上清液中炎症因子TNF-α和IL-6的表达,在25~50mg/L剂量范围内呈显著的剂量-效应关系。氟伐他汀可浓度依赖性抑制人脐静脉内皮细胞上清液中炎症因子TNF-α和IL-6的表达。     

血浆置换联合血液滤过对乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭患者血清IL-17和IL-6的影响

目的探讨血浆置换联合血液滤过对乙型肝炎相关肝衰竭血清白细胞介素(IL)-17、IL-6的影响。方法 30例乙型肝炎慢加急性肝衰竭患者在内科治疗的基础上采用血浆置换联合血液滤过单次治疗。用ELISA检测各组血清IL-17、IL-6浓度,同时记录血清ALT、TBil等值并进行统计分析。结果肝衰竭组患者血清IL-17、IL-6水平分别为(123.5±23.0)pg/ml、(110.0±18.5)pg/ml,高于慢性乙型肝炎患者(48.5±6.3)pg/ml、(27.8±5.9)pg/ml和正常对照组(34.7±3.3)pg/ml、(12.1±5.1)pg/ml,P均<0.001;治疗后血清IL-17、IL-6水平分别为(84.7±21.4)pg/ml、(75.8±16.6)pg/ml,较治疗前下降(t=35.1,P<0.001;t=33.4,P<0.001);与好转组相比,人工肝对恶化组血清IL-17、IL-6清除效率降低(t=3.8,P<0.05;t=3.9,P<0.05);人工肝对血清IL-17、IL-6清除效率均与MELD评分呈负相关(r=-0.53、P=0.003;r=-0.43,P=0.015)。结论血浆置换联合血液滤过能有效降低肝衰竭患者血清IL-17、IL-6水平,其对IL-17、IL-6的清除效率可能与患者预后有关。     

核因子-κB激活在大鼠冠状动脉微栓塞后的心肌组织中的作用及机制

目的 探讨核因子-κB(NF-κB)激活在冠状动脉微栓塞(CME)后心肌组织中的作用及机制.方法 清洁级雄性SD大鼠88只,其中64只经左心窜内注射自体微血栓、同时短暂夹闭主动脉建立大鼠CME模型后,随机分为未治疗组及二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)干预组,分别于术后1、3、7、14 d处死;余24只为假手术组.电泳迁移率改变分析(EMSA)检测不同时间点心肌组织NF-κB DNA结合活性,Western blot测定肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素-6(IL-6)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达水平,实时聚合酶链式反应检测TNFα、IL-6及ICAM-1 mRNA 表达含量.结果 NF-κB DNA结合活性在CME后1 d增高,3 d时达到高峰;7 d时明显降低,14 d时与假手术组无显著性差异.CME组在不同观察时间点心肌TNFα、IL-6、ICAM-1蛋白及基因的表达较假手术组均明显增强(P＜0.05).NF-κB DNA结合活性与TNFα、IL-6、ICAM-13种细胞因子的mRNA表达水平均呈显著正相关(分别是r=0.72,P＜0.05;r=0.94,P＜0.01;r=0.62,P＜0.05).NF-κB特异性抑制剂PDTC干预显著抑制CME后心肌中TNFα、IL-6及ICAM-1蛋白及mRNA的表达(P均＜0.05),同时也改善心功能.结论 CME后NF-κB激活促使炎性因子TNFα、IL-6、ICAM-1在基因及蛋白水平明显上调,是诱导CME心肌炎症反应、心功能减低的重要早期事件.     

八面蒙脱石联合莫沙必利灌胃对急性坏死性胰腺炎大鼠回肠NF-κB活化的影响

目的 探讨八面蒙脱石对急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠回肠黏膜NF-κB活化的影响.方法 120只雄性SD大鼠按完全随机法分为假手术组、ANP组、莫沙必利组、八面蒙脱石组和莫沙比利+八面蒙脱石(联合)组,每组24只大鼠.采用胰胆管内逆行注射牛磺胆酸钠诱导大鼠ANP模型;假手术组开腹注射生理盐水后关腹.各治疗组于造模前30 min分别给予相应药物灌胃1次.术后3、6、12 h分批处死动物.取胰腺组织行病理检查;取血测定TNF-a、IL-1水平;取回肠观察超微结构的改变;免疫组化法检测回肠黏膜NF-κB的表达;Western blotting法检测回肠组织IκBa水平.结果 与假手术组比较,ANP组胰腺损伤明显,血TNF-a、IL-1水平明显升高[(36.79±1.14)pg/ml对(9.00±0.01)pg/ml,(25.17±1.93)ng/ml对(3.45±0.11)ng/ml,P值均＜0.05],回肠绒毛高度显著下降[(0.25±0.22)×10~(-6)m对(1.50±0.33)×10~(-6)m,P＜0.05],柱状细胞指数显著降低[(2.40±1.65)×10~6个/m对(13.5±4.28)×10~6个/m,P＜0.05],NF-κB表达增加(6.92±1.54对1.28±0.29,P＜0.05),IκBa蛋白水平下降(3.30±1.99对24.32±1.93).莫沙必利组和八面蒙脱石组的各项指标与ANP组均无显著差异.联合组的血TNF-a、IL-1水平[(30.57±0.39)pg/ml和(13.45±1.26)ng/ml]、回肠绒毛高度和柱状细胞指数[(1.05±0.28)×10~(-6)m和(10.10±2.50)×10~6个/m]、NF-κB活化(4.32±1.57)和IκBa蛋白水平(15.99±1.26)均与ANP组有统计学差异(P值均＜0.05).结论 八面蒙脱石联合莫沙必利灌胃能减少ANP大鼠回肠黏膜NF-κB的大量激活,减轻胰腺和回肠黏膜的损伤程度.     

大黄甘草汤对急性坏死性胰腺炎大鼠并发的肺损伤的影响

目的 观察大黄甘草汤对急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠并发肺损伤的治疗效果,探讨其作用机制.方法 90只Wistar大鼠按完全随机法分为假手术组、ANP组和大黄甘草汤治疗(治疗)组,每组30只.采用逆行胰胆管注射4%牛磺胆酸钠方法制备ANP模型.治疗组在制模后给予大黄甘草汤(0.25 g/ml)0.6 ml/100 g体重灌胃,1次/12 h;假手术组与ANP组予等量生理盐水灌胃.术后6、12、24 h分批处死大鼠,取胰腺及肺组织行病理学检查并评分;测血清及肺组织IL-6、IL-10、TNF-α水平;免疫组化法检测肺组织Toll样受体4(TLR4)的表达量.结果 制模后12 h,假手术组、ANP组和治疗组的血IL-6水平分别为(14.4±4.0)pg/ml、(171.4±41.3)pg/ml、(156.9±34.7)pg/ml,IL-10水平为(13.7±4.5)pg/ml、(120.5±23.7)pg/ml、(148.3±44.4)pg/ml,TNF-α水平为(22.4±4.7)pg/ml、(261.3±51.4)pg/ml、(235.3±45.9)pg/ml;肺组织IL-6水平为(257.3±55.9)pg/g、(2578.3±403.0)pg/g、(2370.0±491.0)pg/g,IL-10水平为(80.8±20.8)Pg/g、(642.0±107.3)pg/g、(695.3±151.7)Pg/g,TNF-α水平为(207.6±98.6)pg/g、(1769.1±635.6)Pg/g、(1401.1±450.5)pg/g;胰腺病理评分为0、7.0±1.3、6.3±1.0;肺脏病理评分为0、6.3±1.4、5.6±1.0;肺组织TLR4表达量为0.09 ±0.03、0.59±0.09、0.52±0.08.ANP组和治疗组的上述指标均显著高于假手术组(P值均＜0.01);除IL-10外,治疗组的指标又显著低于ANP组(P值均＜0.05).肺组织病理学损伤与胰腺组织损伤呈正相关(r=0.807,P＜0.01),与TLR4表达水平亦呈正相关(r=0.519,P＜0.01).结论 大黄甘草汤可快速改善ANP并发的肺损伤,其机制可能与抑制TLR4的表达、降低IL-6和TNF-α、升高IL-10水平有关.     

系统性红斑狼疮患者热休克蛋白90和白细胞介素18的表达及意义

目的:研究系统性红斑狼疮(SLE)患者热休克蛋白90(HSP90)和血浆白细胞介素18(IL-18)的表达水平及与疾病活动的关系。方法:运用Westernblot技术检测SLE患者外周血单个核细胞HSP90的表达,ELISA方法检测血浆中的IL-18水平,并与SLE疾病活动指数(SLEDAI)进行相关性分析。结果:⑴SLE患者HSP90的表达水平在活动期组(0.82±0.10)和稳定期组(0.54±0.09)与正常对照组(0.37±0.11)比较均具有显著性差异(分别P<0.01),且活动期组较稳定期组增高更明显(P<0.01);⑵SLE患者血浆IL-18水平在稳定期组(327.82±101.45pg/ml)和活动期组(459.79±134.08pg/ml)均显著高于正常对照组(252.32±76.45pg/ml)(分别为P<0.05,P<0.01);⑶SLE患者的HSP90和IL-18水平与SLEDAI评分之间呈正相关(分别为r=0.80,P<0.01;r=0.49,P<0.01)。结论:SLE患者外周血单个核细胞HSP90和血浆IL-18水平均显著增高,并且与SLE的病情活动密切相关,可能在SLE的发病机制中发挥重要作用。     

乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭患者血清白细胞介素1受体拮抗剂与疾病严重程度的关系

目的探讨乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)患者外周血白细胞介素(IL)1受体拮抗剂(IL-1Ra)与患者疾病严重程度的关系。方法选取福州市传染病医院2013年10月-2015年1月就诊的31例HBV-ACLF患者为研究对象,另选取同期28例急性乙型肝炎(AHB)和30例慢性乙型肝炎(CHB)患者作为对照。用Q-Plex法检测外周血IL-1Ra、IL-1β、IL-6、IL-4、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)α、干扰素(IFN)γ等细胞因子浓度,并检测各组肝功能、凝血功能等,将血清IL-1Ra等细胞因子浓度与患者肝功能、MELD评分及HBV DNA等进行相关分析。多组间比较采用Kruskal-wallis H检验,进一步两两比较采用Mann-Whitney U检验;计数资料采用χ2检验;相关分析采用Spearman秩相关。结果 IL-1Ra、IL-1Ra/IL-1β在3组之间的差异均有统计学意义(P值均0.05),其中HBV-ACLF组IL-1Ra水平[186.46(162.68~512.90)pg/ml]显著高于CHB组[70.47(47.07~92.47)pg/ml]和AHB组[143.69(117.75~208.54)pg/ml],差异均有统计学意义(Z=6.300,P0.001;Z=2.505,P=0.012);而HBV-ACLF患者IL-1Ra与IL-1β比值[2.92(2.20~4.74)]较AHB组[4.54(2.75~6.05)]低,但较CHB患者[2.49(1.50~2.50)]高,差异均有统计学意义(Z=1.966,P=0.048;Z=2.682,P0.001)。HBV-ACLF组IL-1β、IL-6、TNFα水平显著高于其他2组(P值均0.01)。血清IL-1Ra与TBil、MELD评分均呈负相关(r值分别为-0.506、-0.818,P值均0.01),与凝血酶原活动度(PTA)呈正相关(r=0.475,P=0.007)。结论 IL-1Ra与反映HBV-ACLF严重程度的指标TBil、MELD评分呈负相关,与PTA呈正相关,IL-1ra在HBV-ACLF发病过程中可能起重要作用。