与人类关系密切的7种动物对戊型肝炎病毒易感性的初步研究

目的　用双抗原夹心法ELISA (DS -ELISA)和逆转录巢式PCR法 (RT -nPCR)研究与人类生活关系密切的猪、犬、山羊、鸡、鸭、鸽子和兔等 7种动物对戊型肝炎病毒 (HEV)的易感性。方法　用多基因型HEV重组蛋白建立检测HEV抗体的DS -ELISA ,并用于 5 91份猪、警犬、家犬、宠物犬、山羊、鸡、鸭、鸽子和兔等多种动物血清标本的HEV抗体检测 ;用HEV多基因型通用性引物RT -nPCR扩增 14 3份犬血清标本HEVRNA。结果　在猪、家犬和宠物犬血清标本中检测到HEV抗体 ,阳性率分别为 4 3 93%、15 19%和 4 6 5 % ,但在警犬、山羊、鸡、鸭、鸽子和兔血清标本中未检测到HEV抗体 ;14 3份犬血清标本用RT -nPCR未扩增出HEVRNA。结论　用多基因型HEV重组蛋白建立的双抗原夹心法ELISA适用于多种动物血清标本HEV抗体的检测 ;猪和犬对HEV易感 ,在HEV传播中可能起重要作用。     

家畜戊型肝炎病毒诊断方法的建立及应用

目的建立检测家畜戊型肝炎病毒（HEV）反转录套式聚合酶链式反应（RT-nPCR）方法,并应用于广西地区家畜戊型肝炎感染调查。方法参考GenBank上4种基因型HEV核苷酸序列,应用生物软件Oligo6.0在ORF2保守区设计两对简并引物,扩增目的片段为436bp,进行了特异性、敏感性和重复性试验,并对采自广西地区猪、牛和羊的肝粪样本进行HEV检测。结果检测家畜粪便样本阳性率31.49%（285/905）;家畜肝脏样本阳性率18.01%（49/272）。结论所建立的RT-nPCR方法适用于家畜肝粪样本HEV检测,临床检测应用表明广西家畜存在HEV感染。     

戊型肝炎

实验感染HEVⅣ型后恒河猴HEVRNA及抗HEVIgM（IgG）动态变化研究——杨志国等（江苏南京中国人民解放军第81医院南京军区肝病研究所210002）；《中国现代医学杂志》，2006，16（12）：1828-1830[目的：观察实验感染HEV（Hepatitis E Virus）Ⅳ型后恒河猴HEVRNA及抗HEV—IgM（IgG）的动态变化，探索HEVⅣ型感染的规律。方法：用逆转录PCR检测实验动物接种前后血清及粪便HEVRNA，用酶联免疫法（ELISA）检测血清抗HEV-IgM及抗HEV-IgG，并同步观察其血生化及肝脏组织学的变化。结果：感染后的恒河猴均发生了典型的急性肝炎，血清HEVRNA首先呈现阳性，相继出现谷丙转氨酶（ALT）升高、抗HEV-IgM阳性及抗HEV—IgG阳性。     

禽类养殖职业人群戊型肝炎病毒感染状况及其危险因素研究

戊型肝炎（Hepatitis E,以下简称戊肝）是由戊型肝炎病毒（Hepatitis E Virus,HEV）引起的急性病毒性肝炎。研究发现,世界各地的多种动物（猪、鼠、鹿、猴、牛、羊、鸡、狗等）中存在天然HEV感染,提示着动物可能在戊肝的传播中发挥作用,进而引起戊肝是否人兽共患病的讨论。在动物中发现了猪、鸡和鼠HEV,较多的研究发现猪HEV可通过越种传播以及接触猪可能增加人群戊肝的感染风险,而鸡HEV也可越种感染猪、火鸡,同时在美国、越南、尼泊尔鸡的抗HEVIgG阳性率分别是30％、44％和13．6％,     

烟台市2015-2018年人感染戊型肝炎病毒基因型分析北大核心CSCD

目的分析2015-2018年烟台市人感染戊型肝炎病毒(HEV)基因型别变化,探讨分子流行病特征。方法选取烟台市2015-2018年国家法定传染病报告系统上报的戊型肝炎病例为研究对象,采集血清标本检测HEV-IgM抗体,对血清HEV-IgM阳性病例的血清和粪便标本提取HEV核酸,采用逆转录PCR方法对HEV开放式阅读框架2区域内的核苷酸片段(644 bp)进行扩增,测序后进行系统进化分析。结果共采集360份血清样本,198份(55%)样本HEV-IgM阳性。HEV-IgM阳性的血清标本,HEV核酸检出率27.78%(55/198);粪便标本HEV核酸检测阳性率39.58%(19/48)。总阳性病例数72例,男性48例,女性24例。本次检测的72例HEV病毒株基因型全部是Ⅳ型,以4d亚型为主,占77.78%(56株);其次是4b亚型,占19.44%(14株);4a亚型占2.78%(2株)。72株HEV核苷酸序列的遗传距离为0.002~0.303。56株4d亚型HEV序列与山东地区猪源(KF176351)、羊源(KU904267)、牛源(KU904278)HEV序列的遗传距离为0.021~0.160、0.010~0.178、0.008~0.176。结论基因Ⅳ型HEV在2015-2018年烟台地区占主导趋势,4d亚型为主要流行株。本地人感染HEV可能与进食动物制品或密切接触动物相关。     

2006-2008年安庆地区散发性戊型肝炎病毒血症检测与序列分析

目的了解安庆地区散发性戊型肝炎病毒血症的检出率与基因型的分布。方法收集2006-2008年间安庆市立医院血清戊肝IgM抗体阳性患者的血清(包括单份血清和系列血清)共145份,采用巢式RT-PCR方法检测HEVRNA,并扩增494-nt核苷酸片段,进行基因分型和同源性比对。结果在57名血清戊肝IgM抗体阳性的患者血清中,HEVRNA总检出率为47.37%;男性与女性分别为50.00%、40.00%,两者间无显著性差别(χ2=0.44,P=0.51)。其中,单份/首份血清的检出率最高(26/57,45.61%),第2份血清较低(8/35,22.86%),第3份及以后的血清几乎未检出阳性(1/53,1.89%)。所有35条HEV核苷酸序列均为基因Ⅳ型,与2007-2008年间获得的27株安庆地区猪基因Ⅳ型HEV共同比对后发现,人序列之间、猪序列之间、人与猪序列之间的同源性都约为86%;不同年份、不同宿主(人与猪)的HEV核苷酸序列间的同源性均在84%～88%之间。结论基因Ⅳ型HEV是安庆地区散发型戊肝的主要病毒株。当地人与猪HEV序列的同源性较高,提示HEV在人与猪之间存在相互传播的可能。     

我国家禽戊型肝炎病毒感染情况的调查

目的了解我国家禽戊型肝炎病毒(HEV)感染情况。方法自我国15个省份采集鸡和鸭血清共计1647份,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测血清中HEV抗原和抗体;通过Nested PCR对陕西、西藏和海南的全部血清样本及其它抗原阳性样本分别进行HEV及禽HEV核酸检测。结果 1507份鸡血清中有54份为HEV抗体阳性,26份为HEV抗原阳性,抗原和抗体的阳性率分别为3.58%和1.73%;140份鸭血清中10份为HEV抗体阳性,2份为HEV抗原阳性,阳性率分别为7.14%和1.43%;鸡和鸭HEV抗原、抗体阳性率无统计学差异。在鸡、鸭血清标本中没有检测到HEVRNA。结论我国家禽存在HEV感染,但还需要进一步研究以确定感染的病毒是否为禽HEV或1-4型HEV跨种感染。     

猪HEV实验感染SD大鼠的研究

目的探索SD大鼠对猪HEV的易感性。方法22只SD大鼠,随机分为4组,每组均设一只对照。前两组实验鼠分别经尾静脉注射0.6×102 GE 和1.2×102 GE猪HEV 4型病毒液（病毒滴度为102 GE/mL）,其余两组实验鼠分别经灌胃途径给予0.6×102 GE 和1.2×102 GE病毒液。每组的对照鼠均以相应途径给予相应剂量的PBS。在注射前及注射后分别采集鼠血清和粪便标本,用RT nPCR法检测HEV RNA及ELISA法检测血清抗 HEV总抗体;且当血清ALT水平升高后取鼠肝组织通过光镜和电镜检查病理学变化。结果静脉注射大剂量病毒组的4只SD大鼠在感染2周后血清ALT明显升高,其中3只肝组织病理学检查出现轻微的非特异性炎症反应,有1只鼠出现抗 HEV抗体阳转;其他组的鼠感染后未见异常改变。所有血清标本和粪便标本均未检测出HEV RNA。结论猪HEV可能会跨种系传播感染SD大鼠但易感性较低且需较大的感染剂量。     

唾液抗戊型肝炎病毒IgM用于戊型肝炎诊断的探讨

目的应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测唾液中抗戊型肝炎病毒（HEV）-IgM,评价其用于戊型肝炎早期诊断的可行性.方法应用东南大学基因工程疫苗研究所建立的HEV-IgM抗体ELISA检测方法,检测77例急性戊型肝炎患者、63例非戊型肝炎患者及64例正常人的唾液和血清样本中抗HEV-IgM,将唾液和血清两者的检测结果加以比较,并观察标本采集时间对检测结果的影响.结果77份急性戊型肝炎患者血清与唾液抗HEV-IgM阳性符合率为87%;在64份正常对照组及63份其他患者对照组中,血清与唾液抗HEV-IgM均阴性,阴性符合率为100%.标本采集时间对唾液和血清检测结果的相关性无显著影响.结论唾液标本用于抗HEV-IgM检测,特异性好,敏感性较高,具有无创伤、容易采集、操作简便等优点,在特殊情况下可代替血清用于戊型肝炎的诊断,尤其适用于戊型肝炎流行时HEV近期感染的血清流行病学调查.     

戊型肝炎病毒抗体双原夹心法ELISA的建立与初步应用

目的 建立抗戊型肝炎病毒（HEV）抗体检测的双抗原夹心ELISA（DS-ELISA），并应用于多种动物血清的检测。方法 将大肠杆菌表达的一段HEVORF2区重组抗原分别包被微孔板和进行辣根过氧化物醇（HRP）标记。利用5份阳性血清和40份阴性血清建立双抗原夹心ELISA；用400份义务献血员血清比较双抗原夹心ELISA与间接法IgG抗体ELISA的符合情况；用3只HEV感染猴系列血清比较双抗原夹心ELISA试剂和Genelabs公司HEVIgG试剂；用双抗原夹心ELISA试剂检测新疆地区的部分牛，绵羊，山羊，猪血清和上海地区的部分鸡血清中的HEV抗体。结果 建立了检测HEV抗体的双抗原夹心ELISA方法，对400份义务献血员血清的检测表明其与间接法IgG抗体ELISA试剂的符合情况良好，并且有更高的s/co比较；与Genelabs公司HEVIgG试剂的比较表明双抗原夹心ELISA试剂的检出更早，尤其是持续时间及强度明显优于Genelabs试剂；在所检测的各种动物中均发现了HEV抗体，其中猪抗体的阳性率最高，表明双抗原夹心ELISA试剂可同时用于不同动物的抗HEV抗体检测。结论 利用大肠杆菌表达的HEV重组抗原建立了双抗原夹心法ELISA，并可同时用于不同动物的抗HEV抗体检测。     

Swine hepatitis E virus in rural southern China: genetic characterization and experimental infection in rhesus monkeys (Macaca mulatta)

BACKGROUND: In rural areas of southern China, where hepatitis E is endemic, residents generally rear pigs in pigsties near their houses. The study was conducted to assess the possibility that hepatitis E virus (HEV) infections in this region are acquired primarily through contact with swine. METHODS: One hundred twenty swine fecal samples collected from pigsties located in eight rural communities of southern China were tested for HEV RNA. The swine HEV isolates were analyzed genetically and were experimentally inoculated into rhesus monkeys to determine the potential risk of cross-species infection. RESULTS: Twenty-nine of the 120 swine fecal samples were positive for HEV RNA. The nucleotide sequences of these swine HEV strains shared 85%-99% identities with the local human genotype 4 isolates and belonged to two subgroups of genotype 4. Importantly, swine HEV strains representing both subgroups induced hepatitis in rhesus monkeys by inoculation with the virus, evidenced by elevated serum alanine transaminase (ALT), viremia, fecal viral shedding, anti-HEV seroconversion, and liver histopathological changes. CONCLUSIONS: Swine may be the principal reservoir for human HEV infection in rural southern China.     

武汉地区散发性急性戊型肝炎流行特点和病毒基因型分析

目的：探讨武汉地区散发性急性戊型肝炎流行特点和病毒基因型。方法：采用逆转录-巢式聚合酶链反应（RT-nPCR）检测162份急性戊型肝炎患者血清HEV RNA,并对PCR产物进行测序及同源进化分析。结果：武汉地区急性戊型肝炎患者男女比例为4.40∶1,30～59岁年龄段占71.60%,162份急性戊型肝炎患者血清有41份HEVRNA阳性,阳性率为25.31%,同源进化分析表明41株HEV毒株均属于基因Ⅳ型,各毒株间的核苷酸同源性为84.7%～100%,基因Ⅳ型又可进一步分为5种亚型,即Ⅳ-A、Ⅳ-B、Ⅳ-C、Ⅳ-D和Ⅳ-E,各亚型内部的核苷酸同源性分别为91.3%～100%、98.0%、92.0%～100%、98.0%～100%、100%,其中Ⅳ-A与上海株、西安株和广西株的核苷酸同源性分别为92.0%～97.3%、94.7%～99.3%和91.3%～96.0%,Ⅳ-D与北京株的核苷酸同源性为95.3%～96.7%。结论：武汉地区急性戊型肝炎以男性多见,好发于30～59岁年龄段,且均由基因Ⅳ型HEV引起,基因Ⅳ型又可进一步分为Ⅳ-A、Ⅳ-B、Ⅳ-C、Ⅳ-D和Ⅳ-E 5种亚型,其中Ⅳ-A与上海株、西安株和广西株亲缘关系较近,Ⅳ-D与北京株亲缘关系较近。     

Current status of hepatitis e virus infection in Korea

Hepatitis E virus (HEV) is an emerging pathogen associated with acute viral hepatitis, and HEV is becoming increasingly recognized. Approximately 2% of acute viral hepatitis is caused by HEV, and 18 cases of hepatitis E have been reported in Korea. Of these cases, only two have involved a history of travel from India, which suggests that they were imported cases. The remaining reported cases include a sporadic case of acute hepatitis E with genotype 4 HEV isolates and identification of the full genome sequence, as well as another case of genotype 4 HEV hepatitis that developed after ingestion of the raw bile juice of a wild bear living on a mountain in southern Korea. Moreover, genotype 3 HEV, which shows close genetic homology with swine HEV in Korea, has been detected in collected human serum samples. Therefore, genotypes 3 and 4 HEV are currently circulating in the Korean community and may be related to zoonotic transmission and food-borne infection. The reported anti-HEV seroprevalence of 17% to 27% in the Korean population suggests that HEV infection has been autochthonously circulating, thereby resulting in subclinical infection in Korea. Given the discrepancies among anti-HEV assays, the diagnosis of hepatitis E should be made with caution using adequate antibody assays, and HEV RNA should be preferably detected from the stool. Further virological characterization and epidemiological study of the virus are warranted.     

HEV ORF3真核表达载体的构建

目的 构建戊型肝炎病毒（HEV） ORF3真核表达载体pcHEV3并进行初步鉴定.方法 从实验感染HEV新疆株的猕猴胆汁中提取HEV RNA,逆转录法合成HEV cDNA,采用RT-PCR方法扩增HEV ORF3 cDNA片段,将其克隆至载体质粒pcDNA3,构建HEV ORF3真核表达载体,经抗生素初步筛选后,重组阳性载体进行酶切和测序鉴定.结果 从实验感染HEV新疆株的猕猴胆汁中克隆出HEV ORF3全长cDNA片段,经酶切鉴定及DNA测序鉴定,成功构建HEV ORF3蛋白真核表达载体pcHEV3.结论 成功构建HEV ORF3蛋白真核表达载体,为进一步研究HEV ORF3蛋白的功能提供了条件.