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相似文献
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1.
逆转录-套式PCR鉴定福建省登革Ⅰ型病毒   总被引:8,自引:4,他引:4  
目的 检测急性感染者血清中的登革病毒,并判定其型别。方法 从血清中提取病毒RNA,使用通用引物和型特异性引物.用逆转录-套式PCR方法扩增登革病毒特异性核酸片段,电泳后观察判定型别。同时还将扩增产物进行测序分析。结果用通用引物扩增5份标本,均出现511bp扩增带,在型特异性引物的扩增下均出现482bp的扩增带,初步判断为DVI病毒。经测序分析进一步确定为DVI病毒。结论 运用此方法证实2004年福建省登革热流行系DVI病毒引起。  相似文献   

2.
目的对2005年福建省分离的1株登革病毒(DV)进行鉴定,并从分子水平追踪其可能的传染源。方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测疑似登革热患者血清中DV-IgM、IgG抗体;同时应用C6/36细胞、单克隆抗体间接免疫荧光(McAb-IFA)、逆转录.套式PCR法分别进行病毒的分离和鉴定,并对分离株的部分基因进行核苷酸序列分析。结果患者血清登革病毒特异性IgM抗体阳性、IgG抗体可疑,表明该患者在近期感染过登革病毒。患者血清接种C6/36细胞,观察到登革病毒特有的CPE。受感染的C6/36细胞能与登革病毒Ⅱ型单克隆抗体反应,表明分离的病毒株为登革Ⅱ型病毒。分离株的核酸提取物经RT-PCR扩增,登革病毒通用引物可扩增出51lbp的特异性条带,型特异性引物扩增出119bp的特异性条带,进一步证实分离的病毒株为登革Ⅱ型病毒。分离株RT-PCR扩增产物的核苷酸序列与30株不同地域来源的登革Ⅱ型病毒相应序列构建的系统发生树表明,此毒株与东南亚地区的毒株比较接近。此次分离株的序列与1999年登革Ⅱ型病毒福建株的对应序列在亲缘关系上有一定程度距离。结合流行病学调查资料,进一步确定此病例为输入性感染病例。结论福建省首次从输入性登革热患者血清中分离出登革Ⅱ型病毒,该病毒来源于东南亚地区。  相似文献   

3.
目的对深圳市2005年从登革热患者急性期血液中分离到的1株登革病毒进行型别鉴定,从分子水平分析分离株的生物学特征,追踪其可能的地域来源。方法用C6/36细胞培养增殖病毒株SZ0524,收集病毒液。用逆转录-半套式PCR(RT-semi-nested-PCR)方法和荧光PCR方法对其进行型别鉴定。扩增病毒E基因后进行序列测定,并与不同国家和地区的登革病毒株进行同源性比较和进化树分析。结果深圳市登革病毒分离株用4型特异性引物扩增出392bp的特异性条带,荧光PCR进一步证实了分离的病毒株为登革4型病毒。SZ0524与登革病毒4型国际标准株H241株在E基因上核苷酸同源性为99.7%,而与登革病毒1、2、3型国际标准株HAWAII、NGC、H87同源性分别为57.0%、59.2%和56.2%。基因进化树显示SZ0524株与D4-73NIID株和D4-61NIID株亲缘关系最近,其次为H241,在进化树的同一分支上,属基因Ⅰ亚型。结论从分子水平证明从深圳市登革热患者血清中分离到的毒株确为DEN-4型病毒。结合流行病学调查资料,证实此病例为输入性感染病例,该毒株最有可能来源于东南亚一带。  相似文献   

4.
目的测定2014年南平市登革暴发相关登革病毒E基因序列,探讨其输入来源及基因型别。方法将患者急性期血清接种C6/36细胞,分离登革病毒,通过RT-PCR进行血清型鉴定,扩增全长E基因,测定序列并绘制系统进化树。结果共分离到4株DENV-1,2株DENV-2,扩增并测序获得E基因全长序列,4株南平地区DENV-1型分离株之间同源性为100%,与D13459(Donguang)分离株同源性也高达99.7%;2株DENV-2型分离株与DENV2/CN/GZ05/2014分离株的同源性均达100%。系统进化分析发现,4株DENV-1病毒株与来自广东及印度的毒株处于同一进化树分支,均为基因Ⅴ型;2株DENV-2病毒株与来自广东及新加坡的毒株处于同一进化树分支,均为基因Ⅳ型。结论福建省南平市本次登革热本地病例暴发可能是由广东或者东南亚地区的登革热输入病例引起的。  相似文献   

5.
目的 分析深圳市2010年登革热暴发疫情的病因,从分子水平探讨流行毒株的生物学特征,追踪其地域来源.方法 采用ELISA、胶体金免疫层析法和荧光PCR检测疑似登革热患者血清中的特异性IgM、IgG抗体和病毒核酸,并用C6/36和BHK-21细胞对早期病例血清进行病毒分离,采用反转录-半套式PCR和荧光PCR方法对其进行型别鉴定.同时扩增病毒E基因后进行序列测定,并与不同国家和地区的登革病毒株进行同源性比较和进化树分析.结果 从疑似登革热患者血清中检测到登革病毒IgM、IgG抗体及登革1型病毒核酸.深圳市登革1型病毒分离株SZ1029与登革1型国际标准株HAWAII 45株、我国福建省Fj231/04株及广东省1997、1999年登革1型病毒流行株GD14/97、GD05/99在E基因上的核苷酸同源性分别为94.8%、99.6%、97.7%和98.5%.基因进化树显示,深圳市登革病毒分离株与马来西亚分离株D1/Malaysia/36000/05、新加坡分离株SG(EHI)DEDI42808和Fj231/04株亲缘关系最近,在进化树的同一分支上,与GZ/80、Taiwan87同属基因Ⅰ亚型.所有患者发病前1个月在深圳市某工地居住,无输血史、无外出史.结论 该次疫情的病因为登革1型病毒感染,该毒株有可能来源于东南亚一带,推测深圳可能存在登革1型病毒的疫源地.  相似文献   

6.
目的 分析2015年福建省本地登革热病例部分登革病毒流行株的基因组序列,调查相关病毒株之间的遗传联系,为福建省登革热防控提供病原学证据。方法 采集急性期患者血清,实时荧光RT-PCR检测登革病毒RNA,阳性者分离病毒,扩增病毒基因组并测序,以病毒全长编码区序列进行种系发生分析。结果 2015年福建省先后出现登革1型(DENV1)和登革2型病毒(DENV2)引起的本地暴发疫情,共发生4起聚集性病例,报告41例。分离到DENV1毒株9株,DENV2毒株8株。种系发生分析显示,9株DENV1高度相似,同属于基因1型(G1),提示其共同的输入来源可能为斯里兰卡;而8株DENV2病毒虽然同属于大都市基因型,却分为差异较大的两簇,表明莆田与福州两地疫情相关毒株的遗传关联度较低,可能分别来自马来西亚和印度。结论 2015年共出现4起聚集性本地登革热疫情,部分患者病毒分离株的病原学特征表明,福建省2015年本地登革热暴发疫情存在多个输入来源。  相似文献   

7.
目的了解福建省手足口病患者中CVB5(Coxsackie virus B5)病毒的变异及进化特征。方法采集2010年福建省手足口病例呼吸道标本,经RD细胞分离肠道病毒。病毒分离上清用于RNA提取并经RT-PCR法鉴定病毒型别。对鉴定为其他肠道病毒(非EV71或CVA16)的病毒,扩增病毒完整VP1区,扩增产物经克隆、筛选后测序。应用Mega软件对病毒VP1序列进行比较和种系进化分析。结果从2010年福建省手足口病患者中扩增得到6株完整的VP1区序列,序列比对证实有4株CVB5病毒,其他2株为Echo9病毒。序列差异比较表明,分离自福建省的CVB5病毒一致性程度较高,在种系进化上处于独立的进化分支,而与国内其他省份或其他国家的CVB5病毒分离株比较则有较大差异。结论 2010年福建省手足口病患者中存在CVB5病毒的感染,病毒与既往其它省份分离株有较大差异,提示CVB5病毒在福建省具有独特的传播链。  相似文献   

8.
目的调查分析2007年福建省莆田市登革热暴发的流行病学特征、影响因素,并对病原体的可能来源进行追踪。方法利用流行病学调查和疫情报告数据以及病毒分离株的序列信息。分析、阐明暴发的流行学特点及影响因素;从感染者体内分离病毒并进行病毒序列测定,分析本次暴发可能的病毒来源。结果本次暴发为登革Ⅱ型病毒引起的登革热暴发流行。共报告确诊病例103例,波及5个乡镇,发病主要集中在9月8日-10月8日,多数病例发生在1—2个村(街道),发病具有时间和空间的聚集性特征,病例临床表现均为典型登革热特征,无临床严重或死亡病例。从病毒分离株的序列分析表明,导致暴发的病毒来源可能为东南亚。外界病毒传入、高白纹伊蚊密度和临床漏诊可能是导致该起登革热暴发流行的主要原因。结论本次暴发流行为一起由输入性病例引起,在当地扩散造成的登革Ⅱ型病毒暴发,病毒的来源可能是东南亚一带。  相似文献   

9.
病人血清中登革病毒的分离与鉴定   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的应用细胞分离法从登革热病人急性期血清中分离登革热病毒并应用免疫荧光法证实病毒的血清型。C6/36细胞长成单层后接种急性期血清,以5~7天为一代,观察细胞病变;感染后的细胞使用型特异性抗体进行免疫荧光实验证实其血清型。在10份急性期病人血清中,有6份标本成功分离出登革热Ⅰ型病毒,其结果和RT—PCR等实验方法的结果一致。分离率为60%。  相似文献   

10.
目的对2011年8月采集的从老挝输入的登革热病人急性期血清进行登革病毒分离,以找出病原学证据。方法用C6/36白纹伊蚊细胞进行病毒分离,对有细胞病变的标本进行RT-PCR,检测登革病毒RNA及型别,对PCR产物测序,进行比对分析和进化树分析。结果从8例输入登革热病人的血清中分离到4株能引起细胞病变的病毒,均为登革病毒1型,与泰国毒株的同源性99%。结论云南省首次从输入登革热病人血清中分离到登革病毒1型,为云南省登革热的防控提供了依据。  相似文献   

11.
OBJECTIVE: Isolation of dengue virus from dengue fever and dengue haemorrhagic fever cases from Mindanao, Republic of the Philippines. METHODS: 12 patients with clinically suspected dengue fever (DF) or dengue haemorrhagic fever (DHF) presenting in four regional hospitals between August and September 1995 on Minadano were enrolled in the study. Dengue virus was isolated by inoculation of Vero/E6 or C6/36 cells with patient serum. IgM antibodies were measured using a commercial test system. Up to 454 bp of the capsid region and 240 bp of the E/NS1 gene junction of different viral isolates were sequenced and phylogenetically analyzed. RESULTS: Virus could be isolated from seven patients, five isolates were typed as dengue virus type 2 and two as dengue virus type 4 by immunostaining with monoclonal antibodies or by RT/PCR. Phylogenetic analysis confirmed a close relationship of the dengue virus type 2 isolates with viruses isolated in the Philippines in 1983 and 1988. CONCLUSION: As observed in studies from other parts of South East Asia, dengue virus type 2 was readily isolated from dengue haemorrhagic fever cases. Dengue virus type 2 and 4 circulate in Mindanao, Philippines, with dengue type 2 being responsible for most of our severe DF or DHF cases.  相似文献   

12.
目的对分离自福建省的1株登革1型病毒(FJ231/04)进行全基因组序列测定,并同其它病毒株全基因序列进行比较,了解其序列特征和可能的传播来源。方法采取分段扩增、克隆、测序的方案,设计10对引物分别扩增不同的片段,基因组5’末端序列采用RACE技术进行扩增,扩增产物随后克隆到质粒载体并测序。通过末端重叠序列进行拼按后组成全长病毒基因组序列。结果拼接后的病毒全基因组全长10735nt,编码一个长的开放读码框。参考已公布的登革1型病毒的全基因序列,对该病毒株进行进化分析。序列的进化分析表明,该福建省分离株属登革1型病毒中的第1群(基因1型)病毒。在遗传距离上,该毒株和2002年的泰国分离株最为接近(差异为0.53%)。根据病毒发现时间及其核酸差异,推测该病毒可能是通过在东南亚一带感染者或病人带入福建。结论通过对登革病毒金基因组序列的测定可以获得毒株的特征。此外病毒序列的进化分析,还可为了解病毒可能的来源以及传播途径,正确了解登革病毒在我省的流行病学概况提供重要的线索。  相似文献   

13.
14.
TaqMan MGB探针实时聚合酶链反应检测登革病毒   总被引:8,自引:0,他引:8  
目的 建立一种敏感、特异、重复性好的登革病毒(Dengue Virus,DV)鉴定方法。方法 根据DV 3’端非编码区基因保守序列,设计一套特异性引物和TaqMan MGB探针。利用1998~2004年收集的26份登革热病人临床血清标本。15例乙脑病人血清。DV4个血清型标准毒株及23株1978~1997年DV地方流行株和相关西尼罗病毒、日本脑炎病毒、麻疹病毒、基孔肯亚病毒等毒株。同时用克隆了1型DV基因组3’端非编码区序列片段的质粒DNA作为阳性对照,检测所建立方法的特异性、敏感性。结果 所建立方法的最低检测限约为每反应5个基因拷贝。用该方法检测4个血清型DV标准毒株、23株DV地方流行株和26例分离到DV的阳性血清标本,检出率为100%;用该方法检测15例乙脑病人血清、10例麻疹病人血清和西尼罗病毒、日本脑炎病毒、麻疹病毒、基孔肯亚病毒,结果均为阴性。结论 新建的TaqMan MGB探针检测DV方法是实验室早期诊断登革热较理想的方法。  相似文献   

15.
16.
Dengue fever infection was first documented in Jeddah, Saudi Arabia, by virus isolation of dengue type 2 virus in 1994 at the virology laboratory of Dr. Soliman Fakeeh Hospital. Dengue virus surveillance was established after that time. Blood samples were collected from 985 patients (710 male patients and 275 female patients) with suspected cases of dengue from February 1994 to December 1999. Dengue virus isolates were obtained in 207 patients (21%; 162 male patients and 45 female patients). Dengue type 2 was the predominant serotype (138 of 207 isolates, 66.7%), followed by dengue type 1 with (56 of 207 isolates, 27%) and dengue type 3 (13 of 207 isolates, 6.3%). The largest number of isolates (186 of 207 isolates, 90%) was in 1994, a year during which there was a dengue epidemic. In the next 5 years, 1995-1999, only 21 isolates (10%) were isolated. Immunoglobulin M capture enzyme-linked immunosorbent assay was positive in 160 acute samples; 52 of them were from virus culture-positive cases and 108 (11%) from culture-negative cases. The total number of cases diagnosed by both methods was 315 (32%). The prevalence of dengue immunoglobulin G antibodies, as assessed on the basis of immunofluorescent assay, hemagglutination inhibition titers > or = 1/20, or both, in the acute samples was 314 (32%) of 985, indicating past Flavivirus infection. Two patients died, one man with dengue hemorrhagic fever and one woman with dengue shock syndrome. Both fatal dengue cases were due to infection with type 2 virus. All other cases were simple dengue fever. To our knowledge, this is the first report confirming the circulation of 3 dengue serotypes in Jeddah.  相似文献   

17.
目的 建立一种特异性强,灵敏度高,操作简便的呼吸道腺病毒榆测方法 ,为临床呼吸道腙病毒通用特异诊断试剂的研发奠定实验基础.方法 用生物信息学软件DNAMAN 5.2.2,Gene Runner 3.05,BLAST对GenBank中已收录的10个型别人呼吸道腺病毒核酸伞序列进行比对分析,找出高度保守序列,设计5对腺病毒通用特异引物,同时确保PCR产物具有型别特异性.用NP-40裂解法制备模板,对引物的有效性,特异性及灵敏性进行验证,并应用于64例急性呼吸道感染患儿咽拭子标本的榆测,阳性标本的PCR产物直接测序鉴定血清型.将阳性标本接种HeLa细胞,光镜下观察细胞病变,电镜下观察病毒形态.结果 BLAST结果 表明,5对引物与其他病毒,细菌及人类基因组等无高度同源性,是腺病毒特异性引物.用5对引物扩增人3型腺病毒DNA,均出现阳性H的条带,但不能检测呼吸道合胞病毒柯萨奇病毒,验证了引物的有效性和腺病毒特异性.模板稀释,病毒稀释均可检测列10-5梯度,说明引物具有较高的灵敏性,同时验证了NP-40裂解法的稳定性.64例临床叫拭子标本中检测出2例阳性标本,阳性率为3.13%(2/64).阳性标本接种HeLa细胞,光镜下可见细胞变圆,聚集成葡萄串状,脱落等腺病毒所致细胞病变,电镜下可见细胞核内有典型的晶格状排列的腺病毒颗粒.PCR产物测序结果 表明,2株病毒均为B组腺病毒.结论 成功设计了腺病毒通用的,特异的,同时扩增产物又具有腺病毒型别特异性的引物.用该引物建立的PCR方法 检测呼吸道标本中的腺病毒DNA具有灵敏和特异的特点,适用丁临床常规诊断腺病毒感染.  相似文献   

18.
Direct rapid genetic diagnosis by RT-PCR as well as virus isolation was performed on the 122 patients with hand, foot and mouth disease (HFMD) in Osaka Prefecture in 2000, followed by molecular epidemiological analyses of the isolated viruses. MRC-5 cells showed the highest sensitivity for virus isolation, recovering 59 strains of viruses from 80 virus-positive patients. By RT-PCR using newly designed primers spanning VP4 and VP2, corresponding genome regions of coxsackievirus type A16 (CA16) and enterovirus 71 (EV71) isolates were amplified only with primers specific to respective viruses. On the other hand, none of the genomes of prototype enteroviruses of other 49 serotypes were detected with these primers. From the sequence analyses, all of the 22 isolates of CA16 belonged to the same genotype and 33 isolates of EV71 were classified into two genetic groups. The results showed that 3 different genotypes of viruses were prevailing in the epidemic of HFMD in Osaka Prefecture in 2000.  相似文献   

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