严重急性呼吸综合征-冠状病毒原核表达蛋白血清特异性抗体检测方法的比较

SARS冠状病毒(CoV)的主要结构蛋白包括刺突蛋白(S)、膜糖蛋白(M)、被膜蛋白(E)以及核壳蛋白(N)[1].N蛋白由422个氨基酸组成,在病毒体内含量丰富,是机体抗SARS-CoV免疫应答的主要靶蛋白之一[2].     

庚型肝炎病毒多聚蛋白的翻译及基因变异研究进展

庚型肝炎病毒(HGV)是单股正链RNA病毒,其基因结构及保守序列类似于黄病毒科的成员。HGV基因组全长约9400个核苷酸(nt),与HCV相似,在5’端和3’端各有一段非翻译区(UTR),一个大开放读码框架(ORF)编码约2900个氨基酸的多聚蛋白前体,其氨基端(N端)和羧基端(C端)分别为结构蛋白(C、E1、E2)和非结构蛋白(NS2、NS3、NS4a/b、NS5a/b)。NS3区编码丝蛋白酶、解旋酶,NS5区编码RNA聚合酶。HGV与HCV全序列氨     

严重急性呼吸综合征患者肺组织中S基因病毒准种特性的初步研究

严重急性呼吸综合征(SARS)病原体是一种与冠状病毒(coronaviruses)类似的新的正链 RNA 病毒,基因组全长约为30 kb,包括复制酶 A、复制酶 B、S、E、M 基因编码区和14个目前尚未清楚功能的开放阅读框。SARS 病毒的变异率估计为每天(8.26×10~(-6)±2.16×10~(-6))/nt,与普通RNA 病毒类似。SARS 病毒感染呈很短暂的急性自限性过程,变异株在患者体内能否积累形成准种,所形成准种的异质性如何?有关研究目前报道还不多,为此我们采用构象敏感凝胶电泳(CSGE)及核酸序列分析的方法初步检测了1例患者肺组织中 SARS 病毒准种的复杂性及差异性,结果报道如下。     

登革病毒的检测技术研究进展

登革热病毒 (denguevirus,DV)属于黄病毒科黄病毒属 ,是有包膜的单股正链RNA病毒 ,基因组长约 11kb ,整个基因的编码顺序为 :5’Ⅰ型帽子结构、非编码区、AUC蛋白 (核衣壳蛋白 )基因、M蛋白 (膜蛋白 )基因、E蛋白 (包膜蛋白 )基因、NS1- 2a- 2b - 3- 4a - 4b - 5基因、非编码区 3’〔1〕。DV分为 4个血清型 (1～ 4 ) ,可引起隐性感染、登革热 (denguefever,DF)和登革出血热 (denguehemorrhagicfever,DHF) ,严重的还可导致登革休克综合征 (dengueshocksyndrome,DSS)。随着全球气候变暖和城市化进程的加快 ,登革热病例正在迅速增加 ,…     

猪繁殖与呼吸综合征病毒E＋M＋N基因重组腺病毒的构建

猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）俗称猪蓝耳病,是由病毒引起的一种高度接触性传染病,可导致母猪晚期流产、早产、死胎、木乃伊胎等繁殖障碍和仔猪严重的呼吸道症状及高死亡率。该病毒已在全世界范围内广泛流行,给养殖业造成了重大的经济损失。目前,传统的疫苗无法提供完全的保护作用,开发研制新型疫苗已迫在眉睫。PRRSV基因组长约15kb,有8个不同程度的开放阅读框（ORFS）,即ORF1-ORF7。该病毒具有3个重要的结构蛋白,即E蛋白,M蛋白和N蛋白,这三种蛋白分别由病毒基因ORF5,ORF6和ORF7编码。本试验构建了含猪繁殖与呼吸综合征病毒E＋M＋N基因的重组腺病毒。首先用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）的方法分别扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒E基因、M基因和N基因,将三者用口蹄疫病毒2A序列串联起来,将连接好的E＋M＋N基因插入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV。将获得的重组穿梭质粒和腺病毒骨架载体pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183内进行同源重组,获得了插有外源基因的重组腺病毒质粒pAd/E＋M＋N;最后,经PacⅠ酶切线性化后转染HEK-293细胞,成功地得到含有E＋M＋N基因的重组腺病毒,为重组腺病毒活载体疫苗的研究奠定基础。     

淡色库蚊氨肽酶N基因的克隆及生物信息学分析

目的克隆淡色库蚊Bt毒素受体氨肽酶N(Aminopeptidase N,APN)基因,并对基因及编码蛋白进行生物信息学分析。方法提取淡色库蚊RNA,通过RT-PCR扩增氨肽酶N基因的全长cDNA序列,纯化PCR产物连接至pMD19-T载体,阳性重组质粒经PCR鉴定后进行基因测序。生物信息学分析APN基因的序列同源性及编码蛋白的结构特征。结果该基因cDNA序列全长为1 383bp(含终止密码子),编码460个氨基酸,与致倦库蚊XM_001862270.1序列的同源性为100%。预测蛋白质分子量为52.9kDa,等电点为4.98。前21个氨基酸为N-末端的信号肽,存在2个N-糖基化位点(93 NLT95和169 NVS171)。具有肽酶家族M1的序列特征、锌结合位点HEXXH和谷氨酸锌化氨肽酶的保守结构GAMEN。结论成功克隆了淡色库蚊氨肽酶N基因并对APN蛋白进行生物信息学分析,为进一步探讨淡色库蚊APN的功能及Bt毒素作用机制奠定了基础。     

应用干扰RNA体外抑制严重急性呼吸综合征冠状病毒N基因的表达

目的构建绿色荧光蛋白（GFP）与严重急性呼吸综合征（SARS）冠状病毒N蛋白的融合表达载体pEGFP-C1-N以及针对SARS冠状病毒N基因的小发卡型shRNA表达载体pshRNAN，观察shRNA对SARS冠状病毒N基因复制和表达的影响。方法将构建成功的pEGFP-C1-N与psh RNA-N共转染293细胞，于转染后24、48、72h观察GFP表达的强弱，采用Western Blot分别检测GFP与N蛋白的表达，逆转录PCR检测N基因的mRNA。结果pshRNA—N作用组绿色荧光强度明显弱于未干扰组，Western Blot和逆转录PCR结果也证实pshRNA—N对N基因和N蛋白的表达有明显抑制作用，而无关序列的shRNA无此作用。结论针对SARS冠状病毒N基因的shRNA具有显著和特异的抑制N蛋白表达的作用。     

丙型肝炎病毒感染的血清学和病毒学诊断试验研究进展

一、HCV的基因结构及功能 目前从感染HCV的人和黑猩猩的血浆中分离出的病毒颗粒属于披膜病毒科黄病毒属。基因组为一大约10Kb单股正链RNA分子,含有一个跨越整个基因组,编码3011或3010个氨基酸的单一开放读码框(ORF)。HCV的ORF含有编码核壳蛋白(C),外膜蛋白(E),基质蛋白(M)及五种非结构蛋白(NS_(1-5))的基因,在基因组的5′和3′端分别有非编码区,它可能与基因的异源性和高度易变性有关。 二、血清学诊断方法 特异性抗体检测 1989年Kuo等建立了C_(100-3)抗原放射免疫方法(RIA)检测抗-C_(100-3)抗体,由于该法     

微小隐孢子虫子孢子表面抗原基因gp23的克隆和测序

目的　对微小隐孢子虫子孢子表面蛋白CP2 3编码区基因gp2 3进行克隆及测序。　方法　提取牛源微小隐孢子虫卵囊基因组DNA ,用聚合酶链反应 (PCR)扩增编码CP2 3的基因 ,然后将其克隆到 pMD1 8 T载体中 ,用双脱氧链末端终止法测DNA序列。　结果与结论　获得了CP2 3的编码区基因 ,克隆出的 gp2 3基因的核苷酸与氨基酸序列长分别为 345bp和 1 1 4aa,有一个开放阅读框 ,与GenBank报道的 gp2 3基因比较 ,同源性分别为 97.3 %与 98 2 % ,在 2 32～ 2 38bp处多了 6bp。     

一起急性腹泻疫情中检出的GI.8型诺如病毒的序列测定和分子特征分析

目的对湖州地区一起急性腹泻疫情中检出的GI.8型诺如病毒进行序列测定和分子特征分析。方法根据GI型诺如病毒保守序列自行设计5对引物,用一步法RT-PCR分段扩增GI.8型诺如病毒CHN/Huzhou/N10的全基因组序列,采用生物信息学相关软件对序列进行整理和分析。结果 CHN/Huzhou/N10全长7 740bp,编码区包括3个开放读码框架(ORF1~ORF3),分别长5 400bp(5~5 404nt)、1 632bp(5 388~7 019nt)和642bp(7 019~7 660nt)。RdRp区,VP1区和VP2区的系统进化分析显示CHN/Huzhou/N10属于GI.8基因型。衣壳蛋白区的氨基酸序列分析表明,与原型株Boxer/2001/US相比,CHN/Huzhou/N10VP1区的氨基酸序列共有16个变异位点,12个位于P2区。其中aa347T→S,aa397T→E这2个变异位点分别位于HBGA受体结合袋位点Ⅱ和Ⅲ内。结论本文获得了我国GI.8型诺如病毒CHN/Huzhou/N10的全基因组序列,相关序列信息可用于病毒的遗传进化研究、快速诊断试剂的研发以及疫苗的设计。