晚期糖基化终产物对结肠癌干细胞增殖及凋亡的影响研究

目的探讨晚期糖基化终产物(AGEs)对结肠癌干细胞AGEs受体(RAGE)表达及增殖和凋亡的影响。方法以人SW480结肠癌干细胞为研究对象,不同浓度AGEs及50μmol/L PD98059、40mmol/L二甲双胍(MET)干预结肠癌干细胞后,分别应用RT-PCR和Western blot检测24h细胞RAGE mRNA和RAGE、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化ERK(p-ERK)蛋白表达;CCK-8检测24h细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡。结果应用不同浓度(100、200、300μg/ml)AGEs干预后,与Con组(未加AGEs)比较,200μg/ml AGEs组RAGE mRNA和蛋白表达均增加,(p-ERK1/2)/(ERK1/2)也升高(P0.05)。PD98059干预后,RAGE蛋白表达及(p-ERK1/2)/(ERK1/2)均降低。与不同浓度(100、200、300、500μg/ml)BSA组比较,相应浓度(100、200、300、500μg/ml)AGEs组细胞吸光度(OD)升高(P0.05),细胞活力分别增加11.6%、16.3%、13.8%、13.9%。200μg/ml AGEs组PD98059干预,细胞OD值下降(P0.05)。24h后,200μg/ml AGEs组细胞凋亡率与Con组比较,差异无统计学意义(P0.05),MET组细胞凋亡率升高(P0.05);与MET组比较,MET+AGEs组凋亡率降低(P0.05);与MET+AGEs组比较,MET+AGEs+PD组凋亡率升高(P0.05)。结论 AGEs可促进结肠癌干细胞增殖,抑制其凋亡,作用机制可能是通过作用于RAGE,上调其表达量,激活ERK1/2通路来实现。     

糖基化终产物对正常人血小板内皮型一氧化氮合酶活性及其表达的影响

目的 通过观察糖基化终产物（AGEs)对血小板内皮型一氧化氮合酶（eNOS)活性及其表达的影响，探讨AGEs损伤血小板的机制。方法 健康成人6例，取外周静脉血，用凝胶色谱柱法收集纯化的血小板悬液，分别与三种浓度的AGEs(100μg/ml,200μg/ml，400μg/ml）孵充300min，部分血小板用位素二步色谱法测定血小板一氧化氮合酶（NOS）活性；部分血小板用免疫沉淀法制备经eNOS蛋白，蛋白印迹法检测eNOS蛋白表达水平，结果 AGEs明显抑制正常人血小板NOS纯化eNOS蛋白，蛋白印迹法检测eNOS蛋白表达水平。结果 AGEs明显抑制正常人血小板NOS活性且呈浓度依赖性。正常人血小板表达eNOS；AGEs干预30min不影响eNOS表达水平。结论 AGEs通过抑制血小板eNOS活性而激活血小板，这种作用不是通过降低血小板eNOS表达实现的。     

糖基化终末产物对破骨细胞骨吸收功能的影响祆

目的观察糖基化终末产物(AGEs)对破骨细胞骨吸收功能的影响.方法用人血清白蛋白和葡萄糖恒温孵育制备人AGEs,采用甲苯胺蓝染色和图像分析评价AGE对破骨细胞形成骨吸收陷窝的影响.结果低浓度AGEs(50～200 μg/ml)对骨吸收陷窝的面积和数目无明显影响;只有高浓度AGEs(500～1000 μg/ml)才能促进骨吸收陷窝面积的扩大和数目增加(P＜0.05).结论 AGE可能促进破骨细胞的骨吸收功能.     

糖基化终末产物对破骨细胞骨吸收功能的影响

目的　观察糖基化终末产物 (AGEs)对破骨细胞骨吸收功能的影响。方法　用人血清白蛋白和葡萄糖恒温孵育制备人AGEs,采用甲苯胺蓝染色和图像分析评价AGE对破骨细胞形成骨吸收陷窝的影响。结果　低浓度AGEs(50～ 2 0 0 μg/ml)对骨吸收陷窝的面积和数目无明显影响 ;只有高浓度AGEs(50 0～ 1 0 0 0 μg/ml)才能促进骨吸收陷窝面积的扩大和数目增加 (P <0 .0 5)。结论　AGE可能促进破骨细胞的骨吸收功能     

老年人脑血管病血清糖基化终产物和β淀粉样蛋白检测及其意义

目的探讨晚期糖基化终产物(advanced glycosylation end products,AGEs)和β淀粉样蛋白(-βamyloid protein,Aβ)对老年人急性脑血管病发病的影响。方法采集60岁以上脑梗死(cerebral infarction,CI)患者(CI组,29例)和脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)患者(ICH组,18例)血清标本,应用免疫竞争饱和法测定AGEs,用放射免疫分析非平衡法检测Aβ,同时与年龄匹配对照组30例比较。结果CI组患者AGEs(13.55±1.00)mg/L,Aβ(1.43±0.24)μg/L;ICH组AGEs(12.45±1.03)mg/L,Aβ(1.42±0.13)μg/L;对照组AGEs(9.94±1.24)mg/L,Aβ(1.02±0.13)μg/L。CI组和ICH组两指标均明显高于对照组(P<0.05),CI组AGEs显著高于ICH组(P<0.05),而CI组与ICH组Aβ比较则无明显差异。结论高浓度的AGEs和Aβ可能与老年人急性脑血管病的发病有关。     

糖基化终产物对U937巨噬细胞高密度脂蛋白受体蛋白表达的影响

目的　研究诱导分化及糖基化终产物 (AGEs)对人单核 /巨噬细胞 (U937细胞 )高密度脂蛋白受体 (SR BI)蛋白表达的影响 ,探讨AGEs和巨噬细胞SR BI在动脉粥样硬化中的作用。方法　U937细胞经PMA诱导分化 ,并将不同浓度或同一浓度AGEs与诱导分化 48h后的U937细胞共同孵育 ,用免疫细胞化学法和Western印迹法检测SR BI蛋白的表达。结果　诱导分化后U937细胞SR BI表达在 2 4、48h逐渐升高 ,72h下降 ;1 0 0、2 0 0和 40 0 μg/mlAGEs刺激后细胞表面SR BI蛋白表达量分别是BSA组的 1 44、2 38和 2 77倍 (P <0 0 5) ;40 0 μg/ml的AGEs作用 6、1 2、2 4、48h后 ,U937巨噬细胞SR BI蛋白表达量分别为 0h的 1 38、2 49、3 76和 4 2 5倍 (P <0 0 5)。结论　AGEs可增加U937巨噬细胞SR BI蛋白表达且呈浓度和时间依赖性。     

人参不同部位皂甙对人胚肺成纤维细胞寿命的影响

当人胚肺成纤维细胞被传至40代龄后,在培养液中加入人参根皂甙(SRG)sμg/ml,人参果皂甙(SFG)1.5μg/ml和人参茎叶皂甙(SSLG)1.0μg/ml可分别延长细胞传代寿命的120％,110％和130％。当培养液中三种皂甙的终浓度分别在1.78～16.00μg/ml,0.50～4.50μg/ml和0.25～4.00μg/ml范围内时。实验结果表明,高代龄细胞的饱和密度明显增加,细胞的克隆生长也受到显著影响,SRG的作用较SFG和SSLG更明显。而同样条件下三种皂甙对低代龄细胞的影响则不明显。     

晚期糖化终末产物在去卵巢大鼠骨质疏松发病中的作用及氨基胍防治效果

目的　探讨晚期糖化终末产物 (AGEs)在去卵巢大鼠骨质疏松发病中的作用及氨基胍防治效果。方法　选用 1 0月龄大鼠通过卵巢切除诱导骨质疏松并用氨基胍防治其骨量丢失 ,测定其骨密度及骨胶原中 AGEs的含量及血、尿生化指标。结果　卵巢切除大鼠骨密度 (0 .2 0 7g/cm2 ± 0 .0 1 6 g/cm2 )明显低于假手术大鼠 (0 .2 36 g/cm2 ± 0 .0 1 0 g/cm2 ) (P<0 .0 1 ) ,而骨胶原 AGEs含量 (59.86 RU/mg胶原± 3.1 3 RU/mg胶原 )明显高于假手术组大鼠 (53.83RU/mg胶原± 5.46RU/mg胶原 ) (P<0 .0 1 )。卵巢切除大鼠血清雌激素 (4.50 pg/ml± 1 .73pg/ml)与假手术组(8.45 pg/ml± 2 .90 pg/ml)比较明显降低 (P<0 .0 2 ) ,2 4 h尿钙、尿钙与肌酐比值、尿磷、尿磷与肌酐比值均有升高趋势。卵巢切除大鼠给予氨基胍后骨密度 (0 .2 2 1 g/cm2± 0 .0 1 7g/cm2 )明显升高 (P<0 .0 5) ,骨胶原中 AGEs含量 (51 .2 3RU/mg胶原± 7.46RU/mg胶原 )明显降低 (P<0 .0 1 ) ,血清雌激素 (8.59pg/ml± 3.0 1 pg/ml)明显升高 (P<0 .0 1 ) ,2 4 h尿钙、尿钙与肌酐比值降低 ,2 4 h尿羟脯氨酸升高 ,与手术组比较有显著差异 (P<0 .0 5)。结论　卵巢切除后 ,雌激素的降低和 AGEs的增加是导致骨质疏松的主要原因。而氨基胍通过降低体内 AGE     

商陆抗病毒蛋白对感染细胞模型中HCV复制的影响

目的探讨商陆抗病毒蛋白(PAP)对丙型肝炎病毒(HCV)感染细胞模型中 HCV 的抑制作用。方法用 HCV 阳性血清感染人肝癌细胞株 HepG2细胞.制成 HCV感染细胞模型,用不同浓度的 PAP 干预该模型;利用荧光定量 PCR 法分别于药物干预后48h、96h、144h 检测培养细胞及上清液中 HCV RNA 含量,同时以不同浓度干扰素(IFN)处理该模型作为对照。结果 PAP 处理 HepG2感染 HCV细胞模型后,细胞内 HCV RNA 含量在48h、96h、144h 各组间与对照组相比有显著差异(P<0.01)。在第48h,HCVRNA 含量100μg/ml 组和10μg/ml 组<1μg/ml 组<0.1μg/ml 组<0.01μg/ml 组及对照组;在第96h,HCV RNA含量100μg/ml 组和10μg/ml 组<1μg/ml 组<0.1μg/ml 组和0.01μg/ml 组<对照组;在第144h,HCVRNA含量100μg/ml 组及10μg/ml 组<1μml 组<0.1μg/ml 组、0.01μg/ml组及对照组。培养上清液中 HCV RNA 含量各组间在48h时与对照组相比差异无显著性(P>0.05),第96h,培养上清液中 HCV RNA 含量各组间差异显著(P<0.05)。100μg/ml组及10μg/ml 组<1μg/ml 组<0.1μg/ml 组、0.01μg/ml 组及对照组;第144h 时,培养上清液中 HCV RNA 含量各组间差异显著(P<0.01),100μg/ml 组、10μg/ml 组及1μg/ml 组<0.1μg/ml 组、0.01μg/ml 组及对照组。PAP 对 HCV 的抑制作用随 PAP 浓度的增加而增强,以100μg/ml 组对 HCV的抑制作用最强。IFN 干预该模型亦得出相似结果,以3.0×10~4IU/ml 组对 HCV 抑制作用最强。PAP 与 IFN 均以第48h 的抑制效果最好,在48h、96h 及144h时,PAP 对 HCV的抑制作用显著高于 IFN(P<0.01)。实验浓度的 PAP 未引起细胞死亡或脱壁,对细胞的形态、生长也无明显影响。结论 PAP 对 HCV 复制有明显的抑制作用,且作用强于IFN。实验浓度的 PAP 对细胞形态及生长无明显影响。     

PPAR-γ激活对糖基化终末产物引起的大鼠肾系膜细胞TGF-β及CTGF mRNA表达的影响

目的 观察过氧化物酶体增殖体激活受体-γ(PPAR-γ)激活对糖基化终末产物(AGEs)引起的大鼠肾系膜细胞TGF-β及CTGF mRNA表达的影响.方法 体外培养正常大鼠肾系膜细胞,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测不同浓度AGEs(0～400 μg/ml-1)及不同浓度PPAP-γ)激活剂(罗格列酮)和PPAR-γ阻断剂(GW9662)对AGEs(100 μg/ml-1)引起的TGF-β及CTGF mRNA表达的影响.结果 给予PPAR-γ激活剂可明显减轻AGEs引起的大鼠系膜细胞TGF-β、CTGF mRNA的表达.结论 PPAR-γ激活剂可以明显减轻AGEs对系膜细胞TGF-β、CTGF mRNA的表达影响,从而改善肾小球细胞外基质积聚,在糖尿病时起到肾脏保护作用.     

普罗布考对糖基化终末产物引发心脏微血管内皮功能紊乱的作用

目的:观察普罗布考（probucol）对糖基化终末产物（AGEs）作用后的心脏微血管内皮细胞iNOS表达的影响。方法: 原代培养心脏微血管内皮细胞,AGEs（100 mg/L）体外模拟高糖环境,在probucol(5 μmol/L,10 μmol/L,20 μmol/L) 作用后,检测ROS、NO和iNOS变化情况。结果: 与AGEs组比较,probucol组中ROS蛋白表达降低,NO生成增加,而 iNOS蛋白表达降低,且显示有浓度依赖性。结论: probucol可能通过对抗氧化应激的途径,缓解AGEs引发的心脏微血管内皮功能障碍。     

性激素水平及平衡对大鼠血管内皮细胞增殖的调节作用及意义

目的　探讨雌、雄及孕激素分别对雌、雄性大鼠肺血管内皮细胞 (VEC)增殖的影响。方法　采用组织贴块法培养大鼠肺血管内皮细胞 ,应用噻唑蓝 (MTT)比色法检测大鼠VEC的增殖情况。结果　 (1) 3× 10 -8mol/L、3×10 -7mol/L 17 β雌二醇 (E2 )可促进雌鼠肺VEC的增殖 (P <0 .0 1) ;3× 10 -9mol/L、3× 10 -8mol/L、3× 10 -7mol/L 17 βE2 均能促进雄鼠VEC的增殖 (P<0 .0 5 ) ,各组间无明显差异。雌激素受体拮抗剂他莫昔芬可阻断 17 βE2 上述促增殖作用。 (2 ) 3× 10 -8mol/L、3× 10 -7mol/L睾酮 (T)均可明显促进雄鼠VEC的增殖(P <0 .0 5 ) ,但对雌鼠VEC增殖无促进作用。 (3)E2 /孕激素 (P) =3/ 10时能促进雌鼠VEC的增殖 (P<0 .0 5 )。(4)E2 /T =1亦可促进雌鼠VEC增殖 (P<0 .0 5 )。结论　雌激素可促进雌、雄性大鼠VEC的增殖 ,其促增殖作用无性别差异 ,且通过雌激素受体 (ER)介导。雄激素仅可促进雄性大鼠VEC增殖 ,单纯孕激素对雌鼠VEC增殖无明显影响。E2 /T、E2 /P比值的平衡对雌鼠VEC的增殖也起重要作用     

氧化低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞损伤的条件培养基对血管平滑肌细胞增殖的作用

目的观察氧化低密度脂蛋白（OX—LDL）损伤血管内皮细胞（VEC）的条件培养基对血管平滑肌细胞（VSMC）生长状态的影响。方法在培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞上，分别采用MTT染色法、流式细胞术及增殖细胞核抗原免疫组化方法等，检测OX—LDL诱导VEC损伤的条件培养基对VSMC生长率、细胞周期及PCNA表达的影响。结果OX—LDL可呈浓度依赖性损伤VEC的形态、减少上清液中NO含量、升高上清液中ET-1含量。终浓度为1001μg,／ml的ox-LDL与VEC共同孵育24h制备的条件培养基，能明显促进VSMC生长、提高PCNA表达及增加细胞周期S期细胞数。结论血管内皮细胞受到OX—LDL损伤时，制备的条件培养基能促进血管平滑肌细胞增殖，这可能是氧化低密度脂蛋白致动脉粥样硬化形成的原因之一。     

重度慢性阻塞性肺疾病稳定期患者血循环内皮细胞的变化

目的观察重度慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者血循环内皮细胞（CEC）值的变化。方法重度COPD（稳定期）组36例与正常对照组30例分别检测血CEC,重度COPD患者利用超声心动图测肺动脉平均压。结果重度COPD（稳定期）组血CEC值[（18.42±10.87）个/mm^3]明显高于对照组[（6.87±4.42）个/mm^3],差异有统计学意义（P〈0.01）;血CEC值与血氧分压呈显著性负相关（r=-0.235,P=0.021）,与肺动脉平均压呈显著性相关（r=0.183,P=0.015）。结论重度COPD患者血CEC值明显增加,肺血管内皮细胞（VEC）结构明显受损,缺氧是导致血管内皮细胞受损的主要原因。     

犬骨髓成年多能祖细胞诱导分化血管内皮细胞的实验研究

目的内皮细胞移植对损伤组织的修复治疗至关重要,本研究旨在探讨骨髓成年多能干细胞(MAPCs)体内外诱导分化血管内皮细胞的可行性.方法采用Percoll密度梯度法分离培养MAPCs.应用10 ng/ml血管内皮细胞生长因子(VEGF)对骨髓MAPCs进行体外诱导分化2～3周,使其定向分化成为血管内皮细胞.采用细胞形态学、细胞免疫组化以确定诱导分化的效果.将标记BrdU的MAPCs自体移植于犬心肌内,观察局部微环境对于骨髓MAPCs的分化能力.结果应用10 ng/ml VEGF孵育骨髓MAPCs 2～3周,可见MAPCs分化为血管内皮细胞:细胞形态呈鹅卵石样;形成血管样结构;细胞vWF免疫染色阳性.移植于心肌内的MAPCs在体内形成新生血管,血管内皮BrdU染色与vWF染色均阳性.结论骨髓MAPCs可在体外VEGF诱导下或在体内微环境作用下分化为成熟血管内皮细胞.骨髓MAPCs可为损伤组织的移植修复治疗提供内皮细胞资源.     

糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子mRNA及蛋白表达的影响

目的研究糖基化终产物（AGEs）对人脐静脉山皮细胞血管内皮生长凼子（VEGF）mRNA及蛋白表达的影响，探讨AGEs在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株ECV304用BSA及小同浓度的AGEs孵育24h及400mg／L的AGEs孵育0、12、24及36h，采用原位杂交及Westem blot方法检测VEGFmRNA及蛋白的表达。结果人脐静脉内皮细胞在100、200及400mg／LAGEs孵育24h后，VEGFmRNA及蛋白表达均显著高于BSA对照组（P〈0．05），在用400mg／LAGEs分别孵育12．24及36h后，各组内皮细胞VEGF mRNA及蛋白表达量也明显高于0h对照组（P〈O．05）。结论AGEs可增加人脐静脉内皮细胞VEGF mRNA及蛋白的表达，且与浓度和时间呈正相关。     

磁性微球聚乳酸复合材料生物相容性研究

目的:探讨自制的新型磁性微球聚乳酸复合材料及载药雷帕霉素磁性微球聚乳酸复合材料对血管内皮细胞增殖的影响。方法:将不同含量的磁性聚合物微球聚乳酸复合材料和磁性聚合物微球的载药雷帕霉素聚乳酸磁性复合材料放置于培养的血管内皮细胞溶液中,标准条件下共培养4 d后,四噻唑蓝比色法测定细胞数量,倒置显微镜下观察内皮细胞的增殖情况。结果:培养1、2、3、4 d的磁性微球聚乳酸复合材料不同浓度组对血管内皮细胞生长均有明显的促进作用(P0.05)。雷帕霉素是抑制内皮细胞生长,但是载药的磁性微球聚乳酸复合材料各浓度组内皮细胞的数量显著多于单纯药物对照组(P0.05),磁性复合材料显著的减弱了雷帕霉素对内皮细胞的抑制作用。结论:磁性微球复合材料对血管内皮细胞具有促进生长的作用。     

血管内皮细胞,血浆内皮素值与糖尿病患者微血管病变的相关性及评估

目的 探讨糖尿病（ＤＭ）患者血管内皮细胞损伤及功能变化在微血管病变中的应用。方法 测定６０例ＤＭ患者及３０例正常人外周血循环内皮细胞（ＣＥＣ）数和血浆内皮素（ＥＴ）水平。结果 ＤＭ患者ＣＥＣ数和ＥＴ水平明显高于正常人，其中伴微血管病变者增高更明显。两者均民糖化血红蛋白水平呈显著正相关。结论 两者同共参与糖尿病微血管病变的发生发展。     

葡萄糖浓度波动损伤牛血管内皮细胞的机制

目的 探讨葡萄糖浓度波动损伤牛血管内皮细胞的机制.方法 取新生牛胸主动脉进行血管内皮细胞的原代培养.实验分3组:对照组、高糖组和波动组.荧光偏振法检测3组内皮细胞的细胞膜流动性;生化方法测定细胞内山梨醇、醛糖还原酶、山梨醇脱氢酶和糖基化终产物(AGEs)的含量;逆转录聚合酶链反应法检测细胞一氧化氮合酶(eNOS)、内皮素1(ET-1)以及糖基化终产物受体mRNA的表达情况.结果 偏正度和膜微黏度均为波动组和高糖组高于对照组(均P<0.01),波动组高于高糖组(均P<0.01).细胞内山梨醇含量、醛糖还原酶、AGEs含量均为波动组和高糖组高于对照组(均P<0.01),醛糖还原酶、AGEs含量均为波动组高于高糖组(均P<0.01).细胞内山梨醇脱氢酶含量波动组和高糖组均低于对照组(P<0.05),波动组低于高糖组(P<0.05).与对照组比较,高糖组和波动组细胞RAGE、eNOS和ET-1的mRNA表达均明显上调(P<0.01).结论 葡萄糖浓度波动导致血管内皮细胞的细胞膜流动性降低,激活多元醇通路途径相关酶的活性,增加细胞内AGEs的积聚,上调内皮细胞eNOS、ET-1和糖基化终产物受体mRNA的表达.葡萄糖浓度波动对血管内皮细胞的损伤比持续高糖更为严重.     

Interleukin-15 inhibits sodium nitroprusside-induced apoptosis of synovial fibroblasts and vascular endothelial cells

OBJECTIVE: One of the pathologic hallmarks of juvenile rheumatoid arthritis (JRA) is a tumor-like expansion of inflamed synovial tissue, or pannus, which causes much of the joint damage in this disease. The expansion of pannus is supported by extensive formation of new blood vessels. We have previously shown that revascularization of minced JRA synovial tissues engrafted into SCID mice correlated with the intensity of inflammatory activity in the tissues and with interleukin-15 (IL-15) expression. Since synovial vascular endothelial cells (VECs) expressed IL-15 receptors, the present study was undertaken to investigate the hypothesis that IL-15 might play a role in neovascularization of the pannus. METHODS: To evaluate IL-15 for possible angiogenic activity, we assessed the ability of recombinant human IL-15 (rHuIL-15) to induce VEC growth directly and to stimulate synovial cells to produce endothelial growth factors. Since IL-15 had been shown to inhibit apoptosis of certain immune cells, we were also interested in whether it might have similar effects on VECs. Apoptosis was induced by addition of sodium nitroprusside (SNP) at 1-2 mM to >80% confluent primary VECs, and numbers of apoptotic cells were determined by annexin V assay. RESULTS: Addition of rHuIL-15 at 10-100 ng/ml to primary synovial fibroblast cultures failed to up-regulate expression of vascular endothelial growth factor and angiopoietin 1 by these cells. Although rHuIL-15 failed to induce a mitogenic response of VECs, it promoted survival of these cells on Matrigel. Preincubation of VECs with rHuIL-15 at 50 ng/ml significantly reduced the proportion of VECs undergoing apoptosis. CONCLUSION: IL-15 promotes survival of VECs on Matrigel and inhibits SNP-induced apoptosis of endothelial cells. We hypothesize that this mechanism may be relevant to the stabilization of newly formed vascular structures in JRA synovium.