黑逍遥散对Aβ_(25~35)诱导AD模型大鼠脑组织神经递质及海马病理改变的影响

目的观察黑逍遥散对Aβ25~35诱导阿尔茨海默病(AD)模型大鼠学习记忆能力改善作用、脑组织乙酰胆碱酯酶(AchE)、胆碱乙酰转移酶和(ChAT)、单胺氧化酶(MAO)及海马病理改变的影响,探讨黑逍遥散防治AD的作用及其机制。方法 110只SD大鼠先随机挑选16只为假手术组,余下作为造模组,经过7 d的水迷宫实验,剔除记忆力异常的大鼠。造模组再按随机数字表分为模型组、阳性对照组及黑逍遥散高、中、低剂量组。采用Aβ25~35海马区注射诱发大鼠AD模型;高、中、低剂量组分别按4.25、8.50和17.0 g·kg-1·d-1灌胃给药,阳性对照组给予哈伯因(0.02 mg·kg-1·d-1)灌胃,每组14只,给药时间持续28 d。Morris水迷宫检测各组大鼠学习记忆能力的变化,最后一次水迷宫后,处死大鼠,收集大鼠海马及血液样本。ELISA法测大鼠脑匀浆AchE、ChAT、MAO活性;HE染色法观察海马病理损伤;电镜观察各组大鼠海马组织超微结构的变化。结果黑逍遥散能改善Aβ25~35所致AD模型大鼠行为学功能,提高学习和记忆能力;降低AD大鼠脑组织AchE和MAO活性、升高ChAT活性(P0.05);改善Aβ25~35所致AD模型大鼠AD大鼠海马病理损伤。结论黑逍遥散改善AD大鼠学习记忆力、保护AD模型大鼠脑组织结构和功能,这可能与其调节胆碱能和单胺类神经元神经递质有关。     

脑缺血对AD模型大鼠脑组织Aβ1-40表达的影响

目的 探讨脑缺血与阿尔茨海默病（AD）的相关性。方法 将40只大鼠随机分为假手术组、AD模型组（AD组）、脑缺血组（CI组）、AD脑缺血组（AD＋CI组），每组10只。AD组、AD＋CI组行AD造模，其后CI组、AD＋CI组行脑缺氧造模。分别于实验前、AD造模后14、21d（即脑缺血后1周）行学习记忆功能测试，采用免疫组化法检测大鼠脑组织β-淀粉样肽（Aβ1-40）阳性细胞数。结果 AD＋CI组在21d时学习记忆功能较假手术组、CI组、AD组明显下降；脑内Aβ1-40阳性细胞数明显增加。结论 脑缺血可加重AD病情，其可能机制为增加AB的神经毒性作用。     

茶多酚减轻代谢综合征大鼠胰岛β细胞炎性损伤的机制研究

通过高糖高脂饮食诱导建立SD大鼠代谢综合征(MS)模型.茶多酚干预10周后大鼠空腹血糖、甘油三酯、胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、游离脂肪酸水平均较MS组明显下降(均P＜0.05),茶多酚组胰腺组织肿瘤坏死因子α、干扰素、诱导型一氧化氮合酶的mRNA和蛋白表达较MS组明显下降(均P＜0.05),白细胞介素1β蛋白表达也明显降低(P＜0.05).电镜观察茶多酚组大鼠胰岛β细胞的分泌颗粒较MS组增多,细胞器结构破坏减轻.提示茶多酚可通过抑制炎性细胞因子的产生,保护胰岛β细胞免受损伤.     

β—淀粉样肽致大鼠Alzheimer病模型的研究

目的　建立β－淀粉样肽（β－ＡＰ）致大鼠Ａｌｚｈｅｉｍ ｅｒ病（ＡＤ）模型。并对大鼠海马内单胺类神经递质变化进行研究。方法　分别在两组大鼠海马内注射β－ＡＰ和生理盐水，然后用三等分迷宫测定大鼠的学习、记忆功能。迷宫实验结束后迅速处死大鼠，取出海马测定其中单胺类递质代谢产物的含量。结果　海马内注射β－ＡＰ的大鼠的学习、记忆功能出现明显障碍，其海马内的３－甲基－４－羟基苯乙二醇（ＭＨＰＧ）和５－羟吲哚乙酸（５－ＨＩＡＡ）水平明显下降，高香草酸（ＨＶＡ）水平无显著改变。结论　β－ＡＰ致大鼠ＡＤ模型是一种新的成功的ＡＤ动物模型。     

Aβ25~35合并鹅膏蕈氨酸诱导老年痴呆大鼠模型

目的建立Aβ25~35合并鹅膏蕈氨酸诱导老年痴呆(AD)中大鼠模型。方法 120只大鼠平均分为观察组,实施Aβ25~35合并鹅膏蕈氨酸诱导AD,不实施Aβ25~35合并鹅膏蕈氨酸诱导AD为对照组,针对两组大鼠的记忆水平等指标进行观察比较。结果两组定位航行试验中,潜伏期4 d及后2 d差异具有统计学意义(P0.05)。观察组学习记忆能力中象限百分比、20%、40%区域有统计学差异(P0.05)。观察组空间探索学习记忆中象限百分比、20%、40%区域、穿过原平台的次数与对照组有统计学差异(P0.05)。结论 Aβ25~35合并鹅膏蕈氨酸诱导AD模型,与传统的模拟AD模型可以更好地AD的发病特征,可以将其作为AD治疗中的新模型。     

中药干预β淀粉样肽生成、代谢及其毒性作用的研究概况

阿尔茨海默病（AD）是以进行性智能衰退为特征的中枢神经系统的退行性疾病,它以细胞外老年斑（SP）、细胞内神经原纤维缠结（NFT）、神经元大量丢失为主要病理特征.目前,其病因和发病机制尚未明确,因而缺乏有效的治疗手段.自1985年Masters等发现β-淀粉样肽（Aβ）是SP的主要结构物质以来,人们对Aβ做了大量研究,Aβ在各个特征病理形成过程中都发挥了重要作用,Aβ的沉积是AD病理的始发因素和中心环节,Aβ是多种因素导致AD发生发展的共同通路.因而,抑制Aβ的生成,促进Aβ的清除,降低其毒性和对神经元损伤后的修复等方面成了AD药物研究的重要靶标.实验研究显示中药在防治AD中有一定的作用趋势,有潜在的药物开发价值.下面将近年来中药对Aβ生成、代谢及其毒性影响的研究综述如下.     

去卵巢后痴呆大鼠模型β淀粉样蛋白及tau蛋白的变化及倍美力的干预作用

目的观察去卵巢后痴呆大鼠模型海马CA1区β淀粉样蛋白(Aβ)及tau蛋白阳性神经元的变化及倍美力(Premain)对其的影响,探讨倍美力的脑保护作用机制。方法采用穹窿海马伞切除术制备AD模型鼠,切除穹窿海马伞、双侧卵巢切除制备痴呆及雌激素缺乏复合模型鼠,采用Morris水迷宫观察其行为学改变,利用免疫组织化学染色法测定大鼠海马CA1区Aβ及tau蛋白阳性神经元的表达。结果倍美力治疗组大鼠学习、记忆能力增强,海马CA1区Aβ及tau蛋白阳性神经元的表达低于正常组及模型组。结论倍美力有助于改善痴呆及雌激素缺乏复合模型鼠的学习及记忆能力。     

β3-肾上腺素受体基因多态性与有氧运动干预代谢综合征患者效果的相关性

目的探讨β3-肾上腺素受体(β3-AR)基因Trp64Arg位点多态性与有氧运动对代谢综合征(MS)患者干预效果的相关性。方法95例MS患者进行为期16 w的有氧运动;聚合酶链反应-限制性片段长度多态(PCR-RFLP)法测定β3-AR基因Trp64Arg位点多态性;运动前后测定身体形态学、血流动力学、血糖控制和血脂等相关指标;分析基因多态性与各指标变化率以及MS改善率的关系。结果 3种基因型的分布频率分别为TT 77.9%、TA 22.1%、AA 0%,等位基因分布频率为T 88.9%、A 11.1%,符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律。不同基因型组间比较,运动前TA基因型空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(Hb A1c)和空腹胰岛素(FIns)高于TT基因型(P0.01);运动后TA基因型FBG和FIns的变化率显著高于TT基因型(P0.01);TA基因型MS改善率明显高于TT基因型(57.1%vs 20.3%,P0.01)。结论有氧运动对MS患者的干预效果与β3-AR基因Trp64Arg位点多态性有关联,携带TA基因型患者通过有氧运动的治疗效果优于TT基因型携带者。     

Aβ_(1-42)合并IBO诱导阿尔茨海默病大鼠模型的建立和评价

目的 建立一种新的复合式阿尔茨海默病(AD)大鼠模型,用于AD及其药物治疗的研究.方法 SD雄性大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组.在大鼠左侧海马区内注β-淀粉样蛋白1-42肽段(Aβ1-42 )和鹅膏蕈氨酸(IBO)混合液造成AD模型,通过水迷宫试验比较各组差异.结果在定位航行中,模型组潜伏期明显比正常组和假手术组延长(P<0.01).结论 Aβ1-42合并IBO诱导阿尔茨海默病大鼠模型在一定程度上较好的模拟AD的发病特点,可作为AD及其药物研究的一种新模型.     

褪黑素对Aβ诱导的大鼠脑组织GFAP和S100β蛋白表达的干预作用

目的观察褪黑素(MT)干预β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的大鼠脑组织胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和S100β蛋白的表达,探讨MT对老年痴呆症(AD)治疗的作用机制。方法 30只大鼠随机分为生理盐水对照组、β淀粉样蛋白(Aβ)诱导AD模型构建组(模型组)和AD模型+MT治疗组(MT组)。动物喂养40d时取大鼠脑组织,用HE染色观察脑组织病理变化,免疫组化染色法检测Aβ标记的脑组织部位以及Aβ对神经细胞毒性作用,同时检测胶质细胞的GFAP和S100-β蛋白的表达水平。结果 HE染色观察脑组织病变在MT组明显轻于模型组;免疫组化结果显示,Aβ的表达水平在模型组和MT组二者间无明显差异,但Aβ对海马CA3区神经元损伤作用在模型组要大于MT组。GFAP和S100β表达水平在模型组则显著高于MT组和正常组(P0.05)。结论用MT干预治疗,可降低AD模型鼠胶质细胞表达GFAP和S100β蛋白的水平,从而起到了减轻大脑神经元细胞的损伤作用。     

慢性脑缺血大鼠脑内Aβ1-42表达及葡多酚的脑保护作用

目的探讨长期脑低灌流情况下脑组织内Aβ_(1-42)表达的变化和葡多酚对Aβ表达的影响及其脑保护作用。方法采用双侧颈总动脉永久结扎方法制备慢性脑缺血大鼠模型,将54只健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组、缺血组、葡多酚干预组,利用Morris水迷宫、HE和免疫组化染色方法分别观察各组大鼠术后2、4、6个月不同时间点的行为学变化,海马CAl区神经细胞形态学和Aβ的表达情况。结果与对照组相比,缺血组大鼠出现进行性认知功能障碍,海马CAl区锥体细胞经历了变性、坏死、细胞大量脱失及锥体细胞层不完整甚至消失的过程,海马CAl区Aβ_(1-42)表达明显增加;葡多酚干预组以上变化均明显减轻,且具有统计学差异。结论慢性脑缺血可以导致大鼠进行性认知功能障碍,海马CAl区神经细胞进行性损伤及Aβ_(1-42)表达增加;而葡多酚对慢性脑缺血损伤具有保护作用。     

17β-雌二醇及代谢产物对大鼠肝星状细胞功能的影响

目的 探讨17β-雌二醇(β-Est)及其主要代谢产物2-羟雌二醇(2OHE)、2-甲氧雌二醇(2MeOE)对肝星状细胞(HSC)功能的影响及其可能的作用途径。方法 采用原位酶灌注法和密度梯度离心法分离HSC。初次传代后，HSC随机分成10组，分别加入不同浓度β-Est、2OHE、2MeOE，加药后72h，采用MTT、ELISA及免疫组化法分别检测HSC增殖、培养液中透明质酸(HA)和Ⅳ型胶原(VⅣ)含量及细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、雌激素受体(ER)表达。结果 在10^-9～10^-7mol／L浓度范围内，β-Est、2OHE、2MeOE能抑制活化HSC增殖、分泌细胞外基质(ECM)，呈剂量依赖关系，10^-7mol／Lβ-Est、2OHE、2MeOE能抑制活化HSC表达α-SMA，生物学活性依次为2MeOE＞20HE＞β-Est。10^-7mol／L β-Est能促进HSC表达ERβ蛋白，而相同浓度2OHE、2MeOE对HSC表达ERβ蛋白无影响。结论 在生理条件下，雌激素抑制肝纤维化形成可能通过其代谢产物发挥作用。     

丹参酮对D-半乳糖-Aβ_(1-40)致痴呆大鼠海马内Aβ和AChE的影响

目的 探讨丹参酮对D-半乳糖-Aβ_(1-40)致复合痴呆模型大鼠海马内β-淀粉样蛋白(Aβ)和乙酰胆碱酯酶(AChE) 表达的影响.方法　实验动物随机分成AD模型组、丹参酮治疗组和溶媒对照组.采用免疫组织化学和酶组织化学方法　,分别观察大鼠海马内Aβ和AChE表达的变化.结果 AD模型组大鼠海马内Aβ-ir细胞数显著增多,平均光密度增强;AChE阳性神经纤维受损,光密度下降(含阳性面积百分比和光密度);与溶媒对照组比较差异显著(P<0.01).丹参酮处理后,Aβ-ir细胞数明显减少,光密度也下降;AChE阳性神经纤维密度增强,与AD模型组比较差异有显著性意义(P<0.01).结论 丹参酮改善D-半乳糖-Aβ_(1-40)致复合痴呆大鼠学习记忆障碍的作用机制,可能与降低海马内Aβ的表达而保护脑内胆碱能神经有关.     

TGF-β1对大鼠肝细胞系BRL-3A凋亡和细胞周期的影响

目的:研究转化生长因子β1(TGF-β1)对大鼠肝细胞系BRL-3A凋亡和细胞周期的影响.方法:MTT法检测TGF-β1对细胞增殖的影响:将BRL-3A细胞分为6组,分别给予不同浓度的TGF-β1(0、2、4、6、8、10μg/L),检测各组细胞24、36、48 h时的增殖活性;进一步将BRL-3A细胞分为TGF-β1...     

砷暴露与大鼠肝脏损伤及激活素A,转化生长因子-β1的相关性

目的:探讨水砷暴露与大鼠肝脏损伤的关系,了解激活素A(ACTA),转化生长因子-β1(TGF-β1)在肝脏损伤中的作用.方法:大鼠110只随机分成对照组、模型组(浓度100 mg/L的亚砷酸钠溶液)、自然恢复组.对照组和模型组分别予第1、2、3、4月末各处死10只,自然恢复组第1月给予砷溶液,月末随机取出10只改为自来水,其余仍给予砷溶液.第2月末处死上月分出的10只,并在此取出10只改为自来水,1 mo后处死,依次类推,第4月末将最后10只停用砷溶液的大鼠处死.股动脉取血进行血清肝功能和肝组织病理学检查以观察其肝脏损伤的动态变化,取大鼠肝组织采用实时荧光定量PCR法检测ACTA、TGF-β1的基因表达水平.结果:砷暴露1 mo后脱离自然恢复1 mo可见炎细胞浸润明显减轻.ALT、AST模型组中增高,第3、4月造模,ALT升高差异有统计学意义( P<0.05);造模1、2、3 mo后分别自然恢复1 mo,ALT降低有统计学意义(49.33±13.51 U/L vs 62.68±23.57 U/L,62.75±14.40U/L vs 64.36±18.24 U/L,65.74±11.85 U/Lvs 69.36±15.7 U/L,均P<0.05).ACTA mRNA第3、4月造模与对照组比较有统计学意义(64.83±28.29 vs 28.33±18.70,98.67±26.80vs 28.33±18.70,均P<0.05),TGF-β1 mRNA1、2、3、4 mo造模与对照组比较均有统计学意义(46.27±18.39 vs 33.64±20.17,67.06±20.79 vs 33.64±20.17,88.33±23.42 vs 33.64±20.17,110.57±24.23 vs 33.64±20.17,均P<0.05);造模1、2、3 mo后分别自然恢复1mo,TGF-β1 mRNA降低有统计学意义(35.36±16.48 vs 46.27±18.39,52.04±21.37 vs67.06±20.79,70.69±35.27 vs 88.33±23.42,均P<0.05).结论:砷暴露所引起的肝脏损伤随暴露时间的延长而加重,越早脱离暴露其损伤的肝细胞修复越快;促炎症因子ACTA、TGF-β1与砷暴露肝损伤的发生相关.     

Aβ_(1-42)诱导皮层神经元细胞凋亡的机制及通心络的干预作用

目的 探讨Aβ诱导皮层神经元凋亡的机制及通心络的干预作用.方法 原代培养的小鼠皮层神经,经Aβ1-42处理后,MTT判断神经元存活率,Hoechst33342染色、流式细胞仪检测检测神经元凋亡,Western印迹法检测caspase凋亡蛋白的表达.结果 神经元经Aβ_(1-42)处理后,活细胞数减少,染色质浓缩、核碎裂,染色阳性神经元增多,细胞凋亡率上升,caspase-3表达增强.通心络可明显改善上述变化.结论 Aβ通过caspase-3途径引起神经元凋亡从而导致神经元细胞死亡.通心络可抑制Aβ诱导的神经元凋亡来保护神经元,从而起到治疗AD的作用.     

老年帕金森病大鼠模型皮质中γ-氨基丁酸A受体β亚基含量的变化

目的探讨在帕金森病(PD)状态下皮质中γ-氨基丁酸(GABA)A受体各个β亚基表达水平的变化。方法分离6-羟基多巴(6-OHDA)制作成功的PD动物模型的皮质,应用高效液相(HPLC)法测定皮质中GABA的含量,应用qRT-PCR的方法检测GABA A受体中β1、β2、β3亚基的mRNA表达水平,应用Western印迹的方法检测GABA A受体中β1、β2、β3亚基的蛋白质表达水平。结果 PD模型大鼠注射侧的皮质中GABA的浓度较对照侧及正常对照的双侧均有不同程度的升高(P<0.05)。皮质中,β1、β2、β3亚基的mRNA表达均有所降低,β2和β3亚基降低更明显(P<0.01);各个亚基的蛋白水平的变化趋势与mRNA的变化一致。结论 GABA A受体的β1、β2、β3亚基在皮质中均有表达,且与GABA在PD动物脑组织中含量相适应,β1、β2、β3亚基均有受体下调的情况。     

Aβ25～35诱导阿尔茨海默病模型大鼠海马神经元HSP70的表达

目的利用β-淀粉样蛋白(Aβ25～35)毒性作用诱导大鼠阿尔茨海默病(AD)模型,研究热休克蛋白70(HSP70)在海马神经元损伤中的表达.方法将大鼠随机分为2组:AD模型组、溶媒体组,在双侧海马分别注射2 μl(10 μg)Aβ25～35 、2 μl生理盐水;于海马注射第1,7,14,21天采用免疫组织化学、积分光密度分析等手段对各组大鼠脑HSP70的表达进行观察.结果 AD模型组手术第7天大鼠记忆明显减退(P<0.05),且HSP70在海马神经元内表达第1天时最高,第1～21天呈递减趋势,其中第14天锐减.结论 Aβ25～35通过氧化应激和损伤海马神经元等过程使HSP70的表达明显降低,HSP70表达是AD大鼠脑内神经元存活的重要标志.     

Ⅱ组代谢型谷氨酸受体阻断剂对老年痴呆大鼠模型脑内nNOS及nNOS mRNA表达的影响

目的 阐明Ⅱ组代谢型谷氨酸受体(metabotropic glutamate receptor 2/3,mGluR2/3)对老年性痴呆(AD)发病过程中一氧化氮(NO)的影响.方法 应用免疫组化和原位杂交方法,观察脑室应用Ⅱ组mGluR2/3阻断剂α-甲基-(4-四唑基-苯)甘氨酸 (MTPG)对脑室β-淀粉样肽(Aβ)注射所致的AD大鼠神经型一氧化氮合酶(nNOS)及其mRNA表达的影响.48只SD大鼠随机分为假手术组、痴呆组、痴呆组+MTPG组,每组16只.各组大鼠均在Morris水迷宫测试后常温饲养1 w后取材观察.结果 假手术组海马CA1区锥体细胞轮廓清楚,排列整齐,胞浆有较弱的nNOS表达.痴呆组nNOS表达较假手术组明显增加,同时锥体细胞数目变少,锥体神经元的轮廓、形态出现明显的损伤性改变;脑室注射mGluR2/3阻断剂MTPG,可部分阻断AD引起的nNOS表达增加,对神经元的形态也有恢复作用.原位杂交与免疫组化显示相似的变化趋势.结论 mGluR2/3参与AD发病过程,NO信号通路可能发挥重要作用.     

Aβ_(25～35)对大鼠海马神经元及小胶质细胞的影响

目的探讨双侧海马注射Aβ25³5不同时间点对大鼠海马神经元及MG的影响。方法雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组(注射Aβ后2、7、15、21 d 4个时间点),双侧海马注射Aβ建立大鼠AD模型。水迷宫法观察大鼠学习记忆能力;硫堇染色观察海马CA1区神经元和胶质细胞;Aβ、CD11b免疫组化染色分别观察Aβ沉积和活化MG。结果与对照组相比,模型组大鼠在第335不同时间点对大鼠海马神经元及MG的影响。方法雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组(注射Aβ后2、7、15、21 d 4个时间点),双侧海马注射Aβ建立大鼠AD模型。水迷宫法观察大鼠学习记忆能力;硫堇染色观察海马CA1区神经元和胶质细胞;Aβ、CD11b免疫组化染色分别观察Aβ沉积和活化MG。结果与对照组相比,模型组大鼠在第3⁵天逃避潜伏期均显著延长,学习记忆能力下降(P<0.05);4个时间点模型组大鼠海马都有神经元缺失,胶质细胞增生,2 d、7 d、15 d组大鼠神经元损伤呈加重趋势,但21 d组神经元损伤较15 d组有减轻趋势(P<0.05);4个时间点模型组大鼠都有Aβ沉积和活化的MG,Aβ沉积量及MG活化自第7天后呈下降趋势(P<0.05)。结论 Aβ可以引起神经元损伤,降低大鼠的学习记忆能力;Aβ可以激活MG,引起MG形态和数量改变,MG可吞噬、清除Aβ;Aβ沉积量和MG活化数量变化呈正相关。