HBx激活的MSL2蛋白通过泛素化降解APOBEC3B增强HBV cccDNA的稳定性促进肝癌的发生发展

正【据《Hepatology》2017年11月报道】题:HBx激活的MSL2蛋白通过泛素化降解APOBEC3B增强HBV cccD NA的稳定性促进肝癌的发生发展(作者Gao YE等)HBV感染是慢性乙型肝炎、肝硬化和肝癌发生的主要诱因。HBV cccD NA作为病毒复制和转录的模板在肝细胞核内以稳定的cccD NA池存在,其难以清除是目前抗乙型肝炎药物治疗无效的一个重要原因。本研究提出了一个新的假说:HBV X蛋白     

前列腺素E2促进乙型肝炎病毒复制的机制研究

目的探讨前列腺素E2(PGE2)对乙型肝炎病毒(HBV)复制及T细胞功能的影响。方法ELISA法检测慢性乙肝患者(CHB,120例)和健康体检者(HP,60例)血清中PGE2的浓度。检测PGE2高水平或低水平患者血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)的水平,流式细胞术检测血样中CD8+T细胞功能相关指标。将24只经尾静脉注射重组病毒rAAV8-1.3HBV的小鼠随机均分为3组,每组8只:对照组(DMSO)、PGE2组(PGE2的稳定类似物)和PGE2受体拮抗组(PGE2受体拮抗剂),试剂盒及实时定量PCR检测3组小鼠血清中HBsAg、HBV DNA及pgRNA水平,流式细胞术检测肝脏中CD8+T细胞功能相关指标。结果与HP(201.3±13.38)对比,CHB患者(877.2±43.27)血清中PGE2水平显著增加(P<0.05)。与PGE2低水平患者相比,PGE2高水平患者血清中HBV DNA(1.84±0.161)、ALT(722.64±33.081)、AST(514.20±13.427)水平显著增加,CD8+T细胞中Tim3的表达显著增加(18.64±2.051),颗粒酶B的表达显著降低(0.29±0.102)(P<0.05)。与对照组相比,PGE2组小鼠血清中HBsAg(5.57±0.941)、HBV DNA(0.58±0.073)及pgRNA(0.57±0.069)水平显著增加,肝脏CD8+T细胞中Tim3(25.45±3.412)的表达显著增加,TNF-α(21.50±3.139)和IFNγ(15.23±2.105)的表达显著降低(P<0.05)。PGE2受体拮抗有相反的效果。结论PGE2在CHB患者血清中呈高表达,PGE2促进HBV复制及T细胞衰竭,PGE2信号阻断不仅可修复T细胞功能还可控制HBV复制。     

醌氧化还原酶1抑制剂双香豆素促进HBV X蛋白降解进而抑制cccDNA转录的机制研究

【据Journal of Hepatology2021年3月报道】题:醌氧化还原酶1抑制剂双香豆素促进HBV X蛋白降解进而抑制ccc DNA转录的机制研究(作者Cheng ST等)HBV ccc DNA在肝细胞核内持续稳定的存在,被认为是HBV感染慢性化、抗病毒治疗无法彻底清除以及停药后肝炎复发的最主要原因。HBV X蛋白(HBx)对HBV ccc DNA的转录过程发挥关键作用;促进HBx降解,则可能抑制ccc DNA转录。因此,开发靶向HBx的小分子化合物是达到"ccc DNA沉默清除"这一重要目标的可能途径。     

肝细胞核因子3结合位点的突变及对抑制乙型肝炎病毒复制的影响

目的 研究肝细胞核因子(HNF)3结合位点HNF3β对HBV转录和复制调节作用的机制.方法 通过分别位于HBV基因组的多聚酶编码区Pp、PS1p和sp区上的HNF3结合位点,构建HBV基因组2个或3个位点的复合突变,获得4个复合突变型重组质粒;分别转染非肝源性细胞小鼠成纤维细胞株(NIH3T3),Northern印迹法检测3.5 kb、2.4 kb/2.1 kb、0.7 kb HBV RNA的转录水平,Southern印迹法检测HBV DNA复制中间体水平,观察上述突变是否会影响HNF3β对HBV转录和复制的抑制作用.结果 在被转染的非肝源性细胞3T3中,HNF3β仍能降低4个复合突变型HBV重组质粒3.5 kb HBV RNA的转录水平,抑制HBV DNA的复制;与未共转染HNF3β相比,转录水平下降50%～75%、复制水平下降80%～96%.结论 在位于HBV基因组的多聚酶编码区Pp、PS1p和Sp区上的3个HNF3结合位点中,即使其中2个或3个结合位点同时联合突变,HNF3β仍能抑制HBV的转录和复制.Pp、PS1p和Sp区HNF3结合位点的突变不能阻断HNF3β对HBV复制的抑制作用.     

小泛素样修饰物特异性蛋白酶3通过调节脂滴水平体外促进HepG2细胞丙型肝炎病毒复制

目的 探究丙型肝炎病毒(HCV)感染细胞小泛素样修饰物特异性蛋白酶3(SENP3)对脂滴水平的调节及其对HCV复制的影响。方法 以感染性HCV病毒颗粒感染人HepG2细胞,采用Western blot法检测感染前后SENP3蛋白表达水平。采用脂质体法转染SENP3-siRNA至HepG2细胞,在感染HCV后采用Western blot法检测HCV核心蛋白表达量,采用qRT-PCR法检测HCV RNA水平,采用油红O染色观察细胞脂滴水平。以软脂酸处理敲低SENP3后的HepG2细胞,采用qRT-PCR法检测感染HCV后HCV RNA水平。结果 在HCV感染HepG2细胞后1 d、3 d和6 d,HCV 核心蛋白相对表达量分别为0.01±0.00、0.17±0.02和0.43±0.04,SENP3蛋白相对表达量分别为0.23±0.04、0.42±0.03和0.46±0.04,差异显著(P<0.05);转染SENP3-siRNA可有效降低SENP3表达并降低HCV感染后细胞HCV核心蛋白表达水平;SENP3敲低细胞HCV RNA相对水平为54.2±11.4%,较转染非特异性siRNA细胞显著降低(P<0.01);敲低SENP3蛋白表达后细胞脂滴数量显著减少;敲低SENP3的HepG2细胞感染HCV后HCV RNA相对水平为58.2±5.2%,较转染非特异性siRNA细胞显著降低(P<0.01),而以软脂酸处理敲低SENP3的HepG2细胞,在感染HCV后HCV RNA相对水平为74.6±6.4%,较未经软脂酸处理细胞显著升高(P<0.01)。结论 在HCV感染肝细胞时SENP3可通过调节脂滴代谢促进HCV复制。     

组蛋白乙酰化酶SIRT3协同组蛋白甲基化酶SUV39H1和SETD1A表观调控HBV cccDNA的转录活性

<正>【据《Hepatology》2018年10月报道】题:组蛋白去乙酰化酶SIRT3协同组蛋白甲基化酶SUV39H1和SETD1A表观调控HBV cccD NA的转录活性(作者Ren JH等)HBV cccD NA在肝细胞核内持续稳定的存在,被认为是HBV感染慢性化和抗HBV治疗停止后肝炎复发的最主要原因。因此,HBV cccD NA是当今HBV研究领域中的热点和难题。HBV cccD NA微染色体组成包括组蛋白和非组     

非小细胞肺癌组织中TP酶激活蛋白SH3功能结合蛋白2的表达及临床意义

目的 检测非小细胞肺癌(NSCLC)组织和细胞中TP酶激活蛋白SH3功能结合蛋白2(G3BP2)的表达情况,分析G3BP2对NSCLC细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法 收集NSCLC患者120例,腺癌47例,鳞状细胞癌73例。免疫组织化学检测腺癌、鳞状细胞癌组织中G3BP2的表达情况,分析G3BP2表达与患者临床病理特征的关系。蛋白免疫印迹实验和qRT-PCR检测SPC-A-1、16HBE细胞中G3BP2的表达。对NCI-H226、SPC-A-1细胞转染si-NC、si-G3BP2质粒,检测敲低G3BP2对细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。结果 腺癌组织和鳞状细胞癌组织中G3BP2的阳性表达率无统计学差异(P>0.05),G3BP2阳性与TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。NCI-H226和SPC-A-1细胞中G3BP2蛋白及mRNA的表达高于16HBE细胞。敲低G3BP2可明显抑制NCI-H226、SPC-A-1细胞的增殖和侵袭并增强细胞凋亡。结论 G3BP2在NSCLC组织中的阳性表达与TNM分期、淋巴结转移有关,敲低G3BP2的表达可显著抑制NSCLC的进展。     

中西医结合治疗促进AIDS病人免疫功能重建的研究

目的观察中西医结合治疗对艾滋病（AIDS）病人免疫功能重建的促进作用。方法将80例病人随机分为治疗组[中药＋高效抗反转录病毒治疗（HAART）]和对照组（单纯HAART）,疗程半年,比较两组CD4＋、CD8＋T淋巴细胞计数及白细胞介素2（IL-2）水平的变化。结果对照组（35人）和治疗组（39人）治疗后的CD4＋T细胞计数和IL-2水平,均高于治疗前（P〈0.01和P〈0.05）,而CD8＋T细胞计数低于治疗前（P〈0.01）。治疗组CD4＋T淋巴细胞上升幅度高于对照组（P=0.018）,而两组CD8＋T淋巴细胞和IL-2上升幅度的差异无统计学意义（P〉0.05）。结论中西医结合治疗提高CD4＋T细胞的效果优于单纯的抗病毒治疗,可促进AIDS病人的免疫重建。     

虚拟现实技术结合注意力训练法促进脑卒中功能康复的研究

目的探究虚拟现实（VR）技术与注意力训练法相结合对脑卒中患者的功能康复及生活质量的影响。 方法选取2017年12月至2018年9月丽水市第二医院康复科门诊及住院的40例脑卒中偏瘫患者,采用随机数字表法将患者分为治疗组和对照组,每组20例。所有患者采用常规药物治疗,对照组采用传统康复训练结合认知训练（包括注意力训练）,治疗组患者在此基础上增加VR康复训练,每次训练30 min,1次/d,每周6 d,共持续8周。采用简易精神状态量表（MMSE）评分、Fugl-Meyer运动功能评分（FMA）、Barthel指数（BI）评分对2组患者干预前后的运动功能及日常生活活动能力进行评定比较。 结果2组患者治疗后与治疗前相比,MMSE评分、FMA评分和BI评分均有明显改善,差异具有统计学意义（P<0.05）;治疗组患者与同期对照组相比,MMSE、FMA和BI评分均显著提高,差异具有统计学意义（P<0.05）,生活质量明显优于同期对照组。 结论使用VR技术与注意力训练法结合对脑卒中偏瘫患者的功能康复效果显著,能够进一步提高患者的日常生活能力,改善生活质量。     

白藜芦醇促进人前列腺癌PC-3细胞凋亡机制的研究

目的 观察白藜芦醇(Res)对人前列腺癌PC-3细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其机制.方法 以PC-3细胞作为实验对象,并根据干预方式不同分为A组(12.50μmol/L Res)、B组(25.00μmol/L Res)、C组(50.00μmol/L Res)、D组(100.00μmol/L Res)和对照组(等体积完全...     

血清对氧磷酶-1水平及其基因L55M位点多态性与冠心病的关系研究

目的探讨血清对氧磷酶(PON)-1水平及其基因L55M位点多态性与冠心病的关系。方法选取2013—2015年在广东医学院附属深圳市福田人民医院心内科住院的患者252例,根据冠状动脉造影检查结果分为冠心病组160例和非冠心病组92例。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清PON-1水平,应用Mass ARRAY时间飞行质谱技术分析PON-1基因L55M位点多态性。结果冠心病组患者血清PON-1水平低于非冠心病组(P0.05)。冠状动脉多支病变及双支病变患者血清PON-1水平低于单支病变患者(P0.05)。两组患者PON-1基因L55M位点基因型、等位基因分布频率比较,差异均无统计学意义(P0.05)。冠心病组LL基因型患者血清PON-1水平低于非冠心病组(P0.05),而两组ML基因型患者血清PON-1水平比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论冠心病患者血清PON-1水平明显降低,而PON-1基因L55M位点多态性与冠心病无关。     

C5L2基因新的SNP位点C698T与新疆地区维吾尔族人群2型糖尿病的相关性研究

目的 本研究旨在探讨促酰化蛋白( acylation-stimulating protein,ASP)的功能受体C5L2基因新的SNP位点C698T多态性与糖尿病的相关性.方法 采用直接测序的方法,在C5L2基因第二外显子区发现新的SNP位点C698T;采用PCR-限制性片段长度多态性方法,对252例2型糖尿病患者和747名健康对照者C5L2基因C698T进行分析.结果 C5L2基因C698T杂合子基因型在2型糖尿病组和对照组的分布频率分别为0.107和0.036,差异有统计学意义(x2=18.576,P＜0.01).在调整了年龄、性别、吸烟、饮酒,高血压、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇等混杂因素后,C698T杂合子SNP仍为新疆维吾尔族人群2型糖尿病的独立危险因素(P＜0.01,OR=3.373,95％CIl.736 ～6.553).结论 在新疆维吾尔族人群中,C5L2基因C698T基因多态性与2型糖尿病具有相关性,CT基因型可增加新疆维吾尔族人群2型糖尿病发生的风险.     

胸腺肽促进人肝癌细胞HepG2凋亡机制的研究

将对数生长期的人肝癌细胞H epG 2(3×104/m l)随机分为1、2、3、4组,1、2、3组分别用浓度为400、200、100μg/m l的胸腺肽1m l处理,4组用相同体积RPM I-1640培养液处理。免疫组化法检测H epG 2中p53、B c1-2、B ax蛋白的表达,用流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳法检测细胞凋亡及死亡率。结果1、2、3组细胞凋亡率及死亡率均显著高于4组;随胸腺肽浓度升高,细胞死亡率升高。胸腺肽作用于H epG 2细胞24h后,琼脂糖凝胶电泳出现明显的DNA梯形条带,大约相当于180~200bp的整倍数,对照组无DNA梯形条带出现。荧光显微镜下可见H epG 2细胞缩小、染色质固缩,细胞核裂成碎片,但细胞形态仍完整。1、2、3组p53、B ax表达显著高于4组,P均<0.05;B c1-2表达显著低于4组,P均<0.05。提示胸腺肽可诱导人肝癌H epG 2细胞凋亡,其机理是上调p53、B ax表达,抑制B c1-2表达。     

脂蛋白脂酶的调控与功能及其致动脉粥样硬化机制的研究新进展

脂蛋白脂酶能够水解极低密度脂蛋白和乳糜微粒中的甘油三酯,对清除体内过多的甘油三酯至关重要,是脂质代谢的关键酶。新近研究发现脂蛋白脂酶的合成和转运过程受到多种因素调控,并具有致动脉粥样硬化的作用,其机制存在多种途径。因此,本文主要针对脂蛋白脂酶合成和转运过程中的调控、生物学功能及其致动脉粥样硬化的主要机制研究进展作一综述,以期为动脉粥样硬化的防治寻找新的治疗靶点。     

丁苯酞诱导缺氧条件下NDUFA4L2蛋白的高表达并参与脑保护的机制

目的探索NDUFA4L2蛋白在缺氧环境下大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤细胞(pheochromocytoma cell,PC12)中的表达及其与丁苯酞介导的脑保护作用机制的关系。方法以PC12细胞为载体,制作PC12细胞缺氧模型,观察不同缺氧时间段(0、6、12、18、24、48 h) PC12细胞形态变化,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)半定量分析不同缺氧时间段及不同浓度丁苯酞预处理后PC12细胞中NDUFA4L2蛋白的表达情况。结果 PC12细胞缺氧损伤、外形变化严重程度与缺氧时间有关; NDUFA4L2蛋白在PC12细胞缺氧24 h内Western blot定量检测呈高表达趋势,高表达程度与缺氧时间无相关性;丁苯酞预处理后,NDUFA4L2蛋白表达水平均较未预处理组显著增高,差异有统计学意义(P0. 05)。结论 NDUFA4L2蛋白在缺氧24 h内可能对PC12细胞损伤有保护作用;丁苯酞可能通过诱导NDUFA4L2蛋白表达起到脑保护作用。     

miR-155与NLRP3炎症体促进动脉粥样硬化的相关机制研究

微小RNA(miR)-155参与血管内皮细胞功能障碍、巨噬细胞炎症,是促进动脉粥样硬化发展的重要微小RNA。核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症体参与动脉粥样硬化斑块的产生,并与斑块不稳定性密切相关。但miR-155调节NLRP3炎症体在动脉粥样硬化中的机制仍不清楚。本文就miR-155与NLRP3炎症体在氧化低密度脂蛋白介导的动脉粥样硬化的相关机制作一综述。     

吉非替尼诱导p27核转位并激活半胱天冬酶8促进NSCLC细胞凋亡的机制

目的探讨吉非替尼诱导的p27蛋白表达改变和核转位及半胱天冬酶(Caspase)8的激活对表皮生长因子受体(EGFR)突变的非小细胞肺癌(NSCLC)细胞周期阻滞和细胞凋亡的影响及作用机制。方法选取存在19号外显子缺失突变的对吉非替尼敏感的NSCLC细胞系HCC827,采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法和流式细胞术分别检测吉非替尼在不同浓度和时间下对细胞活性的影响。利用Western印迹检测p27蛋白和Caspase及其他相关蛋白的相对含量。通过免疫荧光法观察p27蛋白的亚细胞定位。采用蛋白免疫共沉淀验证p27蛋白和Caspase8之间的相互作用。结果吉非替尼浓度-时间依赖性促进了HCC827细胞凋亡。当吉非替尼干预18 h后,细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)抑制因子p27蛋白表达开始出现显著升高(P<0.05),且p27蛋白在此过程中伴随从细胞核到细胞质的核转位现象,而促凋亡蛋白B细胞淋巴瘤(Bcl)-2相关x蛋白(Bax)和Bad及抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl/白血病-x基因长片段(Bcl-xl)在吉非替尼干预后表达并未发生显著改变。此外,细胞质中p27蛋白与Caspase8的降解中间体p43/p41结合从而抑制其自身细胞质向细胞核易位。结论推断吉非替尼通过调节p27蛋白的亚细胞定位及Caspase8之间的相互作用,从而达到促EGFR突变的NSCLC细胞凋亡的效果。     

肌浆网Ca~(2+)-ATP酶和L型-Ca~(2+)通道功能变化对肥厚心室肌电重构的影响

为探讨肌浆网Ca2 + ATP酶和L型 Ca2 +通道功能变化在左室肥厚 (LVH)心室肌电重构发生中的作用。将 60只日本大耳白兔随机分为 6组 :单纯实验组、实验组 +维拉帕米、实验组 +Thapsigargin、单纯对照组、对照组 +维拉帕米和对照组 +Thapsigargin。实验组行腹主动脉部分结扎术 ,喂养 1 0周制作LVH模型。对照组在游离出腹主动脉后 ,不予结扎。均采用以Langendorff离体灌流方法。对单纯实验组和单纯对照组 ,在心外膜左室心尖部部位以 2 31ms为基础周长 (BCL)测定心室有效不应期 (VERP)后 ,于右房行电刺激 ,刺激频率为 2 60次 /分 ,持续 30min ,保持 1 1房室传导。刺激结束后 ,重复测定VERP值。对其余 4组 ,先测定未加药物时各组的VERP值 ,随后改用加入药物的灌流液后再次测定VERP值 ,最后进行右房刺激及VERP的测定 (同前 )。结果 :单纯实验组在快速刺激后 ,VERP显著延长 ,其延长程度显著大于单纯对照组 ;而在加用维拉帕米的实验组和对照组中 ,快速刺激后无VERP延长的表现 ;相反 ,Thapsigargin则可增强快速刺激后VERP延长的表现。结论 :L 型Ca2 +通道的激活可能是LVH心室肌电重构发生的重要原因。其中 ,心室肌细胞肌浆网Ca2 + ATP酶的功能降低参与了此过程 ,并可能导致了LVH与正常心室肌的频率相关性电重构?     

心血管自主神经功能与高血压并2型糖尿病患者血压节律的相关性研究

目的分析心血管自主神经功能与高血压并2型糖尿病患者血压节律的相关性。方法选取2013年6月—2015年6月东营市河口区人民医院心内科收治的门诊高血压患者80例(高血压组)、高血压并2型糖尿病患者80例(高血压并2型糖尿病组)。比较两组患者动态血压监测指标[包括24 h收缩压(24 h SBP)、24 h舒张压(24h DBP)、昼间SBP(Dt-SBP)、昼间DBP(Dt-DBP)、夜间SBP(Nt-SBP)、夜间DBP(Nt-DBP)、昼夜SBP下降值(ΔSBP)、昼夜DBP下降值(ΔSBP)、杓型血压发生率]和标准心血管自主神经功能测试(SCAFT)指标[包括Valsalva动作反应指数、呼吸差、卧立位血压差、30∶15比值、SCAFT评分],采用Spearman秩相关分析SCAFT评分与高血压并2型糖尿病患者动态血压监测指标、糖化血红蛋白的相关性。结果两组患者24 h SBP、24 h DBP、Dt-SBP、Dt-DBP比较,差异无统计学意义(P>0.05);高血压并2型糖尿病组患者Nt-SBP、Nt-DBP高于高血压组,ΔSBP、ΔDBP及杓型血压发生率低于高血压组(P<0.05)。高血压并2型糖尿病组患者Valsalva动作反应指数、30∶15比值低于高血压组,呼吸差、卧立位血压差、SCAFT评分高于高血压组(P<0.05)。Spearman秩相关分析结果显示,SCAFT评分与高血压并2型糖尿病组患者Nt-SBP、Nt-DBP、糖化血红蛋白呈正相关(rs值分别为0.433、0.372、0.583,P<0.05),与ΔSBP、ΔDBP呈负相关(rs值分别为-0.315、-0.448,P<0.05)。结论心血管自主神经功能与高血压并2型糖尿病患者血压节律密切相关。