反义寡核苷酸并超声微泡造影剂转染联合超声照射逆转肝癌多药耐药

目的探讨体内、体外mdr1、mrp、lrp反义寡核苷酸(AODNs)并超声微泡造影剂转染联合低强度超声照射逆转肝癌多药耐药的可行性,寻找逆转肿瘤多药耐药有效和靶向的方法。方法利用超声微泡造影剂包载肿瘤耐药基因mdr1、mrp、lrp的AODNs进行转染,联合低强度超声照射,以肝癌细胞多药耐药细胞模型(HepG2／ADM) 为研究对象,通过逆转录聚合酶链反应、western blot和四甲基偶氮唑盐法,从体外细胞培养及动物实验,研究 AODNs并超声微泡造影剂转染联合超声照射逆转癌细胞多药耐药及降低肿瘤恶性表型和成瘤能力的作用。结果 HepG2／AMD细胞增殖被抑制,其mdr1和mrp的mRNA、蛋白质表达水平明显降低;裸鼠皮下移植瘤生长受抑制。结论体外、体内AODNs并超声微泡造影剂转染联合低强度超声照射能有效逆转人肝癌细胞HepG2／ADM的多药耐药, 该技术可能为肝癌临床治疗提供新的思路。     

抗基因及反义寡脱氧核苷酸抑制N—ras表达及对肝癌细胞增殖的影响

目的 探讨抗基因及反义寡核苷酸对肝癌的潜在治疗作用。方法 合成了针对Ｎ－ｒａｓ转录，翻译起始区的１２ｍｅｒ硫代磷酸抗基因寡脱氧核苷酸（Ｓ－ＯＤＮａｎ），１９ｍｅｒ硫代磷酸反义寡脱氧核苷酸（Ｓ－ＯＤＮＡａｓ）采用ＥＬＩＳＡ，斑点杂交法分别检测寡脱氧核苷酸处理的肝癌ＢＥＬ７４０２细胞内ｐ２１，Ｎ－ｒａｓｍＲＮＡ水平，观察了ＢＥＬ７４０２肝癌细胞生长的影响。结果 处理细胞内Ｎ－ｒａｓｍＲＮＡ水平低于对照     

抗基因及反义寡脱氧核苷酸抑制N－ras表达及对肝癌细胞增殖的影响

探讨抗基因及反义寡核苷酸对肝癌的潜在治疗作用。方法合成了针对Ｎ－ｒａｓ转录、翻译起始区的１２ｍｅｒ硫代磷酸抗基因寡脱氧核苷酸（Ｓ－ＯＤＨａｎ）、１９ｍｅｒ硫代磷酸反义寡脱氧核苷酸（Ｓ－ＯＤＮＡａｓ）。采用ＥＬＩＳＡ、斑点杂交法分别检测了寡脱氧核苷酸处理的肝癌ＢＥＬ７４０２细胞内ｐ２１、Ｎ－ｒａｓｍＲＮＡ水平，观察了对ＢＥＬ７４０２肝癌细胞生长的影响。结果处理细胞内Ｎ－ｒａｓｍＲＮＡ水平低于对照组，以Ｓ－ＯＤＮａｎ组更明显。两者对ｐ２１合成的抑制率达８０％，６７．５％。两者的细胞生长抑制率达８８％、７７％，并呈剂量依赖性。两者处理的细胞３Ｈ－ＴｄＲ掺入降低为对照组的２１．８％、３０．５５％；ＡＦＰ水平明显低于对照组（Ｐ直＜０．００１）。结论Ｓ－ＯＤＮａｎ．Ｓ－ＤＤＮａｓ能有效抑制Ｎ－ｒａｓ表达及相关肝癌细胞增殖；也进一步说明Ｎ－ｒａｓ在肝癌发生中起作重要作用。     

多种反义寡脱氧核苷酸联合逆转人肝癌多药耐药性的实验研究

目的:探讨反义寡脱氧核苷酸(ASPODNS)对人肝癌多药耐药基因(MDR)的逆转作用。方法:ASPONs作用于肝癌MDR细胞模型后,用MTT法检测其逆转作用,用逆转录PCR和流式细胞术检测其对4种MDR基因表达的影响。结果:ASPODNs抑制MDR基因的表达存在时间-效应和剂量-效应关系,对单基因MDR细胞耐药性的逆转率为90.26％～100％,对多重MDR细胞耐药性逆转率为70.09％～100％。结论:多种ASPODNs联合逆转MDR具有可行性并能取得明显效果。     

反义寡脱氧核苷酸对耻垢分枝杆菌抑制作用的研究

目的研究反义寡脱氧核苷酸对耻垢分枝杆菌生长的抑制作用,探讨其潜在的抗结核作用。方法在7H9培养基中接种5×10^5耻垢分枝杆菌MC^2 155,同时加入20μmol／L针对结核分枝杆菌中必须基因RV3806c在耻垢分枝杆菌中的同源基因MSMEG_6401的反义寡脱氧核苷酸。以耻垢分枝杆菌MC^2 155单独培养作为对照。观察和绘制细菌生长曲线;测定细胞膜MSMEG_6401编码的磷酸核糖转移酶的生物活性;应用高压气相色谱测定耻垢分枝杆菌细胞壁中糖的含量。结果与对照组相比,试验组耻垢分枝杆菌增殖速度平均降低0.45 OD（P〈0.01）;CFU计数平均延缓0．67Log;在应用等量的膜蛋白的情况下,实验组磷酸核糖转移酶的生物活性降低约40％,试验组和对照组细菌反应细胞壁的糖含量的指标甘露糖-半乳糖,阿拉伯糖比率没有明显差异（2组实验组分别为63％和69．4％;2组对照组分别为66．6％和69．1％）。结论针对MSMEG_6401的反义寡脱氧核苷酸对耻垢分枝杆菌的增殖有一定程度的抑制作用,推测反义寡脱氧核苷酸技术有一定抗结核价值;结核分枝杆菌的RV3806c基因或者是其编码产物可能是一个好的抗结核药物作用靶位。     

重组腺病毒载体携带多药耐药基因1反义RNA靶向逆转肝癌细胞多药耐药

目的 探讨携带多药耐药基因1(multidrug resistance gene 1,mdr1)反义RNA的重组腺病毒载体靶向逆转甲胎蛋白阳性(AFP+)的肝癌多药耐药细胞HepG2R的疗效及作用机制.方法 分别构建携带AFP启动子和mdr1基因反义核苷酸片段的重组腺病毒载体Adeno-asmdr及携带AFP启动子和增强绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒载体Adeno-EGFP,将Adeno-EGFP转染人正常肝细胞L02(AFP-),人官颈癌细胞HeLa(AFP-)及HepG2(AFP+)细胞,检测增强绿色荧光蛋白基因在各细胞的转录水平;将Adeno-asmdr转染HepG2R细胞,Western blot检测不同时间P-gp170的表达,末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记法检测HepG2R细胞凋亡,流式细胞术检测HepG2R细胞在不同药物作用下细胞周期、凋亡率.结果 增强绿色荧光蛋白基因在AFP阳性的HepG2细胞可得到显著转录,而在L02细胞和HeLa细胞,其转录减少,显示了该载体的良好转录活性以及靶向特异性.Adeno-asmdr转染HepG2R细胞后,HepG2R细胞P-gp170表达明显减弱,HepG2R细胞凋亡增加,HepG2R细胞对多种化疗药物的耐受能力明显下降,细胞出现显著的周期阻滞,大量细胞被阻滞于S期和G0/M期,凋亡细胞比例增加.结论 实验构建的Adneo-asmdr重组腺病毒载体可在AFP阳性HepG2R细胞内特异靶向性表达目的 基因,并可有效降低mdrl基因产物P-gp170的表达,从而达到对HepG2R细胞多药耐药的逆转作用.     

生存素反义寡脱氧核苷酸对人胃癌细胞株凋亡的影响

背景：生存素（survivin）是凋亡抑制蛋白（IAP）基因家族成员之一，在多数肿瘤组织中高表达。目的：观察生存素反义寡脱氧核苷酸（ASODN）对人胃癌细胞株凋亡的影响。方法：将体外培养的人胃癌细胞株SGC-7901分为不同浓度生存素ASODN组、无关寡脱氧核苷酸（N-ODN）组和对照组。以四甲基偶氮唑蓝（MTT）试验检测生存素ASODN对SGC-7901细胞生长的影响；通过形态学观察、DNA电泳和流式细胞仪分析反映细胞凋亡情况；以端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附测定（TRAP-ELISA）方法检测端粒酶活性。结果：生存素ASODN能抑制SGC-7901细胞生长，诱导细胞凋亡，抑制端粒酶活性。凋亡细胞形态学上表现为细胞膜起泡、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成；DNA电泳呈现凋亡特征性阶梯状条带；流式细胞仪分析显示G1期前出现亚二倍体凋亡峰。结论：生存素ASODN能诱导人胃癌细胞株SGC-7901凋亡，抑制细胞生长及其端粒酶活性。     

辐射促进多药耐药反义寡脱氧核苷酸逆转人胰腺癌细胞耐药的实验观察

目的 探讨多药耐药基因( MDR1)反义寡核苷酸(ASON)在辐射的促进下体外逆转肿瘤细胞SW1990/FU的耐药效果.方法 采取MTT法比较MDR1的ASON直接转染与联合辐射转染的情况下SW1990/FU细胞对5-氟尿嘧啶(5-FU)的半数抑制量(IC50),再利用流式细胞仪检测两种不同的转染方法对SW1990/FU细胞的MDR1的表达产物P糖蛋白(P-gp)的调控情况.结果 MTT实验显示,联合辐射MDR1的ASON使SW1990/FU对5-FU的IC50从处理前的(129.41±8.12)nmol/L降至处理后的(3.43±0.64)nmol/L,而单纯ASON组的IC50仅降至(42.24±1.21)nmol/L,联合辐射组的逆转效果明显优于单纯ASON组 (P＜0.05).流式细胞的结果显示,辐射组SW1990/FU细胞MDR1-mRNA的P-gp 的阳性率均明显低于ASON组(P＜0.05).结论 辐射促转染的MDR1 ASON对胰腺癌细胞具有较强的耐药逆转作用.     

多药耐药基因反义寡核苷酸逆转肝癌细胞耐药的研究

目的 观察反义硫代磷酸酯寡核昔酸(AsODN)联合逆转耐药肝癌细胞多药耐药基因1(MDR1)和多药耐药相关蛋白基因(MRP)的作用。 方法 用人工合成互补于MDR1基因及MRP基因的反义20聚硫代磷酸寡核苷酸,以脂质体作载体,转染入耐阿霉素(ADM)肝癌细胞SMMC-7721/ADM,四甲基偶氮唑蓝法测定细胞对化学疗法药物的敏感性,流式细胞仪分析细胞相对荧光强度,激光扫描共聚焦显微镜测定细胞内Rhdaming123(Rh123)及柔红霉素(DNR)潴留以反映蛋白质p170和p190功能。 结果 ASODN/MDR1 MRP联合转染SMMC-7721/ADM细胞,能更大程度增加细胞对ADM(47.8倍)和DNR(21.6倍)的敏感性。ASODN/MDR1 MRP联合转染SMMC-7721/ADM细胞,与单独任一种ASODN转染相比,对p170或p190表达的抑制并不增加(q值分别为3.23、3.24,P>0.05)。 结论 针对MDR1 MRP的ASODN联合转染SMMC-7721/ADM细胞,能更大程度逆转肝癌细胞的耐药性。     

超声微泡包裹单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶自杀基因靶向治疗小鼠肝癌的效果

目的 观察超声微泡携单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶(HSV1-TK)基因在小鼠肝癌细胞H22移植瘤组织中的转染效果及联合更昔洛韦(GCV)后对肿瘤的抑瘤效应.方法 建立小鼠肝癌(H22)皮下移植瘤模型40只,随机分成4组,分别经鼠尾静脉注射入等量磷酸盐缓冲液(A组),HSV1-TK(B组)、HSV1-TK(C组)、HSV1-TK+微泡(D组),每次注射200μl,每隔3 d注射1次,共注射3次;对C组、D组小鼠分别给予1 MHz、2 W/cm~2、5 min超声辐照.首次注射HSV1TK 48 h后采用Western blot检测肿瘤组织中TK蛋白的表达情况,且各治疗组分别从腹腔注射GCV 0.2 ml(100 mg·kg~(-1)·d~(-1)),连续注射14 d.测肿瘤大小,计算抑瘤率,治疗结束后处死动物行病理学检查.数据采用重复测量资料的方差分析,两两比较采用LSD-t法.结果 在超声引导下微泡包裹的HSV1-TK基因可以准确定位于肿瘤组织并靶向释放,在处理组中均有TK蛋白的表达,其中D组表达量明显高于其他各组(P＜0.05).抑瘤率在A组、B组、C组、D组中分别为0、3.90%±1.80%、22.70%±2.86%、41.25%±3.20%(C组、D组与B组相比,P值均＜0.05;D组与C组相比,P＜0.05).HE染色结果显示D组较A组的坏死病变程度明显减轻.结论 超声辐照可破坏包裹HSV1-TK基冈的微泡以定位释放,既增加了肝癌基因治疗的靶向性,又提高了外源基因的转染效率,从而增强了自杀基因对小鼠肝癌的杀伤效果.     

临床痢疾志贺菌整合子检测及耐药基因盒序列分析

目的 检测印度东部1988、1995和2002年部分临床分离痢疾志贺菌中细菌耐药关系密切的1、2、3类整合酶基因及整合子携带的耐药基因盒的分布,分析整合子系统对志贺菌耐药的影响.方法 纸片扩散法检测实验菌株对药物的敏感性;应用PCR方法对16株临床耐药菌株进行1、2、3类整合酶基因(intI)筛选,对阳性样本可变区基因盒序列进行鉴定分析.结果 所有16株菌均耐4种及4种以上药物,包括β-内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、磺胺类、氯霉素类和喹诺酮类.13株菌检出1类整合酶基因,全部菌株含2类整合酶基因,即发现同时存在两种整合子结构菌株,未检测到3类整合酶基因.1类整合酶插入基因盒以blaara30-aadAl基因家族为主,分别对β-内酰胺类抗生素、链霉素、壮观霉素耐药;2类整合酶插人基因盒以dfrAl-satl组合为主,分别对甲氧苄氨嘧啶、链丝菌素耐药,同时在4株菌中发现dfrAl-satl-aadAl基因盒组合.结论 2类整合子普遍存在于临床志贺菌中.整合子与志贺菌的多重耐药具有密切相关性.     

上海地区结核分枝杆菌分离株对一线和二线抗结核药物的耐药性分析

目的 了解结核分枝杆菌分离株对一线和二线抗结核药物的耐药性。方法 收集2008年1月至2009年3月采用Bactec-MGIT 960检测的518株结核分枝杆菌,分析药物敏感试验结果。数据行x2检验。结果518株结核分枝杆菌菌株对一线和二线抗结核药物全敏感168株,占32.44％;耐药350株,占67.56％;单耐药72株,占13.90％;耐两种药24株,占4.63％;耐三种及以上药254株,占49.03％。217株为耐多药菌株,占所有病例的41.89％。65株为广泛耐药菌株,占所有病例的12.55％,占耐多药菌的29.95％。在一线药物中,耐异烟肼有278株,耐药率达53.67％;二线药物中,耐氧氟沙星有206株,耐药率达39.77％。433例复治患者任一药物耐药率、耐多药率和广泛耐药率分别为72.05％、46.42％和13.86％,均高于初治患者的44.70％、18.82％和5.88％（x2 =24.253,x2=22.229,x2=4.117,均P＜0.01）。结论 上海地区结核病专科医院结核分枝杆菌分离株的耐药率高,且耐多药与广泛耐药率也较高,在复治患者中耐药情况更严重。     

甲胎蛋白调节肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体2表达及其对Bel 7402细胞耐受该配体的影响

目的 研究甲胎蛋白(AFP)对肝癌细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)受体-2(DR5)表达及其在肝癌细胞耐受TRAIL中的作用.方法 用Western blot法分析全反式维甲酸(ATRA)处理人肝癌细胞株Bel 7402细胞24 h后DR5表达的变化;免疫共沉淀(Co-IP)技术研究AFP与维甲酸受体(RAR)-β相互作用;激光共聚焦显微镜观察AFP与RAR-β的细胞共定位; RNA干扰技术抑制Bel 7402细胞AFP表达,再用ATRA处理24h后检测细胞内DR5表达的变化;用pcDNA3.1质粒和人AFP基因连接构建表达AFP的载体(称为pcDNA3.1-afp),然后转染到不表达AFP的人肝癌细胞株HLE细胞;细胞生长状况用四甲基偶氮唑盐法检测.组间比较用f检验进行统计学分析.结果 Bel 7402和HLE细胞低表达DR5,ATRA(160μmol/L)处理24h后能促进肝癌细胞DR5表达; Co-IP技术研究显示AFP能与RAR-β结合;共聚焦显微镜观察发现AFP与RAR-β共定位于细胞质;干扰AFP表达后,Bel 7402细胞的DR5表达明显提高,抑制AFP表达后,ATRA能显著促进Bel 7402细胞内DR5的表达,并增加Bel 7402细胞对TRAIL的敏感性;转染pcDNA3.1-afp载体后,HLE细胞内的AFP能与RAR-β结合,并发现pcDNA3.1-afp载体能对抗TRAIL诱导HLE细胞凋亡.结论 Bel 7402细胞内表达的AFP具有抑制DR5表达的生物学功能;AFP可能通过抑制RAR-β入核调节DR5的表达;细胞内高表达的AFP是导致Bel 7402细胞耐受TRAIL诱导细胞凋亡的重要原因.     

磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶2过表达对大鼠肝癌细胞不同亚型蛋白激酶C表达及转位的影响

目的 探讨转染磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶2-（PEMT2）基因抑制大鼠肝癌CBRH-7919细胞增殖的机制。方法 采用免疫细胞化学和蛋白质印迹法观察Pemt2过表达对肝癌细咆不矧亚型蛋白激酶C-（PKC）表达及在细胞内转位的影响，同时采用高效薄板层忻技术对细胞内二脂酰甘油（DAG）的水平进行检测。结果 转染PEMT2使细胞cPKC-α表达降低，cPKC-β2表达增加，并由胞浆向质膜转位。同时细胞内DAG水平下降。转染PEMT2对其它PKC亚型的表达及细胞内转位无显著影响。结论 转染PEMT2对不同亚型PKC表达及细胞内转位的影响可能与其抑制细胞增殖、诱导凋亡的机制有关。     

载紫杉醇超声微泡造影剂对人肝癌HepG2细胞周期及形态的影响

目的 探讨超声辐照紫杉醇微泡造影剂,对人肝癌细胞株HepG2细胞周期的影响和形态学变化.方法 体外培养人肝癌HepG2细胞,将细胞分4组,即空白对照组,紫杉醇组,超声空白微泡组,超声载紫杉醇微泡组.流式细胞仪检测不同处理组细胞周期分布,透射电镜观察不同处理组形态学变化. 结果 超声载紫杉醇微泡组细胞阻滞在G2/M期;超声载紫杉醇微泡能够诱导肿瘤细胞发生凋亡,并有凋亡小体形成.结论 超声辐照载紫杉醇微泡造影剂对人肝癌细胞株HepG2有明显阻滞作用,并诱导肿瘤细胞发生凋亡.     

广西壮族自治区肺结核耐药性调查及复治患者耐药相关因素分析

目的 了解广西壮族自治区（简称“广西”）肺结核耐药现状,探讨影响复治患者耐药产生的因素。 方法2010年8月至2011年7月在广西开展结核病耐药性监测,对14个市采取整群分层抽样方法随机抽取30个结核病防治（简称“结防”）机构门诊为监测点,每个监测点纳入新发涂阳肺结核患者41例、复治涂阳肺结核患者22例。收集复治患者社会和既往临床诊疗信息。收集痰标本培养,培养阳性菌株采用比例法进行异烟肼、利福平、乙胺丁醇、链霉素、卡那霉素、氧氟沙星药敏试验。对硝基苯甲酸(PNB)培养法鉴定结核分枝杆菌复合群。对复治患者社会经济以及既往诊疗因素对耐药的影响进行单因素统计分析。 结果 监测收集到1545例结核分枝杆菌复合群阳性患者,总耐药率17.22%（266/1545）;其中新发涂阳患者耐药率为11.97%（142/1186）,复治涂阳患者耐药率为34.54%（124/359）,复治患者总耐药率高于新发患者（χ²=98.473,P=0.000）。耐多药率为6.28%(97/1545);其中新发涂阳患者耐多药率为2.45%（29/1186）,复治患者耐多药率为18.94%（68/359）,复治患者耐多药率高于新发患者（χ²=127.450,P=0.000）;广泛耐多药率为0.19%（3/1545）,全部为复治患者,复治患者广泛耐多药率0.84%（3/359）。复治患者耐药单因素分析表明,女性患者耐药率高于男性（OR=2.009,95%CI:1.145～3.523, χ²=6.062,P=0.014）;壮族患者耐药率高于汉族（OR=1.609,95%CI:1.024～2.529,χ²=4.289, P=0.038）;首次诊疗机构为综合医院的患者耐药率高于到结防机构或专科医院诊疗的患者（OR=1.967,95%CI:1.210～3.198,χ²=7.565, P=0.006）;既往治疗次数2次及以上的患者耐药率高于仅接受过1次治疗的患者（OR=4.128,95%CI:2.506～6.801,χ²=33.160, P=0.000）;非联合用药患者耐药率高于联合用药者（OR=3.419,95%CI:1.952～5.988,χ²=19.775, P=0.000）;低收入家庭患者耐多药率高于高收入患者（OR=4.777,95%CI: 1.117～20.435,χ²=5.336, P=0.021）。 结论 当前广西耐药肺结核疫情仍处于全国较低水平。女性、壮族、低收入、不到定点结防机构诊治、反复多次治疗、不联合用药等可能是导致复治患者耐药的危险因素。     

甲胎蛋白激活PI3K/AKT信号促使肝癌Bel 7402细胞抗全反式维甲酸诱导凋亡

目的 研究甲胎蛋白(AFP)对肝癌细胞内PI3K/AKT信号传递的影响,以及其在癌细胞耐受全反式维甲酸(ATRA)中的作用. 方法 四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测ATRA对人肝癌Bel 7402细胞增殖的影响;显微照相观察细胞形态学的改变;流式细胞分析细胞凋亡;激光共聚焦显微镜观察AFP与PTEN的共定位;免疫共沉淀(Co-IP)技术研究AFP与PTEN相互作用;Westemblot法分析磷酸化的蛋白激酶B(pAKT)和Src表达,构建干扰AFP表达的载体(AFP-siRNA)并转染Bel 7402细胞;用PI3K特异性阻断剂Ly294002处理细胞,分析Ly294002的作用效果.通过t检验分析组间的统计学差异. 结果 MTT分析显示,人肝癌Bel 7402耐受ATRA的细胞毒性;共聚焦显微镜观察显示AFP与PTEN共定位于细胞质;Co-IP技术研究发现AFP能与PTEN结合;MTT分析发现,Bel 7402细胞转染AFP-siRNA载体后24 h后,细胞生长显著受抑制,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),而且AFP-siRNA载体和ATRA共同处理组,细胞生长受到抑制更为显著,与对照组、单独处理组比较,差异均有统计学意义(P＜ 0.01);干扰AFP表达能显著增加Bel 7402细胞对ATRA敏感性,并能抑制pAKT和Src的表达;Ly294002能抑制AFP促进Bel 7402细胞表达pAKT和Src的作用.结论 肝癌细胞内表达的AFP能与PTEN结合并抑制PTEN对AKT的去磷酸化作用,肝癌细胞内高表达的AFP能激活PI3K/AKT信息通路对抗ATRA诱导的凋亡.     

苦参碱、氟尿嘧啶与顺铂对HepG2细胞表达增殖诱导配体的影响

增殖诱导配体(a proliferation-inducing ligand,APRIL),是最近发现的肿瘤坏死因子超家族新成员 [1],在许多肿瘤细胞及组织旱高效表达,表达程度与肿瘤的增殖能力密切相关.     

干扰素联合利巴韦林治疗对Huh7细胞微RNA122表达的影响

目的 探讨IFNβ联合利巴韦林(RBV)治疗对肝癌细胞株Huh7的微RNA122表达的影响.方法 Huh7细胞分别经过单用不同剂量RBV处理3 d、单用不同剂量IFNβ处理4 h,以及IFNβ联合RBV处理后,采用噻唑蓝(MTT)法检测其生长曲线,RT-PCR法检测IFN诱导基因54(ISG54)的表达,然后分别以小核核糖核酸6(U6)和单位细胞数为内参照,茎环结构实时PCR检测微RNA122表达变化.数据比较采用单因素方差分析,两两比较采用q检验.结果 MTT结果显示,RBV能以剂量依赖方式抑制Huh7细胞增殖,而IFNβ仅能轻微地且不能以剂量依赖方式抑制Huh7细胞增殖.RT-PCR结果显示,IFNβ能以剂量依赖方式诱导Huh7细胞ISG54 mRNA表达,而RBV单用和联合IFNβ均不能以剂量依赖方式诱导ISG54 mRNA表达.以U6为内参照,在RBV终浓度为3.125 mg/L时,联合lFN8 100 U/mL和1000 U/mL,微RNA122相对表达量分别为0.770±0.082和0.720±0.045,与单用IFNβ组相比,差异有统计学意义(q=4.623,q=5.112;均P<0.05).提示存在协同效果,而在RBV终浓度为6.25 mg/L和12.5 mg/L时无协同效果.以细胞数为内参照,RBV单用和联合IFNβ均能下调细胞微RNA122表达,以RBV终浓度为3.125 mg/L明显,联合IFNβ 10 U/mL、100 U/mL和1000 U/mL时,微RNA122相对表达量分别为0.680±0.055、0.560±0.084和0.610±0.030,与单用IFNβ组相比,差异有统计学意义(F=4.121,P<0.05),亦提示存在协同效果.结论 RBV在终浓度为3.125 mg/L时,能协同IFNβ下调Huh7细胞微RNA122表达,这可能为临床上RBV提高IFN抗HCV疗效的一个新的分子机制.