18β-GA对人高转移卵巢癌HO-8910PM细胞增殖、黏附和侵袭能力的影响

目的观察18β-甘草次酸（18β-GA）对人高转移卵巢癌HO-8910PM细胞增殖、黏附和侵袭能力及黏附斑激酶（FAK）、基质金属蛋白酶（MMP）-9表达的影响。方法将18β-GA作用于HO-8910PM细胞,采用MTT法检测HO-8910PM细胞增殖抑制率;细胞黏附试验检测细胞黏附能力;Transwell chamber法检测细胞侵袭能力;Westernblot法检测细胞FAK、MMP-9蛋白表达水平。结果 18β-GA明显抑制高转移卵巢癌细胞HO-8910PM的生长增殖、黏附和侵袭能力;Western blot法检测表明药物能下调FAK、MMP-9蛋白的表达。结论 18β-GA可抑制HO-8910PM细胞黏附、侵袭,其机制可能是通过下调FAK、MMP-9蛋白表达而进行的。     

人卵巢癌细胞HABP1的表达及其与侵袭转移能力的相关性

目的探讨透明质酸结合蛋白1（HABP1）在卵巢癌侵袭转移过程中的作用。方法分别用荧光实时定量RT—PCR和Western blot法检测HABP1 mRNA和HABP1蛋白在人卵巢癌细胞株HO-8910及高转移HO-8910PM细胞株中的表达,采用体外侵袭实验测定细胞侵袭能力。结果HO-8910PM中HABP1 mRNA和蛋白的表达水平均高于HO-8910,HO-8910PM的侵袭转移能力高于HO-8910。结论HABP1的高表达可能在人卵巢癌细胞的侵袭转移过程中发挥一定作用。     

青蒿琥脂对人卵巢癌细胞株HO8910增殖的影响及机制探讨

目的观察青蒿琥酯(Art)对人卵巢癌细胞株HO8910增殖的影响,并探讨其机制。方法采用MTT法观察不同浓度(5、10、20、40、80μmol/L)Art对HO8910细胞增殖的影响,通过流式细胞仪观察20μmol/LArt对HO8910细胞周期的影响,采用Western blot法检测不同浓度(5、10、20、40、80μmol/L)Art对HO8910细胞Bcl-2、Bax表达的影响。结果随着Art浓度增加及作用时间的延长,H08910细胞增殖抑制率明显升高(P均<0.05),呈一定的时间、剂量依赖性。20μmol/LArt作用HO8910细胞24、36 h后,G_0/G_1期细胞所占比例显著增加(P<0.01);作用36、48 h,Sub G_1细胞所占比例显著增加(P<0.01)。经过不同浓度Art处理48 h后,Bcl-2表达水平显著降低(P<0.01),Bax表达水平升高(P<0.01),并呈一定剂量相关性。结论 Art对卵巢癌HO8910细胞的增殖有抑制作用,该作用可能与其下调Bcl-2及上调Bax蛋白表达有关。     

槲皮素对卵巢癌细胞HO-8910增殖的抑制作用及机制

目的观察槲皮素体外对卵巢癌HO-8910细胞增殖的抑制作用,并探讨其机制。方法将体外培养卵巢癌HO-8910细胞用0、10、20、40、80、160μmol／L的槲皮素处理。用MTF法测定细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期分布及细胞凋亡率,细胞免疫化学染色法检测细胞内Fas及HSP70的表达,分光光度计法检测细胞内Caspase-3和Csapase-8的活性。结果浓度10～160μmol／L的槲皮素均能抑制人卵巢癌HO-8910细胞的增殖,并有明显的时间和剂量依赖性（P〈0．05）。不同浓度的槲皮素作用48h后各组细胞凋亡率随槲皮素浓度增高,HSP70表达下调,FAS表达增强,Caspase-3、8活性上调,均呈剂量依赖性（P均〈0．05）。结论槲皮素能抑制卵巢癌细胞的增殖。其机制可能与槲皮素通过提高细胞内Fas的表达,降低HSP70的表达及诱导Caspase-3、8的活化及诱导卵巢癌细胞凋亡有关。     

大黄素对卵巢癌HO-8910PM细胞中PRL-3和NAG-1表达的影响

目的 研究大黄素对人高转移卵巢癌HO-8910PM细胞中促肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)和非类固醇抗炎药物激活基因(NAG-1)表达的影响.方法 采用Western blot法检测大黄素对HO-8910PM细胞中PRL-3和NAG-1蛋白表达的影响,荧光定量实时PCR分析大黄素对HO-8910PM细胞中PRL-3和NAG-1 mRNA表达的影响.结果 大黄素能明显下调HO-8910PM细胞中PRL-3的表达,强烈上调NAG-1表达.结论 大黄素影响高转移卵巢癌细胞转移能力可能与PRL-3和NAG-1表达有关.     

三氧化二砷对肝癌细胞侵袭转移的影响及机制

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)抗肝癌侵袭转移的机制.方法 体外培养人肝癌细胞株SMMC-7721,将0、1.0、2.0 μmol/L浓度的As2O3作用于SMMC-7721细胞,采用过河实验检测肿瘤细胞体外运动;MTT法观察细胞黏附能力;Transwell体外侵袭转移模型检测细胞迁徙、侵袭能力;并用PCR法检测乙酰肝素酶(HPA)mRNA表达.结果 0、1.0、2.0 μmol/L As2O3作用SMMC-7721细胞后,表现为过河时间延长,细胞黏附抑制率明显上升,过膜细胞数减少(P＜0.01),HPA基因表达量降低(P均＜0.01);且呈剂量依赖性.结论 As2O3可明显抑制人肝癌细胞SMMC-7721细胞黏附、迁徙和侵袭能力,下调HPA mRNA表达,此可能为其抗肿瘤侵袭转移作用的机制之一.     

TRPV6对人卵巢癌细胞株HO-8910PM迁移的影响

目的探讨TRPV6对卵巢癌细胞株HO-8910PM迁移能力的影响。方法细胞株分别瞬时转染TRPV6的特异性siRNA干扰序列,然后分别通过RT-PCR和Western-blot检测HO-8910PM细胞干扰前后TRPV6基因和蛋白表达变化,通过划痕试验和Transwell小室试验检测TRPV6对HO-8910PM细胞迁移的影响。结果 RT-PCR和Western-blot证实了TRPV6在人卵巢癌高转移细胞株HO-8910PM中的表达以及TRPV6 RNA干扰序列的干扰效率;划痕试验和Transwell小室试验表明,与HO-8910PM阴性干扰对照细胞相比,HO-8910PM-TRPV6-siRNA1和siR-NA2的迁移能力均显著下降(P<0.01)。结论卵巢癌细胞HO-8910PM中TRPV6的表达水平高低与该细胞迁移能力高低呈正相关,TRPV6有可能成为卵巢癌转移预防和治疗的新靶点。     

靶向融合肽MAP2K6-FP联合紫杉醇干预的卵巢癌细胞增殖、侵袭、迁移能力变化及其机制

目的 观察靶向融合肽MAP2K6-FP联合紫杉醇对卵巢癌细胞HO8910增殖、侵袭、迁移的影响,并探讨其相关机制.方法 以不同浓度MAP2K6-FP(0、0.3、0.6、1.0μg/mL)和紫杉醇(0、5、10、15、20、25μmol/L)分别作用HO8910细胞,CCK-8法测算细胞增殖率,筛选用于侵袭、迁移实验的...     

穿心莲内酯对IL-6诱导的非小细胞肺癌细胞侵袭转移的影响及机制

目的探讨穿心莲内酯(AD)对白细胞介素(IL)-6诱导的非小细胞肺癌细胞侵袭转移的影响及机制。方法采用MTT法检测不同浓度AD和IL-6对人肺腺癌A549细胞增殖活性的影响;Transwell小室实验检测AD对IL-6诱导的A549细胞侵袭的影响;Western印迹检测A549细胞中转移相关蛋白基质金属蛋白酶(MMP)-9、上皮间质转化(EMT)相关蛋白E-钙黏附蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及核因子(NF)-κB信号通路相关蛋白磷酸化NF-κB抑制蛋白(p-IκBα)、IκBα的表达。结果 0.5μmol/L、1.0μmol/L和3.0μmol/L低浓度AD和20μg/L、50μg/L和100μg/L IL-6对A549细胞的增殖的无明显影响。给予20μg/L浓度的IL-6处理后,A549细胞的侵袭能力明显增强,A549细胞中MMP-9、Vimentin、p-IκBα蛋白表达升高,而E-cadherin和IκBα蛋白表达降低;而给予0.5μmol/L、1μmol/L和3μmol/L AD处理后,IL-6对A549细胞的上述作用明显减弱,且呈现一定的浓度依赖性。结论 AD可抑制IL-6诱导的非小细胞肺癌细胞侵袭转移,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路的活化有关。     

HABP1在人卵巢癌细胞中的表达及其对紫杉醇敏感性的影响

目的探讨透明质酸结合蛋白1（HABP1）在5种人卵巢癌细胞系中的表达及其对紫杉醇敏感性的影响。方法采用荧光定量RT-PCR法检测各细胞系中HABP1 mRNA的表达量,激光共聚焦显微镜观察HABP1蛋白的表达及定位,MTT法检测各细胞系对紫杉醇的敏感性。结果 HABP1 mRNA在人卵巢癌细胞系SKOV3、OVCA429和HO-8910PM中的表达水平分别是OVCA420的3.7、2.8和2.1倍（P均〈0.05）,HO-8910LM和OVCA420中HABP1 mRNA表达量差异无统计学意义（P均〉0.05）,HABP1蛋白在五种卵巢癌细胞系中的胞质中均有表达,在SKOV3、OVCA429和HO-8910PM细胞中可见到明显的核周聚集,在HO-8910LM和OVCA420中其核周聚集量明显减少,SKOV3、OVCA429、OVCA420、HO-8910PM和HO-8910LM细胞对紫杉醇的中效浓度分别为0.047、0.221、0.7230、.092、0.672μM,相关分析显示HABP1 mRNA表达水平与卵巢癌细胞对紫杉醇的中效浓度之间的相关系数为-0.888,P〈0.05。结论 HABP1高表达能增加人卵巢癌细胞对紫杉醇的敏感性,HABP1可作为筛选卵巢癌化疗药物的新指标。     

阿托伐他汀对人胆管癌QBC939细胞系侵袭的影响

目的探讨阿托伐他汀(ATV)对人胆管癌QBC939细胞系侵袭的影响及其可能作用机制。方法应用细胞培养技术培养人胆管癌QBC939细胞,经不同浓度的ATV处理后,以Matrigel侵袭实验和半定量RT-PCR检测ATV对QBC939细胞内Rho C mRNA表达的影响情况。结果 Matrigel侵袭实验显示,经10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L干预48 h后的QBC939细胞,随着浓度的增加,其体外侵袭能力明显减弱(P0.01);半定量RT-PCR测定显示,ATV作用48 h后,QBC939细胞中Rho C的表达改变并不明显。结论 ATV可减弱人胆管癌QBC939细胞体外侵袭能力。     

三氧化二砷联合白藜芦醇对肺癌细胞侵袭、迁移的影响及机制

目的探索三氧化二砷(As_2O_3)联合白藜芦醇对肺癌细胞A549侵袭、迁移的影响及可能作用机制。方法采用不同浓度白藜芦醇(15、30、60、120μmol/L)作用于体外培养的A549细胞中,四甲基偶氮唑盐(MTT)实验检测细胞增殖。60μmol/L白藜芦醇和10μmol/L As_2O_3单独或联合处理细胞,实验分为对照组、As_2O_310μmol/L组、白藜芦醇60μmol/L组、As_2O_3+白藜芦醇组;细胞划痕实验和Transwell小室法检测细胞的迁移、侵袭,采用免疫印迹法(Western blot)检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、波形蛋白(Vimentin)、钙黏蛋白E(E-cadherin)水平。结果不同浓度白藜芦醇(15、30、60、120μmol/L)显著抑制细胞的增殖(P0.05),且具有浓度依赖性,白藜芦醇的半数抑制浓度(IC50)为58.367μmol/L。与对照组相比,60μmol/L白藜芦醇和10μmol/L As_2O_3单独使用均可显著抑制细胞的迁移、侵袭能力(P0.05),显著下调MMP-2、MMP-9、Vimentin蛋白水平(P0.05),上调E-cadherin蛋白水平(P0.05),联合使用的效果高于单独使用。结论 As_2O_3和白藜芦醇联合使用可增加二者抑制肺癌细胞侵袭、迁移的能力,可能与调控细胞中MMPs水平、抑制细胞基质的降解和上皮间充质转化过程有关。     

紫檀芪对人乳腺癌MDA-MB-231细胞系增殖及凋亡的影响

目的探讨紫檀芪(PTE)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞系增殖及凋亡的影响。方法细胞分为正常对照组、PTE组(10、20、40、80μmol/L),各组细胞分别处理24、48、72 h。MTT法检测各组细胞存活率;黏附实验测定各组细胞黏附率;TUNEL法测定各组细胞凋亡率;Caspase-Glo3/7定量试剂盒测定细胞Caspase3/7的表达情况。结果MTT结果显示PTE对MDA-MB-231细胞增殖有抑制作用(P<0.01),呈药物浓度时间依赖效应,其中80μmol/L处理72 h组抑制效果最明显。黏附实验(48 h)结果显示PTE可以减弱MDA-MB-231细胞黏附能力(P<0.01),并呈浓度依赖效应。TUNEL检测(48 h)结果显示PTE可以增加MDA-MB-231细胞的凋亡率(P<0.01)。Caspase3/7检测结果显示PTE可以使Caspase3/7活性升高(P<0.01)。结论 PTE可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,促进其凋亡。     

维生素K2调控Wnt/β-catenin信号对肝癌细胞侵袭、凋亡的影响及机制研究

目的探讨维生素K2调控Wnt/β-catenin信号对肝癌细胞侵袭、凋亡的影响及机制。方法 5、10、20、40、80μmol/L的维生素K2处理人肝癌SMMC-7721细胞24、48、72 h后,CCK8实验检测细胞的增殖情况;22μmol/L的维生素K2处理细胞48 h后,Transwell小室检测细胞的侵袭能力;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blotting检测MMP-2、MMP-9、Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达。结果 10、20、40、80μmol/L的维生素K2处理肝癌细胞不同时间均可显著抑制癌细胞的增殖,具有浓度依赖性和时间依赖性(P0.01)。根据IC50值选择22μmol/L的维生素K2为研究对象,维生素K2组细胞的凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达均显著高于对照组,细胞侵袭数及MMP-2、MMP-9、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达均显著低于对照组(P0.01)。结论维生素K2可通过下调Wnt/β-catenin信号抑制肝癌细胞的增殖及侵袭能力,诱导细胞凋亡。     

卡维地洛抑制血小板衍生因子BB诱导的人肝星状细胞活化和纤维化的作用机制

目的 研究卡维地洛对人肝星状细胞迁移、侵袭及纤维化作用的影响,并进一步探讨其信号通路机制。方法 人肝星状细胞系(LX-2)加入不同浓度(0、1、2、5、10μmol/L)的卡维地洛处理一定时间后,加入血小板衍生因子(PDGF)BB刺激细胞使其激活,分别采用CCK-8检测细胞增殖水平、划痕实验检测细胞迁移能力、Transwell小室进行侵袭能力检测、Real-time PCR和Western Blot检测纤维化相关指标及通路相关蛋白的表达水平。包括空白对照组、PDGF-BB组(只加入PDGF-BB)和4个不同卡维地洛浓度的混合组(1μmol/L组、2μmol/L组、5μmol/L组、10μmol/L组,且均加入了PDGF-BB)。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较采用Dunnett-t检验。结果 卡维地洛可抑制LX-2増殖且呈浓度依赖性,半抑制浓度为28.42μmol/L;和PDGF-BB组比较,10μmol/L组可明显抑制LX-2的迁移能力[(59.780±8.898)%vs(17.270±2.668)%,t=4.576,P=0.010];PDGF-BB可诱导LX-2侵袭能力增加,卡维地洛处理后的LX-2侵袭能力随浓度增加逐渐减弱,2μmol/L组、5μmol/L组和10μmol/L组LX-2侵袭度自(157.00±10.52)%分别降低至(85.15±13.50)%(t=4.198,P=0.014)、(55.67±9.54)%(t=7.133,P0.01)和(45.37±10.70)%(t=7.438,P0.01);5μmol/L组和10μmol/L组Ⅰ型胶原mRNA表达自(1.068±0.128)降低至(0.453±0.085)(t=3.997,P0.05)和(0.151±0.019)(t=7.091,P0.01);1μmol/L组、2μmol/L组、5μmol/L组和10μmol/L组纤连蛋白mRNA表达自(1.285±0.042)降低至(0.879±0.063)(t=5.345,P0.01)、(0.768±0.010)(t=4.773,P0.01)、(0.742±0.117)(t=4.385,P=0.012)和(0.591±0.049)(t=10.76,P0.01);5μmol/L组和10μmol/L组纤连蛋白表达自(2.103±0.414)降低至(0.739±0.132)(t=3.137,P=0.035)和(0.600±0.114)(t=3.499,P=0.025),分别使α-平滑肌肌动蛋白表达自(1.418±0.241)降低至(0.543±0.215)(t=2.710,P=0.035)和(0.343±0.118)(t=4.005,P0.01);2μmol/L组、5μmol/L组和10μmol/L组Y751磷酸化自(2.309±0.181)降低至(1.278±0.304)(t=2.912,P=0.044)、(0.555±0.038)(t=9.476,P0.01)和(0.175±0.039)(t=11.51,P0.01);5μmol/L和10μmol/L分别使Akt磷酸化自(1.106±0.185)降低至(0.335±0.132)(t=3.386,P=0.015)和(0.137±0.110)(t=4.494,P0.01)。结论 卡维地洛可抑制LX-2的增殖以及PDGF-BB诱导的迁移、侵袭和纤维化作用,其机制主要是通过阻断PDGF-BB/PDGFRβ/Akt通路发挥作用的。     

三氧化二砷对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及其分子机制.方法 利用MTS/PMS法检测As2O3对SMMC-7721细胞增殖的影响;划痕愈合和侵袭实验检测As2O3对SMMC-7721细胞迁移与侵袭能力的影响;实时定量PCR、Western印迹检测As2O3作用SMMC-7721细胞后MMP-9的表达.结果 2.0 μmol/L的As2O3对肿瘤细胞增殖有抑制作用;划痕实验结果显示,2.0μmol/LAs2O3处理SMMC-7721细胞12和24 h后,较未处理组划痕距离明显增加(P＜0.05),表明As2O3可抑制SMMC-7721细胞迁移.Transwell实验结果显示,2.0μmol/LAs2O3处理SMMC-7721细胞12h和24 h后,穿膜细胞数较未处理组明显减少(P＜0.05),表明As2O3可抑制SMMC-7721细胞侵袭能力.实时定量PCR和Western印迹结果显示,以2.0μmol/L As2O3处理SMMC-7721细胞后,MMP-9 mRNA和蛋白表达均明显下调(P＜0.05).结论 As2O3可通过抑制肿瘤细胞增殖、迁移及侵袭,抑制肿瘤的转移.     

阿托伐他汀对同型半胱氨酸所诱导内皮祖细胞功能损伤的保护作用

目的:探讨同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)诱导小鼠骨髓内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)功能损伤的氧化应激机制及阿托伐他汀的拮抗作用。方法:密度梯度离心法获取小鼠骨髓单个核细胞,培养7 d后收集贴壁细胞,FITC-UEA-1荧光染色鉴定EPCs。EPCs与不同浓度Hcy(0μmol/L,50μmol/L,500μmol/L)共孵育24 h或分别经不同浓度的阿托伐他汀(0.1μmol/L,1μmol/L,10μmol/L)预孵育0.5 h后,再加入500μmol/LHcy共孵育24 h。用MTT比色法,改良Boyden小室、黏附能力测定和体外血管生成试剂盒,分别观察EPCs的增殖能力、迁移能力、黏附能力和体外血管生成能力。荧光探针H2DCF-DA法检测细胞内活性氧水平,光泽精化学发光法检测NADPH氧化酶活性,硝酸还原酶法测定细胞培养液中一氧化氮(NO)含量,RT-PCR法测定eNOS基因表达。结果:Hcy诱导EPCs增殖、迁移、黏附和体外血管生成功能下降,活性氧的产生及NADPH氧化酶的活性增加,eNOS基因表达及细胞培养液中NO含量减少,与无Hcy处理组相比有明显差异(P0.05或P0.01)。与500μmol/L Hcy组相比,阿托伐他汀预处理可呈剂量依赖性地拮抗Hcy诱导的上述改变(P0.05或P0.01)。结论:Hcy可能通过激活NADPH氧化酶,诱导EPCs活性氧的产生及降低eNOS基因表达和NO水平,导致EPCs增殖、迁移、黏附和体外血管生成功能下降。阿托伐他汀部分拮抗Hcy的作用。     

HPI-4对胃癌细胞生长的抑制作用及其机制

目的探讨Hedgehog信号通路抑制剂HPI-4对胃癌细胞生长的抑制作用及其可能的作用机制。方法不同浓度(0、20、40和80μmol/L)的HPI-4处理BGC-823细胞后,采用MTT法检测细胞增殖情况,Transwell小室法检查细胞的侵袭能力,流式细胞仪检测细胞的凋亡,Western blotting检测细胞中GLI1、Cyclin D1和Bcl-2蛋白相对表达情况。结果不同浓度的HPI-4处理BGC-823细胞24、48和72 h后,细胞的增殖均受到抑制,且呈时间-剂量关系(P0.05);与对照组(0μmol/L)相比,20、40和80μmol/L HPI-4处理过的BGC-823细胞的侵袭细胞数、GLI1、Cyclin D1和Bcl-2蛋白相对表达均显著降低,且呈浓度依赖性(P0.05);与对照组相比,20、40和80μmol/L HPI-4处理BGC-823细胞的凋亡率均显著升高,且呈浓度依赖性(P0.05)。结论 HPI-4可抑制BGC-823增殖和侵袭,诱导细胞凋亡,其作用机制可能与GLI1、Cyclin D1和Bcl-2蛋白的表达有关。     

二氢青蒿素体外抑制胃癌细胞的黏附、迁移和侵袭

目的 探讨二氢青蒿素(DHA)对人胃癌SGC7901细胞体外黏附、迁移和侵袭的影响及其可能机制.方法 1.25、2.5、5、10、20 μmoL/LDHA作用体外培养的人胃癌SGC7901细胞24 h后,MTT法检测细胞活力;1.25、2.5、5 μmol/L DHA作用人胃癌SGC7901细胞24 h后,细胞黏附分析检测细胞黏附率;细胞划痕实验观察其对细胞迁移能力的影响;Transwell小室侵袭实验观察其对细胞侵袭能力的影响;RT-PCR和Western印迹分别检测ICAM-1、MMP-2、MMP-9、TIMP-2 mRNA和蛋白的表达水平.结果 与对照组相比,1.25、2.5、5μmoL/L DHA对SGC7901细胞增殖没有影响,但显著抑制SGC7901细胞黏附、迁移和侵袭能力,且抑制作用具有剂量依赖性.RT-PCR和Western印迹结果显示,与对照组相比,5 μmol/L DHA作用人胃癌SGC7901细胞24 h,细胞内ICAM-1、MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白表达显著降低(P＜0.05),TIMP-2 mRNA和蛋白表达显著增加(P＜0.05).结论 DHA可体外抑制胃癌SGC7901细胞的黏附、迁移和侵袭能力,其机制可能与上调TIMP-2的表达,下调ICAM-1、MMP-2、MMP-9的表达有关.