清肠汤对溃疡性结肠炎大鼠肠道菌群和肠组织Toll样受体4及核因子-κB激活的影响

[目的]观察中药清肠汤对溃疡性结肠炎（UC）大鼠粪便常见需氧菌群和肠组织Toll样受体4（TLR4）、核因子-κB（NF-κB）p65激活的影响,探讨清肠汤治疗大鼠实验性UC可能的作用机制。[方法]采用硫酸葡聚糖钠加乙酸复合方法制作UC大鼠模型,分别给予柳氮磺胺嘧啶（SASP）和中药清肠汤治疗,通过肠道菌群培养分析观察治疗后大鼠肠道菌群变化,并通过免疫组化方法观察肠组织中TLR4与NF-κB p65的表达,对肠道菌群中大肠埃希菌的特征变化与肠组织TLR4、NF-κB p65的表达进行相关回归分析。[结果]造模后大鼠肠道菌群发生了变化,各中药治疗组治疗结束后大鼠肠道内大肠埃希菌数量明显减少（P〈0.05）,各治疗组治疗结束后大鼠肠组织中TLR4与NF-κB p65的阳性细胞数明显减少（P〈0.05）,大鼠肠组织中的TLR4和NF-κB阳性细胞数存在线性回归关系（P〈0.01）,TLR4、NF-κB阳性细胞数与粪便中大肠埃希菌的含量存在相关性（均P〈0.01）。[结论]清肠汤对UC模型大鼠肠道菌群有调节作用,并可由此抑制肠组织TLR4、NF-κB p65的激活,这可能是清肠汤治疗大鼠实验性UC的机制之一。     

识别易损斑块的新方法——光学相干断层成像技术

易损斑块（vulnerable plaque）指易导致血栓形成或能快速发展为相关病变的所有斑块。冠状动脉造影发现，急性冠脉综合征（ACS）患者有相当一部分冠状动脉并没有明显狭窄，事件的发生是由于斑块破裂、继之血小板聚集、血栓形成导致的。易损斑块是ACS的发病机制已成为共识，因此识别易损斑块，及时采取干预措施对预防不良心脏事件发生尤为重要。易损斑块的检测有多种方法，可检测的血清标志物有高敏C-反应蛋白（hsCRP）、可溶性黏附分子和核转录因子-κB（NF-κB）等，影象学方法有血管内超声（IVUS）、磁共振（MRI），冠脉内导丝温度测定等。光学相干断层成像技术（optical coherence tomography，OCT）采用红外线来显示生物组织中的表层下结构，分辨率高，近年来发展迅速，应用领域逐渐拓展。本文将对这一技术在易损斑块鉴别中的应用作一综述。     

TLR4,N F-кB与急性胰腺炎

急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)是一种常见的急重症,经研究证实多种细胞因子的活化与AP的发生进展关系密切.而Toll样受体4(Toll- like receptor 4,TLR4)、核因子-κB(nuclear factorkappa B,NF-κB)与这些细胞因子的活化密切相关.他们在AP发生发展中作为介导炎症反应的枢纽起着重要作用.以往认为TLR4触发细胞内信号传导通路,从而激活NF-κB,调控大量细胞因子释放,介导炎性反应.目前对TLR4/NF-κB信号通路具体的传导路径及参与因子又有了新的认识,本文概述了TLR4/ NF-κB信号通路,且概述了TLR4/NF-κB信号通路相关下调因子、增强因子,及能激活NF-κB的其他因子.     

Toll样受体4和核因子-κB信号通路在溶血磷脂酸致动脉粥样硬化中的作用

目的探讨Toll样受体4(TLR4)/NF-κB信号通路在溶血磷脂酸(LPA)致动脉粥样硬化中的作用。方法以不同浓度LPA(0¹0μmol/L)刺激人单核细胞株THP-1细胞4h,以及LPA 1μmol/L处理THP-1细胞不同时间(010μmol/L)刺激人单核细胞株THP-1细胞4h,以及LPA 1μmol/L处理THP-1细胞不同时间(0⁸h),荧光定量RT-PCR法测定TLR4mRNA表达,Western blot检测TLR4蛋白、细胞核NF-κB p65表达变化,ELISA法测定细胞因子TNF-α,随后在LPA 1μmol/L条件下,TLR4单抗干预THP-1细胞,观察其对LPA诱导的细胞核NF-κB p65表达及TNF-α分泌水平的影响。结果当LPA 1μmol/L时,TLR4mRNA和蛋白及细胞核NF-κB p65表达较0μmol/L、0.1μmol/L、0.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L LPA明显增高,差异有统计学意义(P<0.01)。LPA 1μmol/L处理THP-1细胞4h时,THP-1细胞TLR4mRNA和蛋白及细胞核NF-κB p65表达水平明显高于0、1、2、8h(P<0.01)。与TLR4单抗干预前比较,TLR4干预后LPA诱导的THP-1细胞NF-κB p65表达及TNF-α分泌水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 LPA可显著上调THP-1细胞TLR4表达及促进NF-κB的活化,LPA致动脉粥样硬化作用可能部分是由TLR4/NF-κB信号途径介导的。     

TLR4/NF-κB与急性冠脉综合征的相关性及通心络的干预作用

目的检测不同类型冠心病患者炎性因子的变化及通心络的稳定斑块作用。方法选择冠心病患者66例,正常对照组24例,比较各组间Toll样受体(TLR)4、核因子(NF)-κB及肿瘤坏死因子(TNF)-α变化。将急性冠状动脉综合征(ACS)患者分为常规治疗组和通心络治疗组,治疗4 w后再次检测上述指标。结果 ACS患者TLR4、NF-κB、TNF-α的表达较稳定性心绞痛组和正常对照组显著增高(P0.01)。治疗后两组TLR4、NF-κB和TNF-α水平均降低(P0.05)。且通心络治疗组TLR4、NF-κB和TNF-α水平降低更显著(P0.05)。结论通心络可减轻动脉的炎症反应,干预动脉粥样斑块的进展,有望成为新的稳定斑块药物。     

TLR2/4-IRF3信号通路调控胆固醇逆转运及其对动脉粥样硬化影响的研究进展

Toll样受体（toll like receptors,TLRs）是天然免疫系统识别病原微生物的主要受体,在天然免疫反应中具有重要的作用,TLR2／4-IRF3信号通路对胆固醇逆转运的调控能对动脉粥样硬化易损斑块产生影响。本文就TLR2／4-IRF3信号通路如何调控胆固醇逆转运从而影响动脉粥样硬化的发生发展作一综述。     

急性冠状动脉综合征患者Toll样受体4的变化及通心络的干预作用

目的:探讨炎性因子在冠心病中的表达,观察通心络对粥样斑块干预作用。方法:选择急性冠状动脉综合征(ACS组)患者44例,稳定型心绞痛(SAP)患者20例,正常对照组24例,比较各组间ToLL样受体4(TLR4)、核因子-κB(NF-κB)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)变化。将ACS组患者分为通心络亚组和辛伐他汀亚组,治疗4周后再次检测上述指标。结果:ACS患者TLR4、NF-κB、TNF-α的表达较SAP组和正常对照组显著增高(P0.01)。通心络亚组TLR4、NF-κB和TNF-α水平降低与辛伐他汀亚组差异无统计学意义(P0.05)。结论:通心络与辛伐他汀一样,可抑制斑块的炎症反应,增强斑块稳定性,有望成为新的稳定斑块药物。     

视黄醇结合蛋白4、核因子κB的表达与糖尿病大鼠动脉粥样硬化的相关性

目的探讨视黄醇结合蛋白4（RBP4）、主动脉壁核因子κB（NF-κB）与糖尿病大血管病变的关系。方法Wistar大鼠分为：对照组（NC组）、单纯糖尿病组（（DM组）、糖尿病合并动脉粥样硬化组（DM＋AS组）。测大鼠主动脉NF-κB活性、血清和附睾RBP4水平、FBG、FIns、TG、HDL-C、LDL-C、尾动脉SBP,计算血浆致动脉粥样硬化指数（AIP）及胰岛素抵抗指数（HOMAIR）。结果DM组和DM＋AS组的RBP4、NF-κB、TG、LDL-C、FBG、FIns、SBP、AIP、HOMA-IR高于NC组;DM＋AS组上述指标高于DM组;RBP4与TG、LDL-C、HOMA-IR、AIP、NF-κB、SBP、体脂比成正相关,与HDL-C成负相关。RBP4、TG是糖尿病大血管病变发生的独立危险因素。结论NF-κB与RBP4与糖尿病大血管病变发生相关,RBP4可能通过胰岛素抵抗、炎症机制及脂代谢紊乱参与糖尿病大血管病变的发生。     

银杏酮酯对心肌细胞Toll样受体4／核转录因子κB及血管紧张素原、血管紧张素Ⅱ1型受体的抑制作用

目的观察银杏酮酯50（GBE50）对脂多糖激活的心肌细胞Toll样受体4（TLR4）／核转录因子κB（NF-κB）信号及血管紧张素原（ATG）、血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1R）表达的影响，探讨GBE50防治左室重构的作用机制。方法体外培养新生大鼠心肌细胞（NRVM），分4组：1）对照组：DMEM培养基中不加任何干预因素；2）脂多糖组：DMEM培养基中加入脂多糖1mg／L；3）脂多糖＋GBE50组：预先加入GBE5080mg／L，1h后加入脂多糖1mg／L；4）脂多糖＋咖啡酸苯乙酯组：预先加入咖啡酸苯乙酯20mg／L30min后加入脂多糖1mg／L。干预24h后免疫细胞化学方法观察NF-κBp65核易位情况；RT—PCR检测TLR4、ATG及AT1R、心肌肌球蛋白重链肛MHCmRNA的表达情况，考马斯亮蓝法测定心肌细胞蛋白含量。结果LPS刺激下NRVM TLR4mR—NA明显升高（P〈O．01），NF-κBp65核易位增多（P〈0．01），ATG和AT1R、心肌肌球蛋白重链p—MHCmRNA表达以及细胞蛋白含量明显增高（P〈O．01）。GBE50与咖啡酸苯乙酯能明显抑制NF-κBp65核易位，同时抑制LPS诱导的TLR4、ATG和AT1Rβ-MHCmRNA表达上调以及细胞蛋白含量的增加（P〈0．05）。结论GBE50可能通过抑制NF-κB活化，进而减弱TLR4／NF-κB信号从而抑制心肌RAS的激活，干预TLR4／NF-κB信号通路可能是银杏叶提取物防治心肌肥大的机制之一。     

运动对糖尿病动脉粥样硬化大鼠Toll样受体促炎通路的影响

目的研究不同运动量对糖尿病动脉粥样硬化大鼠主动脉组织Toll样受体2(TLR2)、TLR4及白细胞介素6(IL-6)、核转录因子κB(NF-κB)表达的影响。方法将100只SD大鼠随机分为对照组(n=20)和糖尿病动脉粥样硬化组(n=80)。对照组予普通饲料喂养,糖尿病动脉粥样硬化组予高糖高脂喂养后腹腔注射STZ(30mg/kg)建立糖尿病动脉粥样硬化模型,后再随机分为模型亚组及小、中、大运动量亚组,对后3亚组进行游泳运动干预。干预后采用ELISA测定各组血浆IL-6、NF-κB的浓度及采用Western blott测定主动脉组织中TLR2、TLR4的表达。结果运动前,模型亚组血浆IL-6[(58.06±5.38)vs(14.21±4.04)ng/ml]、NF-κB[(154.24±9.24)vs(65.99±8.63)ng/ml]较对照组升高(P0.01);各运动亚组运动干预后血浆IL-6、NF-κB较运动前下降(P0.01)。模型亚组主动脉组织中TLR2[(1.19±0.04)vs(0.57±0.04)]、TLR4蛋白表达[(1.25±0.05)vs(0.68±0.06)]较对照组升高(P0.01);运动干预的各亚组运动后主动脉组织中TLR2、TLR4较模型亚组降低,以中、大运动量亚组下降明显(P0.01或P0.05)。结论糖尿病动脉粥样硬化大鼠动脉组织TLR2、TLR4蛋白表达及血浆IL-6、NF-κB增高,运动可以改善上述与促炎通路有关的因素。     

冠心病患者血浆CXCL16与斑块稳定性的相关性分析

目的 探讨血浆CXCL16与冠心病及粥样斑块稳定性的关系.方法 检测正常对照组16例、急性冠状动脉（冠脉）综合征组58例、稳定型心绞痛组22例的血浆CXCL16、基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases,MMP）-1、MMP-2、MMP-9及细胞核因子-κB （nuclear factor-κB,NF-κB）浓度,并进行相关性分析.结果 与对照组比较,稳定型心绞痛组和急性冠脉综合征组血浆CXCL-16、MMP-2、MMP-9及NF-κB浓度均显著升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;与稳定型心绞痛组比较,急性冠脉综合征组血浆CXCH6、MMP-2及MMP-9浓度显著升高,差异有统计学意义（P＜0.05）.相关性分析提示CXCL16与高密度脂蛋白呈负相关（r=-0.368,P＜0.05）,与C反应蛋白（r=0.392,P＜0.05）、MMP-2 （r=0.416,P＜0.05）、MMP-9 （r=0.343,P＜0.05）及NF-κB （r=0.447,P＜0.05）呈显著正相关.结论 CXCH6可能通过NF-κB调节MMPs的水平进而影响粥样硬化斑块稳定性,介导冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）的发生及发展.     

清化肠饮对溃疡性结肠炎小鼠TLR4/NF-κB通路的影响

[目的]评价清化肠饮对溃疡性结肠炎(UC)的治疗效果并阐明其可能的分子机制。[方法]利用葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导UC小鼠模型,将动物随机分为3组:正常对照组、UC模型组和清化肠饮治疗组,每组各10只。观察小鼠疾病活动指数、组织病理学改变,测量血清淀粉酶样蛋白A(SAA)水平,以及观察清化肠饮对UC小鼠模型中TLR4、MyD88、IκB磷酸化表达水平,NF-κB核转录的影响。[结果]研究发现清化肠饮能够很好地改善DSS诱导UC小鼠模型的临床症状、结肠缩短和组织损伤。此外,经清化肠饮的治疗能明显降低DSS诱导的SAA的分泌。此外,清化肠饮能明显抑制DSS诱导的TLR4的表达和MyD88、IκB的磷酸化和NF-κB的核易位。[结论]抑制TLR4/NF-κB通路可能是清化肠饮治疗UC的机制之一。     

旋毛虫ES抗原对DC2.4细胞TLR4、NF-κB和AP-1 mRNA表达的影响

目的 探讨旋毛虫ES抗原对小鼠DC2.4细胞TLR4、NF-κB和AP-1表达的影响.方法 以实时荧光定量PCR（Real-time FQ-PCR）技术对空白对照组、LPS组、ES抗原组、ES抗原＋LPS/ES抗原组和LPS＋ LPS/ES抗原组,检测TLR4、NF-κB和AP-1基因mRNA表达水平变化.结果 ES抗原和LPS单作用组的TLR4、NF-κB和AP-1 mRNA相对表达量分别是6.14/4.09/3.63和4.68/4.71/4.11,是ES抗原和LPS预作用组的各基因相对表达量的2倍以上,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 实验证实,DC2.4细胞受ES抗原和LPS持续作用或者双重作用均可诱导小鼠DC2.4细胞TLR4、NF-κB和AP-1表达的降低,可能诱致DC2.4细胞免疫耐受.     

实验性结肠炎大鼠内毒素-Toll样受体4-核因子κB信号通路的变化及益生菌的作用

目的探讨和分析实验性结肠炎大鼠血浆内毒素水平的变化及结肠Toll样受体4（TLR4）和核因子κB（NF-κB）表达及意义,并分析益生菌的作用。方法30只雄性W istar大鼠均分为正常对照组（NC组）、模型对照组（UC组）和益生菌治疗组（PC组）;UC和PC组建立2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）实验性结肠炎大鼠模型,PC组大鼠给予双歧三联活菌悬液（2.2×10^9CFU/只）治疗,1次/d,共4周。光镜下观察肠黏膜炎性反应并评分;鲎试验检测各组大鼠血浆内毒素水平;W estern印迹法和实时荧光定量PCR法检测大鼠结肠TLR4和NF-κB p65蛋白及mRNA的表达,分析其变化及益生菌的作用。结果PC组炎性反应评分较UC组明显降低（P〈0.05）,但高于NC组（P〈0.01）;PC组血浆内毒素明显低于UC组（P〈0.05）,但高于NC组（P〈0.01）;UC组TLR4和NF-κB p65的蛋白及mRNA表达明显高于PC组和NC组（P〈0.05、0.01）,PC组高于NC组（P〈0.01）。结论内毒素-TLR4-NF-κB信号通路参与了大鼠实验性结肠炎的发生和发展,减少内毒素的产生、降低大鼠结肠TLR4和NF-κB表达可能是益生菌减轻大鼠结肠炎症的机制之一。     

Effect of atorvastatin on expression of TLR4 and NF-κB p65 in atherosclerotic rabbits

ObjectiveTo study the effect of atorvastatin on atherosclerotic rabbits.MethodsA total of 60 New Zealand male rabbits were randomly divided into the normal group, model group and atorvastatin group. The replication rabbit atherosclerotic model with immune injury combined with a high fat diet feeding was used. All rabbits were sacrificed after 3 months. TLR4 and NF-κB p65 were observed by HE staining, immunohistochemistry and western blotting.ResultsThe expression of TLR4, NF-κB p65 were significantly increased in the model group compared with the normal group. The expression of TLR4 and NF-κB p65 decreased significantly in the atorvastatin group, and there was no difference compared with the normal group.ConclusionsThe effect of atorvastatin on atherosclerosis may be achieved by the inhibition of the expression of TLR4 and NF-κB p65.     

骨髓间充质干细胞通过调节LPS-TLR4通路抑制肝星形细胞活化的作用机制

目的研究人骨髓间充质干细胞（BMSC）是否可通过干预LPS-TLR4通路,调控肝星状细胞（HSC）LX2活化,阐明BMSC在肝纤维化形成中的作用。方法体外共培养BMSC、LX2,分为BMSC＋LX2（LPS刺激）组、TLR4阻断剂＋LX2（LPS刺激）组、LX2（LPS刺激）组、BMSC（LPS刺激）组、LX2（无LPS刺激）组,培养6、12、36、48 h;收集上清,ELISA检测IL-8及TGFβ表达,RT-PCR检测LX2的TLR4、Myd88及NF-κB的表达,Western Blot检测TGFβ、SMA、ColⅠ、MyD88、TLR4表达。免疫荧光检测NF-κB细胞内表达情况。结果 LPS可以刺激LX2活化,活化的LX2分泌IL-8及TGFβ增多,TGFβ、SMA、ColⅠ、MyD88、TLR4表达增加,NF-κB p65主要为核内表达。与BMSC共培养后,LPS导致的LX2活化减弱,LX2的TGF-β、SMA、ColⅠ、MyD88、TLR4的表达下降,NF-κB p65胞浆表达为主。结论 BMSC可以通过干预LPS-TLR4通路抑制LX2的活化。     

TLR4/NF-κB信号通路在ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞分泌MCP-1中的作用

目的:探讨Toll样受体4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路在氧化性低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)分泌单核细胞趋化因子-1(MCP-1)中的作用。方法:取SD大鼠胸主动脉中膜培养血管平滑肌细胞,以2.5mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L的TLR4中和抗体(TLR4阻断剂)、5μmol/L、10μmol/L、、20μmol/LPDTC(NF-κB特异性阻断剂)分别进行干预,并分别设置空白对照组和ox-LDL组,观察其对血管平滑肌细胞中ox-LDL诱导的MCP-1表达的影响。结果:与空白对照组比较,ox-LDL组VSMCs MCP-1mRNA及蛋白的表达明显升高(P<0.05);与ox-LDL组比较,用TLR4中和抗体预孵育后Anti-TLR4三组MCP-1mRNA[(1.23±0.21)比(0.81±0.02)、(0.75±0.01)、(0.49±0.01)]及其蛋白的表达[(0.64±0.05)ng/ml比(0.41±0.12)ng/ml、(0.32±0.07)ng/ml、(0.21±0.02)ng/ml]明显降低(P均<0.01),且呈浓度依赖性;用PDTC预孵育后PDTC三组MCP-1mRNA[(1.37±0.19)比(1.02±0.08)、(0.87±0.01)、(0.56±0.02)]及其蛋白的表达[(0.65±0.07)ng/ml比(0.51±0.07)ng/ml、(0.30±0.08)ng/ml、(0.19±0.02)ng/ml]亦明显降低(P均<0.01),且呈浓度依赖性。结论:氧化性低密度脂蛋白是TLR4的内源性配体;氧化性低密度脂蛋白通过或部分通过TLR4/NF-κB信号通路介导血管平滑肌细胞单核细胞趋化因子-1的表达。     

PTEN对ox-LDL诱导的巨噬细胞炎性因子的影响及机制研究

目的:分析第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因(PTEN)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的巨噬细胞炎症因子影响及其作用机制。方法:将构建pc DNA3.1(+)-PTEN(r PTEN)重组表达载体及PTEN siRNA转染小鼠巨噬细胞系RAW 264.7,用制备的50 mg/L的ox-LDL孵育24 h,RT-PCR及Western blot分析PTEN的mRNA及蛋白表达水平;ELISA检测炎性因子TNF-α和IL-6的水平;同时Western blot分析对Toll样受体4(TLR4)及转录因子-κB(NF-κB)的影响及其作用机制。结果:PTEN过表达增高了ox-LDL诱导的TNF-α和IL-6的水平;PTEN沉默抑制了ox-LDL诱导的TNF-α和IL-6炎性因子水平。进一步分析表明,PTEN过表达加强了巨噬细胞中ox-LDL诱导的TLR4及其下游NF-κB通路的活化,而抑制其表达后,TLR4-NF-κB通路明显受到抑制;用TLR4特异性抗体预处理后,PTEN过表达诱导的TNF-α和IL-6的水平明显下降。进一步机制分析证实,磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)抑制剂LY294002(1μmol/L)预处理后,PTEN沉默抑制的TLR4-NF-κB通路的活性明显增加,且伴随有TNF-α和IL-6水平的上调。结论:PTEN有可能通过负向调节PI3K/AKT抗炎通路来影响TLR4-NF-κB炎性通路,进而参与巨噬细胞介导的炎症进程。因此,本研究将为心脑血管疾病的防治提供新的靶标。