一种检测胆螺杆菌套式PCR方法的建立

目的 建立一种敏感性高、特异性强的检测胆螺杆菌的套式PCR方法。方法 基于17种胆螺杆菌亚种的16S rRNA 基因设计筛选出1套套式引物(2条内引物、2条外引物),优化反应条件后,通过模拟粪便标本、动物模型标本和临床标本的检测对方法的敏感性和特异性进行评估。结果 模拟粪便标本中,该方法 检测胆螺杆菌的敏感性达到10 CFU/100 μL。3例感染胆螺杆菌的SPF级BALB/c小鼠模型中,3例小鼠粪便和盲肠中均可检测到胆螺杆菌,1例肝脏标本中检测到了胆螺杆菌。10例胆石病患者中,有2例患者的胆汁、胆囊粘膜和粪便标本中检测到了胆螺杆菌。结论 本研究建立的套式PCR方法 ,敏感性高、特异性强,可用于检测胆螺杆菌的感染。     

猪链球菌2型BALB/c小鼠动物感染模型的建立

目的研究猪链球菌2型(SS2)中国高致病株05ZYH33株对BALB/c小鼠的致病性,探讨其作为SS2动物感染模型的可行性。方法用猪链球菌活菌经腹腔注射感染小白鼠,并做阴性对照。通过LD50测定、临床症状观察、病理剖检、病原分离鉴定、菌株在各脏器内定植分布检测、细胞因子测定,观察和分析小鼠感染SS2后机体的一系列改变。结果 BALB/c小鼠对05ZYH33株易感,其LD50为4×107 CFU/ml,并可区分强毒株和无毒株毒力差异;病原分离鉴定证实各脏器感染菌株均为SS2;涂板计数表明野生株05ZYH33在小鼠各脏器定植量显著高于无毒株Δcps2B;病死鼠的特征性组织病理学变化表现为典型的弥漫性血管内凝血和微血栓形成;野生株及无毒株均可引起炎症因子IL-6及趋化因子MCP-1的释放,但无毒株△cps2B诱导细胞因子水平显著低于野生株(P0.05)。结论 BALB/c小鼠可被SS2感染并引发炎症反应。适龄SPF BALB/c小鼠是中国SS2强致病株良好的动物感染模型。     

猪链球菌2型强弱毒株对BALB/c小鼠肠道菌群影响的差异

目的 旨在探究猪链球菌2型强弱毒株对BALB/c小鼠肠道菌群的影响差异。方法 本研究随机将3周龄的雌性BALB/c小鼠分为3组,即空白对照组、猪链球菌2型强毒株SS2-1感染组和弱毒株HA0609感染组。采用Illumina Miseq测序技术,测定了小鼠结肠粪便样品中微生物16S rRNA V3-4区序列,并对其微生物群落结构和多样性进行了比较分析。结果 各组样本测序覆盖率均达到99%以上,实验数据可靠。三组小鼠在菌群丰度和构成上均存在差异,SS2-1感染组小鼠的肠道菌群OTU数量与Alpha多样性均高于HA0609感染组和Mock组,HA0609感染组与Mock组相似度较为接近。相对于HA0609感染组和Mock组,SS2-1感染组菌群结构改变,益生菌所占比例减少,致病菌或潜在致病菌增多,存在肠道菌群失调现象。根据LEfSe分析结果,预测变形杆菌门下的Alphaproteobacteria可作为猪链球菌2型感染的潜在鉴别生物标志。结论 通过本研究,不仅对猪链球菌2型强弱毒株感染后小鼠的肠道菌群的丰度、多样性和构成有了一定的认识,而且筛选到了猪链球菌2型感染BALB/c小鼠后的潜在标志物Alphaproteobacteria,为通过调整肠道微生物治疗猪链球菌2型和预防猪链球菌2型感染提供了依据。     

建立幽门螺杆菌感染BALB/c小鼠动物模型的实验研究

[目的]建立幽门螺杆菌(Hp)BALB/c小鼠感染动物模型。[方法]用cagA基因和vacA基因同时阳性的Hp小鼠适应株给BALB/c小鼠灌胃。[结果]经Hp小鼠适应株灌胃4周后,病理模型组10只感染的小鼠胃黏膜尿素酶试验、细菌学培养和组织病理学检查均为阳性,感染率为100%;正常对照组未见Hp生长,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]成功地建立了云南Hp小鼠适应株感染的BALB/c小鼠动物模型。这种ca gA基因和vacA基因同时阳性的Hp小鼠适应株毒力强容易定植;可在普通饲养条件下建立,即有利应用于云南地区Hp的相关研究,又可节约研究经费,易于推广使用。     

低氧及常氧条件下不同品系小鼠体外受精胚胎发育及妊娠结局观察

目的 比较不同品系小鼠来源胚胎在低氧条件（5%O2）及常氧条件（20%O2）下体外发育情况和妊娠结局，探讨适用于评价人类体外受精实验室质量控制的体系。方法 KM小鼠、ICR小鼠、C57BL/6J小鼠、BALB/c小鼠各20只，雌雄各半。取四种品系雌性小鼠各10只常规促排卵，取卵后每个品系小鼠均随机分为低氧组与常氧组分别进行培养，进行体外受精及胚胎移植，观察并比较两组各品系小鼠囊胚形态结构、正常受精率、体外受精第2天（D2）卵裂率、D2优质胚胎率、D3优质胚胎率、囊胚率、新鲜移植妊娠率、解冻移植妊娠率。结果 与常氧组比较，低氧组KM小鼠、ICR小鼠、C57BL/6J小鼠、BALB/c小鼠囊胚体外培养均呈中空球形，囊胚均具有更加规则的形状和更高的折光度。低氧组KM小鼠、ICR小鼠、C57BL/6J小鼠、BALB/c小鼠囊胚率、新鲜移植妊娠率、解冻移植妊娠率均高于常氧组（P均<0.05），两组四个品系小鼠正常受精率、D2卵裂率、D2优质胚胎率、D3优质胚胎率比较均无统计学意义。结论 低氧条件下胚胎体外培养可提高KM小鼠、ICR小鼠、C57BL/6J小鼠、BALB/c小鼠胚胎体外发育潜能...     

食物过敏对小鼠肠道屏障功能及CD4+CD25+调节性T细胞的影响

目的:观察卵清蛋白肠道致敏BALB/c小鼠时肠道屏障功能变化,研究有无细菌易位现象发生;观察其脾细胞中CD4 CD25 调节性T细胞数量的变化以期进一步探讨食物过敏机制.方法:无受试蛋白喂养的BALB/c小鼠20只,随机分为实验组和对照组.实验组给予以卵清蛋白(OVA),对照组给予等量生理盐水.培养法分析粪便菌群、ELISA法测定肠黏液分泌型免疫球蛋白A (sIgA)含量及血清二胺氧化酶(DAO)含量.对肠系膜淋巴结(MLN)、腹腔灌洗液及肝、肾、肺组织进行培养以探讨有无细菌易位的发生.同时,采用流式细胞术分析其脾细胞悬液中CD4 CD25 调节性T细胞的数量变化结果:与对照组相比,实验组小鼠肠道固有菌群中益生菌乳酸杆菌、双歧杆菌的含量显著降低(P=0.006, P=0.016),条件致病菌大肠杆菌、类杆菌的含量显著升高(P=0.001, P=0.001);肠道黏液中sIgA的含量(A值)显著升高(0.107±0.012 vs 0.086±0.008, P=0.001);血清DAO含量(A值)显著升高(0.357±0.025 vs 0.179±0.035, P=0.001);MLN及外周器官细菌易位率显著升高(47.8% vs 15.6%, P=0.001);脾细胞悬液中CD4 CD25 T细胞数量显著降低(4.350%4±0.618% vs 6.488%±2.313%, P=0.001).结论:OVA肠道致敏小鼠肠道菌群失调,肠通透性增高反映肠屏障功能受损,OVA肠道致敏小鼠存在肠道细菌易位现象.CD4 CD25 调节性T细胞细胞的下调可能在食物过敏的发生中起重要作用.     

猫胃螺杆菌感染小鼠模型的研究

本研究建立了幽门螺杆菌的近缘苗猪胃螺杆菌的SPF级Balb／c小鼠模型，发现细菌可在其中长期定植并引起与人类Hp相关胃炎相似的组织学改变，提示该模型可用于幽门螺杆菌的研究。     

不同品系小鼠肝螺杆菌感染实验模型的建立及病理特征分析

目的 应用肝螺杆菌感染不同品系小鼠,观察肝螺杆菌的定植状况及病理特征,以期获得稳定的动物模型.方法 SPF级雄性BABL/c Cr、SCID/Cr、C57BL/6 Cr小鼠接种肝螺杆菌(H.hepaticus,Hh)标准菌株ATCC51450菌液0.2 ml(1×108 CUF/ml),连续3次,每次间隔48 h,对照组灌饲等量的PBS.于末次接种Hh后第4周、8周及16周处死小鼠,取出小鼠食管、胃、空肠、回肠、盲肠、结肠、肝脏及胰腺组织,行病理组织学检查、微需氧菌分离培养鉴定及Hh特异性16SrRNA基因扩增.结果 BALB/c Cr小鼠和SCID/ Cr小鼠接种Hh后4周、8周及16周盲肠定植率均为8/8,4周、8周及16周结肠定植率分别为(4/8、5/8、5/8)和(3/8、6/8、5/8),16周回肠及空肠定植率均为1/8,8周、16周肝脏定植率分别为(2/8、3/8)和(2/8、2/8);C57BL/6 Cr小鼠接种Hh后4周、8周16周盲肠定植率分别为1/8、2/8和2/8,8周、16周结肠定植率分别为1/8、2/8.Hh感染的BALB/c Cr和SCID/Cr小鼠肝脏、盲肠及结肠炎症改变较C57BL／6 Cr小鼠更为明显(P＜0.01),且随着感染时间的延长病理组织学评分逐渐增加(P值分别＜0.05和0.01),其中结肠及肝脏组织中Hh定植者的组织学评分明显高于无Hh定植者(P＜0.05),盲肠组织的病理组织学评分随着Hh定植密度的增加而增加(P＜0.05).结论 不同品系小鼠对Hh的易感性不同；BALB/cCr、SCID/Cr小鼠接种Hh后可获得较好的Hh感染模型.     

低剂量辐射预处理对小鼠放射性肠黏膜损伤的保护作用

目的观察低剂量辐射（LDR）对小鼠放射性肠黏膜损伤的保护作用。方法将135只BALB/c小鼠随机均分为三组,A组不行X线照射,B组行全腹X线照射,C组先行LDR预处理,再行全腹X线照射。三组照射后1、3、5 d麻醉、解剖、取血,检测其血清内毒素和二胺氧化酶（DAO）;取肠系膜淋巴结测定肠道内细菌移位率。结果与A组比较,B、C组血清内毒素、DAO、肠道内细菌移位率明显升高（P〈0.05或〈0.01）,但C组明显低于B组（P均〈0.01）。结论 LDR预处理可减轻小鼠肠道的放射性损伤。     

禽流感病毒感染小鼠模型病理损伤及抗原定位研究

目的通过建立高致病性禽流感H5N1病毒感染小鼠模型,研究病毒感染致小鼠组织病理损伤、病毒抗原在体内分布及复制特点,为禽流感病毒传播途径及致病机理研究提供实验依据。方法采用A/vietnam/1194/2004(H5N1)病毒株,滴鼻感染BALB/c小鼠,5 d后取小鼠肺、脑、脾、肠、心、肝、肾等组织,制备石蜡切片并进行组织病理损伤和抗原定位研究。结果小鼠肺组织表现为弥漫性肺损伤,脑组织出现轻度炎症反应,脾组织结构完整但脾小体可见凋亡细胞,其它脏器组织结构未查见组织病理损伤;利用M2、NS1单抗,采用免疫组织化学方法检测发现小鼠肺、脑、肠等均有M2、NS1抗原分布。结论高致病性H5N1病毒感染可在小鼠肺、脑、肠等多种组织中复制,引起严重的肺组织病理损伤及轻度的脑组织及脾组织病理损伤。