碘油羟基磷灰石纳米粒对兔VX2肝肿瘤多药耐药相关蛋白表达的影响

目的 研究碘油羟基磷灰石纳米粒(nHAP)经肝动脉灌注治疗对兔VX2肝肿瘤4种耐药蛋白-多药耐药蛋白1(multidrug resistance protein 1,MDR1)、多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance related protein 1,MRP1)、肺耐药蛋白(lung resistance protein,LRP)、乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)表达的影响.方法 100只新西兰白兔肝内肿瘤种植2周后随机分为5组,每组20只,经肝动脉灌注给药,实验设生理盐水组(A组)、nHAP组(B组)、单纯碘油组(C组)、阿霉素碘油组(D组)及碘油nHAP组(E组).治疗2周后,免疫组组织化学和 Western blotting检测4种耐药蛋白的表达.结果 免疫组织化学和 Western blotting结果均提示:与A组相比,C组和D组残余肿瘤区的MDR1和BCRP表达升高,而E组则表达降低(P<0.05);LRP及MRP1表达在各组差异无统计学意义(P>0.05).结论 在常见的4种多药耐药蛋白中,MDR1和BCRP在兔VX2肝肿瘤多药耐药中可能起重要作用.单纯碘油及阿霉素碘油经肝动脉治疗可升高MDR1和BCRP的表达,而碘油nHAP可降低其表达,进而降低栓塞治疗后耐药的发生.     

促红细胞生成素对哮喘小鼠肺组织细胞凋亡的影响

目的研究促红细胞生成素(EPO)对迟发型哮喘小鼠肺组织细胞凋亡的影响。方法昆明小鼠40只随机分为5组,每组8只。A组为正常对照组,B、C、D、E组(给予鸡卵清蛋白)均制备为哮喘小鼠,其中C、D和E组于第22天起连续治疗1 w(C组EPO 500 IU/kg、D组EPO 1 000 IU/kg、E组地塞米松1 mg/kg,均腹腔注射),攻击结束1 w,对B、C、D和E组再次给予激发,A组给予生理盐水激发,24 h后采血及取肺组织。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清白细胞介素(IL)-4和IL-5水平;苏木精-伊红(HE)法观察形态学变化;转移酶介导的三磷酸脱氧鸟苷-生物素刻痕末端标记(TUNEL)染色观察肺组织细胞的凋亡指数;Western印迹法检测Bax、Bcl-2和Caspase-3凋亡蛋白在肺组织表达。结果 (1)血清IL-4和IL-5:与A组比,B组和C组均明显升高(P0.05),D和E组无显著差异(P0.05);与B组比,C组无显著差异(P0.05),D组和E组明显降低(P0.05);与E组比,C组明显升高(P0.05)。(2)HE染色结果:A组气管管腔光滑,黏膜上皮完整、无水肿;B组气管黏膜损伤严重,充血、水肿、基底层增厚,肺泡壁及肺泡腔内可见大量炎性细胞浸润,嗜酸粒细胞明显增多;C组气管黏膜可见轻度充血、水肿,基底层仍厚,但炎症细胞浸润较B组略有减轻;D组气管黏膜充血、水肿不明显,基底层略增厚,炎症细胞明显减少;E组气管黏膜接近正常,基底层略增厚,少量炎症细胞浸润。(3)TUNEL检测细胞凋亡:与A组比,B、C、D、E组凋亡指数均明显升高(P0.05);与B组比,C、D、E组均明显升高(P0.05);与E组比,C组明显降低(P0.05)。(4)Bax的表达:与A组比,B、C、D、E组均明显升高(P0.05);与B组比,C、D和E组明显降低(P0.05)。(5)Bcl-2的表达:与A组比,B、C、D、E组明显降低(P0.05);与B组比,C、D、E组明显升高(P0.05)。(6)Bax/Bcl-2的比较,与A组比,B、C、D、E组明显升高(P0.05);与B组比,C、D、E组明显降低(P0.05)。(7)Caspase-3的表达:与A组比,B、C、D、E组明显升高(P0.05);与B组比,C、D、E组明显降低(P0.05)。结论迟发型哮喘小鼠血清中IL-4、IL-5升高,肺组织病变明显,Bax、Bcl-2、Caspase-3凋亡蛋白表达异常。EPO可通过降低IL-4、IL-5水平,下调Bax/Bcl-2比例,降低Caspase-3的表达促进嗜酸粒细胞凋亡减轻迟发型哮喘肺组织病理炎性浸润。     

纳米材料碘油混悬液栓塞对肝肿瘤金属蛋白酶表达的影响

羟基磷灰石纳米粒子对肝肿瘤细胞有促凋亡作用,与碘油混合栓塞治疗肝肿瘤可提高其靶向性,抑制肿瘤生长[1,2].基质金属蛋白酶(MMP)-2可降解细胞外基质的纤维骨架结构,在肿瘤转移和浸润中发挥重要作用.本实验应用羟基磷灰石纳米粒子超液化碘油混悬液栓塞治疗兔VX2肝肿瘤,观察肿瘤组织中MMP-2表达,探讨纳米材料栓塞后肝肿瘤转移的可能趋势.     

5-Fu对食管癌细胞株EC9706 凋亡及HIF-1α蛋白表达的影响

目的 探讨5-氟尿嘧啶(5-Fu)对食管癌细胞株EC9706凋亡及HIF-1α蛋白表达的影响.方法 将EC9706细胞随机分为A、B、C、D、E五组,其中A、B、C、D组于培养基内加入浓度分别为12.5、25、50、100 μg/ml的5-Fu 作用72 h, E组不加药.用流式细胞仪及免疫细胞化学染色技术检测各组细胞凋亡率及HIF-1α蛋白表达情况.结果 细胞凋亡率A组和E组均为0,B、C、D组分别为12.0%、23.2%、22.3% ,C组显著高于其他四组,P＜0.05;HIF-1α蛋白表达阳性率A组为66.50%±3.45%、B组为50.58%±4.34%、C组为37.00%±6.15%、D组为34.83%±3.25%、E组为78.58%±5.71%,E组显著高于其他四组(P＜0.05).结论 5-Fu可诱导EC9706细胞凋亡、下调HIF-1α表达,此可能是其治疗食管癌的机制之一.     

音乐疗法与运动疗法对老年小鼠海马细胞凋亡影响的比较

目的探究音乐疗法与运动疗法对老年小鼠海马细胞凋亡的影响。方法昆明种10月龄雄性老年小鼠32只随机分为对照组(A组)、大强度运动组(B组)、中等强度运动组(C组)和音乐组(D组)各8只。A组正常饲养,B组和C组每周进行5次不同强度运动干预,D组每周进行5次音乐干预。实验8 w后,采用Tunnel免疫组化法观察小鼠海马组织凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和海马神经凋亡情况。结果与A相比较,C组和D组海马神经元Bcl-2表达显著升高(P0.05,P0.01),D组Bax表达显著降低(P0.05),C组和D组凋亡细胞数显著减少(P0.05,P0.01)。与B组比较,C组和D组海马神经元Bcl-2表达显著升高(P0.05),D组Bax表达显著降低(P0.05),海马凋亡细胞数显著减少(P0.01)。与C组比较,D组海马凋亡细胞数显著减少(P0.05)。结论音乐疗法和中等强度运动疗法有助于减少老年小鼠海马细胞凋亡,提示音乐疗法和中等强度运动疗法对神经退行性疾病有一定的防治作用,音乐疗法效果更好。     

microRNA-122抑制肝肿瘤细胞HepG2的增殖研究

目的探究microRNA-122(miR-122)对肝肿瘤细胞HepG2增殖的抑制效应。方法培养肝肿瘤细胞HepG2并随机分为miR-122组、阴性对照组(NC组)、空白对照组,miR-122组使用LipofectamineTM2000试剂转染肝癌细胞株HepG2细胞,NC组将阴性对照siRNA转染HepG2细胞,空白对照组只加胎牛血清RPMI-1640培养基。转染24 h后,采用MTS试剂盒测定细胞活力,计算细胞增殖抑制率,采用荧光定量PCR测定细胞中凋亡抑制蛋白(XIAP)、细胞周期素D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖激酶2(CDK2)、细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)、血管内皮生长因子(VEGF)、VEGFR1、VEGFR2、肝细胞生长因子(HGF)的mRNA含量。结果干预后24 h,miR-122组细胞的吸光值(OD)明显低于空白对照组、NC组,细胞增殖抑制率明显高于NC组(t=9.43、19.475、P0.05),miR-122组细胞中XIAP、Cyclin D1、CDK2、CDK4 mRNA含量明显低于空白对照组、NC组(t=8.135、7.542、11.740、5.937,P0.05),VEGF、VEGFR1、VEGFR2、HGF mRNA含量明显低于空白对照组、NC组(t=7.741、13.002、6.347、6.662,P0.05)。结论 miR-122能够抑制肝肿瘤细胞HepG2的增殖,靶向抑制细胞周期相关分子、血管新生相关分子的表达是miR-122发挥增殖抑制效应的可能机制。     

运动预适应对急性心肌缺血大鼠心肌细胞凋亡及凋亡蛋白表达的影响

目的探讨运动预适应(EP)对非动脉硬化大鼠及动脉硬化大鼠急性心肌缺血心肌细胞B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达及半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3蛋白的影响。方法选取7周龄SD大鼠90只,随机分为5组:对照组(A组)、急性心肌缺血组(B组)、动脉硬化+急性心肌缺血组(C组)、EP+急性心肌缺血组(D组)、动脉硬化+EP+急性心肌缺血组(E组),其中A组10只,其余各组20只。C、E组予维生素D3连续灌胃4 d,喂高脂饲料(猪油、胆固醇、胆酸、丙基硫氧嘧啶)6 w制备动脉硬化模型。B、C、D、E组腹腔注射3 mg/kg异丙肾上腺素(ISO),复制大鼠急性心肌缺血损伤模型。D、E组建立EP大鼠模型进行间歇性游泳运动,以尾部负重体重的3%重物。建模后24 h内采用脊髓脱臼法处死大鼠,取左心室心肌组织,采用免疫组化检测Bcl-2及Bax蛋白的表达,Western印迹检测Caspase-3蛋白。结果与A组比较,B、C、D、E组心肌细胞Bcl-2的表达均显著降低(P<0.05),而Bax表达均显著升高(P<0.05);B组与C组心肌细胞Bcl-2的表达差异无统计学意义(P>0.05),但C组Bax的表达显著升高(P<0.05);D组、E组心肌细胞Bcl-2的表达较B组、C组显著升高(P<0.05),而Bax的表达显著降低(P<0.05);与D组比较,E组Bcl-2的表达显著降低,而Bax的表达显著升高(P<0.05)。与A组相比,B、C、D、E组心脏Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.01);与B组、C组相比,D组、E组心脏Caspase-3蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。与D组比较,E组心脏Caspase-3蛋白表达水平无明显差异(P>0.05);与A组比较,B、C、D、E组细胞凋亡指数(AI)显著增高(P<0.05),其中C组AI最高;与B组、C组比较,D组、E组AI显著降低(P<0.05),而D组比E组AI稍低(P<0.05)。结论EP可能改善急性心肌缺血或是在合并动脉硬化基础上急性心肌缺血大鼠的心肌细胞凋亡,可能基于凋亡相关基因Bcl-2表达升高、Bax表达降低调控及下调Caspase-3蛋白所致。     

瘦素经PI3K-AKT-NFκB通路对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的:观察瘦素在SD大鼠心肌缺血再灌注损伤中对磷脂酰肌醇3激酶-丝氨酸(苏氨酸)蛋白激酶B-核转录因子κB(PI3K-Akt-NFκB)信号通路的影响。方法:100只健康雄性SD大鼠随机分为A、B、C、D、E 5组(每组20只)。A组为单纯缺血再灌注模型对照组;B组为假手术组,仅开胸不作血管结扎;C、D、E组分别为瘦素低、中、高剂量干预组(剂量依次为20、50、100μg/kg)。使用线栓法制作心肌缺血再灌注模型,缺血30 min再灌注24 h后观察HE染色心肌病理学改变,蛋白印迹技术(Western Blot)观察PI3K、Akt1、NFκB蛋白的表达,酶联免疫法(ELISA)检测肿瘤刺激因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6),观察瘦素的抗炎作用。结果:①与A组比较,C、D、E组心肌组织病理学表现均缓解,C、D、E组TNF-α、IL-6的表达较A组降低(均P0.05),D组P13K、AKT1、NFκB表达均增加(均P0.05),C组AKT1表达增高(P0.05),E组PI3K、NFκB表达上调(均P0.05);③与B组比较,A、C、D、E组心肌组织病理学变化均有差异,且TNF-α、IL-6表达均增加(均P0.05),A组PI3K表达增加(P0.05),C组PI3K、AKT1表达增加(均P0.05),D、E组PI3K、AKT1、NFκB表达均增加(均P0.05)。结论:瘦素能控制大鼠心肌缺血再灌注损伤的炎症反应,促进相关抑凋亡蛋白并维持细胞生存,其可能经PI3K-AKT-NFκB信号通路减轻心肌缺血再灌注损伤。     

平阳霉素混合碘油经动脉化疗栓塞抑制兔VX2肝癌生长的实验研究

目的 评价平阳霉素混合碘油经肿瘤滋养动脉化疗栓塞对兔VX2肝癌的肿瘤组织、滋养血管及血管新生的影响.方法 将28只新西兰大白兔采用移植法建立兔VX2肝癌模型,并随机均分为单纯碘油组(A组)、平阳霉素组(B组)、平阳霉素加碘油组(C组)和等渗盐水对照组(D组).模型均于建模后第14天行CT检查并计算肿瘤体积V1,然后对各组模型作相应处理:A组经肿瘤滋养动脉注入超液态碘油,B组经肿瘤滋养动脉注入平阳霉素,C组经肿瘤滋养动脉注入平阳霉素加超液态碘油,D组经肿瘤滋养动脉注入等渗盐水.7d后再行CT检查,计算肿瘤体积V2及肿瘤的生长率.处死实验兔进行病理学检查,计算血管内皮生长因子(VEGF)阳性表达率及微血管密度(MVD).组间数据的比较用单因素方差分析,多组的两两间比较用LSD法,两组间比较用成组t检验,对方差不齐者用秩和检验;VEGF表达与MVD值比较用双变量相关分析;阳性表达率的比较用精确概率法.结果 A、B、C、D组介入治疗前的肿瘤体积分别为(389.8±167.3) mm3、(404.1±184.9) mm3、(355.1±158.3) mm3和(378.1±189.0) mm3,差异无统计学意义(F=0.257,P＞0.05);术后肿瘤体积分别为(922.6±32.9) mm3、(665.9±99.9) mm3、(349.5±177.8) mm3和(1403.5±411.2) mm3,差异有统计学意义(F=26.23,P＜0.05),且B组和C组明显小于A组和D组;VEGF阳性表达率分别为57.1％、42.9％、28.6％和100％,差异有统计学意义(F=8.407,P＜0.05).D组残余肿瘤区MVD显著升高(36.4±3.7),与A组(22.4±3.9)、B组(18.7±2.6)和C组(14.1±2.3)比较,差异有统计学意义(t值分别为6.89、10.34和13.49,P值均＜0.05),且C组明显低于其他各组(t值分别为4.89、3.53和13.49,P值均＜0.05).VEGF阳性表达率与MVD存在正相关关系(r=0.743,P＜ 0.01).结论 平阳霉素对兔VX2肝癌有较好的治疗效果,联合超液态碘油经肝动脉化疗栓塞治疗更加有效.     

环磷腺苷效应元件结合蛋白磷酸化在胰岛素样生长因子-1抑制耳蜗毛细胞凋亡中的作用

目的探讨磷酸化环磷腺苷效应元件结合蛋白(P-CREB)对胰岛素样生长因子(IGF)-1抑制小鼠毛细胞凋亡的作用。方法体外培养新生小鼠耳蜗基底膜。实验分为A组:正常对照培养液;B组:庆大霉素(GM)(0.5 mmol/L);C组:GM(0.5 mmol/L)+IGF-1(1 ng/ml);D组:GM(0.5 mmol/L)+IGF-1(10 ng/ml);E组GM(0.5 mmol/L)+IGF-1(50 ng/ml);F组:GM(0.5 mmol/L)+IGF-1(100 ng/ml)。培养24 h后收集细胞及固定。应用TUNEL法观察各组耳蜗毛细胞的凋亡情况。应用Western印迹及RT-PCR法观察P-CREB的表达情况。结果 A组无凋亡细胞。B组检测到凋亡细胞。C组细胞凋亡较B组明显减少。D组凋亡细胞减少最明显(与B组相比,P0.05)。E组及F组凋亡细胞较D组有所增加。P-CREB:Western印迹结果及RT-PCR结果表明:A组及B组P-CREB蛋白及m RNA表达较低。与B组相比,C、D、E及F组P-CREB蛋白及m RNA明显增加,以D组增加最明显。结论 IGF可能通过激活CREB磷酸化抑制毛细胞凋亡。