黄芪对大鼠肝缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨黄芪对大鼠肝缺血再灌注损伤的影响,以及与缺血预处理(IP)作用效果的比较.方法 清洁级健康雄性SD大鼠96只,随机分为假手术组、缺血再灌注组(IR组)、缺血预处理组(IP组)、黄芪组,每组又按再灌注时间(1、3、6、24 h)分为4个时相,每组各时相为6只.制作70%肝缺血再灌注模型,测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)水平;测肝组织髓过氧化物酶(MPO)含量;用免疫组化法检测IL-10、TNF-α表达;以及光镜及电镜观察大鼠肝形态学变化.结果 IR、IP、黄芪组ALT、AST、LDH和MPO含量均明显高于假手术组(P<0.01).与IR组相比,IP、黄芪组各个时相点的值均下降(P<0.05).与IP组比较,黄芪组各个时相点的值均降低(P<0.05).IR、IP、黄芪组肝组织TNF-α、IL-10的阳性细胞表达率均比假手术组高(P<0.05);与IR组比较,IP、黄芪组TNF-α的表达减少,而IL-10的表达增强(P<0.05);与IP组比较,黄芪组TNF-α的表达减少,IL-10表达增强(P<0.05).在光镜及电镜下观察肝形态学变化,可见IR组损伤甚为明显,IP及黄芪组损伤程度较IR组轻,黄芪组更轻,而假手术组肝形态正常.结论 IP和黄芪都可减轻缺血再灌注对肝脏的损伤,且后者较前者效果好.     

葛根素对大鼠肝脏缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响及作用机制

目的探讨葛根素(Pue)对大鼠肝脏缺血再灌注(IR)损伤的保护作用及其对细胞凋亡的影响及可能机制。方法健康雄性SD大鼠72只,随机分为假手术组、IR组、缺血预处理(IP)组和Pue预处理组(Pue组),每组按再灌注(1、6、24 h)三个时间点分3个亚组。建立动物模型;测Bcl-2、Bax蛋白的表达情况及肝组织凋亡指数(AI);透射电镜下观察大鼠肝细胞的变化。结果与假手术组相比,IR组、IP组、Pue组肝组织Bcl-2、Bax蛋白表达以及AI均增加(P<0.05);与IR组比较,IP组、Pue组肝组织Bax蛋白的表达及AI减少,而Bcl-2蛋白表达增加(P<0.05);与IP组比较,Pue组肝组织Bax蛋白的表达及凋亡指数减少,而Bcl-2蛋白的表达增加(P<0.05)。通过透射电镜下对肝细胞学观察,可见假手术组肝细胞形态基本正常,IR组损伤最重,IP组及Pue组损伤较IR组轻,Pue组要更轻。结论 IP及Pue都可通过上调Bcl-2蛋白的表达,抑制Bax蛋白的表达,来减轻肝细胞凋亡,相比之下后者效果要更好。     

槲皮素对缺血再灌注大鼠肝脏损伤的保护作用

目的评估槲皮素对缺血再灌注大鼠肝脏损伤大鼠的保护作用。方法健康大鼠80只被随机分为对照组5只、假手术组25只、缺血再灌注组25只和槲皮素组25只,后3组再按不同灌注时限(0、6、12、24、72 h)分为5个亚组,每个亚组5只。分别于实验结束后留取大鼠血液及肝脏组织,用全自动生化分析仪检测血清中ALT、AST水平,竞争抑制ELISA法检测血清中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平;HE染色法观察肝脏的形态学改变,并用原位末端标记法检测肝脏细胞的凋亡情况。结果肝脏缺血再灌注组各时点血清中ALT、AST、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α均有所升高,且以12 h最高,与对照组、假手术组相比差异有统计学意义(P均<0.05);除IL-6外,槲皮素组各时点以上检测指标与缺血再灌注组比较有统计学差异(P均<0.05)。光镜下,对照组、假手术组肝脏无明显改变;而在缺血再灌注后12 h,肝细胞变性明显,肝索结构消失,部分肝细胞灶状坏死;槲皮素组的肝脏仅部分细胞变性,部分肝索结构存在,该形态学变化与细胞凋亡指数的检测结果一致。结论槲皮素能够有效地改善大鼠肝脏缺血再灌注损伤。     

丙泊酚对大鼠肺缺血再灌注损伤细胞凋亡及相关蛋白的影响

目的 探讨丙泊酚对大鼠肺缺血再灌注损伤(LIRI)细胞凋亡及相关蛋白的影响.方法 雄性SD大鼠42只,随机分为3组:假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)、丙泊酚组(P组).IR组、P组均建立大鼠原位肺缺血再灌注模型(缺血1 h,再灌3 h),P组于缺血前30 min静脉输注丙泊酚5 mg·kg-1·h-1.实验结束后立即取左肺标本,用免疫组化法检测Bcl-2与Bax蛋白表达情况,原位细胞凋亡检测(TUNEL)法检测肺上皮细胞凋亡指数(AI),同时光镜下观察肺组织的病理学变化.结果 与S组相比,IR组凋亡指数增加,肺组织中Bcl-2、Bax表达均增强,Bcl-2/Bax比值明显降低 (P＜0.05);与IR组相比,P组Bcl-2蛋白表达增加、Bax蛋白表达减少和细胞凋亡指数降低(P＜0.05),光镜下肺组织病理学变化明显轻于IR组.结论 丙泊酚对大鼠LIRI具有保护作用,其机制可能与调控Bcl-2/Bax蛋白表达从而减轻肺细胞凋亡有关.     

活血化瘀注射液Ⅰ号预处理与缺血预处理改善肝缺血再灌注损伤

目的:研究活血化瘀注射液Ⅰ号(HHI-Ⅰ)预处理与缺血预处理(ischemic preconditioning,IP)对大鼠肝脏缺血再灌注(ischemia and reperfusion,I/R)损伤的改善作用,并比较两者的作用效果.方法:健康♂SD大鼠80只,随机分为假手术对照组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、缺血预处理组(IP组)、HHI-Ⅰ预处理组(HHI-Ⅰ组),每组20只.建立大鼠部分肝缺血模型,各组在I/R后1,3,6,24 h分别取材,测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)的水平;取左肝测组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量.I/R后1 h RTPCR检测肝组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA的表达,I/R后3 h行组织学观察.结果:I/R组、IP组、HHI-Ⅰ组的ALT,AST,LDH活性、MDA值和TNF-α,ICAM-1 mRNA表达水平均明显高于Sham组.IP组、HHI-Ⅰ组低于I/R组.HHI-Ⅰ组所有时间点ALT,AST,LDH明显低于IP组(ALT:2378.8±303.4 nkat/Lvs 2840.6±248.4 nkat/L;AST:2887.2±270.1nkat/L vs 4567.6±275.1 nkat/L;LDH:10550.4±710.1 nkat/L vs 12164.1±735.1 nkat/L;P均＜0.05).HHI-I组MDA值明显低于IP组(17.35±1.39 nmol/g vs 21.66±1.84 nmol/g,P＜0.05).HHI-Ⅰ组TNF-α,ICAM-1 mRNA表达水平低于IP组(TNF-α:0.54±0.06 vs 0.78±0.08;ICAM-1:0.43±0.03 vs 0.69±0.11,P均＜0.01).各组SOD值均低于Sham组(P＜0.05),IP组、HHI-Ⅰ组均高于I/R组(P＜0.05),HHI-Ⅰ组SOD(1,3,6 h)明显高于IP组(136.00±12.50 nmol/g vs 124.70±9.32 nmol/g,P＜0.05).Sham组光镜下肝小叶结构正常;I/R组肝小叶结构紊乱,肝细胞水肿变性;IP组肝细胞水肿明显,部分肝细胞变性;HHI-Ⅰ组肝小叶结构基本正常,肝细胞无明显水肿.结论:HHI-Ⅰ预处理与IP均可改善I/R对肝脏造成的损伤,前者的效果优于后者.HHI-Ⅰ的保护机制可能在于改善肝脏微循环,减轻组织缺氧状态,并通过抑制TNF-α和ICAM-1等细胞因子和细胞黏附分子的转录表达,减少肝组织中中性粒细胞的浸润.     

活血化瘀注射液I号预处理与缺血预处理改善肝缺血再灌注损伤

目的研究活血化瘀注射液Ⅰ号(HHI-Ⅰ)预处理与缺血预处理(ischemic preconditioning,IP)对大鼠肝脏缺血再灌注(ischemia and reperfusion,I/R)损伤的改善作用,并比较两者的作用效果.方法健康♂SD大鼠80只,随机分为假手术对照组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、缺血预处理组(IP组)、HHI-Ⅰ预处理组(HHI-Ⅰ组),每组20只.建立大鼠部分肝缺血模型,各组在I/R后1,3,6,24 h分别取材,测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)的水平;取左肝测组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量.I/R后1 h RTPCR检测肝组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA的表达,I/R后3 h行组织学观察.结果I/R组、IP组、HHI-Ⅰ组的ALT,AST,LDH活性、MDA值和TNF-α,ICAM-1 mRNA表达水平均明显高于Sham组.IP组、HHI-Ⅰ组低于I/R组.HHI-Ⅰ组所有时间点ALT,AST,LDH明显低于IP组(ALT2378.8±303.4 nkat/Lvs 2840.6±248.4 nkat/L;AST2887.2±270.1nkat/L vs 4567.6±275.1 nkat/L;LDH10550.4±710.1 nkat/L vs 12164.1±735.1 nkat/L;P均＜0.05).HHI-I组MDA值明显低于IP组(17.35±1.39 nmol/g vs 21.66±1.84 nmol/g,P＜0.05).HHI-Ⅰ组TNF-α,ICAM-1 mRNA表达水平低于IP组(TNF-α0.54±0.06 vs 0.78±0.08;ICAM-10.43±0.03 vs 0.69±0.11,P均＜0.01).各组SOD值均低于Sham组(P＜0.05),IP组、HHI-Ⅰ组均高于I/R组(P＜0.05),HHI-Ⅰ组SOD(1,3,6 h)明显高于IP组(136.00±12.50 nmol/g vs 124.70±9.32 nmol/g,P＜0.05).Sham组光镜下肝小叶结构正常;I/R组肝小叶结构紊乱,肝细胞水肿变性;IP组肝细胞水肿明显,部分肝细胞变性;HHI-Ⅰ组肝小叶结构基本正常,肝细胞无明显水肿.结论HHI-Ⅰ预处理与IP均可改善I/R对肝脏造成的损伤,前者的效果优于后者.HHI-Ⅰ的保护机制可能在于改善肝脏微循环,减轻组织缺氧状态,并通过抑制TNF-α和ICAM-1等细胞因子和细胞黏附分子的转录表达,减少肝组织中中性粒细胞的浸润.     

灯盏花素联合预适应对兔缺血再灌注心肌肿瘤坏死因子α、核因子-κB的影响

目的:探讨灯盏花联合预适应对兔缺血再灌注心肌肿瘤坏死因子α(TNF-α)、核因子-κB(NF-κB)的影响.方法:采用新西兰大白兔体内心肌缺血再灌注模型,36只动物随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(IR组)、缺血预适应组(IP组)、灯盏花素联合缺血预适应组(BI组).各组分别进行心肌酶学[肌酸激酶(CK)及乳酸脱氢酶(LDH)]检查,并采用伊文思蓝(EB)/氯化三苯基四氮唑(TTC)测定梗死面积,用免疫组化法检测TNF-α及NF-κB蛋白表达水平.结果:IR、IP及BI组较Sham组均有明显的心肌梗死(P<0.01),IP、BI组较IR组能够明显缩小心肌梗死面积(P<0.01),BI组较IP组疗效显著(P<0.05);IR、IP及BI组心肌酶较Sham组均明显升高(P<0.01),IP、BI组各时间点CK和LDH均较IR组明显降低(P<0.01),且BI组较IP组降低更明显(P<0.05);IR、IP及BI组较Sham组TNF-α及NF-κB蛋白表达均明显增加(P<0.01);IP组、BI组TNF-α及NF-κB蛋白表达均较IR组显著较少(P<0.01),且BI组较IP组更明显(P<0.05).结论:缺血预适应及灯盏花素联合预适应均显著缩小心肌梗死面积,降低心肌酶,减少心肌细胞内TNF-α、NF-κB蛋白的表达.     

不同时间的缺血预处理对脂肪肝缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨缺血预处理（IP）对脂肪肝缺血再灌注（IR）损伤的保护作用,以及取得最佳效果的预处理时间。方法通过建立大鼠脂肪肝模型,给予不同时间的IP（5-10、8-10、10-10、15-10 min）和IR（缺血30 min,再灌注30 min）,检测血清AST、ALT、LDH及NO水平,肝组织中MDA、SOD、MPO含量的变化和肝脏病理学变化。以脂肪肝未行IP组和正常肝脏未行IP组及正常肝脏行10-10 min IP作对照。结果 IR后,脂肪肝未行IP组血清肝功能的变化、肝组织病理学改变及炎性浸润程度显著重于正常肝脏未行IP组。在脂肪肝组中,5或8-10 min IP组血清学及肝组织MDA、MPO水平低于其余组和未行IP组,而其SOD水平显著升高（P〈0.05）。各IP组中的NO水平明显高于其对应的IR组（P〈0.05）。脂肪肝IP组中,5或8-10 min IP组血清NO水平明显高于其余组（P〈0.05）。结论脂肪变性加重肝脏IR损伤,IP对脂肪肝的IR损伤具有保护作用,本实验认为5～8 min缺血和10 min再灌注的IP方案可能是中重度脂肪肝时的最佳预处理方案。     

肝动脉血流延迟开放对大鼠肝移植胆道I/R损伤的影响

目的 探讨肝动脉血流延迟开放对大鼠肝移植胆道缺血/再灌注(I/R)损伤的影响.方法 将大鼠随机分为双重血流同时开放组(P组)、门静脉先开放组(N组)和假手术对照组(S组),供肝再灌注后检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、转肽酶(GGT)、碱性磷酸酶(AKP)、总胆红素(TBIL)及直接胆红素(DBIL)水平,比色法测定髓过氧化物酶(MPO)含量,RT-PCR法检测胆管组织TNF-α及ICAM-1 mRNA表达.结果 肝脏再灌注后24 h,P组ALT、AST、GGT、AKP、TBIL、DBIL水平及胆管损伤病理学评分均明显低于N组(P均<0.05);再灌注后6 h,N组大鼠肝组织MPO含量明显高于P组(P<0.05);再灌注后2、6 h,P组大鼠肝组织TNF-α及ICAM-1 mRNA水平均明显低于N组(P均<0.05).结论 肝动脉血流延迟开放可以加重肝移植物胆管组织的I/R损伤.     

血红素氧合酶对大鼠肝脏缺血再灌注损伤细胞凋亡及相关基因的影响

目的通过应用血红素氧合酶（HO）的诱导剂氯高血红素和抑制剂锌原卟啉（ZnPP），探讨HO对大鼠肝脏缺血再灌注（IR）细胞凋亡及其相关基因的影响。方法将96只Sprague—Dawley大鼠采用钳夹法制备肝脏IR模型，随机分为假手术组、IR组、氯高血红素组和ZnPP组，检测再灌注0、1．5、4h和8h各个时间点大鼠肝脏功能以及病理学改变，流式细胞法测定肝细胞凋亡率、TUNEL法观察再灌注后4h大鼠肝细胞的凋亡情况，Western blot法检测再灌注后8h Bcl-2和Caspase-3的表达。结果在IR组各时间点均可见ALT和AST增高，病理学检查可见肝细胞肿胀，肝窦变窄，嗜中性粒细胞浸润和片状坏死等变化，肝组织中细胞凋亡率明显升高，Bcl-2的表达减少，而Caspase-3的表达增加。在氯高血红素组再灌注后1．5、4h和8h ALT和AST值明显降低，肝脏病理学改善，凋亡细胞减少及细胞凋亡率降低，肝脏Bcl-2的表达增加，Caspase-3的表达减少。ZnPP组则显示与之相反的结果。结论HO在肝脏IR损伤中具有保护作用，这种保护作用可能与抑制细胞凋亡有关。     

乌司他丁联合缺血预处理对大鼠肝缺血再灌注损伤的影响

目的探讨乌司他丁(UTI)预处理和缺血预处理(IPC)联合应用对大鼠肝缺血再灌注损伤的影响及可能的作用机制。方法选择雄性SD大鼠50只,随机分为5组,分别为对照(sham)组、缺血再灌注(IR)组、IPC组、UTI组、UTI联合缺血预处理(UCI)组。术后采集下腔静脉血并取肝组织标本,检测血清AST、ALT、TNFɑ,肝组织髓过氧化物酶(MPO)、NF-κB、肝组织湿干比(W/D)及光镜观察肝组织病理形态学变化。计量资料组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果所检测的血清ALT、AST、TNFα水平和肝组织MPO、NF-κB、W/D值,IR组、IPC组、UTI组、UCI组均明显高于sham组(P值均<0.05),而IPC组、UTI组、UCI组均明显低于IR组(P值均<0.05),UTI组明显低于IPC组(P值均<0.05),UCI组明显低于IPC组、UTI组(P值均<0.05)。肝脏病理学检查示IR组、IPC组、UTI组、UCI组与sham组比较,肝组织损伤明显(P值均<0.05),而IPC组、UTI组、UCI组均比IR组肝组织损伤程度轻(P值均<0.05),UTI组肝组织损伤轻于IPC组(P值均<0.05),UCI组肝组织损伤轻于IPC组、UTI组(P值均<0.05)。结论 UTI和UCI对肝脏缺血再灌注损伤均有保护作用,二者联合应用时,明显增强了对肝脏缺血再灌注损伤的保护效应。其发生机制可能与抑制了NF-κB表达,减少TNFɑ、MPO的释放,减轻了肝脏的炎症反应有关。     

巨噬细胞极化在白藜芦醇抗大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨巨噬细胞极化在白藜芦醇(Res)抗肝脏缺血-再灌注损伤(HIRI)中的作用。方法 24只雄性SD大鼠随机分为假手术组(S组)、缺血-再灌注组(I/R组)、Res后处理组(Res组),每组8只。建立急性HIRI模型,于再灌注6 h后收集动物血液和肝脏标本。检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和碱性磷酸酶(AKP)及炎症因子白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-10、转化生长因子(TGF)-β的浓度,采用Real-time PCR法检测肝脏组织TNF-α及IL-10 mRNA的表达情况,采用流式细胞术分析肝脏M1、M2型巨噬细胞分布情况。结果 Res后处理可以降低肝脏功能学指标ALT、AST、AKP的血清浓度;与I/R组比较,Res组IL-10和TGF-β含量升高,而IL-6和TNF-α含量降低,同时IL-10 mRNA表达量升高而TNF-α表达量下降;流式细胞分析结果显示Res后处理可以降低M1型巨噬细胞的比例,使巨噬细胞向M2型转化。结论 Res对HIRI的保护是通过调节巨噬细胞极化发挥作用的。     

缺血后处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨缺血后处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。方法将75只SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和缺血后处理组,建立大鼠肝脏局部缺血再灌注模型。检测大鼠血清、肝组织丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）水平,并行肝组织病理学和超微结构检查及免疫组化法检测内源性一氧化氮合成酶（eNOS）的表达。结果与缺血再灌注组相比,缺血后处理组血清ALT和AST水平及肝组织MDA明显降低（P＜0．01）,而SOD水平则显著升高（P〈0．01）;肝组织病理损伤减轻,在再灌注7min时IPO组肝组织eNOS蛋白表达比IR组增强。结论缺血后处理可通过抑制再灌注后氧自由基的过量生成和再灌注损伤保护激酶通路,从而减轻肝细胞损伤。     

Toll样受体4在大鼠心肌缺血再灌注损伤中表达的实验研究

目的 观察心肌缺血再灌注早期Toll样受体4 mRNA(TLR4 mRNA)及蛋白表达,探讨TLR4在心肌缺血再灌注损伤中的作用.方法 雄性SD大鼠随机分为2组:假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(IR组),每组36只,建立大鼠心肌缺血再灌注模型,按照不同的再灌注时间(0、0.5、1、24和8 h)处死动物.光镜和电镜观察心肌组织形态及超微结构改变.免疫组化检测心肌TLR4蛋白表达情况.实时定量逆转录聚合酶链反应定量心肌TLR4 mRNA表达水平.酶联免疫吸附试验测定心肌中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量.结果 (1)Sham组心肌组织形态及超微结构改变不明显;IR组心肌损伤较重,缺血心肌恢复血液灌注8 h内,其病理学变化未见显著改善.(2)Sham组与IR组TLR4蛋白都有阳性表达,IR组TLR4表达增加,且以再灌注1 h最为明显(19.62±3.84,P＜0.01).(3)与Sham组比较,IR组心肌,TLR4 mRNA表达水平均出现不同程度上调,以再灌注1 h达到峰值[(4.03±0.85)×10-2,P＜0.01],而Sham组各时间点未见明显改变.(4)IR组心肌TNF-α水平高于各对应时间点Sham组(P均＜0.05),且心肌TLR4 mRNA表达与TNF-α呈正相关(r=0.728,P＜0.01).结论 心肌缺血再灌注早期,心肌TLR4表达迅速上调,TLR4的激活可能通过促进TNF-α等炎性因子的产生分泌增多来介导心肌缺血再灌注损伤.     

帕瑞昔布对老年肝癌患者右肝部分切除术中肝脏缺血再灌注损伤炎性介质变化的影响

目的探讨帕瑞昔布对老年肝癌患者右肝部分切除术中肝脏缺血再灌注损伤(HIRI)炎性介质的影响。方法择期行右肝部分切除术老年肝癌患者60例随机均分为对照组(C组)和帕瑞昔布组(P组)各30例。肝门阻断前60 min,P组静脉注射帕瑞昔布40 mg,C组注射生理盐水。于麻醉诱导前(T0)、肝门开放15 min(T1)、再灌注1 h(T2)、6 h(T3)、24 h(T4)5个时相点抽取静脉血检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6和IL-10浓度的变化。结果两组T0时ALT、AST、TNF-α、IL-6和IL-10水平差异无统计学意义(P>0.05);与T0比较,两组ALT、AST在T1、T2、T3、T4明显升高(P<0.05);P组在再灌注后各时点的ALT、AST水平均明显低于C组(P<0.05)。与T0比较,T1、T2、T3、T4时两组TNF-α、IL-6和IL-10水平明显升高(P<0.05)。与C组比较,T1、T2、T3、T4时P组TNF-α、IL-6水平明显降低(P<0.05),IL-10水平明显升高(P<0.05)。结论帕瑞昔布钠对老年肝癌患者右肝部分切除术中HIRI具有一定的保护作用。     

FK506抑制HMGB1的释放减轻肝移植大鼠肝脏缺血再灌注损伤

目的研究他克莫司(tacrolimus,FK506)预处理对自体原位肝移植(autologous orthotopic liver transplantation,AOLT)大鼠肝脏缺血再灌注(ischemia reperfusion,IR)损伤的作用.方法将32只成熟的♂SD大鼠随机分为4组:假手术组(S组)、AOLT组、AOLT+FK506低剂量处理组(L组)、AOLT+FK506高剂量处理组(H组).术后6 h取材,检测4组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)水平;观察肝组织病理学改变;测定高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGBl)的mRNA及蛋白表达情況.结果肝移植术后,L组和H组血清中的ALT、AST及炎症因子TNF-α、IL-6水平均显著低于AOLT组,但明显高于S组(P0.05).肝组织病理表明,AOLT组肝血窦淤血、肝细胞坏死及炎症细胞浸润程度较显著,而L组和H组较AOLT组明显减轻.L组和H组中HMGB1mRNA及蛋白表达水平显著低于AOLT组,但高于S组(P0.05).上述检测指标在L组和H组之间比较无显著差异.结论 FK506预处理可以显著降低AOLT大鼠肝脏HMGB1的表达,抑制炎症因子释放,减少细胞坏死,从而减轻肝脏IR损伤,保护移植肝脏.     

下调miR-122对非酒精性脂肪性肝炎小鼠的炎症发生及肝细胞凋亡的影响

目的探讨下调miR-122对非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis, NASH)小鼠的炎症发生及肝细胞凋亡的影响。方法 qRT-PCR检测各组小鼠肝组织中miR-122的表达情况;HE染色观察各组小鼠肝组织病理损伤情况;油红O染色观察各组小鼠肝组织脂肪堆积情况;ELISA检测各组小鼠血清中甘油三脂(TG)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)的表达情况;TUNEL荧光染色观察各组小鼠肝细胞凋亡情况;Western blotting检测各组小鼠肝组织中Bax、Bcl-2蛋白表达水平。结果 miR-122 mRNA的表达水平在MCD组和MCD+miR-NC组小鼠肝组织中表达水平上调(P均0.01),在MCD+miR-122 inhibitor组小鼠肝组织中表达水平下调(P0.001);MCD组和MCD+miR-NC组小鼠的肝脏出现中度至重度肝细胞空泡化和大量脂质滴(P均0.001),MCD+miR-122 inhibitor组小鼠的肝脏组织表现出轻度至中度的肝细胞空泡和脂质滴也减少(P0.05);MCD组和MCD+miR-NC组小鼠血清中TG、ALT、AST、TNF-α、IL-1β和IL-6表达水平上调(P均0.01),MCD+miR-122 inhibitor组小鼠血清中TG、ALT、AST、TNF-α、IL-1β和IL-6表达水平下调(P均0.05);MCD组和MCD+miR-NC组肝细胞凋亡指数升高(P均0.001),MCD+miR-122 inhibitor组肝细胞凋亡指数下降(P0.05);MCD组和MCD+miR-NC组小鼠肝组织中Bax蛋白表达水平上调(P0.01),Bcl-2蛋白表达下调(P均0.001),MCD+miR-122 inhibitor组小鼠肝组织中Bax蛋白表达水平下调(P0.05),Bcl-2蛋白表达上调(P0.05)。结论下调miR-122可抑制炎症的发生、抑制肝细胞凋亡,对NASH有一定的治疗作用。     

免疫因素在大鼠肺缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨免疫因素在大鼠肺缺血再灌注(I/R)损伤中的作用。方法选取90只健康雄性Wistar大鼠,随机分为3组,即为I/R组(左肺I/R组),Sham组(假手术组),C组(对照组),均于缺血30 min、再灌注60、120 min时采集标本,检测肺组织的湿/干重比(W/D),支气管肺泡灌洗液的蛋白总量(TP),白细胞数目(WBC),中性粒细胞(PMN)的百分比及肺组织匀浆肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-1、IL-6及IL-8含量。结果在各组的对应时间点,I/R组中再灌注60、120 min时,W/D比值、WBC、PMN比例及TP含量明显高于C组及Sham组(P<0.05);I/R组中再灌注120 min,W/D比值、WBC、PMN比例及TP含量明显高于I/R组中再灌注60 min(P<0.05);I/R组中缺血30 min,肺组织匀浆TNF-α含量明显高于C组及Sham组(P<0.05);I/R组中再灌注60 min及再灌注120 min时,肺组织匀浆TNF-α、IL-1、IL-6及IL-8含量明显高于C组及Sham组(P<0.05);I/R组中再灌注120 min时,肺组织匀浆TNF-α、IL-1、IL-6及IL-8含量明显高于I/R组再灌注60 min时(P<0.05)。结论免疫因素在大鼠肺I/R损伤发挥重要作用。     

神经型一氧化氮合酶在小鼠心肌缺血预处理中的作用

目的 应用神经型一氧化氮合酶(nNOS)基因敲除小鼠和nNOS抑制剂,探讨nNOS对心肌缺血预处理后心肌细胞凋亡的影响.方法 实验分为野生型缺血再灌注组(WT IR)、野生型缺血预处理组(WT IP)、野生型缺血预处理L-VNIO处理组(WT IP+ L-VNIO)、基因敲除鼠缺血再灌注组(KO IR)和基因敲除鼠缺血预处理组(KO IP).采用冠状动脉左前降支结扎法建立小鼠缺血再灌注损伤模型,缺血再灌注组缺血30 min再灌注3h,缺血预处理组分别经缺血5 min再灌注5 min连续三个循环后,再缺血30 min再灌注3h,观察TUNEL染色和Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3的活性变化,并用Western Blot法观察Bax、Bcl-2和Fas蛋白的表达情况.结果 与WT IR组相比,WT IP组小鼠TUNEL阳性细胞数目减少,Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3活性降低,Bax和Fas蛋白表达显著降低,Bcl-2表达显著增加(P＜0.05).而在KO IP组,与KO IR组相比,TUNEL阳性细胞数目和Caspase活性显著增加,Bax和Fas表达显著增高,Bcl-2表达显著降低(P＜0.05).结论 nNOS在心肌缺血预处理时发挥抑制心肌细胞凋亡的作用.     

消退素D1预处理对肝缺血再灌注损伤大鼠模型的保护作用及机制

目的探究消退素D1(RvD1)对肝缺血再灌注(IR)损伤大鼠模型的保护作用及与血红素氧合酶-1(HO-1)之间的关系。方法 Sprague-Dawley大鼠36只随机分为6组,分别为假手术(sham)+PBS组、sham+RvD1高剂量(10μg/kg)组、IR+PBS组、IR+RvD1(2μg/kg)低剂量组、IR+RvD1(5μg/kg)中剂量组和IR+RvD1(10μg/kg)高剂量组,每组6只。RvD1于缺血前1 h腹腔注射。生化仪测定ALT、AST水平,酶联免疫法检测血浆TNFα、IL-6、IL-8水平,HE染色观察肝组织学变化,Western Blot方法检测肝组织HO-1变化。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果与IR+PBS组相比,IR+RvD1中剂量组和IR+RvD1高剂量组大鼠ALT、AST水平以及炎症因子TNFα、IL-6、IL-8水平均明显降低(P值均0.05),且中、高剂量两组间比较差异均无统计学意义(P值均 0.05)。Western Blot结果显示IR+RvD1中剂量组和IR+RvD1高剂量组肝脏HO-1蛋白表达较IR+PBS组升高(P值均0.05)。HE染色观察肝组织学变化显示,与IR+PBS组相比,IR+RvD1中剂量组和IR+RvD1高剂量组细胞肿胀及肝索排列紊乱依然存在,但未见明显大片坏死区域。结论 RvD1可能通过增加肝脏HO-1表达,降低炎症因子(TNFα、IL-6、IL-8)和转氨酶(ALT、AST)水平,发挥对大鼠肝脏IR损伤的保护作用。