多烯紫杉醇抑制乳腺肿瘤细胞增殖及诱导凋亡的实验研究

近年来，多项国外研究表明，多烯紫杉醇(TXT)对晚期乳腺癌肿瘤和晚期非小细胞肺癌有效，但国内少有报道。2004年1月至2005年1月，我们对TXT抑制乳腺肿瘤细胞的生长和诱导凋亡进行了研究，以期为临床合理使用TXT治疗乳腺癌提供实验依据。     

吡柔比星对鼻咽癌CNE2细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨吡柔比星对鼻咽癌（NPC）CNE2细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养NPC细胞株CNE2,加入不同浓度的吡柔比星。用MTT法检测细胞增殖情况;用RT-PCR法检测NPC细胞株中X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）mRNA的表达情况。结果吡柔比星对NPC细胞的增殖有抑制作用,并诱导其发生凋亡,且呈明显的时效和量效关系,其作用随着浓度及时间的增加而增加;RT-PCR法检测显示XIAP mRNA表达下调。结论吡柔比星可抑制体外培养的NPC细胞株CNE2的增殖和诱导细胞凋亡,其作用与下调XIAP基因表达有关。     

β-榄香烯对肝星状细胞周期及凋亡的影响

肝纤维化是肝脏细胞外基质（EcM）异常生成和积累的结果，肝星状细胞（hepatic stellate cells，HSC）为肝纤维化形成的关键细胞。HSC在诸多因素（如细胞因子、生长因子、肝细胞、Kupffer细胞、内皮细胞等）的调控下，HSC持续激活导致胶原生成细胞增多，并最终引起ECM的大量沉积，同时在肝纤维化的逆转过程中，HSC的减少主要通过凋亡机制。因此HSC的激活增殖是各种原因引起肝纤维化形成的中心环节，阻抑激活的HSC增殖和诱导其凋亡是治疗慢性肝损伤和肝纤维化的重要策略。莪术为临床抗肝纤维化治疗的常用中药，不少研究显示该药具有抗肝纤维化、抑制ECM生成的作用。榄香烯为其有效成分，具有抗血栓形成、抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡的作用。榄香烯是否为莪术抗肝纤维化的有效成分尚少见报道，本实验采用传代的HSC系HSC-T6初步探讨β-榄香烯对HSC凋亡、增殖的影响。     

多烯紫杉醇联合AG490对前列腺癌DU-145细胞增殖凋亡的影响

目的 探讨多烯紫杉醇联合酪氨酸激酶(JAK)抑制剂AG490对前列腺癌DU-145细胞增殖凋亡的影响,并探讨其机制.方法 将培养后的对数生长期前列腺癌DU-145细胞随机分为紫杉醇组、AG490组、联合组及对照组.紫杉醇组、AG490组、联合组分别采用不同浓度的多烯紫杉醇、AG490及二者联合应用干预;对照组不干预.干预24、48 h后采用MTF法检测各组细胞生长抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;干预48 h采用免疫组化法检测各组Bcl-2表达.结果 紫杉醇、AG490及联合组细胞生长抑制率均明显高于对照组,呈时间和剂量依赖性;联合组明显高于紫杉醇组及AG490组,P均＜0.05.紫杉醇组与AG490组比较无统计学差异.各组细胞凋亡率比较亦呈现相同趋势.各干预组细胞Bcl-2蛋白表达均明显低于对照组,联合组Bcl-2蛋白表达明显低于紫杉醇组与AG490组(P均＜0.05).结论 多烯紫杉醇与AG490均可抑制DU-145细胞增殖,诱导其凋亡,呈剂量、时间依赖性;二者联合应用有协同作用,其作用可能与Bcl-2介导有关.     

抑制5-脂氧合酶表达对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 应用RNA干扰(RNAi)技术阻断5-脂氧合酶(5-LOX)的表达,观察其对人胰腺癌细胞SW1990增殖及凋亡的作用.方法 构建4个靶向5-LOX的小干扰RNA(small interference,siRNA)和1个阴性对照siRNA质粒表达载体,采用Lipofectamine TM2000法转染SWl990细胞,RT-PCR和Western blot检测RNAi后SWl990细胞的5-LOX mRNA和蛋白表达,MTT法检测细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 阴性对照和4个序列特异性的siRNA对SWl990细胞5-LOXmRNA表达的抑制率分别为(3.0±1.4)%、(18.8±1.5)%、(53.5±2.3)%、(56.1±2.0)%、(52.4±2.5)%;5-LOX蛋白表达抑制率分别为(4.5±2.0)%、(18.1±2.5)%、(50.4±4.3)%、(48.9±4.4)%、(45.9±4.0)%.转染24 h后癌细胞增殖抑制率分别为(2.1±1.0)%、(5.5±1.3)%、(11.9±1.2)%、(13.4±1.1)%、(13.8±1.3)%.;48 h的增殖抑制率分别为(3.0±1.3)%、(16.0±2.2)%、(25.7±2.5)%、(25.3±3.1)%、(27.2±3.2)%.转染24 h细胞凋亡率分别为(2.0±0.8)%、(5.3±1.0)%、(10.6±1.2)%、(12.4±1.0)%、(10.6±0.9)%;转染48 h的凋亡率分别为(3.0±1.0)%、(7.1±1.1)%、(17.5±0.9)%、(21.5±1.1)%、(15.7±1.0)%.结论 通过RNAi可以有效、特异地阻断SWl990细胞5-LOX的表达,并可以有效抑制肿瘤细胞的增殖,促进肿瘤细胞凋亡.     

Juglone对人鼻咽癌细胞株CNE-2Z细胞增殖及细胞周期的抑制作用

目的测定Pin1抑制剂(Juglone)对人鼻咽癌细胞株CNE-2Z细胞生长增殖及细胞周期的影响,讨论Ju-glone的抗鼻咽癌肿瘤的作用效果。方法体外培养人鼻咽癌CNE-2Z细胞,采用MTT实验观察细胞生长增殖状况,流式细胞仪检测细胞周期。结果 MTT测定结果显示,Juglone对人鼻咽癌细胞株CNE-2Z细胞生长有明显的抑制作用,并且随着时间的延长和作用浓度的升高,其抑制作用也逐渐增强;流式细胞仪分析检测结果显示,加入Juglone培养24 h后造成CNE-2Z细胞G1期阻滞,48 h后,CNE-2Z细胞G2/M期阻滞(P<0.01)。结论 Juglone有抑制鼻咽癌细胞增殖和细胞周期阻滞的作用,有望为鼻咽癌防治提供候选药物。     

miR-363-5p抑制BRD4表达对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨miR-363-5p对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响及可能的分子机制.方法 通过qRT-PCR技术检测人正常鼻咽上皮细胞NP-69和4株不同鼻咽癌细胞(5-8F、CNE1、CNE2Z和C666-1)中的miR-363-5p.将miR-363-5p mimics转染至5-8F细胞,qRT-PCR检测转染效果,MTT...     

大蒜素对人肺癌H460细胞增殖及凋亡的影响

目的观察大蒜素对人肺癌H460细胞增殖及凋亡的影响。方法将体外培养的人肺癌H460细胞与不同浓度的大蒜素共育,采用MTT法测算H460细胞增殖率,采用流式细胞仪检测H460细胞凋亡率。结果随着大蒜素浓度增大、作用时间延长,H460细胞的增殖率逐渐降低,呈剂量、时间依赖性（P均〈0.05）;随着大蒜素浓度增大,H460细胞凋亡率逐渐升高,呈一定剂量依赖性（P〈0.05）。结论大蒜素能够抑制人肺癌H460细胞的增殖,并诱导其凋亡。     

20(S)-人参皂苷Rg3对结肠癌干细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨20(S)-人参皂苷Rg3[Rg3 (S)]抑制结肠癌干细胞增殖及诱导凋亡的作用.方法 利用免疫磁珠法筛选结肠癌干细胞;用CCK-8法检测Rg3 (S)对结肠癌干细胞增殖的影响,利用分光光度法检测凋亡酶Caspase-9及Caspase-3的表达.结果 Rg3(S)作用24 h后,抑制结肠癌干细胞的增殖,48 h时达最大抑制率;Rg3(S)浓度为640 μg/ml时抑制率最高;在640 μg/ml Rg3(S)的作用下,结肠癌干细胞中Caspase-9及Caspase-3的活力分别升高至阴性对照组的7倍和9倍;结论 Rg3(S)能够抑制结肠癌干细胞的增殖,通过Caspase-9及Caspase-3途径诱导结肠癌干细胞发生凋亡.     

异常表达的miRNA对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

下调miR-221改变细胞周期,增加G0/G1期细胞,减少S期细胞,但对细胞活性无明显影响;miR-221和miR-21共同下调后,细胞活力则明显下降.其他miR转染对细胞生长和凋亡的影响不明显.结论 部分在胰腺癌中异常表达的miRNA对胰腺癌细胞的生长有一定影响,选用一定组合的联合转染,对细胞生长和凋亡的影响比单独转染时加强.     

白藜芦醇对人乳腺癌MX-1细胞增殖的影响

目的观察白藜芦醇（Res）对人乳腺癌MX-1细胞增殖的影响。方法用0.15-500μM Res处理增殖期的MX-1细胞,5 d后检测各组细胞增殖率和细胞生长状态,计算Res半数生长抑制浓度（IC50）和杀伤浓度。对各组细胞进行Hochest染色,检测凋亡细胞。结果 0.15-500μM Res处理后各组细胞增殖率均低于空白对照组（P均〈0.01）。Res对MX-1的IC50为10.27μM,杀伤浓度为27.13μM。50-500μM Res处理的MX-1细胞皱缩,并出现凋亡。结论 0.15-500μM Res对MX-1细胞增殖有抑制作用。     

γ-氨基丁酸对胰腺癌细胞增殖及转移作用的实验研究

目的 观察γ-氨基丁酸(GABA)对胰腺癌SW1990细胞增殖、细胞周期及基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9表达的影响.方法 应用不同浓度(0～320 μmol/L)GABA干预SW1990细胞,采用MTT法和流式细胞仪检测细胞增殖和细胞周期.RT-PCR检测细胞MMP-2 mRNA和MMP-9 mRNA的表达,Western blot检测MMP-2和MMP-9蛋白表达.结果 GABA促进胰腺癌SW1990细胞的生长,使G0/G1细胞减少,S期和G2/M细胞增多.320μmol/L的GABA干预细胞后的A570值为1.11±0.03,较无GABA干预组的0.56±0.01显著增加(P<0.01);G0/G1细胞为(46.18±1.12)%,较无GABA干预组的(87.29±1.34)%显著减少(P<0.01);MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA及蛋白表达分别为8.6、6.8、10.5、8.4,较0～40μmol/L组显著增加(P<0.05).结论 GABA能促进SW1990细胞增殖和MMPs的表达.     

原花青素对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨原花青素对人雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3细胞（PC-3细胞）增殖和凋亡的影响。方法体外培养的PC-3细胞与100、200、300μg／ml的原花青素共孵育,分别在24、48和72h时采用HE染色观察细胞形态学变化,噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术（FCM）分析细胞凋亡情况。结果原花青素可引起PC-3细胞形态明显改变;抑制PC-3细胞增殖,不同浓度（100、200、300μg／ml）原花青素对PC-3细胞作用72h时的细胞增殖抑制率分别为25．2％、70．9％和85．2％;FCM检测表明原花青素可诱导PC-3细胞凋亡,300μg／ml原花青素处理7Zh引起36．3％的凋亡率。这3种作用均随原花青素浓度和作用时间的延长而增强。结论原花青素可在体外抑制前列腺癌PC-3细胞增殖,并促进其凋亡。     

薏苡仁酯对5-氟脲嘧啶抑制人鼻咽癌细胞增殖的增效作用

目的:探讨薏苡仁酯(coixenolide,CXL)对5-氟脲嘧啶(5-Fu)抑制人鼻咽癌细胞CNE-2Z增殖的影响。方法:采用微量细胞克隆形成法检测CNG-2Z的药物敏感性。结果:5-Fu呈剂量依赖性抑制CNE-2Z的增殖,ID50=10-5.462mol/L。加入CXL10-7、10-6mol/L均可使5-Fu的量效曲线左移,ID50降至10-5.756mol/L和10-6.116mol/L。CXL还能使5-Fu的时效曲线左移,缩短该药的作用时间。未发现CXL能增强5-Fu的骨髓毒性作用。结论:CXL对5-Fu杀伤细胞具有选择性的增效作用。     

阻断泛素-蛋白酶体通路对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的　研究阻断泛素 蛋白酶体通路对胃癌细胞增殖的抑制作用及其机制。方法　将泛素 蛋白酶体通路特异性阻断剂MG 132加入胃癌细胞株SGC 790 1,四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法测定细胞抑制效应 ,流式细胞仪 (FCM )检测细胞周期及凋亡 ,DNA片段分析进一步证实凋亡的存在 ,TRAPPCR ELISA法检测端粒酶活性 ,免疫细胞化学检测 p2 7kip1的表达。 结果　MG 132对SGC 790 1细胞有显著抑制作用 ;FCM显示对照组胃癌细胞G0 /G1期比例为 (46 .3± 4 .1) % ,MG 132作用后为 (72 .1± 5 .0 ) % ,较对照组增加 (P <0 .0 1) ,并有明显的亚二倍体凋亡峰 ;细胞DNA抽提电泳后发现特征性凋亡梯状条带 ,TRAPPCR ELISA法检测示MG 132作用胃癌细胞 2 4、4 8、72、96h时A值分别为 0 .197± 0 .0 0 7、0 .0 81± 0 .0 0 5、0 .0 74± 0 .0 0 4、0 .0 6 3± 0 .0 0 2 ,对照组A值分别为 1.80 1± 0 .0 4 8、1.887± 0 .0 72、2 .0 4 7± 0 .0 85、2 .131± 0 .0 76 ;端粒酶活性显著受抑制 (P <0 .0 1) ;p2 7kip1在胃癌细胞中为胞质表达 ,经MG 132作用后 ,胞质、胞核均有表达。结论　MG 132能显著抑制胃癌细胞株SGC 790 1的增殖、诱导其凋亡 ,其机制是增强 p2 7kip1表达 ,使细胞产生G1期阻滞 ,并抑制端粒酶活性。     

氯丙嗪协同榄香烯对Hep-2细胞增殖的抑制作用

目的 体外观察盐酸氯丙嗪与榄香烯联合应用对人喉癌细胞株Hep-2细胞的增殖抑制率及对细胞周期进程各时相的影响.方法 应用 MTT(噻唑蓝)比色法和流式细胞术检测单纯榄香烯制剂及榄香烯联合氯丙嗪制剂对Hep-2细胞的增殖抑制作用.结果 单纯榄香烯组Hep-2细胞增殖抑制率随着药物浓度的增加而升高,而榄香烯联合氯丙嗪组明显高于单纯用药组,且Hep-2细胞周期进程发生明显改变,细胞凋亡率升高.结论 在一定浓度范围内盐酸氯丙嗪能够增强榄香烯对Hep-2细胞的增殖抑制率及细胞周期进程各时相变化和凋亡率,有明显的协同作用.     

β-榄香烯对肝星状细胞凋亡相关蛋白Bcl-2家族的影响

[目的]研究β-榄香烯对肝星状细胞(HSC)凋亡及凋亡相关蛋白的影响。[方法]传代培养的大鼠HSC系HSC-T6与不同剂量β-榄香烯(终浓度为10、5、2.5 mg/L)共同培养48 h后,应用Annexin-V-碘化丙锭染色检测β-榄香烯对HSC凋亡的影响,免疫组化检测凋亡相关蛋白BcL-2/Bax。[结果]β-榄香烯可使HSC凋亡率明显增多,同时可使凋亡抑制分子Bcl-2表达下调,促凋亡分子Bax表达增强(P<0.01)。[结论]β-榄香烯可通过下调Bcl-2/Bax比率,促进HSC凋亡。     

细胞增殖和凋亡与肝癌浸润转移的相关性

肿瘤的发生发展不仅与肿瘤细胞的增殖而且与其凋亡(ａｐｏｐｔｏｓｉｓ)有着密切的联系[1] 。本文利用ＤＮＡ末端标记法(ＩＳＥＬ)、光镜、电镜和免疫组化法分别对肝癌 (ＨＣＣ)凋亡和增殖细胞核抗原 (ＰＣＮＡ)进行原位观察和比较 ,并结合计算机图像技术定量分析 ,与ＨＣＣ各生物学参数对比 ,以探讨细胞增殖和凋亡在ＨＣＣ浸润和肝内转移过程中的可能机制。一、材料与方法1.病例资料 :近期手术切除且病理证实的ＨＣＣ标本 5 5例 ,男 4 6例 ,女 9例 ,年龄为 2 5～ 74岁 ,中位年龄 4 9.7岁。所有患者术前均未接受化疗、放疗或免疫治疗。ＨＣ…     

5-氟尿嘧啶对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及其机制探讨

目的 观察5-氟尿嘧啶（5-FU）对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响,并探讨其可能的机制.方法 将对数生长期的MCF-7细胞随机分为观察组和对照组,观察组分别加入终质量浓度为20、10、1、0.1μg/mL的5-FU,对照组加入100 mL的RPMI-1640完全培养液.培养24、48、72 h后,采用MTT法测定MCF-7细胞的吸光度并计算细胞抑制率,显微镜下观察细胞形态变化,流式细胞术检测细胞周期,Western blot法检测Bcl-2、Bax蛋白.结果 与对照组比较,随着5-FU浓度增加以及用药时间的延长,细胞增殖抑制率逐渐增加（P均＜0.05）;细胞数量逐渐减少,凋亡现象更加明显;G1期细胞比例明显升高、S期细胞比例逐步降低（P均＜0.05）,但G2期细胞比例变化不明显;Bax蛋白相对表达量逐渐增加,Bcl-2蛋白相对表达量逐步减少（P均＜0.05）.结论 5-FU对人乳腺癌MCF-7细胞增殖有明显的抑制作用,并呈现时间和剂量依赖性;该作用与其促进细胞凋亡,上调Bax蛋白、下调Bcl-2蛋白表达有关.