重组人碱性成纤维细胞生长因子在大豆毛状根中的表达

目的 利用基因重组技术在大豆毛状根中表达hbFGF.方法 将hbFGF基因克隆到pCambia1301载体,以大豆子叶节和下胚轴为外植体,通过发根农杆菌C58C1介导转入到大豆中.经潮霉素抗性筛选,PCR法检测hbFGF基因的整合.用Western blot印迹分析hbFGF的表达.结果 阳性毛状根中整合并表达了hbFGF基因.结论 克隆hbFGF基因并转染到大豆的毛状根中,在毛状根中表达.     

胸腺素α1治疗病毒性肝炎的研究进展

胸腺素α1（日达仙）是一种人工合成的多肽类免疫调节剂，具有多种生物学活性，单独或联合应用治疗病毒性肝炎具有良好的效果，且适应证广泛、副作用极少、无禁忌症，可用于嗜肝病毒感染所致的慢性肝炎、肝硬化和急性肝衰竭等，获得的病毒学应答具有持续性，停药后仍具有延迟的抗病毒效应，与其他抗病毒药物联合应用可提高应答率。     

胸腺素α1抗体的制备及其效价测定

目的制备用于检测胸腺素α1基因工程表达产物的特异性抗体。方法以提纯的胸腺素α1与牛血清白蛋白偶联后作为抗原,皮下多点注射免疫大鼠。经过3个月的免疫,获得抗胸腺素α1的多克隆抗体。结果用间接酶联免疫吸附(ELISA)方法,测定抗体效价超过5,000,显示该抗体能与胸腺素α1抗原特异性地产生明显免疫反应。结论采用本法制备的抗体具有很好的灵敏性和特异性。为胸腺素α1的分离纯化及大规模生产,从而为进一步满足临床需要奠定了基础。     

α-干扰素联合胸腺素α1治疗慢性乙型肝炎疗效分析

目的探讨干扰素联合胸腺素α1治疗乙型肝炎的疗效。方法选择115例慢性乙型肝炎患者,干扰素治疗组55例,联合治疗组30例,对照组30例。α-干扰素300万单位肌肉注射,隔日一次,胸腺素α1 1.6mg皮下注射,每周2次,观察肝功能、HBV DNA及血清病毒指标。结果治疗结束时,单用干扰素治疗的慢性乙型肝炎患者HBeAg阴转率为41.8%,而联合胸腺素-α1者为50%;HBV DNA阴转32.9%,而联合用药组为78%;HBeAb阳转为18%,后者为25%。结论胸腺素α1联合干扰素治疗疗效好于单用干扰素治疗。     

胸腺素-α1联合干扰素-α治疗181例慢性乙型肝炎的临床观察

目的探讨胸腺素联合干扰素-α1b(IFN-α1b)治疗慢性乙型肝炎(CHB)的临床疗效。方法181例CHB患者被随机分为胸腺素联合IFN-α1b组(A组)60例、IFN-α1b组(B组)58例和非抗病毒组(C组)63例。A组给予胸腺素1.6mg皮下注射,每周2次,连续24周,干扰素-α1b5MU,肌肉注射,每日一次,连续2周后,改为隔日1次,连续22周;B组给予干扰素-α1b,方法同A组;C组只给予护肝治疗。治疗结束和随访24周时观察分析疗效。结果治疗结束时,A、B、C三组ALT复常率分别为81.7%、77.6%、74.6%,随访结束时,分别为78.3%、62.1%、50.8%,治疗结束时,HBVDNA阴转率分别为65.0%、43.1%、4.8%,随访结束时分别为61.7%、32.7%、3.2%;治疗结束时,HBeAg阴转率分别为63.3%、36.2%、3.2%,随访24周时分别为60.0%、29.3%、1.6%。结论胸腺素联合IFN-α1b治疗CHB疗效优于单用IFN-α1b。     

自体CIK细胞联合胸腺素α1治疗消化系统统恶性肿瘤疗效观察

目的观察细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）联合胸腺素α1治疗消化系统恶性肿瘤的疗效。方法50例消化系统肿瘤患者均给予自体CIK细胞及胸腺素α1治疗。结果本组治疗后,死亡6例,其余患者血清CD3、CD4、CD8、CD56水平较治疗前明显升高（P均〈0.01）,而肿瘤标志物AFP、CEA、CA19-9水平均明显下降（P均〈0.01）;治疗后腹胀、腹痛缓解42例,睡眠改善36例,食欲好转、体质量增加28例。结论自体CIK细胞联合胸腺素α1治疗消化系统恶性肿瘤安全、有效。     

拉米夫定联合胸腺素α1治疗乙型重型肝炎的临床观察

目的观察拉米夫定联合胸腺素α1治疗乙型重型肝炎的疗效。方法选择乙型重型肝炎患者88例，治疗组44例用拉米夫定联合胸腺素α1治疗，对照组44例不作任何抗病毒及免疫调节剂治疗，两组均常规使用护肝、对症治疗。结果治疗组生存率为81．82％，与对照组生存率54．55％比较，经统计学处理有显著性差异（P〈0．01）。结论拉米夫定联合胸腺素α1治疗乙型重型肝炎可明显降低死亡率，提高生存率．改善预后，值得临床进一步研究。     

HBV基因B型对胸腺素α1治疗的应答好于基因C型

一些研究已报道了HBV基因型与干扰素治疗的应答有关。然而HBV基因型与胸腺紊1（T-α1）疗效之间的关系尚不清楚。研究人员回顾性地检测了用T-α1治疗的病人的HBV基因型、前核心及核心启动子突变株，并且分析了完全应答（ALT正常及HBeAg和HBV—DNA的血清清除）和HBV基因型之间的关系。研究对象为98例慢性乙肝患被随机分为三组，（i）T6组（n=32）给予T-α1每周两次，[第一段]     

重组人干扰素α-1b联合利巴韦林治疗慢性丙型肝炎疗效观察

目前公认的治疗慢性丙型病毒性肝炎(CHC)的标准治疗方案是聚乙二醇干扰素联合利巴韦林[1].我们应用重组人干扰素(IFN)α-1b联合利巴韦林治疗慢性丙型病毒性肝炎48周,并观察丙型肝炎病毒(HCV)-RNA转阴率及不良反应.     

布地奈德联合重组人干扰素α1b雾化吸入治疗儿童病毒性肺炎临床疗效分析

目的:探究布地奈德联合重组人干扰素α1b雾化吸入治疗儿童病毒性肺炎临床疗效.方法:抽选我院近一年来收治的90例病毒性肺炎患儿作为研究对象,将其等分为对照组和实验组,对照组采用布地奈德治疗,实验组在此基础上引入重组人干扰素α1b雾化吸入治疗,对比两组患儿的临床疗效、血清炎症因子指标、肺功能指标及临床症状消失时间.结果:实...     

重组人干扰素α1b雾化吸入在急性毛细支气管炎患儿中的应用价值分析

目的观察重组人干扰素α1b雾化吸入治疗儿童急性毛细支气管炎的临床疗效。方法选取我院收治的急性毛细支气管炎患儿共127例,随机分为对照组(N=63)与观察组(N=64),两组患儿均接受急性毛细支气管炎相关治疗包括止咳、平喘、抗感染等措施。对照组患儿接受常规治疗,观察组患儿在常规治疗基础上给予重组人干扰素α1b雾化吸入治疗。比较两组治疗后主要及次要疗效指标消失时间、治疗效果等相关指标。结果观察组患儿主要及次要疗效指标如喘息、三凹征等消失时间均明显短于对照组,P0.05。观察组患儿治疗总有效率为87.3%,明显高于对照组总有效率69.4%,P0.05。观察组患儿早期(病程72h)治疗后疗效指标总改善率高于晚期(病程≥72h)治疗患儿,P0.05。且观察组呼吸道合胞病毒(RSV)阳性的患儿治疗疗效指标总改善率高于RSV阴性患儿,P0.05。结论雾化吸入重组人干扰素α1b可以减轻儿童急性毛细支气管炎的临床症状、体征,缩短病程,对早期RSV阳性患儿治疗效果较好。     

重组人干扰素α-1b联合氦氖激光治疗带状疱疹患者8例

由于老年人往往免疫力相对较差,发生带状疱疹时临床症状常较重,且容易后遗神经痛(PHN),有报道老年患者PHN发生率高达50%～75%[1].常规的治疗方法为抗病毒及对症治疗等,由于老年人大多体质较弱,基础疾病多,有些患者不方便或不适合应用常规抗病毒药物.我科采用重组人干扰素α-1b(IFN-α-1b)联合氦氖激光治疗带状疱疹82例,取得了较满意的疗效,现报道如下.     

腺相关病毒介导人α1干扰素基因在淋巴细胞中表达的研究

为了探讨人α1干扰素基因和腺相关病毒重组体pWP8A—hIFNα1在淋巴细胞中表达的情况，将pWP8A-hIFNα1以磷酸钙转染法转入淋巴细胞，于转染后24小时、48小时、72小时和1周分别提取细胞总DNA、RNA和蛋白质；经PCR、Southern blot，逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测该重组体在淋巴细胞中表达人α1干扰素情况。结果显示，pWP8A-hIFNα1转染淋巴细胞后24小时检测到细胞内含人α1干扰素mRNA和蛋白质，并持续表达1周以上。表明由腺相关病毒介导的人α1干扰素基因可在淋巴细胞中表达。     

慢病毒介导的重组人α1-抗胰蛋白酶在小鼠体内的表达

目的:构建重组人α1-抗胰蛋白酶(hAAT)因子的慢病毒表达载体,并通过体外细胞水平和小鼠体内分析其表达情况.方法:通过RT-PCR的方法扩增出hAAT基因的编码序列,并构建重组慢病毒质粒;经体外包装后,感染鼠成纤维细胞及注射小鼠.荧光显微镜下观察GFP的表达情况,同时对收获的细胞及感染小鼠的肝脏或血浆进行Western blot、ELISA检测.结果:获得重组hAAT因子的慢病毒表达质粒pLVX-ser;包装后得到8×106TU/mL滴度的慢病毒颗粒.通过荧光显微镜下观察,显示重组hAAT因子在成纤维细胞中正常表达;对小鼠尾静脉注射病毒之后,进行hAAT因子检测,Western blot结果说明hAAT因子在小鼠体内成功表达;通过ELISA检测发现hAAT在小鼠体内的表达平均达190g/L左右,而且在慢病毒的介导下hAAT在小鼠中的表达可持续3mo以上.结论:重组慢病毒载体可高效、持续表达hAAT因子,为通过基因工程生产重组hAAT因子以及为α1-AT缺乏症的基因治疗奠定基础.     

细粒棘球绦虫重组质粒pBI-Eg95-EgA31在根癌农杆菌LBA4404中的表达效率研究

目的分析细粒棘球绦虫重组质粒pBI-Eg95-EgA31在根癌农杆菌LBA4404株中的表达效率。方法用IPTG诱导根癌农杆菌0、1、3、5、7、9、11和13h,用SDS-PAGE和Western blot鉴定所表达的蛋白质。结果表达产物分子质量单位约为37.5ku,且能被感染细粒棘球蚴的鼠血清特异识别,表达蛋白约占LBA4404菌体总蛋白的20%。结论细粒棘球绦虫重组质粒pBI-Eg95-EgA31能在LBA4404中表达,为进一步构建细粒棘球绦虫转基因植物疫苗奠定了基础。     

人胸苷激酶基因在大肠杆菌中的表达

目的　在大肠杆菌中表达人胸苷激酶 (hTK)。方法　用内切酶将hTKTA克隆中的hTK基因切下 ,并与同样内切酶切的载体PET2 8a 连接 ,转化大肠杆菌 ,筛选阳性克隆 ,酶切和DNA序列分析鉴定 ,用IPTG诱导培养阳性克隆 ;SDS -PAGE鉴定hTK在大肠杆菌中的表达。结论　hTK基因重组入PET2 8a 的EcoRI和XhoI位点 ,IPTG可以明显诱导hTK在大肠杆菌中表达。     

射频消融术治疗原发性肝癌患者接受胸腺素α1维持治疗临床价值探讨*

目的 探讨在射频消融术(RFA)治疗原发性肝癌(PLC)后应用胸腺素α₁维持治疗的意义。方法 在75例单发小于5 cm的PLC患者,在超声引导下行经皮RFA治疗,术后部分患者继续应用胸腺素α₁ 治疗3个月。采用ELISA法检测血清细胞因子水平。随访36个月,观察无复发生存率(RFS)的差异。结果 治疗后,35例联合组一次性治疗达到完全应答率为80.0%,40例RFA治疗组为82.5%,经补救治疗,两组均达到100.0%完全应答;在术后3月末,两组外周血T细胞亚群变化无统计学差异,但联合治疗组血清IL-2和IFN-γ水平分别为34.5(26.7,39.6)ng/L和77.2(74.4,82.7)ng/L,显著高于RFA治疗组【分别为26.8(22.3,28.4)ng/L和64.6(59.7,75.9)ng/L,P<0.05】;联合组中位RFS为26个月,RFA治疗组为23个月,差异无统计学意义;联合组1 a、2 a和3 a RFS分别为62.9%、28.6%和5.7%,而单行RFA治疗组分别为55.0%、17.5%(P＜0.05)和0.0%,提示在RFA术后应用胸腺素α₁治疗有一定的效果;多因素分析显示是否应用胸腺素α₁治疗、病灶大于3 cm、特殊部位的病灶和治疗后是否获得CR等影响RFA治疗后患者的预后。结论 在RFA治疗PLC患者后应用胸腺素α₁维持治疗可能能进一步提升治疗效果,可能与提高了机体抗肿瘤细胞免疫功能有关,值得进一步观察。     

人重组谷氨酸脱羧酶65基因的克隆表达及其在1型糖尿病诊断中的初步应用

目的 构建人重组谷氨酸脱羧酶65(GAD65)基因不同区段原核表达载体,诱导表达获得重组蛋白,并初步验证GAD65不同抗原区段在1型糖尿病GAD自身抗体检测中的价值.方法 应用巢式逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术调取目的 基因,构建相应的原核表达质粒,转化大肠杆菌E.coli HB101,诱导表达获得纯化重组蛋白,用重组蛋白作为包被抗原,初步建立检测GAD自身抗体的酶联免疫吸附测定法(ELISA)方法,评价各片段在1型糖尿病诊断中的价值.结果 获得了4种可被1型糖尿病患者血清识别的重组人GAD抗原区段,其中GAD65(180-585)抗原区段具有很好的特异性,检出率为55.3%,是首选的抗原区段.结论 所选重组人GAD65(180-585)抗原区段具有良好的抗原性,可作为1型糖尿病患者辅助诊断试剂的候选抗原.     

人QKI6基因重组腺病毒载体的构建及其在心肌细胞中的表达鉴定

目的:构建人RNA结合蛋白（QKI6）基因的重组腺病毒载体,并在心肌细胞中表达。方法:利用PCR技术,从原始质粒中扩增出QKI6目的基因片段,酶切后连接到pShuttle-GFP-CMV重组穿梭质粒上。再将pShuttle-GFP-QKI6 转移到pAdxsi载体上,得到带有QKI6目的基因及GFP荧光指针的重组腺病毒载体pAdxsi-GFP-QKI6。酶切、PCR鉴定重组腺病毒载体pAdxsi-GFP-QKI6,并完成扩增与纯化。经Pacl线性化后,转染HEK 293细胞进行腺病毒包装,并测定病毒的滴度及目的基因的表达。以包装好的重组腺病毒感染大鼠新生心肌细胞,通过GFP表达观察病毒感染效率。用PCR检测目的基因QKI6在感染的心肌细胞中的表达。结果:含QKI6基因及GFP荧光指针的重组腺病毒载体pAdxsi-GFP-QKI6构建成功,酶切、PCR鉴定及DNA测序证实了其正确性。重组腺病毒可重复感染HEK 293细胞,荧光显微镜下可见GFP表达,且QKI6基因的表达明显升高。包装的重组腺病毒可有效感染新生心肌细胞,并表达目的基因QKI6。结论:成功地构建QKI6基因重组腺病毒载体,以其感染293细胞及新生心肌细胞后,可有效地表达QKI6基因,为进一步研究QKI6基因在糖尿病心肌细胞凋亡的机制以及在糖尿病性心肌病治疗中的应用奠定实验基础。     

HIF-1α基因RNA干扰质粒在胃癌细胞中的构建与鉴定

目的:构建转录因子HIF-1α表达的RNA干扰(RNA interference,RNAi)质粒,为研究HIF-1α参与的细胞信号通路及以HIF-1α为靶点的基因治疗提供稳定转染细胞的RNAi.方法:选取HIF-1α基因的19nt特异性序列,设计针对HIF-1α的shRNA序列,应用基因重组技术克隆到pSilencer1.0-U6表达载体中,利用EcoRⅠ和ApaⅠ双酶切和DNA测序鉴定重组克隆.低氧条件下,将包含HIF-1α基因RNAi序列的重组载体转染人胃癌细胞SGC-7901,转染48h后,收集细胞裂解液,Western blotting分析低氧条件下对照组与转染组HIF-1α蛋白的表达水平.结果:双酶切证实shRNA插入pSilencer1.0-U6质粒,DNA测序证实插入的序列正确;HIF-1α基因RNAi质粒转染胃癌细胞SGC-7901成功;Western blotting结果显示与空质粒对照组比转染组细胞HIF-1α表达下调.结论:成功构建人HIF-1α基因RNAi质粒,为研究HIF-1α参与的细胞信号通路提供了稳定转染细胞的干扰质粒.同时,阻断HIF-1α的信号通路将为肿瘤基因治疗提供一个较好的靶点,研究结果为以HIF-1α为靶向的基因治疗提供了有利工具.