放线菌素D诱导胃腺癌细胞凋亡中热休克蛋白的作用

目的探讨热休克蛋白(HSP)在放线菌素D(Act-D)诱导胃腺癌BGC823细胞凋亡中的作用及HSP抗凋亡机制。方法体外培养的胃腺癌BGC823细胞于RPMI1640、10%胎牛血清、5%CO2孵育,取指数生长期细胞1×105/ml接种反应板24h,分为非热休克组(NHS)和热休克组(HS),两组分别由不同浓度(0,5,10,20μg/ml)Act-D诱导,作用4h。采用脱氧核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)和3H-胸腺嘧啶脱氧核苷(3H-TdR)掺入试验检测肿瘤细胞凋亡指数(AI)及DNA合成情况。结果 HS组比NHS组凋亡指数明显下降(P0.01);cpm值明显升高(P0.01),呈现剂量依赖效应。结论热休克反应对胃腺癌BGC823细胞经Act-D诱导凋亡具有抑制作用,与Act-D呈剂量依赖效应。     

5-羟色胺通过上调2B受体抑制放线菌素D诱导肝细胞凋亡初步实验研究

目的探讨5-羟色胺(5-HT)在肝细胞凋亡中的作用及机制。方法以不同浓度梯度放线菌素D(AcD)分别诱导HepG2和7702细胞凋亡,采用AnnexinV-FITC/PI流式细胞术和TUNEL方法检测细胞凋亡,MTT法检测细胞存活率。AcD预处理HepG2细胞后分别加入5-HT、5-HT 2A受体激动剂DOI、5-HT 2B受体激动剂M110、5-HT 2B受体拮抗剂SB204+5-HT,AnnexinV-FITC/PI流式细胞术和MTT法分别检测细胞凋亡率和存活率,蛋白质印迹法检测蛋白水解酶3(caspase3)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT)及磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)的表达。结果 AcD以浓度依赖性方式分别诱导HepG2细胞和7702细胞的凋亡,50 ng/mL AcD处理两种细胞凋亡率均高于无血清对照组(HePG2细胞t=1.71,7702细胞t=1.98,均P0.05),与单用AcD组相比,5-HT使HepG2细胞凋亡率从31.96%±2.13%降至10.24%±2.59%(t=1.62,P0.05),5-HT 2B受体激动剂使其降至8.41%±0.96%(t=1.75,P0.05),反之,5-HT 2B受体拮抗剂能拮抗5-HT的抗凋亡作用,其凋亡率为25.92%±1.33%(t=1.45,P0.05)。5-HT及5-HT 2B受体激动剂均能够减少caspase3活化,增加AKT的磷酸化,使细胞凋亡减少。结论 5-HT通过上调5-HT 2B受体促进AKT磷酸化,从而抑制AcD诱导的肝细胞凋亡。     

RGD活性肽对环磷酰胺诱导HL7702正常肝细胞损伤的保护作用

目的 探讨含RGD序列的抗肿瘤多肽T30肽对环磷酰胺诱导HL7702细胞凋亡的保护作用.方法 将HL7702细胞按一定密度分别接种于96孔板和24孔板,培养24h后向各孔中分别加入环磷酰胺(CTX)(浓度为4μg/ml),CTX+ RGD-T30(浓度依次为20、40、60 μg/ml),继续培养24 h,进行WST-1、AO/EB双染、Annexin-V-FTTC/PI流式细胞染色.结果 RGD-T30肽与CTX共处理HL7702细胞生长抑制明显改善,当RDG-T30肽浓度达到40μg/ml时,促进生长作用呈现正比例曲线特征.RDG-T30肽组凋亡细胞明显减少,绝大多数细胞形态饱满,几乎没有死亡细胞.CTX单独处理的HL7702细胞组24h晚期凋亡细胞占30.2％,CTX与RDG-T30共处理细胞组凋亡细胞分别占19.2％和13.1％、7.1％.结论 T30肽对CTX诱导的HL7702凋亡具有拮抗作用.     

内毒素诱导肝细胞凋亡及肝细胞生长因子的抑制作用观察

目的观察内毒素(LPS)诱导肝细胞凋亡的作用及肝细胞生长因子(HGF)对LPS的拮抗作用。方法HepG2细胞传代培养24 h,分三组。对照组加原培养液,LPS组加含LPS(20μg/ml)的培养液,干预组加含LPS(20μg/ml)、HGF(40 U/L)的培养液．继续培养16 h。Tunel标记法检测细胞凋亡。结果LPS组细胞凋亡率为98．65%±0．64%．干预组为35．97%±0．45%,两组相比,P＜0．01。结论LPS可诱导肝细胞凋亡,HGF可抑制LPS所诱导的肝细胞凋亡。     

氟致离体人肝细胞凋亡及硒的保护作用研究

目的 研究硒、氟对离体人肝细胞周期和凋亡的影响。方法 体外培养的人肝细胞接触氟和（或）硒12h后,用流式细胞仪检测肝细胞凋亡百分率和细胞周期构成比。结果 氟可使肝细胞凋亡百分率明显升高,S期细胞数增加,但G0／G1期和G2／M期细胞数无明显改变;加硒可明显拮抗氟的这种影响。结论 氟对人肝细胞的损害与氟诱导细胞凋亡和改变细胞周期分布有关,一定 量的硒可明显拮抗氟诱导的肝细胞凋亡及其对细胞周期的影响。     

rsTRAIL诱导白血病细胞系HL60凋亡及其作用机制

用不同浓度可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（rsTRAIL）处理白血病HL60细胞系,采用AO/EB双重荧光染色法、MTT比色法、流式细胞分析术、染色体核型分析等多种细胞及遗传学方法检测rsTRAIL诱导白血病HL60细胞凋亡的作用。结果rsTRAIL处理后HL60细胞可见典型的凋亡特点,细胞生长抑制率和凋亡率从50 ng/ml的8.4%和21.4%上升到5 000 ng/ml的70.0%和86.5%,具显著的剂量和时间效应;高浓度rsTRAIL（3 200 ng/ml、5 000 ng/ml）作用HL60细胞后,出现体积增大,染色体多倍化（130~144条）的细胞,流式分析结果提示细胞出现裂亡。认为rsTRAIL对白血病细胞系HL60的细胞及遗传学影响非常显著,可通过诱导凋亡的方式杀伤肿瘤细胞。     

从肝细胞凋亡探索病毒性肝炎的发病机理

细胞凋亡在哺乳动物细胞的发育、成长及疾病过程中都具有重要意义。为当前广大分子生物学家及医学家研究的热门课题。最近对细胞凋亡的概念有一些重要的改变;过去探索凋亡的机理常常以“细胞核”为中心,近年来发现“线粒体”才是细胞凋亡的枢纽部位［１］。过去对细胞凋亡多偏重单个受体配体及单个传导系统,如Ｆａｓ及ＦａｓＬ及Ｃａｓｐａｓｅ系统,现在了解诱发细胞凋亡有多种受体、配体系统,也可以不通过受体配体系统直接弓１起细胞凋亡［２,３］。过去认为“细胞凋亡”和“细胞坏死”为两个对立的截然不同的概念,现在认为凋亡和坏…     

低Se低VE诱导肝细胞凋亡及相关基因所起的作用

目的 研究低硒（Ｓｅ）低维生素Ｅ（ＶＥ）能否诱导大鼠肝细胞凋亡及相关基因ｐ５３、ｂｃｌ－２和ｃ－ｍｙｃ所起的作用。方法 以天然的和人工半合成的低Ｓｅ低ＶＥ饲料喂养大鼠１７周,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记（ＴＵＮＥＬ）检测肝细胞凋亡,采用免疫组化法检测肝细胞ｐ５３、ｂｃｌ－２和ｃ－ｍｙｃ蛋白。结果 与补Ｓｅ和ＶＥ组大鼠相比,低Ｓｅ低ＶＥ组大鼠肝细胞凋亡显著增加;ｐ５３和ｃ－ｍｙｃ蛋白增     

三氧化二砷对肝癌细胞株凋亡的诱导作用

目的研究三氧化二砷(As2O2)对人、鼠肝癌细胞株凋亡的诱导作用.方法用不同质量浓度(0.25,0.5,1,2,3,4 mg/L)的三氧化二砷处理体外培养的鼠7919,人HePG2肝癌细胞株,以MTT比色法、AO/EB荧光染色法、DNA凝胶电泳和免疫组化染色法检测细胞凋亡.结果不同浓度的三氧化二砷均可抑制7919,HePG2细胞生长;AO/EB荧光染色在荧光显微镜下观察肝癌细胞呈典型的凋亡形态学改变;DNA凝胶电泳呈梯形条带为凋亡的特征;免疫组化染色加药组bcl-2表达下调,bax表达上调,对照组bcl-2表达上调,bax表达下调,两株细胞结果相同.结论As2O3对两株细胞均有诱导凋亡作用.这为临床应用As2O3治疗肝癌提供了一个可供参考的实验依据.     

肿瘤坏死因子—α诱导体外培养大鼠肝细胞凋亡的作用

目的 了解肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）对体外培养大鼠肝细胞凋亡的作用。方法 在半乳糖胺（ＧａＩＮ）或放线菌素Ｄ（ＡｃｔＤ）致敏情况下,加入ＴＮＦ－α,通过光镜、电镜及ＤＮＡ电泳等方法,观察ＴＮＦ－α对体外培养肝细胞凋亡的作用。结果 在大鼠注射ＧａｌＮ后分离肝细胞加入ＴＮＦ－α,ＡＬＴ上升,电镜下可见细胞坏死及凋亡;给正常鼠肝细胞ＡｃｔＤ加入ＴＮＦ－α,光镜下出现典型凋亡细胞,ＤＮＡ电泳出现凋亡的     

IGFBPrP1 siRNA诱导的大鼠肝星状细胞凋亡及其机制

目的研究IGFBPrP1 siRNA对大鼠肝星状细胞凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法体外培养大鼠肝星状细胞株（HSC-T6）,分别设立：正常对照组,阴性对照组,IGFBPrP1 siRNA转染组。IGFBPrP1 siRNA转染大鼠肝星状细胞,转染不同时间后,用CCK-8试剂盒检测肝星状细胞增殖的变化,AnnexinV/PI双标法流式细胞术检测肝星状细胞凋亡的变化,免疫细胞化学染色法检测P53及Bcl-2蛋白表达的变化。结果 （1）IGFBPrP1 siRNA转染大鼠肝星状细胞不同时间（24、48、72 h）后,转染组细胞增殖受到抑制且凋亡率明显增高,与正常对照组及阴性对照组相比,差异均有统计学意义（P〈0.01）;（2）IGFBPrP1 siRNA转染大鼠肝星状细胞48 h后,与正常对照组及阴性对照组相比,转染组P53蛋白的表达量显著增高（P〈0.01）;Bcl-2蛋白的表达明显降低（P〈0.01）。结论 IGFBPrP1 siRNA能显著抑制大鼠肝星状细胞增殖且能促进其凋亡;上调P53的表达,下调Bcl-2的表达可能是IGFBPrP1 siRNA诱导大鼠肝星状细胞凋亡的途径之一;推测抑制IGFBPrP1的表达有可能成为治疗肝纤维化的新靶点。     

人参皂甙-Rh2对Ara—c诱导HL60细胞增殖抑制和凋亡作用的影响

目的探讨人参皂甙单体Rid（GS—Rh2）对阿糖胞苷（Ara—c）抗白血病作用的影响。方法体外培养人髓性白血病细胞株（HL60）并随机分为三组,其中Ara．C组加入终质量浓度分别为5．0-40．0μg／ml的Ara-c,GSRh2组加入终质量浓度为4．0～32．0μg／ml的GS-Rh2,联合组加入终质量浓度为4．0μg／ml的GS—Rh2及上述质量浓度Ara—C。48h后采用MTT法测定三组HL60细胞的增殖抑制率（IR）,并计算半数抑制浓度（IC50）、合用指数（CI）、增效倍数及合并效应与期望合并效应的比值（q）;倒置显微镜及常规瑞-吉染色法观察细胞凋亡形态。结果Ara-c组、GSRh2组的IC如分别为32．0、13．0,联合组Ara-c的IC50为14．5μg／L,显著低于Ara-c组（P〈0．001）;联合组CI为0．76,4．0μg／ml GSRh2对Ara—c的增效倍数为2．21,Ara-c质量浓度为5．0、10．0、20．0、40．0μs／ml时的q分别为1．42、1．39、1．36、1．21;联合组细胞凋亡形态较其他两组明显。结论GSRh2可提高HL60细胞对Am-c的敏感性,减少Ara—C的临床用药剂量和毒副作用,加强Ara-c的疗效;此为临床治疗白血病提供了新的思路。     

TL1A在高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用及机制探讨

目的 研究肿瘤坏死因子配体相关分子1A（TL1A）在高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用,并探讨机制.方法 采用RT-PCR、Western blot法检测不同浓度（5.6、11.2、22.4、33.6 mmol/L）葡萄糖与人脐静脉内皮细胞共同孵育48 h以及22.4 mmol/L葡萄糖作用于内皮细胞12、24、48、96 h后,TL1A mRNA及蛋白质在人脐静脉内皮细胞中的表达情况.在22.4 mmol/L葡萄糖培养的人脐静脉内皮细胞中加入不同浓度的TL1A单克隆抗体（1、3、9 μg/mL）,48 h后进行Annexin V/PI双染色流式细胞凋亡计数,以纯化重组人TL1A作为内源性TL1A的对照.结果 在人脐静脉内皮细胞中,随着葡萄糖浓度升高及作用时间延长,TL1A mRNA和蛋白水增高（P＜0.05）.流式细胞计数显示,高糖培养人脐静脉内皮细胞经TL1A单克降抗体处理后凋亡明显减少（P＜0.05）.结论 高浓度葡萄糖诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞TL1A的表达呈浓度、时间依赖性增高;TL1A表达增多可能是高糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的重要因素.     

毒胡萝卜素诱导K562细胞凋亡及其调控机制的研究

目的探讨毒胡萝卜索（TG）对K562细胞凋亡诱导作用及其调控机制。方法Hoechst33258染色荧光显微镜观察凋亡细胞形态改变;Annexin V—FITC／PI双染检测细胞凋亡率变化;RT—PCR检测bcl-2、bax、bcl—XL 、XIAP、survivin基因表达变化并通过免疫组织化学技术检测其在蛋白质水平的表达。结果TG作用后,K562细胞呈典型的凋亡细胞形态;细胞凋亡率均明显升高（P〈0.05）,且在一定范围内呈浓度和时间依赖性;bax、bcl—XL、XIAP mRNA和蛋白质表达上调,survivin mRNA和蛋白质表达下调,bcl-2／bax比率降低。结论TG可诱导K562细胞发生内质网应激反应性凋亡,其机制可能与Bax表达上调、survivin表达下调有关,bcl-XL XIAP表达上调可能发挥拮抗凋亡的作用。     

痢疾杆菌D_(15)及其L型感染与细胞凋亡

目的　探讨痢疾杆菌及其L型感染与细胞凋亡的关系。方法　 6～ 8周龄C57BL/ 6J小鼠 ,随机分成 3组。A组 :痢疾杆菌D15感染组 ,每天每只经口灌注 0 5ml菌液 ,连续 12d。B组 :痢疾杆菌D15L型感染组 ,灌注时间及次数均同A组。C组 :生理盐水对照组。于实验第 13d处死动物 ,病变脏器超薄切片 ,用末端转移酶作原位缺口末端标记法检测各组小鼠主要脏器的凋亡细胞。结果　痢疾杆菌及其L型感染均可引起肠及肝细胞的凋亡 ,统计学处理显示 ,细菌型比L型更易引起细胞凋亡。结论　痢疾杆菌及其L型感染均可引起细胞凋亡     

雌激素对子宫内膜细胞凋亡的影响及其机制探讨

目的 观察雌激素对子宫内膜细胞凋亡的影响,并探讨其机制.方法 将原代培养的子宫内膜细胞随机分为C组和E8、E7、E6组.C组不加雌激素,E8、E7、E6组分别加入浓度为10-8、10-7、10-6 mol/L的雌激素.采用流式细胞术检测细胞凋亡率,Real-time PCR法检测前列腺特异性酸性磷酸酶（PSAP）基因;构建PSAP基因干扰载体,并转染至子宫内膜细胞,观察转染前后细胞凋亡率和PSAP基因表达量.结果 C、E8、E7、E6组细胞凋亡率（gate1）分别为10.8％±0.1％、15.5％±0.2％、15.8％±0.1％、16.6％±0.3％,E8组和E7组比较,P＞0.05;其余两两比较,P均＜0.05.C、E8、E7、E6组细胞凋亡率（gate2）分别为4.2％±0.2％、4.5％±0.1％、5.4％±0.2％、5.7％±0.1％,两两比较,P均＜0.05.C、E8、E7、E6组PSAP基因表达量分别为0.46 ±0.05、0.33 ±0.03、0.26±0.03、0.40 ±0.02,两两比较,P均＜0.05.干扰前后细胞凋亡率分别为18.2％±1.3％、10.2％±0.7％,PSAP基因表达量分别为50.4 ±3.2、19.2±1.3,P均＜0.05.结论 雌激素作用后子宫内膜细胞凋亡增加,PSAP基因表达降低;PSAP基因被干扰后,细胞凋亡减少.雌激素可能通过抑制PSAP基因表达促进子宫内膜细胞凋亡.     

丁型肝炎患者肝组织中Fas/FasL和肝细胞凋亡表达

目的探讨Fas/FasL及肝细胞凋亡在丁型肝炎患者肝组织中的表达及作用.方法采用免疫组化双重染色和TUNEL技术,检测79例丁肝患者肝组织HDAg,Fas/FasL表达,以及肝细胞凋亡,以54例乙型肝炎作对照.结果Fas以肝细胞浆表达为主,HDAg以核浆型表达为主,二抗原表达及分布有相关性.FasL主要表达在浸润淋巴细胞浆、肝细胞核,与HDAg表达及分布不全一致.HDAg,Fas/FasL和肝细胞凋亡在各型肝炎中的表达强度有显著性差别意义.结论HDV感染可诱导肝细胞Fas/FasL表达,增强Fas/FasL途径介导的肝细胞凋亡,这一机制在丁型肝炎发病机制中可能有一定的重要作用.     

缺血预处理对心肌缺血再灌注诱发凋亡的保护机制

目的：通过观察心肌细胞凋亡指数与心肌中Fas、C-fOS表达阳性率的变化,探讨缺血预处理对心肌缺血再灌注诱发细胞凋亡的保护作用及与心肌中Fas、c-fos基因表达的关系. 方法：将入选大鼠随机分为假手术对照组（A组）、缺血组（B组）、缺血再灌注组（C组）、缺血预处理组（D组）,每组15只,测定各组大鼠心肌中细胞凋亡和Fas、c-fos的表达,并分析三者之间的相关性. 结果：与A组比较,B、C及D组大鼠的心肌凋亡指数、心肌中Fas与c-fos的阳性率均升高（P＜0.01）;与C组比较,B组及D组大鼠的心肌凋亡指数、心肌中Fas与C-fOS的阳性率均降低（P＜0.01）.Pearson相关分析显示心肌凋亡指数、Fas、c-fos三者之间存在显著正相关. 结论：缺血预处理可能通过下调凋亡相关基因Fas、c-fos的表达,减少细胞凋亡而发挥心肌保护作用.