细胞因子对人食道鳞癌细胞的体外杀伤作用

目的 探讨细胞因子活化杀伤(CIK)细胞对人食道鳞癌细胞(ESCC) Ecap-109的体外杀伤作用.方法 先用细胞因子诱导CIK细胞的生成并进行表型鉴定,后与人食道鳞癌细胞Ecap-109按不同比例进行共同培养,MTT法测定CIK对Ecap-109的杀伤活性.结果 不同比例的CIK细胞对Ecap-109均有明显的杀伤效果,最高可达94.8％.结论 CIK细胞对人食道鳞癌细胞Ecap-109具有明显的杀伤作用.     

三种来源CIK细胞体外增殖及杀伤活性比较

目的为白血病的治疗提供理论依据。方法用Fieoll两步分离法分别从正常人、非霍奇金淋巴瘤患者外周血和脐血中分离获得单个核细胞;细胞因子诱导培养成细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）。流式细胞仪检测CIK的免疫表型,MTT法测定其对白血病K562细胞的杀伤活性。结果三种不同来源的单个核细胞均可诱导成CIK,脐血来源的CIK其扩增效率和杀伤活性均优于其他两种来源,差异有显著性（P〈0．01）。结论脐血来源的CIK细胞体外增殖快,杀伤活性强;脐血具有来源方便、免疫原性弱、含有大量造血干细胞、单个核细胞提取率高、输注时移植物抗宿主病（GVHD）发生率低等优点,白血病治疗时可优先考虑。     

原发性肝癌肿瘤浸润性淋巴细胞的细胞表型及杀伤活性

本文用间接免疫荧光染色流式细胞计数分析技术和LDH释放法检测了11例肝癌患者肿瘤浸润性淋巴细胞（TIL）的细胞表型及杀伤活性。结果培养初期TIL细胞特征是以CD3为主，CD4／CD8为0．83，NK细胞23．3±3．6％。经重组白细胞介素2（rIL—2）激活20天后，CD3减少，CD4／CD8为1.85，NK细胞数量增至39．2±9．8％，P＜0．01。激活后的TIL对自体肝癌细胞杀伤率比培养初期高3．74倍，亦比对同时培养的BEL—7204肝癌细胞杀伤率高1．75倍。对自体和异体肝癌细胞杀伤作用均显著高于LAK细胞，且具有靶细胞特异性。结果表明肝癌TIL对肝癌细胞杀伤作用，可能与NK细胞数量增多，导致肝癌细胞凋亡有关。     

DC与CIK或LAK联合对结肠癌细胞株SW480杀伤作用的研究

[目的]研究树突状细胞(DC)联合细胞因子诱导或未诱导的杀伤细胞(CIK)或淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)对结肠癌细胞株SW480的杀伤活性.提供DC联合CIK或LAK治疗结肠癌的实验依据.[方法]取人外周血分离出单个核细胞(PBMNC),诱导生成DC、CIK、LAK细胞;流式细胞仪检测DC经SW480肿瘤抗原冲击后的表型变化;以CIK+DC细胞、CIK细胞、LAK+DC细胞及LAK细胞作为效应细胞,SW480为靶细胞,以15∶1、30∶1、45∶1为效靶比,LDH释放法测定细胞杀伤试验活性;ELISA检测杀伤试验中干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素2(IL-2)、IL-12、IL-17的分泌水平.[结果]流式细胞仪检测DC经SW480肿瘤抗原冲击后,其表面分子HLA-DR、CD40、CD80和CD86表达分别平均为90.23％、73.68％、85.96％、57.55％,与未经肿瘤抗原冲击DC比较,DC成熟的表面标志分子表达明显增加(P＜0.01).相同效靶比下,CIK+DC细胞组对SW480的杀伤作用最强,明显高于其他细胞组(P＜0.01);CIK+ DC细胞组在效靶比为45∶1时,杀伤活性最强(P＜0.01);单独CIK细胞组的杀伤活性明显高于LAK+DC细胞组(P＜0.01);LAK+ DC细胞组的杀伤活性明显高于单独LAK细胞组(P＜0.01).效靶比为45∶1时,各杀伤试验细胞组上清液中IFN-γ、IL-2、IL-12、IL-17的分泌量,CIK+DC细胞组的IFN-γ、IL-12的分泌量显著高于其他细胞组(P＜0.05);LAK+DC、单独LAK细胞组IL-2的分泌量明显高于CIK+DC、单独CIK细胞组(P＜0.05);单独CIK细胞组IFN-γ的分泌量明显高于LAK+DC、单独LAK细胞组(P＜0.05).[结论]CIK+DC细胞组对SW480的杀伤活性明显强于单独CIK、LAK+ DC组、单独LAK细胞组.其机制可能是,SW480抗原致敏的DC分泌IFN-γ、IL-12等刺激、诱导CIK细胞的活化和增殖,明显增强CIK细胞杀伤SW480的活性.     

CIK对耐药肿瘤细胞的杀伤作用

目的探讨细胞因子活化的杀伤细胞(CIK细胞)对耐药肿瘤细胞的杀伤作用。方法选用人食管癌细胞株Ecap-109作为实验细胞,用顺铂(cDDP)反复刺激建立人食管癌细胞耐药细胞模型,检测cDDP对Ecap-109的抑制率和药物半数抑制浓度(IC50)确定诱导耐药效果,之后用CIK细胞对耐药的Ecap-109细胞进行体外杀伤实验,并与未诱导的Ecap-109细胞杀伤活性进行比较。结果经长期反复诱导后,检测诱导的Ecap-109细胞IC50为70.869μmol/L,而亲本Ecap-109细胞为20.561μmol/L,两者相比有统计学意义(P0.01)。用此细胞做耐药细胞,同时用亲本Ecap-109细胞做对照,检测杀伤活性。CIK细胞对耐药细胞Ecap-109和亲本细胞Ecap-109的杀伤活性分别为83.01%和80.43%,两者比较没有显著差异。结论 CIK细胞对耐药肿瘤细胞Ecap-109的杀伤作用与对正常Ecap-109细胞的杀伤作用没有明显差异,证明CIK细胞可以杀伤耐药肿瘤细胞。     

肝癌患者细胞因子分泌和肿瘤浸润巴细胞杀伤肝癌细胞的研究

和为探讨肝癌肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）杀途肝癌细胞的作用机制,用航向电镜观察了ＴＩＬ与肝癌细胞共同培养后,ＴＩＬ吸附、包绕和吞噬自体和ＥＢＬ－７４０２肝癌细胞、促使肝癌细胞凋亡。接受ＴＩＬ治疗的肝癌术后患者,外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）产生干扰素（１ＦＮγ）活性和血清肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）活性,明显高于手术对照组。与单纯手术治疗组比较,ＴＩＬ组生存时间明显延长。肝癌术后应用ＴＩＬ的疗效显著优于     

树突状细胞激活的肿瘤浸润性淋巴细胞抗胃癌活性的研究

目的　树突状细胞 (DC)是目前已知的功能最强的抗原提呈细胞 (APC) ,可以向包括肿瘤浸润性淋巴细胞 (TIL)在内的T淋巴细胞提呈抗原 ,并诱发细胞毒T淋巴细胞 (CTL)反应。该文探讨树突状细胞激活的肿瘤浸润性淋巴细胞体外对胃癌细胞 (SGC 790 1 )的杀伤活性。方法　从胃癌患者外周血获取DC ,应用粒 /巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)、白介素 4(IL 4)和肿瘤抗原激活DC ,然后用DC激活TIL ,观察TIL在体外对自体胃癌细胞和人胃癌细胞株细胞的杀伤活性。结果　DC激活的TIL具有很高的对自体胃癌细胞杀伤活性 ,杀伤率为 (89.39± 3 .0 5) % ,明显高于未经DC激活的TIL、CD激活的T淋巴细胞和未经DC激活的T淋巴细胞对自体胃癌细胞的杀伤率 [杀伤率分别为 (54 .37±1 .50 ) % ,(53 .92± 1 .46) %和 (3 .55± 0 .2 5) % ]。而它们对SGC 790 1细胞的杀伤活性则相对较低。结论　胃癌患者外周血DC能诱导TIL产生高效而特异的抗胃癌免疫     

中药对胃癌细胞体外杀伤作用的研究

胃癌是最常见的癌肿之一，占消化道癌肿的第一位。由于早期诊断、早期手术治疗存在一定困难，所以除化疗、放疗、免疫治疗外，中医药物治疗胃癌是不可缺少的手段之一。我院著名老中医张镜人教授，根据中医辨证论治及多年的临床经验拟定中药方，在临床应用上取得显著疗效。由此，我们观察了3种复方中药对胃癌上皮详细胞的杀伤作用，现报道如下。1材料与方法1．1材料：NKM－45细胞株（中国科学院上海细胞生物学研究所提供），用200ml／L，小牛血清的RPMI－1640培养液，置5％CO2、37℃培养箱中培养，1号复方中药成份：黄芪6g，南沙参6g，川…     

CIK对三种鼻咽癌细胞株杀伤活性的研究

目的 观察细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）对鼻咽癌（NPC）细胞株的杀伤作用及相关因素。方法 分别将健康志愿者和鼻咽癌患者外周血单个核细胞在体外经多种细胞因子诱导收获的CIK细胞作为效应细胞,以NPC细胞株CNE-1、CNE-2Z和NP69为靶细胞,用MTT法测定效应细胞对靶细胞（效靶比为20：1）的杀伤活性。结果健康志愿者CIK对CNE-1、CNE-2Z、NP69的杀伤率均明显高于NPC患者CIK（P均〈0．01）;≤60岁NPC患者的CIK对三种细胞株的杀伤率均显著高于〉60岁者（P〈0．05）。结论 CIK对不同NPC细胞株均有杀伤力,且其杀伤活性与年龄及机体状态有关,此为NPC临床免疫治疗提供了依据。     

Antitumor activities of human autologous cytokine—induced killer（CIK）cells against hepatocellular carcinoma cells in vitro and in vivo

AIM：To characterize the anticancer function of cytokine induced killer cells(CIK) and develop an adoptive immunotherapy for the patients with primary hepatocellular carcinoma(HCC),we evaluated the proliferation rate phenotype and the antitumor activity of human CIK cells from healthy donors and HCC patients in vitro and in vivo.METHODS:Peipheral bolld mononuclear cells(PBMC) form healthy donors and patients with primary HCC were incubated in vitro and induced into CIK cells in the presence of various cytokines such as interferon-gamma(IFN-γ),interleukin-1(IL-1),IL-2,and monoclonal antibody(mAb) against CD3.The phenotype and characterization of CIK cells were identified by folw cytometric analysis.The cytotoxicity of CIK cells was detemined by ^51Cr release assay.RESULTS:The CIK cells were shown to be a heterogeneous population with different cellular phenotypes.The percentage of CD3^+/CD56^+ positive cells,the dominant effector cells,in total CIK cells from healthy donors and HCC patients,significantly increased form 0.1-0.13% at day 0 to 19.0-20.5% at day 21 incubation,which suggested that the CD^3+ CD56^+positive cells proliferated faster than other cell populations of CIK cells in the protocol used in this study.After 28 day in vitro incubation,the CIK cells from patients with HCC and healthy donors increased by more than 300-fold and 500-fold in proliferation cell number respectively,CIK cells originated from HCC patients possessed a higher in vitro antitumor cytotoxic activity on autologous HCC cells than the autologous lymphokine-activated killer(LAK) cells and PBMC cells,In in vivo animal experiment.CIK cells had stonger effects on the inhibition of tumor growth in Balb/c nude mice bearing BEL-7402-producing tumor than LAK cells(mean inhibitory rate 84.7%VS52.8%,P<0.05) or PBMC(mean inhibitory rate 84.7%VS 37.1%,P<0.01).CONCLUSION:Autologous CIK cells are of highly efficient cytotoxic effcetor cells against primary hepatocellular carcinoma cells and might serve as an alternative adoptive therapeutic strategy for HCC patrents.     

顺铂结合CIK细胞对裸鼠人胃癌模型体内的抗肿瘤作用

目的:探讨顺铂、CIK细胞以及顺铂联合CIK对裸鼠人胃癌移植瘤生长的抑制作用,为临床上联合应用顺铂和CIK细胞治疗胃癌提供实验依据.方法:应用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞,给予多种细胞因子(rhIFN-g、CD3mcAb、rh1L-1、rhlL-2),诱导生成CIK细胞;培养人胃癌细胞株SGC-7901,接种至80只裸鼠右腋皮下,10 d后取移植瘤直径基本一致的裸鼠随机分4组:NS对照组、顺铂组、CIK细胞组和顺铂+CIK细胞组,每组16只.连续5 d在接种肿瘤细胞部位处给予相应注射治疗,观察其对胃癌移植瘤模型的抗肿瘤疗效.结果:与NS对照组相比,顺铂组、CIK细胞组、顺铂+CIK细胞组裸鼠人胃癌移植瘤模型治疗后肿块质量均减轻,生存期均明显延长,尤以顺铂+CIK组效果显著(P<0.01).裸鼠体内实验表明,顺铂+CIK细胞联合应用能够显著抑制胃癌细胞的生长,其抑瘤率可达57.8%,明显高于NS对照组(P<0.01).免疫功能检测显示红细胞C3b反应受体明显升高,红细胞免疫复合物受体明显降低(P<0.01).结论:顺铂联合CIK细胞对人胃癌移植瘤生长的抑制作用大于单独应用顺铂或CIK细胞.     

成体肝干细胞向肝癌细胞趋向性迁移的体外实验

目的 体外观察成体肝干细胞与相互隔离的肝癌细胞在共培养体系中的生物学行为。方法 利用重组腺病毒介导，建立工程化稳定表达增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的大鼠成体肝干细胞WB-EGFP、胚胎成纤维细胞REF-EGFP。在相瓦隔离的体系下，共同培养肝癌细胞CBRH-7919、肝干细胞WB-EGFP或成纤维细胞REF-EGFP，连续动态观察肝干细胞在体外共培养体系中的迁移情况。结果隔离区细胞爬片上培养的WB-EGFP细胞缓慢向肝癌细胞CBRH-7919培养区移动，不仅发生在中央空白区接种的WB-EGFP细胞，而且最边缘空白区接种的WB-EGFP细胞也有类似的定向迁移运动；而成纤维细胞无趋向肿瘤细胞迁移的现象，72h后仍大部分停留在盖玻片上。结论 成体肝干细胞在体外具有追踪趋向肝癌细胞的生物学特性。     

Chemoprevention against hepatocellular carcinoma

Since the majority of hepatocellular carcinoma (HCC) arises from a background of chronic liver diseases caused by infection with hepatitis?C virus (HCV) and hepatitis?B virus (HBV), chemoprevention targeting patients at high risk of HCC is feasible. In this review article, we summarize current knowledge of chemoprevention against HCC mostly using phytochemicals which have less toxicity than pharmaceutical agents. We describe in?vivo and in?vitro evidence and proposed mechanisms of beneficial effects of several compounds on the liver, including acyclic retinoid (ACR), angiotensin-converting enzyme inhibitors (ACEIs), caffeine, capsaicin, cepharanthine (CEP), cinnamaldehyde, curcumin, diallyl sulfide (DAS), eicosapentaenoic acid (EPA), epigallocatechin-3-gallate (EGCG), genistein, lycopene, resveratrol, silymarin, sulforaphane (SFN), and xanthohumol (XN). Because antihepatocarcinogenic effects by these compounds are mostly based on experimental studies, clinical evidence is urgently necessary.