地拉罗司对小鼠成肌细胞C2C12生物活性的影响

目的模拟体内肌少症病理环境,观察铁螯合剂地拉罗司(deferasirox,DFS)对小鼠成肌细胞C2C12生物学活性的影响。方法构建模拟体内骨骼肌营养缺乏的细胞培养模型:体外培养小鼠成肌细胞C2C12,细胞分为3组:对照组、无血清培养基组和无血清培养基加DFS (10μmol/L)共孵育组,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡; C2C12细胞在马血清作用下诱导分化,镜下观察细胞形态并计数骨骼肌肌管数目;构建模拟体内骨骼肌炎性损伤的细胞培养模型:C2C12细胞在马血清诱导下分化后分为3组:对照组、肿瘤坏死因子-α(tumour necrosis factor,TNF-α,10 ng/m L)干预组和TNF-α(10 ng/m L)加DFS (10μmol/L)共孵育组,丙二醛(malondialdehyde,MDA)检测试剂盒和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)试剂盒分别检测细胞MDA和GSH-Px水平,实时定量PCR法检测细胞肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MyHC) mRNA和肌细胞生成素(myogenin,MyOG) mRNA的表达水平,镜下观察细胞形态并计数骨骼肌肌管数目。结果对照组、无血清培养基组和无血清培养基加DFS共孵育组细胞增殖最终OD值分比为2. 74±0. 01、0. 43±0. 01和0. 83±0. 01,细胞凋亡率分别为(7. 45±1. 73)%、(37. 82±2. 30)%和(25. 73±1. 42)%,肌管计数分别为9. 10±1. 45、1. 00±0. 33和3. 80±1. 14。C2C12细胞在无血清培养条件下增殖下降、凋亡率增加、细胞肌管形成减少,DFS干预后细胞增殖升高、凋亡率下降、肌管形成增加,均P<0. 05。对照组、TNF-α干预组和TNF-α加DFS共孵育组细胞内MDA含量分别为(1. 57±0. 01)、(3. 33±0. 14)和(2. 01±0. 19) nmol/L,GSH-Px含量分别为85. 44±7. 92、36. 26±7. 48和118. 50±17. 89,MyHC mRNA的表达量分别为1、0. 60±0. 14和1. 36±0. 13,MyOG mRNA的表达量分别为1、0. 88±0. 06和1. 57±0. 16,肌管计数分别为4. 30±1. 50、3. 30±0. 67和5. 30±2. 26。C2C12细胞诱导分化后,在TNF-α干预下,细胞MDA含量增加(P<0. 05)、GSH-Px含量下降(P<0. 05); DFS干预后细胞MDA含量下降(P<0. 05)、GSH-Px含量增加(P<0. 05),MyHC和MyOG mRNA表达上升(P<0. 05),肌管数目形成增加(P<0. 05)。结论 DFS可逆转C2C12细胞在营养缺乏和炎性损伤状态下的部分生物学活性指标的下降。     

地拉罗司对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1生物学活性的影响

目的探讨铁鳌合剂地拉罗司(deferasirox,DFS)体外对成骨细胞增生、分化、矿化和细胞内铁离子的影响。方法小鼠前成骨样细胞MC3T3-E1在37℃条件下体外培养,在10 mmol/Lβ-甘油磷酸和50 mg/L抗坏血酸的诱导作用下,分化为成骨细胞,同时用不同浓度(10、20、40μmol/L)DFS干预,用CCK-8法检测细胞的增生,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性试剂盒检测细胞ALP活性,Von kossa染色法行细胞钙结节染色,实时定量PCR检测细胞膜转铁蛋白受体(transferrin receptor,TfR)mRNA的表达。结果 MC3T3-E1细胞增生结果显示,DMSO溶剂组、对照组(0μmol/L)、10、20、40μmol/L组A值分别为1.41±0.09、1.41±0.09、1.01±0.01、0.79±0.04、0.67±0.04;ALP活性检测结果显示,对照组(0μmol/L)、10、20、40μmol/L组ALP活性值分别为0.73±0.03、0.65±0.02、0.54±0.03、0.35±0.04;钙结节检测结果显示,对照组(0μmol/L)、10、20、40μmol/L组TfR mRNA钙化面积比值分别为4.22±0.12、3.29±0.14、1.40±0.20、0.86±0.21;TfR mRNA表达检测结果显示,对照组(0μmol/L)、10、20、40μmol/L组TfR mRNA表达比分别为1、1.52±0.23、1.91±0.17、2.98±0.14。MC3T3-E1细胞的增生、ALP活性、钙结节和钙化面积随DFS干预浓度的增加呈剂量依赖性降低(P0.05),TfR mRNA的表达随DFS干预浓度的增加呈剂量依赖性升高(P0.05)。结论 DFS可能通过螯合成骨细胞内的铁离子抑制其增生、分化和矿化。     

甲状腺激素对小鼠巨噬细胞生物活性影响的实验研究

目的 研究甲状腺激素对小鼠腹腔巨噬细胞的激活作用。方法 将三碘甲状腺原氨酸(T3)稀释为不同的水平作用于巨噬细胞，观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数，测定巨噬细胞中乳酸脱氢酶(LDH)和酸性磷酸酶(ACP)活性水平。结果 T3在0．75μg／L时，不仅提高巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数，还可增加其LDH和ACP的活性；较高水平的T3对巨噬细胞的生物活性有一定的抑制作用。结论 甲状腺激素在一定的水平范围内，对小鼠腹腔巨噬细胞具有激活作用。     

胰升糖素样肽1诱导成肌细胞株C2C12分化为分泌胰岛素样物质细胞

成肌细胞株C2C12与不同浓度的胰升糖素样肽1(GLP-1)共孵育，C2C12细胞通过GLP-1的作用可以产生胰岛素样物质。     

林蛙皮生物活性肽对小鼠免疫功能的影响

目的探讨林蛙皮生物活性肽对小鼠免疫功能的影响。方法将雄性昆明小鼠随机分为阴性对照组、阳性对照组和林蛙皮活性肽低、中、高剂量组,每组10只;连续灌胃给药28 d后,通过NK细胞活性、SRBC诱导的迟发性变态反应和碳廓清实验,评价林蛙皮活性肽对小鼠的免疫调节作用。结果林蛙皮生物活性肽中剂量组和高剂量组可明显增强小鼠NK细胞活性(P<0.05或P<0.01);高剂量组可增强羊红细胞诱导的小鼠迟发型变态反应(P<0.01);高、中和低剂量组均可提高小鼠碳廓清吞噬指数(P<0.05或P<0.01)。结论在一定剂量范围内,林蛙皮活性肽对小鼠的细胞免疫功能(SRBC诱导的DTH)、单核-巨噬细胞吞噬能力(碳廓清实验)和NK细胞活性均有明显的增强作用,可提升小鼠的非特异性和特异性免疫功能。     

布比卡因增强小鼠成肌细胞溶酶体的活性

目的探讨局部麻醉药布比卡因对小鼠成肌细胞溶酶体的影响。方法将体外培养的小鼠成肌细胞C2C12分为2组。对照组:不加任何药物;布比卡因组:以600μmol/L布比卡因刺激细胞6 h。实验结束后,用Lyso Sensor探针评价溶酶体腔p H,用Lyso Trackor探针检测溶酶体含量,用蛋白免疫印迹法检测溶酶体相关膜蛋白-1(LAMP-1)和溶酶体蛋白水解酶Cathepsin B的表达水平,并以Magic Red染色法测定Cathepsin B的活性。结果布比卡因对溶酶体腔p H没有影响。但是,与对照组相比,布比卡因组溶酶体含量增加15.15%(P0.01),LAMP-1与Cathepsin B表达量分别增加36.41%、35.29%(P0.01),Cathepsin B活性增加23.74%(P0.01)。结论布比卡因能增加小鼠成肌细胞溶酶体含量,增强溶酶体活性。     

白细胞介素2、12对肺部真菌感染小鼠免疫功能影响的研究

据美国医院感染监测委员会的资料显示 ,1 990年住院患者的深部真菌感染的发病率是 1 980年的 1 .9倍 ,居各种病原体感染上升的首位[1 ] 。真菌等与机体免疫功能关系密切 ,一方面深部真菌感染多发生在机体免疫功能低下的患者 ,另一方面真菌感染可进一步降低机体的免疫导致感染的加重。我们采用白细胞介素 2 (ＩＬ 2 )、ＩＬ 1 2和二性霉素Ｂ(ＡｍＢ)对曲霉菌感染的模型小鼠进行了实验研究。材料与方法　主要材料 :实验所用小鼠为 6～ 8周龄雄性清洁级ＢＡＬＢ/ｃ小鼠 ,购自中山医科大学实验动物中心。烟曲霉菌菌株购自广东省微生物研究所。治…     

Kruppel样因子4过表达对热应激所致C2C12细胞凋亡的影响

目的探讨Kruppel样因子4对热应激所致C2C12小鼠肌原细胞凋亡的影响。方法采用热应激（42．5℃）处理Kruppel样因子4过表达的C2C12细胞1h，37℃恢复12h；采用流式细胞术、Hoechst33258染色检测细胞凋亡；采用Westernblot检测凋亡相关蛋白bcl-2、bax的表达。结果流式细胞术结果发现，两组细胞凋亡百分率较热应激前均升高，但与转空载体组相比较Kruppel样因子4过表达组升高更明显，凋亡百分率达19．6％；荧光染色可见细胞出现核固缩、凋亡小体等凋亡形态学改变；Kruppel样因子4组细胞经Westernblot能检测到bcl-2、bax蛋白明显改变。结论Kruppell样因子4可以诱导热应激所致（22C12小鼠肌原细胞凋亡。     

新型铁螯合剂地拉罗司治疗骨髓增生异常综合征铁过载的临床研究

目的分析新型铁螯合剂地拉罗司治疗骨髓增生异常综合征(MDS)继发性铁过载的临床疗效及不良反应。方法回顾性分析了解放军总医院2012年1月至2014年4月期间应用新型铁螯合剂地拉罗司治疗MDS继发性铁过载患者的临床资料,观察治疗前后血清铁蛋白(SF)、红细胞输注量、血红蛋白及药物不良反应。结果共有8例MDS继发性铁过载患者服用地拉罗司,其中男性7例,女性1例,中位年龄52(38~71)岁。治疗3个月后,疗效评价为完全反应(CR)3例,微小反应(MiR)3例,稳定铁过载(SIL)2例,总反应率为75.0%(6/8),中位红细胞输注量为2(1~3)u/月。治疗1年后,疗效评价为CR 5例,MiR 2例,SIL1例,总反应率为87.5%(7/8)。与治疗前相比,患者治疗1年后SF显著降低[(871.0±584.2)vs(2164.9±1233.6)ng/m1]、血红蛋白显著升高[(101.5±34.59)vs(65.37±21.35)g/L],差异均具有统计学意义(P0.05)。1年后5例患者脱离输血,其余3例中位红细胞输注量分别为0.5 u/月、1.5 u/月及2.0 u/月。治疗1年后,仅1例患者死亡。服药后出现恶心、呕吐者3例,腹泻1例。结论地拉罗司治疗MDS继发性铁过载安全有效。     

Krppel样因子4过表达对热应激所致C2C12细胞凋亡的影响

目的探讨Krppel样因子4对热应激所致C2C12小鼠肌原细胞凋亡的影响。方法采用热应激(42.5℃)处理Krppel样因子4过表达的C2C12细胞1h,37℃恢复12h;采用流式细胞术、Hoechst33258染色检测细胞凋亡;采用Western blot检测凋亡相关蛋白bcl-2、bax的表达。结果流式细胞术结果发现,两组细胞凋亡百分率较热应激前均升高,但与转空载体组相比较Krppel样因子4过表达组升高更明显,凋亡百分率达19.6%;荧光染色可见细胞出现核固缩、凋亡小体等凋亡形态学改变;Krppel样因子4组细胞经Western blot能检测到bcl-2、bax蛋白明显改变。结论Krppel样因子4可以诱导热应激所致C2C12小鼠肌原细胞凋亡。     

Krüppel样因子4过表达对热应激所致C2C12细胞凋亡的影响

目的 探讨Krüppel样因子4对热应激所致C2C12小鼠肌原细胞凋亡的影响.方法 采用热应激(42.5℃)处理Krüppel样因子4过表达的C2C12细胞1 h,37℃恢复12 h;采用流式细胞术、Hoechst33258染色检测细胞凋亡;采用Western blot检测凋亡相关蛋白bcl-2、bax的表达.结果 流式细胞术结果发现,两组细胞凋亡百分率较热应激前均升高,但与转空载体组相比较Krüppel样因子4过表达组升高更明显,凋亡百分率达19.6%;荧光染色可见细胞出现核固缩、凋亡小体等凋亡形态学改变;Krüppel样因子4组细胞经Western blot能检测到bcl-2、bax蛋白明显改变.结论 Krüppel样因子4可以诱导热应激所致C2C12小鼠肌原细胞凋亡.     

C肽的生物活性及其临床意义

近年来人们对C肽的活性有了进一步认为。C肽可改善糖尿病微血管病变和神经病变,其作用机制与升高组织Na^ -K^ -ATP酶活性及激活内皮型一氧化氮合酶促进一氧化氮合成有关。细胞膜上C肽受体的发现,为研究C肽的生物活性提供分子生物学基础。C肽与胰岛素联合治疗已显示其临床应用前景,但仍需进一步研究。     

C肽的生物活性及其临床意义

近年来人们对C肽的活性有了进一步认识。C肽可改善糖尿病微血管病变和神经病变 ,其作用机制与升高组织Na+ K+ ATP酶活性及激活内皮型一氧化氮合酶促进一氧化氮合成有关。细胞膜上C肽受体的发现 ,为研究C肽的生物活性提供分子生物学基础。C肽与胰岛素联合治疗已显示其临床应用前景 ,但仍需进一步研究     

地黄低聚糖对骨骼肌成肌细胞瞬时外向钾电流的影响

目的从细胞瞬时外向钾电流(Ito)角度,探讨地黄低聚糖(RGOs)对骨骼肌成肌细胞(SMs)电生理特性的影响。方法分离成年大鼠心肌细胞和SMs,运用膜片钳技术研究心肌细胞和SMs以及0.625g·L-1RGOs干预后,SMs与心肌细胞Ito的差异。结果两种细胞Ito均从-40mV时开始激活,RGOs对大鼠SMsIto有增加作用,从-30mV到30mV,经过0.625g·L-1RGOs预处理的SMs组Ito密度〔(7.3±0.7)to(65.3±2.3)pA/pF(n=5)〕显著高于心肌组〔(0.9±0.1)to(28.8±0.9)pA/pF(n=5)〕和SMs组〔(4.5±0.5)to(23.7±2.0)pA/pF(n=5)〕的电流密度。结论RGOs能显著提高SMs的Ito密度,影响移植的SMs的电生理特性。这为今后在提高干细胞移植有效性同时,增加其安全性提供了一个新的思路。     

骨骼肌成肌细胞移植对慢性心力衰竭犬左心室功能的影响

目的:观察自体骨骼肌成肌细胞移植对慢性心力衰竭犬的左心室重塑及左心室功能的影响.方法:19只慢性心力衰竭犬模型建立后随机分为实验组(n=9):采用开胸直接心肌内注射自体骨骼肌成肌细胞;对照组(n=10):开胸心肌内注射等量生理盐水.移植前及移植后5周行超声心动图检查,病理组织标本行Desmin和Brd-U免疫荧光双重染色.结果:①移植后较移植前,实验组收缩末期心室腔面积(ESA)、舒张末期心室腔面积(EDA)均明显下降(P<0.05),射血分数显著升高(P<0.05),差异有统计学意义;而对照组ESA和EDA在移植前、移植后差异无统计学意义(P>0.05);②实验组心肌注射部位可见存活细胞,经Desmin和Brd-U免疫荧光双重染色证实来自于移植的骨骼肌成肌细胞.结论:自体骨骼肌成肌细胞对慢性心力衰竭犬的左心室重塑及功能有明显改善作用.     

Irisin通过激活AMPK促进C2C12细胞葡萄糖摄取

目的研究鸢尾素(irisin)对C2C12细胞葡萄糖摄取的影响及机制。方法将C2C12细胞分为:Control组,不同浓度的irisin组(分为0.1μg/ml,0.3μg/ml和1μg/ml组),高糖/高脂(HG/HF)处理组,HG/HF+不同浓度的irisin组(分为0.1μg/ml,0.3μg/ml和1μg/ml组),Control+Scramble siRNA组,HG/HF+AMPKα2 siRNA组,HG/HF+scramble siRNA组,HG/HF+scramble siRNA+irisin组,HG/HF+AMPKα2 siRNA+irisin组。采用荧光葡萄糖(2-NBDG)检测细胞的葡萄糖摄取;Western blot检测细胞葡萄糖转运体4(GLUT4)转位情况和AMPK磷酸化水平。结果 (1)与Control组相比,HG/HF组C2C12细胞葡萄糖摄取降低(P0.05),不管是否经过高糖处理,Irisin均增加C2C12细胞葡萄糖摄取(P0.05或P0.01)。与Control组相比,HG/HF降低鼠骨骼肌细胞膜GLUT4表达(P0.01),Irisin显著增加HG/HF孵育骨骼肌细胞细胞膜GLUT4表达(P0.01);(2)与Control组相比,HG/HF降低C2C12细胞细胞膜AMPK磷酸化水平(P0.05),在Control组及HG/HF组,Irisin显著增加骨骼肌细胞AMPK的磷酸化水平(P0.05);(3)与HG/HF+scramble siRNA+irisin组相比,HG/HF+AMPKα2 siRNA+irisin转染组细胞葡萄糖摄取及细胞表面GLUT4表达均显著减少(P0.05或P0.01)。结论 Irisin通过激活AMPK促进小鼠骨骼肌细胞葡萄糖摄取。     

采用cDNA芯片检测Krüppel样因子4过表达对C2C12细胞基因表达谱的影响

目的采用cDNA芯片检测Krüppel样因子4过表达对C2C12细胞中基因表达谱的影响。方法用cDNA芯片检测Krüppel样因子4过表达的C2C12细胞中基因表达谱的改变(以空载体细胞为对照);用MEDLINE、Genomatix等生物信息学数据库和分析软件对在Krüppel样因子4过表达的C2C12细胞中表达发生改变的已命名基因进行功能和细胞信号通路分析。结果采用cDNA芯片筛选到在Krüppel样因子4过表达的C2C12细胞中表达发生改变的基因605个;其中下调的基因为250个,已命名基因为155个;上调的基因为355个,已命名基因为255个;其中包含多个炎症相关基因和凋亡相关基因。上述炎症相关基因属于13条细胞信号通路,凋亡相关基因属于9条细胞信号通路。结论Krüppel样因子4过表达能够引起C2C12细胞中多个下游基因表达发生改变。     

海洋生物活性成份(HQS-V)对免疫受抑小鼠免疫机能的影响

采用液-液分配色谱等方法对海洋生物-被囊类动物进行萃取分离,得到不同组分的活性提取物,观察HQS-V成分对免疫低下小鼠部分免疫功能指标的影响。通过环磷酰胺造成小鼠免疫功能低下,HQS-V按每日100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg分成三组。结果显示100mg/kg及200mg/kg两组对免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能影响更明显(模型组OD值为0。070±0.015,100mg/kg组0.417±0.184,20mg/kg组0.348±0.145,400mg/kg组0.168±0.120),而对脾T淋     

半枝莲多糖对C26荷瘤小鼠caspase-3,8,9活性的影响

目的观察半枝莲多糖(SPS)对C26荷瘤小鼠caspase-3,8,9活性的影响。方法通过腋下接种C26结肠癌细胞建立小鼠移植瘤模型,SPS作用10 d后,根据肿瘤重量计算抑瘤率评价SPS对肿瘤生长的影响,分光光度法检测肿瘤组织中caspase-3,8,9活性。结果与模型组比较,SPS可以抑制肿瘤的生长,提高肿瘤组织中caspase-3和caspase-9的活性,而caspase-8活性没有明显改变。结论 SPS可能通过活化caspase-9,进而激活caspase-3诱导肿瘤细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用。