8-Br-cAMP可上调人视网膜母细胞瘤HX O-Rb44细胞抑癌基因的表达

目的 探讨８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ对人网膜母细胞瘤ＨＸＯ－Ｒｂ４４细胞抑癌基因表达的效应，方法 应用ＲＮＡ斑点印迹技术检测细胞ｐ１６、ｐ２１ｗａｆｌ、ｗｐ５３、ｍｐ５３和Ｒｂ的ｍＲＮＡ、应用免疫组化斑点印迷技术检测细胞Ｐ１６、Ｐ２１ｗａｆｌ、ＰＲｂ、ｃｄｋ２、ｃｄｋ４和ＰＣＮＡ蛋白质表达的免疫反应（ＩＲ）。结果 在斑点印迹标本上，人ＨＸＯ－Ｂｂ４４细胞ｐ１６、ｐ２１ｗａｆｌ、ｗｐ５３及Ｒｂ的ｍＲＮＡ信号     

8—Br—cAMP对人视网膜母细胞瘤HXO—Rb44细胞癌基因的表达效应

目的 研究８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ对培养的人视网膜母细胞瘤ＨＸＯ－Ｒｂ４４细胞癌基因表达的效应及其与该细胞生长的关系。方法 ｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ,Ｎ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ及ｐ２１ｒａｓ ｍＲＮＡ均以原位杂交ＲＮＡ斑点印迹技术检测,对繁殖细胞核抗原,ｖ－Ｆｏｓ,Ｎ－Ｍｙｃ和Ｐ＾２１ｒａｓ蛋白表达的免疫反应性则采用免疫组化及收白质斑点印迹技术检测。     

增殖细胞核抗原及核仁组成区嗜银蛋白与视网膜母细胞瘤预后的关系

目的探讨视网膜母细胞瘤（ｒｅｔｉｎｏｂｌａｓｔｏｍａ，Ｒｂ）细胞的增殖活性与患者预后的关系。方法应用抗增殖细胞核抗原（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇｃｅｌｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｇｅｎ，ＰＣＮＡ）单克隆抗体ＰＣ－１０，采用ＬＳＡＢ免疫组织化学方法及Ｐｌｏｔｏｎ银染技术，对４８例Ｒｂ石蜡标本进行ＰＣＮＡ和核仁组成区嗜银蛋白（ａｒｇｙｒｏｐｈｉｌｉｃｐｒｏｔｅｉｎｓｏｆｔｈｅｎｕｃｌｅａｒｏｒｇａｎｉｚｅｒｒｅｇｉｏｎｓ，ＡｇＮＯＲｓ）检则。结果Ｒｂ组织ＰＣＮＡ标记指数（ｌａｂｅｌｉｎｇｉｎｄｅｘ，ＬＩ）与其相对应组织切片的ＡｇＮＯＲｓ计数有显著相关性（ｒ＝０．６４７，Ｐ＜０．００１）。其中行单纯眼球摘除治疗并有５年随访资料的２９例Ｒｂ中，术后存活时间≥５年组（１９例）与术后存活时间＜５年组（１０例）比较，前组的Ｒｂ组织平均ＰＣＮＡＬＩ和平均每核ＡｇＮＯＲｓ计数均显著低于后组（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５），表明ＰＣＮＡＬＩ或ＡｇＮＯＲｓ计数与Ｒｂ预后呈明显的负相关。结论ＰＣ－ＮＡＬＩ和ＡｇＮＯＲｓ计数有助于Ｒｂ预后评估     

一氧化氮在8-Br-cAMP对视网膜母细胞瘤细胞株影响中的作用

目的研究８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ对人视网膜母细胞瘤ＨＸＯ－Ｒｂ４４细胞作用后产生一氧化氮（ＮＯ）的效应,以探讨ＨＸＯ－Ｒｂ４４细胞分化和凋亡的机制。方法应用原位杂交和 ＲＮＡ斑点印迹技术检测 ＮＯＳ ｍＲＮＡ及 Ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡ;应用硝酸还原酶法检测ＮＯ的含量;应用蛋白斑点印迹技术检测一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）的酶活性;应用免疫细胞化学及蛋白质斑点印迹技术检测 ＮＳＥ的免疫反应性（ＩＲ）。结果 ＮＯＳ ｍＲＮＡ,ＮＯＳ酶活性,ＮＯ含量和 ＮＳＥ－ＩＲ均为实验组（ＥＧ）强于对照组（ＣＧ）（Ｐ＜０．０１）,而Ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡ为ＥＧ弱于ＣＧ（Ｐ＜０．０５）,并在ＥＧ标本上可见ＨＸＯ－Ｒｂ４４细胞呈现神经样的突起。结论 ８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ可使 ＨＸＯ－Ｒｂ４４细胞生成 ＮＯ增加,促进 ＮＯＳ的酶活性和 ＮＯＳ ｍＲＮＡ的表达,提高ＮＳＥ－ＩＲ,并降低 Ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡ的表达。结果表明,８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ具有促使 ＨＸＯ－Ｒｂ４４细胞向神经细胞分化并诱导该细胞凋亡的效应,提示ＮＯ可能参与此效应。     

眼睑恶性肿瘤组织中P53蛋白及增殖细胞核抗原表达的研究

目的 探讨Ｐ５３基因突变与眼睑恶性肿瘤发生的关系。方法 采用链霉卵白素－生物素（ＬＳＡＢ）免疫组化方法检测１０２例眼睑恶性肿瘤组织Ｐ５３蛋白及增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）表达情况。结果 在正常眼睑皮肤、睑板腺及轻度不典型增生眼睑上皮中,未见Ｐ５３蛋白表达,而中、重度不典型增生,原位癌,浸润癌中,Ｐ５３蛋白阳性表达率逐渐增高,其ＰＣＮＡ指数也有增加趋势。３０／５３例基底细胞癌（ＢＣＣ）、１６／３２例鳞     

增殖细胞核抗原与bc1-2在培养的人视网膜色素上皮细胞的表达

目的观察培养的人视网膜色素上皮细胞（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｓ，ＲＰＥ）的增殖细胞核抗原（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｃｅｌｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｇｅｎ，ＰＣＮＡ）和ｂｃ１－２的表达。方法用ＳＡＢＣ法对培养的人ＲＰＥ作鼠抗人ＰＣＮＡ单抗及兔抗人ｂｃ１－２抗体免疫组织化学染色。结果ＲＰＥ在接种后２４小时和４８小时，ＰＣＮＡ的阳性率分别为３１．２％和５０．６％，阳性染色位于细胞核内，斑块状。ｂｃ１－２的表达为７６％～９０％，阳性染色在细胞浆，细颗粒状。结论培养中一半ＲＰＥ有ＰＣＮＡ抗原表达，提示这些细胞处于Ｓ期；ｂｃ１－２抗原在大多数ＲＰＥ表达阳性。这些生物标记物可能与培养的ＲＰＥ生长活性有关。     

RDS／peripherin表达载体的构建和在COS—1细胞的表达

目的 构建大鼠ＲＤＳ／ｐｅｒｉｐｈｅｒｉｎ真核表达载体ｐＡＬＴＥＲ－ＲＤＳ,并观察在ＣＯＳ－１细胞中的表达,方法 将全长度的ＲＤＳ／ｐｅｒｉｐｈｅｒｉｎｃＤＮＡ（１．５ｋｂ）插入到真核表达载体ｐＡＬＴＥＲ－ＭＡＸ中,构建了ＲＤＳ真核表达载体ｐＡＬＴＥＲ－ＲＤＳ,采用电穿孔技术将其转染ＣＯＳ－１细胞,转染４８ｈ后,采用ＲＴ－ＰＣＲ检测ＲＤＳ／ｐｅｒｉｈｐｅｒｉｎｃＤＮＡ的表达,结果 采用ＲＴ－ＰＣＲ     

眼眶横纹肌肉瘤rasp21,p53蛋白表达及其与预后的关系

目的 研究ｒａｓｐ２１，ｐ５３癌基因蛋白产物在眼眶横纹肌肉瘤中的表达及其与预后的关系。方法 对确诊的２１例眼眶ＲＭＳ用免疫组化ＡＢＣ法标记ｒａｓｐ２１，ｐ５３蛋白。结果 发现ｒａｓｐ２１，ｐ５３在眼眶ＲＭＳ的阳性率分别为４２．９％和７６．２％。随访的１３例患者中，ｐ５３阳性表达组１００％预后不好，ｒａｓｐ２１／ｐ５３阳性表达组８０％预后不好，ｒａｓｐ２１／ｐ５３阴性组２５％预后不好。     

遗传性视网膜变性视细胞凋亡与p53基因表达

目的 研究遗传性视网膜变性视细胞凋亡的基因调控。方法 对出生后第１３－６０天的遗传性神经网膜变性动物模型（ＲＣＳ）大鼠视网膜,进行末端脱氧核糖核苷酸连接酶介导 ｄＵＴＰ末端标记（ＴＵＮＥＬ）凋恨细胞检测、ｐ５３蛋白免疫组织化学染色、ｐ５３ｍＲＮＡ原位杂交和ＲＴ－ＰＣＲ。结果 ＲＣＳ大鼠视网膜视细胞自生后第２５天出现凋亡,第３０－３５天达高峰;视细胞凋亡初期,妈隆后第２８－３０天,视细胞内Ｐ５３蛋白     

眼睑皮脂腺癌中c-myc和p53的异常表达

我们用免疫组织化学方法对眼睑皮脂腺癌中ｃ ｍｙｃ和ｐ5 3蛋白的表达、增殖细胞核抗原 (ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇｃｅｌｌｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｇｅｎ,ＰＣＮＡ)及核仁组成区相关嗜银蛋白 (ａｒｇｙｒｏｐｈｉｌｎｕｃｌｅｏｌａｒｏｒｇａｎｉｚｅｒｒｅｇｉｏｎｓ ,ＡｇＮＯＲ)进行检测 ,以期探讨眼睑皮脂腺癌的发生与ｃ ｍｙｃ及ｐ5 3间的关系。一、材料和方法1 材料来源 :取自青岛大学医学院附属医院眼科 1980年 1月至 1999年 1月间送检的眼睑皮脂腺癌石蜡标本 2 6例 ,男性 10例 ,女性 16例 ;正常睑板腺组织 8例 ,霰粒肿 8例 ,均…     

HSP27、增殖细胞核抗原在视网膜母细胞瘤中的表达

目的探讨热休克蛋白(heat shock proteins,HSP)27、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,Rb)中的表达及其与Rb分化程度和视神经浸润的关系。方法应用鼠抗人HSP27及PCNA的单克隆抗体,采用PV9000二步法免疫组织化学方法,对36例Rb患儿和2例正常对照视网膜组织常规石蜡标本行HSP27及PCNA表达的测定,并分析它们与肿瘤分化程度及视神经浸润的关系。结果HSP27及PCNA在Rb中的表达阳性率分别为69.4%及83.3%;两指标在未分化组阳性表达高于分化组(P<0.05),两指标在视神经浸润组的阳性表达高于未浸润组(P<0.05)。Rb中HSP27的表达与PCNA的表达呈正相关(P<0.01)。结论Rb中HSP27和PCNA的表达与Rb的分化程度、视神经浸润有关。     

视网膜母细胞瘤增殖细胞核抗原的免疫组织化学研究

目的：研究视网膜母细胞瘤(retinoblastoma，RB)细胞的增殖活性与RB组织学分型和浸润能力的关系。 方法：应用链霉亲和物素蛋白-生物素酶标免疫组织化学方法(LSAB法)对48例RB组织中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)的表达进行分析。 结果：12例分化型RB组织平均PCNA标记指数(labelling index，L1)明显低于36例未分化型(P<0.05)；22例视神经浸润组RB组织平均PCNA LI明显高于26例视神经未浸润(P<0.05)。表明PCNA LI与RB组织学分型及浸润能力相关。 结论：测定PCNALI对于判断RB的组织学特性和生物学行为具有一定意义。 （中华眼底病杂志，1997，13：10-11）     

PTEN和p53在视网膜母细胞瘤中的表达及临床意义

目的检测视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)组织中PTEN基因和p53基因的蛋白表达水平并探讨二者在RB发生发展中的作用以及相关性。方法采用PV-9000免疫组织化学二步法,检测40例RB组织和16例正常视网膜组织中PTEN和p53蛋白的表达,统计分析不同临床和病理阶段RB表达PTEN和p53的差异及其相关性。结果(1)PTEN在正常视网膜组织中的阳性表达率为100%,显著高于RB55%(P<0.01);PTEN蛋白的阳性表达率与临床分期、病理分型以及是否伴有视神经浸润有关(P<0·05);与性别差异无关(P>0.05)。(2)p53在正常视网膜组织中不表达,在RB组织中阳性表达率为57.5%,差异有统计学意义(P<0·05);p53蛋白的阳性表达率与临床分期、病理分型以及是否伴有视神经浸润有关(P<0.05);与性别差异无关(P>0·05)。(3)PTEN和p53在RB中的蛋白表达呈负相关(r=-0.3710,P<0.05)。结论PTEN和p53可作为判断RB恶性程度和预后的指标。PTEN可作为RB早期诊断的分子标记物之一。     

热休克蛋白27及CD34在视网膜母细胞瘤的表达

目的 探讨热休克蛋白27（HSP27）、CD34在视网膜母细胞瘤（Rb）中的表达及其与Rb血管化、分化程度和视神经浸润的关系.方法 应用鼠抗人HSP27、CD34的单克隆抗体,采用北京中杉PV9000通用型二步法免疫组化法,对36例Rb常规石蜡标本行HSP27、CD34表达的测定,并计算CD34标记的肿瘤微血管密度（MVD）值.HSP27光密度值（OD值）、MVD在未分化组、分化组的差异及在有视神经浸润组、无视神经浸润组的差异采用t检验,HSP27 OD值与MVD之间的相关性采用Spearman等级相关分析.结果 HSP27在正常视网膜神经纤维层有弱表达,在Rb中的阳性表达率为69%,阳性物质主要位于细胞浆内.HSP27和CD34在Rb中的阳性表达率分别为69%和100%,CD34标记的MVD及HSP27均与Rb的分化程度、视神经浸润有关（P均＜0.01）.CD34标记的微血管密度与HSP27的表达呈正相关（r=0.4659,P＜0.01）.结论 HSP27、CD34标记的MVD的测定对于确定Rb的组织特性和肿瘤的生物学行为具有重要意义.HSP27可能会促进新生血管的发生,与肿瘤的浸润、转移有关.     

视网膜母细胞瘤中血管内皮生长因子的免疫组织化学研究

目的 研究视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达与RB组织学分裂和浸润能力的关系。 方法 应用链霉亲和素蛋白 生物素酶标免疫组织化学方法(labell streptavidin biotin method,LSAB法)，对40例RB组织中VEGF的表达进行分析。 结果 分化型RB(13例)组织VEGF表达低于未分化型(27例)(P＜0.05); 视神经浸润组(14例)VEGF表达明显高于视神经未浸润组(26例)(P＜0.05)。 结论 VEGF表达与RB组织学分型及浸润能力相关。 (中华眼底病杂志, 1999, 15: 238-240)     

MMP-2和MMP-9在视网膜母细胞瘤中的表达及意义

目的探讨视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,Rb)中基质金属蛋白酶-2(matrixmetalloproteinase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达及其与临床病程的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测41例Rb组织中MMP-2和MMP-9的表达;用HMIAS-2000型全自动医学彩色图像分析系统测量其平均光密度值。统计学方法比较不同临床和病理阶段Rb表达MMP-2和MMP-9的差异。结果在41例Rb组织切片中均有MMP-2和MMP-9的表达。有视神经浸润的肿瘤MMP-2和MMP-9表达水平明显高于无视神经浸润的肿瘤(P<0.01),处于眼外期的肿瘤MMP-2和MMP-9的表达水平明显高于眼内期和青光眼期的肿瘤(P<0.01)。结论Rb细胞内有MMP-2和MMP-9的表达。MMP-2和MMP-9的表达水平与视神经浸润和临床分期存在密切的关系,提示其表达水平与该肿瘤的浸润与发展有关。     

视网膜母细胞瘤增殖细胞核抗原表达的研究

目的 :探讨增殖细胞核抗原 (proliferatingcellnuclearantigen ,PCNA)在视网膜母细胞瘤 (retinoblastoma ,Rb)中的表达及其与Rb病理类型和侵犯视神经情况的关系。方法 :用免疫组化技术检测PCNA在 3 7例Rb组织标本中的表达 ,并应用多功能真彩色病理图像分析系统 (CMIAS系列 )来分析PCNA染色的阳性细胞个数 ,采用积分光密度值定量分析其增殖指数 ,并将各指标进行SPSS统计软件相关性分析。结果 :本组 3 7例Rb标本中PCNA的阳性表达为 97 3 0 % ,而在 2例正常视网膜组织内 (对照组 )的表达均为阴性。PCNA的表达水平与Rb不同的分化、增殖程度有显著的统计学差异 (P <0 0 1) ,Rb侵犯视神经情况越严重、分化程度越差 ,PCNA的表达越强。结论 :Rb中PCNA的高表达可作为判断Rb恶性及其程度的新型标记物。PCNA与Rb分化类型、视神经侵犯情况密切相关 ,为PCNA表达水平反映Rb分化程度和增殖能力提供理论依据     

基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-9和血管内皮生长因子在视网膜母细胞瘤中的表达

　　目的　观察基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9和血管内皮生长因子(VEGF)在视网膜母细胞瘤(RB)中的表达及其与RB分化程度和视神经浸润的关系。方法　经病理检查确诊的40例RB眼球石蜡标本纳入研究。按照RB细胞中有无菊形团排列以及RB肿瘤细胞是否浸润视神经分为分化型、未分化型以及视神经浸润、视神经无浸润组。其中,分化型15例,未分化型25例;视神经浸润13例,视神经无浸润27例。采用免疫组织化学方法检测其MMP-2、MMP-9和VEGF的表达,对比分析MMP-2、MMP-9和VEGF表达与肿瘤病理组织分型和视神经是否侵润之间的关系。结果　40例RB中,MMP-2、MMP-9和VEGF的阳性表达率分别为52.5%、57.5% 和72.5% 。未分化型RB中MMP-2、MMP-9和VEGF的阳性表达均高于分化型RB中MMP-2、MMP-9和VEGF的阳性表达,差异有统计学意义(χ²=9.037,9.253,8.095;P＜0.05);有视神经浸润的RB中MMP-2、MMP-9和VEGF的阳性水平均高于无视神经浸润RB中MMP-2、MMP-9和VEGF的阳性水平,差异有统计学意义(χ²=11.045,10.243,8.956;P＜0.05)。RB中MMP-2、MMP-9和VEGF的表达呈正相关关系(r=0.126,0.314;P＜0.05)。结论　RB细胞内有MMP-2、MMP-9和VEGF的表达。MMP-2、MMP-9表达与VEGF表达存在相关性。MMP-2、MMP-9和VEGF的表达水平与视神经浸润存在密切的关系。       

基质金属蛋白酶-2和细胞外基质金属蛋白酶诱导因子在视网膜母细胞瘤中的表达

目的：：探讨基质金属蛋白酶-2( matrix metalloproteinase-2, MMP-2)和细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extracellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN)在视网膜母细胞瘤( retinoblastoma,Rb)中的表达及其与临床病程的关系。方法：用免疫组织化学 SABC 法分别检测39例 Rb 中MMP-2及EMMPRIN的表达;用LEICA IM 50型全自动医学图像分析系统测量其平均灰度值,比较不同临床和病理阶段Rb中表达MMP-2和EMMPRIN的差异及二者阳性表达之间的关系。结果：Rb患者39例中MMP-2阳性表达35例(灰度值为109.64±14.52),占90％;EMMPRIN阳性表达33例(灰度值为108.01±13.60),占85％;青光眼期Rb中MMP-2和EMMPRIN 的表达(灰度值分别为108.21±11.47,107.56±14.32)明显高于眼内期(灰度值分别为121.13±11.32,119.34±12.66;P<0.01,P<0.05),眼外期二者表达(灰度值分别为91.03±11.71,92.26±12.93)明显高于青光眼期(P<0.01,P<0.05);视神经浸润组Rb中MMP-2和EMMPRIN的表达(灰度值分别为103.89±13.39,105.23±14.00)明显高于无视神经浸润组(灰度值分别为118.39±15.11,117.53±16.13;P<0.01,P<0.05)。结论：MMP-2及EMMPRIN的表达水平可能与Rb的浸润转移有关。     

综合治疗前后视网膜母细胞瘤微血管密度和血管内皮生长因子表达研究

目的 观察视网膜母细胞瘤(RB)未行综合治疗和行综合治疗后微血管密度(MVD)、血管内皮生长因子(VEGF)表达以及与RB肿瘤视神经浸润和综合治疗后复发的关系.方法 61例RB石蜡标本纳入研究.分为未行综合治疗直接摘除眼球(未治疗)组、综合治疗前计划眼球摘除(计划眼摘)组、综合治疗后肿瘤复发(复发)组,3组分别为52、...