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相似文献
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1.
目的:探索青光眼病人小梁细胞体外培养和保存方法。方法:从小梁切除术取得的巩膜内板层,应用组织培养方法进行病人小梁细胞体外培养,完成鉴定工作。并将第四代的青光眼病人小梁细胞冻存,冻存2周,1个月,2个月,半年后,将细胞复苏,观察复苏后小梁细胞的生长情况。结果:青光眼病人小梁组织培养出的细胞经鉴定为小梁细胞,培养的小梁细胞经冷冻保存,复苏率超过80%。结论:青光眼病人小梁细胞体外培养及冻存复苏成功,使  相似文献   

2.
目的:建立人眼虹膜色素上皮细胞体外培养并对其进行冻存与复苏。方法:直接刮取虹膜色素上皮细胞组织碎屑进行培养,光镜观察生长特性及形态特点,透射电镜观察其超微结构。根据慢冻速融的细胞冻存原则,定期收集细胞进行液氮冻存,至少2个月后进行复苏。结果:人眼虹膜色素上皮细胞体外培养成功,原代细胞在光镜下呈多角形单层生长,胞浆内有丰富的色素颗粒;电镜下见胞浆富含色素、细胞器丰富、细胞膜有明显微绒毛、微丝、相监细胞之间可见桥粒连接。共冻存6批细胞,进行4次复苏实验均成功,每镒复苏细胞存活为90%。结论:人眼虹膜色素上皮细胞体外培养的建立及冻存、复苏的成功,为研究某些疾病提供有利的基础。  相似文献   

3.
角膜缘上皮细胞体外培养、冻存和复苏的实验研究   总被引:6,自引:0,他引:6  
目的 建立兔角膜缘上皮细胞体外培养、冻存和复苏的方法。方法 兔角膜缘上皮细胞组织块接种培养。取第三代细胞进行冻存。于冻存后第2周,3、6个月复苏细胞。用MTT法测细胞生长曲线。结果 兔角膜缘上皮细胞体外生长良好。培养细胞AE1单克隆抗体染色阳性,PAS染色阴性。冻存细胞复苏成功。冻存细胞复苏后生长曲线良好。结论 兔角膜缘上皮细胞可以在体外培养、冻存和复苏。  相似文献   

4.
目的建立一种改良的兔角膜细胞冻存和复苏的方法。方法兔角膜细胞消化培养。取第2代细胞分别进行传统和改良方法冻存,于冻存后的第2周、3个月、6个月、la分别行传统和改良的复苏方法。用MTT法测细胞生长曲线,应用三因素分析统计方法评定不同冻存方法、不同复苏方法、不同复苏时间三因素单独和(或)组合对细胞复苏率的影响。结果兔角膜细胞体外生长良好。培养细胞Vim单克隆抗体阳性。细胞的复苏率均受不同冻存方法和复苏方法单、双因素影响,不受复苏时间及与冻存和复苏方法单、双因素及三因素的影响。冻存复苏后生长曲线良好。结论改良后的兔角膜细胞冻存和复苏方法可使细胞保持最佳生物学特性,细胞复苏率高,适用于体外实验研究。  相似文献   

5.
目的 探讨体外培养原代人眼Tenon's囊成纤维细胞的方法及其生长特性,为抗纤维化研究提供靶细胞模型.方法 取翼状胬肉及斜视手术患者的Tenon's囊组织,用组织块法培养原代成纤维细胞.用免疫荧光方法鉴定细胞.对细胞进行传代、冻存和复苏的观察.对复苏后的细胞行MTT法检测其活力并绘制生长曲线.结果 入眼Tenon's囊成纤维细胞可以在体外用组织块方法培养出来,呈典型的长梭形.免疫荧光鉴定细胞波形蛋白染色阳性.细胞多次传代后依然生长迅速,3d即可长满瓶底.复苏后细胞2~6d处生长对数期,增殖能力良好.结论 人眼Tenon's囊成纤维细胞体外生长状态良好,可以液氮冻存,复苏后细胞活力较强,可以用于抗纤维化增生的基础研究.  相似文献   

6.
目的:建立新的人视网膜母细胞瘤细胞株,对其进行冻存和复苏,为临床、科研提供Rb细胞库。方法:用精确优化的取材,不经离心,直接通过洗涤吹打细胞后接种,并根据慢冻速融的细胞冻存原则,定期收集建株的Rb_(70)细胞作液氮冻存及复苏。结果:成功建立SO-Rb_(70)细胞株,共冻存8批细胞,进行了6次复苏实验,4次获成功。结论:经液氮冻存的人Rb_(70)细胞,复苏后生长良好,保持了细胞原有的生物活性及细胞特征,为Rb的深入研究提供了丰富的实验研究材料。眼科学报1998;14:80—82。  相似文献   

7.
目的研究视网膜干细胞冻存复苏后的成活率及再培养后的增生分化特性。方法对胎龄17 d Long Evans的大鼠眼视网膜干细胞进行分离与体外培养。利用无血清培养基短期体外培养大鼠胚胎来源的视网膜干细胞,将传代三代后的视网膜干细胞以冻存液[体积分数为80%的改良基础培养基(DMEM)/F12,10%牛血清白蛋白(BSA),10%二甲基亚砜(DMSO),碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)20 ng/ml]于液氮中冻存,于1、2、4、8、12、16周分别复苏,计数活细胞比例进行再培养,并进一步诱导分化,采用免疫细胞荧光化学方法检测视网膜干细胞的增生及分化特性。结果不同的冻存时间对冻存后细胞存活率的影响无显著差异(P>0.05),再培养生长良好,具有视网膜干细胞特异性标志,并可进一步诱导分化为视网膜各种类型的细胞。结论大鼠视网膜干细胞的冻存复苏并不影响其原有的增生及分化特性。(中华眼底病杂志, 2007, 23: 94-97)  相似文献   

8.
人眼小梁细胞体外培养及传代实验   总被引:1,自引:1,他引:0  
Dai W  Li M 《中华眼科杂志》1998,34(2):121-123
目的探索体外培养人眼小梁细胞的方法,为进一步研究原发性开角型青光眼的发病机理提供实验的依据。方法用器官培养及组织块培养两种方法,进行人眼小梁细胞的原代培养和传代实验,并同时对照培养人眼巩膜成纤维细胞,对二者从形态学上进行比较。结果(1)器官培养较单纯组织块培养更易获得原代小梁细胞;(2)传3~5代人眼小梁细胞处于最稳定阶段,可利用此阶段细胞进行多种体外实验。结论体外培养人眼小梁细胞可获得生长形态及特征稳定的小梁细胞。  相似文献   

9.
目的探索一种有效的体外分离兔视网膜色素上皮(RPE)细胞的良好方法,并观察RPE细胞冻存复苏前后的形态学特点。方法用两步酶法分离兔RPE细胞,第一步酶(透明质酸酶 胰蛋白酶),用于松解视网膜神经上皮细胞与RPE细胞之间的连接;第二步(胰蛋白酶)用于离散RPE细胞,制成细胞悬液;然后用慢冻速融方法对细胞进行冷冻保存及复苏,最后用4种方法(RPE片层观察、H-E染色、免疫组化法及光、电镜观察法)观察RPE细胞在冻存前后的形态特点。结果 用此方法分离培养的细胞其结构完整,纯度高,收获量多,在体外生长旺盛,达到铺满汇合的时间缩短,同时维持体内细胞的许多生物学和形态学特点。细胞冻存复苏后的存活率高达80%左右,且与冻存前细胞形态相比未见明显差别。结论 此分离培养方法及冻存复苏法是高效可行的。  相似文献   

10.
兔视网膜色素上皮细胞的培养与保存   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的 探索一种有效的体外分离兔视网膜色素上皮(RPE)细胞的良好方法,并观察RPE细胞冻存复苏前后的形态学特点。方法 用两步酶法分离兔RPE细胞,第一步酶(透明质酸酶 胰蛋白酶),用于松解视网膜神经上皮细胞与RPE细胞之间的连接;第二步(胰蛋白酶)用于离散RPE细胞,制成细胞悬液;然后用慢冻速融方法对细胞进行冷冻保存及复苏,最后用4种方法(PRE片层观察、H-E染色、免疫组化法及光、电镜观察法)RPE细胞在冻存前后的形态特点。结果 用此方法分离培养的细胞其结构完整,纯度高,收获量多,在体外生长旺盛,达到铺满区合的时间缩短,同时维持体内细胞的许多生物学和形态学特点。细胞冻存复苏后的存活率高达80%左右,且兴冻存前细胞形态相比未见明显差别。结论 此分离培养方法及冻存复苏法是高效可行的。  相似文献   

11.
人结膜上皮细胞的培养鉴定及液氮冻存   总被引:6,自引:1,他引:5  
目的:探索人眼结膜上皮细胞体外培养和细胞保存的最佳方法,建立人结膜上皮细胞,进一步研究人结膜的病理、生理特点及为毒理试验提供可靠的细胞模型。方法:分别用组织块培养法、机械分离法及混合消化液培养法体外培养正常成年人结膜上皮细胞,通过观察细胞形态、生长特性并用原位免疫组化方法鉴定培养细胞;收集第3代和第4代融合的细胞液氮冻存,保存30天后复苏,观察复苏成功率。结果:3种取材方法中,混合消化液培养法细胞  相似文献   

12.
Jian  Ge  Minkai  Lin 《眼科学报》1998,14(3):134-137
Purpose : To establish the culture system of human glaucomatous trabecular cells in vitro and study their ultrastructures.Methods : The trabecular specimens from trabeculectomy were cultured in vitro and passaged 3 times, then identified. Moreover, the glaucomatous cells were observed with electron microscope while compared with the normal ones.Result: Cultured human glaucomatous trabecular cells were obtained. The ultrastructure of the cells showed the decrease in vilious project, coated vesicle and lysosomal inclusion. Conclusion : The establishment of human glaucomatous trabecular cells culture in vitro made the culture system more perfect. The morphologic changes might be related to the abnormal functions of human trabecular meshwork cells. Eye Science 1998; 14 : 134 - 737.  相似文献   

13.
人眼小梁细胞体外培养及生物学特性研究   总被引:5,自引:1,他引:4  
目的:建立人眼小梁细胞培养方法并研究其生物学特性。方法:以体外组织块培养的方法获得培养的人小梁细胞,应用光镜、电镜观察细胞的形态学特征,并观察其免疫组化特性和细胞的生长曲线。结果:光镜下小梁细胞为扁平多角形、单层生长;电镜下细胞连接为点粘连和缝隙连接、细胞表面可见微绒毛、胞浆细胞器丰富;免疫组化染色对抗纤维连接蛋白(Anti—FN)、抗层粘连蛋白(Anti—LN)、抗神经元特异性烯醇化酶(Anti—NSE)单抗呈阳性,对抗第Ⅷ因子(Anti-ⅧFactor)单抗呈阴性;传代小梁细胞繁殖时间较长,10天后为平台期。结论:根据体外培养的小梁细胞的形态特点、生长特征、免疫组化特性可对其进行鉴定。人小梁细胞体外培养的成功,为在细胞和分子水平研究青光眼的发病机制提供了有利的条件。眼科学报 1996;12:64—69。  相似文献   

14.
Yehong  Zhuo  Jian  Ge 《眼科学报》1999,15(1):46-50
Background: To study the glucocorticoid receptor (GR) and the associated gene regulation in the pathogenesis of glucocorticoid- induced glaucoma (GIG) in Chinese patients.Methods: The trabecular cells of normal individuals and patients with GIG were cultured in vitro. By using polymerase chain reaction (PCR),gene fragments on GR DNA binding sites of trabecular cells were amplified. The product was detected by gel electrophoresis.Results: The trabecular cells were cultured successfully in normal individuals and patients with GIG in vitro. A single PCR product was obtained in both two groups with the same size of 545 base pairs.Conclusion: There is not any difference in gene on the GR DNA binding sites between normal individuals and patients with GIG. The results suggest the difference in mRNA or other functional genes. Eye Science 1999 ; 15 ; 46 - 50.  相似文献   

15.
He X  Li M 《中华眼科杂志》1998,34(4):280-2, 20
OBJECTIVE: To look for better cultural methods in order to obtain numerous human trabecular cells in vitro for glaucoma experimental studies, and describe the immunohistochemical characteristics of the cells. METHOD: Human trabecular meshwork cells were cultured, then 4 monoclonal antibodies were used for immunohistochemical stains of the cultured cells. RESULTS: At the primary period, the growth of human trabecular cells was obviously slower than that of cows and pigs. The immunohistochemical stains showed that the cells presented positive reactions to neuronal specific enolase (NSE) and vimentin and negative reactions to factor VIII related antigen (VIIIR:Ag) and desmin. CONCLUSIONS: The culture of human trabecular meshwork cells in vitro needs more careful and better cultural conditions. The cells originally are derived from embryonic neural crest, not from mesodermal endothelium of blood vessels. There is middle filament vimentin and no desmin in the cells.  相似文献   

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