紫杉醇对体外人翼状胬肉成纤维细胞的抑制作用

目的:观察紫杉醇(PA)对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(HPF)增生,凋亡的影响。方法:用0～1000nmol/LPA作用于体外培养HPF的24～96h后观察不同浓度的PA对HPF的影响。MTT法检测细胞的增殖情况,流式细胞仪测定细胞的周期时相。结果:在1～1000nmol/LPA对HPF的抑制作用呈时间和剂量依赖性(P<0.05)。1,10,1000,10000nmol/L的PA作用HPF24h后,流式检测发现低浓度药物组(1～10nmol/L)主要阻止细胞在G0～G1,高浓度组(100～1000nmol/L)主要阻止细胞在G2～M期,并可见细胞凋亡。结论:PA可显著抑制HPF的增殖,使细胞周期停止在G2～M期和细胞的凋亡。     

锗132对体外培养翼状胬肉成纤维细胞的增殖抑制作用观察

观察锗１３２对体外培养翼状胬肉成纤维细胞的抗增殖作用,寻找辅助治疗翼状胬肉和预防翼状胬肉复发的新方法。方法将翼状胬肉成纤维细胞行体外原代和传代培养;观察不同浓度锗１３２及丝裂霉素Ｃ对成纤维细胞生长曲线的影响及培养的翼状胬肉成纤维细胞增殖抑制作用和毒性作用;采用免疫组织化学方法检测增殖细胞核抗原（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇ ｃｅｌｌ ｎｕｃｌｅａｒ ａｎｔｉｇｅｎ,ＰＣＮＡ）的表达,结果锗１３２可抑     

临床常用药物对体外培养的复发性翼状胬肉成纤维细胞的抑制效果比较

背景 翼状胬肉是眼科常见的眼表疾病,临床上常用的防治翼状胬肉复发的药物包括地塞米松(DXM)、干扰素α-2b(IFN-α2b)、丝裂霉素C(MMC)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、环孢素A(CsA)和他克莫司(FK506),但鲜见关于这6种药物对复发性翼状胬肉成纤维细胞生物学行为抑制作用的比较研究. 目的 观察DXM、IFN-α2b、MMC、5-FU、CSA和FK506对体外培养的人复发性翼状胬肉成纤维细胞的抑制作用,筛选治疗复发性翼状胬肉的最佳药物. 方法 收集2015年5月至2016年7月在天津医科大学眼科医院行复发性翼状胬肉切除术的患者术中切除的组织标本7例7眼,采用组织块培养法分离和培养成纤维细胞,采用免疫组织化学法对培养细胞进行鉴定.分别在培养液中添加DXM、IFN-α2b、MMC、5-FU、CsA和FK506作用48 h,未添加药物的培养细胞作为对照组.采用CCK-8法检测各种药物对培养细胞的生长抑制率,分别计算药物的半数抑制浓度(IC50).在药物IC50剂量下作用48 h,采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡比例和细胞周期的变化;采用免疫组织化学法检测细胞中增生细胞核抗原(PCNA)的表达变化. 结果 培养的细胞为长梭形,呈旋涡状排列,细胞中波形蛋白表达阳性,角蛋白无表达.DXM、IFN-α2b、MMC、5-FU、CsA和FK506对成纤维细胞的IC50分别为(3.5×103±2.83×10-2)、(6.1×102±3.6×10-3)、(3.2×10-1±1×10-4)、(2.2×101±1.2× 10-3)、(6.3×101±2.5×10-3)和(6.0×101±0.0×100) mg/L.在IC50剂量下分别作用后48 h,IFN-α2b组、CsA组、MMC组、FK506组、DXM组和5-FU组凋亡细胞比例分别为(35.00±3.21)％、(30.37±1.67)％、(26.11±0.75)％、(22.01±0.07)％、(20.95±1.68)％和(19.85±0.52)％,与对照组的(11.38±2.18)％比较细胞凋亡比例均明显升高,差异均有统计学意义(均P＜0.05).对照组G0/G1期、S期和G2/M期细胞比例分别为(85.64±2.62)％、(5.29±1.56)％和(2.73±2.66)％,各药物组G0/G1期细胞比例明显下降,S期和G2/M期细胞明显升高,差异均有统计学意义(均P＜0.05),对细胞周期阻滞效果由强到弱依次为MMC、CsA、5-FU、DXM、IFN-α2b和FK506.对照组细胞中可见有大量PCNA阳性表达,各药物组细胞中PCNA表达强度均弱于对照组.对照组、FK506组、DXM组、5-FU组、IFN-α2b组、CsA组和MMC组细胞中PCNA的阳性表达率分别为(95.00±2.00)％、(82.67±5.04)％、(80.00±2.78)％、(64.00±6.55)％、(38.00±3.00)％、(32.00±4.36)％和(29.67±3.02)％,总体比较差异有统计学意义(F=25.995,P=0.000),各药物组细胞中PCNA阳性表达率均明显低于对照组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 DXM、IFN-α2b、MMC、5-FU、CsA和FK506均可抑制复发性翼状胬肉成纤维细胞的增生并促进细胞凋亡,其中MMC和CsA的作用更为显著.     

姜黄素抑制翼状胬肉成纤维细胞增生的研究

目的观察姜黄素对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(HPF)增生和凋亡的影响,寻找辅助治疗和预防翼状胬肉复发的新方法。方法用0～160μmol/L姜黄素作用体外培养的HPF,24～96h后观察不同浓度姜黄素对HPF的影响。MTT法及免疫组织化学染色增生细胞核抗原(PCNA)检测细胞生长活性,流式细胞仪测定细胞周期时相变化。结果在20～160μmol/L浓度作用24～72h范围内,姜黄素可剂量和时间依赖性的抑制HPF增生(P<0.05)。20,40,80,160μmol/L姜黄素作用24h后,流式细胞仪检测结果发现,姜黄素作用组均出现典型的亚二倍体凋亡峰,G0/G1期细胞百分比上升(P<0.05),S期细胞百分比下降(P<0.05),说明细胞阻滞于G0/G1期。当姜黄素的浓度在20～160μmol/L范围内能浓度依赖性地抑制细胞表达PCNA(P<0.05)。结论姜黄素可显著抑制翼状胬肉成纤维细胞增生,使细胞周期停滞于G0/G1期,并诱导其凋亡,作用呈时间和剂量依赖性。     

β-catenin在翼状胬肉成纤维细胞中的表达

目的:β-catenin在正常的细胞粘附和wnt信号通路中发挥重要功能,本文探讨其在翼状胬肉组织及成纤维细胞中的表达及TGF-β1对其的影响。方法:通过组织块培养获取正常球结膜和翼状胬肉成纤维细胞并传至第4代,用10μg/LTGF-β1作用于细胞。抗β-catenin抗体对体内取出组织和培养的细胞行免疫组化染色;免疫印迹法检测培养成纤维细胞中β-catenin的表达情况。结果:免疫组化显示翼状胬肉成纤维细胞中β-catenin阳性着色强于正常结膜成纤维细胞。β-catenin在胬肉组织中较多,且多分布于上皮下纤维血管组织,上皮染色较少。体外培养见翼状胬肉成纤维细胞的生长较正常结膜成纤维细胞快、增殖能力强。免疫印迹法显示在翼状胬肉成纤维细胞蛋白中β-catenin的特异性阳性条带灰度值高于正常球结膜成纤维细胞蛋白。TGF-β1能促进翼状胬肉成纤维细胞中的β-catenin蛋白表达。结论:β-catenin在翼状胬肉组织及其成纤维细胞中的表达增高,提示β-catenin与翼状胬肉的发病有关。     

橙皮苷对人翼状胬肉成纤维细胞增生的抑制作用

目的　评价橙皮苷对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞（human pterygium fibroblasts,HPF）增生的抑制作用,对照观察丝裂霉素C（mitomycin C,MMC）对HPF的影响,寻找治疗及预防翼状胬肉复发的中医中药方法。方法　将人翼状胬肉新鲜组织剪碎后进行体外贴壁细胞常规培养及传代,并采用波形蛋白（Vimentin）免疫细胞化学染色及DAPI染色对HPF进行鉴定。用24 μmol·L^-1、48 μmol·L^-1、64 μmol·L^-1、72 μmol·L^-1、96 μmol·L^-1、120 μmol·L^-1橙皮苷及1.5 μmol·L^-1、7.5 μmol·L^-1、30.0 μmol·L^-1 MMC作用于第3代HPF,24 h、48 h、72 h后采用MTT法检测细胞的增生抑制率,并筛选合适的浓度梯度及时间进行细胞凋亡检测,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果　根据MTT法检测细胞增生抑制率的结果,选用72 μmol·L^-1及48 μmol·L^-1 的橙皮苷作为实验组,将7.5 μmol·L^-1 MMC作为MMC标准对照组,无处理细胞作为空白对照组,培养48 h后流式细胞仪检测HPF的凋亡率。结果显示,72 μmol·L^-1橙皮苷组、48 μmol·L^-1橙皮苷组、7.5 μmol·L^-1 MMC标准对照组及空白对照组的细胞凋亡率分别为（41.10±1.04）%、（24.97±3.70）%、（48.60±6.94）%及（9.20±4.67）%,各组间HPF凋亡率整体存在差异（F=43.581,P<0.001）,两两比较结果显示,除72 μmol·L^-1橙皮苷组与MMC标准对照组间差异无统计学意义（P>0.05）外,其余组间两两相比差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　72 μmol·L^-1橙皮苷在抑制HPF生长方面有着与MMC等同的效果,主要是通过促进HPF凋亡进而抑制HPF的增生。     

银杏叶提取物对体外培养翼状胬肉成纤维细胞增殖的抑制作用

目的：研究不同浓度的银杏叶提取物（ginkgo biloba extract,GBE）对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(human pterygium fibroblasts,HPFs)增殖和凋亡的影响。 方法：用噻唑蓝比色法(MTT)检测不同浓度(12.5,25.0,50.0,100.0mg/L) GBE在不同作用时间(24,48,72h)对体外培养的HPFs增殖的影响。用流式细胞仪检测HPFs的细胞周期及凋亡率。 结果：MTT结果显示,GBE浓度为12.5mg/L组作用24h后对HPFs的增殖无明显抑制作用（P>0.05）,其余各时间段各组均可见明显抑制HPFs的增殖,且各组间比较差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪检测发现GBE作用48h后G₀/G₁期细胞比例增加,S期细胞比例下降,计算不同浓度GBE作用下凋亡率分别为4.37%,8.14%,11.09%,15.18%,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。 结论：GBE对HPFs的增殖有明显抑制作用,并与用药剂量和持续时间有关。     

麦考酚酸对翼状胬肉成纤维细胞作用的实验研究

目的 研究麦考酚酸(mycophenolic acid,MPA)对翼状胬肉成纤维细胞(pterygium fibroblasts,PFB)活性的影响,并对其相关机制进行探讨.方法 体外培养PFB,MTT比色法、Brdu掺入法观察MPA对PFB增殖的抑制作用,Western blot检测PFB内核转录因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)P65及IκB-α蛋白的表达.结果 MTT比色法发现不同浓度的MPA和丝裂霉素C对PFB增殖均有抑制作用,差异均有统计学意义(均为P＜0.05),且呈时间、剂量依赖性,半数抑制浓度下48 h抑制率分别为(31.918 5±1.277 6)％、(31.123 5±1.582 6)％,72 h抑制率分别为(50.292 9±2.457 4)％、(47.972 9±0.614 2)％.Brdu掺入法发现不同浓度MPA组积分光密度值与空白对照组比较,差异均有统计学意义(均为P＜0.05),进一步证实MPA可抑制PFB的增殖;Western blot显示,MPA可抑制PFB胞核内P65表达(与空白对照组表达量1.542 9±0.142 7相比,MPA组表达量仅为0.886 4±0.072 8),并能增加胞浆IκB-α的表达(空白对照组为1.559 2±0.267 6,MPA组为2.142 5±0.305 2).结论 MPA对PFB增殖有显著的抑制作用,其作用机制可能与其抑制PFB的NF-κB通路有关.     

粉防己碱对翼状胬肉成纤维细胞增生作用的研究

目的:观察粉防己碱(tetrandrine,Tet)对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(human pterygium fibroblast,HPF)增殖的影响,研究粉防己碱对翼状胬肉成纤维细胞增殖的作用,寻找辅助治疗翼状胬肉的新方法。方法:用不同浓度(0 ～160μmol/L)Tet作用体外培养的HPF,观察24 ～96h Tet对HPF的影响。MTT法检测细胞生长抑制率,免疫细胞化学法检测Tet干预前后HPF增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况。结果:在Tet20, 40, 80, 160μmol/L浓度作用24 ～72h范围内,可剂量和时间依赖性的抑制HPF增生(P<0.05)。Tet干预后PCNA蛋白表达下降,当Tet的浓度在20 ～160μmol/L范围内能浓度依赖性地抑制细胞表达PCNA(P<0.05)结论:Tet可显著抑制翼状胬肉成纤维细胞增生,在一定浓度和时间范围内抑制作用呈剂量与时间依赖性。但在高浓度时( >160μmol/L)可能存在细胞毒性作用。     

β-NGF对人翼状胬肉成纤维细胞增生的影响

目的观察神经生长因子β（β-NGF）对体外培养的人翼状胬肉成纤维细胞（HPF）增生的影响,探讨翼状胬肉的发病机制。方法对翼状胬肉组织标本行组织块培养。待细胞生长汇合至80%后以0.25%胰蛋白酶＋0.02%EDTA1∶1混合消化细胞,取3～5代细胞用于实验。通过细胞中波形蛋白、角蛋白及α平滑肌肌动蛋白的表达鉴定培养的细胞,免疫荧光法检测HPF中β-NGF受体trkA、p75的表达,MTT法检测不同质量浓度β-NGF对HPF的作用,Westernblot及RT-PCR法半定量检测细胞核抗原（PCNA）来评估HPF的增生。结果波形蛋白、α平滑肌肌动蛋白、trkA和p75在HPF中呈阳性表达;MTT结果显示,在β-NGF作用12、24、48、72和96h后,48h为β-NGF促增生的高峰期;在不同质量浓度β-NGF（5～50ng/mL）作用下,HPF中PCNA蛋白及mRNA的表达与0和1ng/mLβ-NGF作用组之间比较差异均有统计学意义（Fprotein=24.980,P=0.000;FmRNA=64.490,P=0.000）。结论NGF可能通过结合两受体trkA、p75促进了HPF的增生。     

汉防己甲素体外对正常结膜与翼状胬肉成纤维细胞抑制作用的比较

目的:观察汉防己甲素(tetrandrine,Tet)对正常结膜和翼状胬肉成纤维细胞抑制作用的异同。方法:在相同的培养条件下,传第3代的正常结膜与翼状胬肉成纤维细胞皆加入不同浓度的Tet,分别于加药后1和3d行MTT检测细胞的存活率。结果:用药后1d,4×10-5和2×10-5mol/LTet对正常结膜与翼状胬肉成纤维细胞存活率无显著性差异(P>0.05),其余各浓度的Tet对翼状胬肉成纤维细胞的抑制作用大于正常结膜成纤维细胞,正常结膜成纤维细胞的存活率大于翼状胬肉成纤维细胞(P<0.01)。用药后3d,4×10-5mol/LTet组翼状胬肉成纤维细胞的存活率大于正常结膜成纤维细胞(P<0.01);其余各浓度的Tet对两种成纤维细胞存活率无显著性差异(P>0.05)。结论:用药后3d,2×10-5mol/L及半数抑制量(10-5mol/L)以下浓度的Tet对翼状胬肉成纤维细胞起抑制作用,而对正常结膜成纤维细胞的影响较小。     

核心蛋白多糖抑制翼状胬肉成纤维细胞增生的实验研究

目的　观察核心蛋白多糖对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞（ｈｕｍａｎｐｔｅｒｙｇｉｕｍｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ,ＨＰＦ）增生和凋亡的影响,寻找辅助治疗和预防翼状胬肉切除术后复发的新方法。方法　采用组织块法体外培养ＨＰＦ,将处于对数生长期的细胞用于实验。将０．１ｍｇ?Ｌ－１、１．０ｍｇ?Ｌ－１、１０．０ｍｇ?Ｌ－１的Ｄｅｃｏｒｉｎ分别加入细胞培养基中培养２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ。ＭＴＴ比色法分别测定不同浓度的Ｄｅｃｏｒｉｎ作用于ＨＰＦ不同时间后的细胞生长抑制率,流式细胞仪测定细胞周期时相变化,免疫组织化学法染色ＰＣ-ＮＡ检测细胞生长活性。结果　ＭＴＴ结果显示不同浓度组Ｄｅｃｏｒｉｎ作用ＨＰＦ２４ｈ细胞生长抑制率分别为（７．８１±１２６）％、（１９５２±２．１４）％、（４２．６９±１．６２）％,作用４８ｈ分别为（１０．１９±２．７４）％、（２２．２８±０．９７）％、（４５．７３±０．８２）％,作用７２ｈ分别为（２０．４９±１．３９）％、（２９．５０±２．４７）％、（５９．４１±１．７１）％。随着药物浓度的逐渐增高和作用时间的延长,细胞生长抑制率逐渐增加,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。流式细胞仪检测各浓度Ｄｅｃｏｒｉｎ组ＨＰＦ中Ｇ０／Ｇ１期细胞比率均较空白对照组高,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。当Ｄｅｃｏｒｉｎ浓度在０．１～１０．０ｍｇ?Ｌ－１范围内作用ＨＰＦ７２ｈ,均能够明显抑制细胞表达ＰＣＮＡ（均为Ｐ＜０．０５）。结论　Ｄｅｃｏｒｉｎ可以抑制ＨＰＦ的增生,诱导其凋亡,且呈明显的剂量和时间依赖性,有望成为防治翼状胬肉的药物之一。     

层黏连蛋白对人翼状胬肉成纤维细胞生长的抑制作用

目的:探讨层黏连蛋白对体外培养的人翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响.方法:体外培养的第3代翼状胬肉成纤维细胞,接种于层黏连蛋白包被培养皿(Ln组)和空白培养皿(对照组)中,倒置显微镜观察细胞生长状态,MTT法检测细胞增殖状态,作出生长曲线;免疫荧光法检测α-SMA在细胞内的表达;RT-PCR法检测TGF-β1和cytokeratin mRNA的表达水平.结果:Ln组成纤维细胞数量少于对照组;3～7 d,Ln组A570明显低于对照组(0.20 vs 0.28,0.22 vs 0.30,0.28 vs0.34,0.31 vs0.36,0.33 vs 0.36,P＜0.05);α-SMA在对照组细胞内表达良好,在Ln组的表达受到抑制;与对照组相比,Ln组TGF-β1 mRNA的表达下降,cytokeratin mRNA表达增加.结论:层黏连蛋白能抑制翼状胬肉中成纤维细胞的增殖.     

汉防己甲素对翼状胬肉成纤维细胞抑制作用的实验研究

目的观察汉防己甲素对体外培养的翼状胬肉成纤维细胞的抑制作用，寻找治疗翼状胬肉和预防其复发的有效药物。方法用MTT比色法测定不同浓度的汉防己甲素对体外培养的翼状胬肉成纤维细胞增生的抑制作用，并与丝裂霉素C（MMC）进行比较；用荧光定量PCR检测10^-5mol／L的汉防己甲素对翼状胬肉成纤维细胞基质金属蛋白酶（MMP）MMP-3 mRNA的表达的影响。结果不同浓度的汉防己甲素对体外培养的翼状胬肉成纤维细胞的增生均有明显的抑制作用（P〈0．01）；10^-5mol／L的汉防己甲素作用24h其MMP-3 mRNA的表达量下降了27．12％。结论汉防己甲素对翼状胬肉成纤维细胞具有明显的抑制作用，可望用于对翼状胬肉的治疗。     

兔结膜成纤维细胞的体外培养

目的：探索兔眼结膜成纤维细胞体外培养的方法。方法：分别采用组织块培养法、机械分离法、消化培养法、细胞悬液法和混合消化组织块培养法培养兔结膜成纤维细胞,观察细胞形态和生长特性。结果：单纯机械分离和消化培养法都可以得到单层贴壁细胞,细胞消化后再培养可缩短生长周期。结论：混合酶充分消化的组织块连同细胞悬液一同培养的方法,步骤简便且周期短。通过差别消化法和多次传代可以得到较纯的成纤维细胞。     

汉防己甲素对翼状胬肉成纤维细胞相关因子分泌的影响

目的 观察翼状胬肉组织块分泌的相关因子变化,了解汉防己甲素（tetrandrine,Tet）对翼状胬肉病变的作用.方法 收集初发翼状胬肉（实验组）和正常球结膜组织块（对照组）体外培养上清液,ELISA检测上清液中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、白介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）的含量及10^-5 mol·L^-1 Tet作用48 h实验组中各因子含量的变化.结果 实验组上清液中VEGF含量较对照组高（P＜0.01）;加入Tet作用48 h后明显下降（P＜0.01）,与对照组上清液中VEGF含量无差异（P＞0.05）.2组上清液中IL-1β的含量相比差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 VEGF在翼状胬肉新生血管形成中发挥着重要作用.汉防己甲素对翼状胬肉组织中VEGF的分泌有明显抑制作用,有良好的应用前景,但IL-1β在翼状胬肉中的作用仍需进一步研究.     

VEGF诱导对翼状胬肉成纤维细胞血管生成拟态影响的研究

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)诱导对人翼状胬肉成纤维细胞血管生成拟态(VM)的影响。方法收集在广州市增城区人民医院行翼状胬肉手术的6例新鲜的初发性人翼状胬肉标本(年龄41~58岁)。将人翼状胬肉新鲜组织剪碎后进行体外贴壁细胞常规培养,并采用波形蛋白(Vimentin)免疫细胞化学染色和广谱细胞角蛋白(CK)染色对人翼状胬肉成纤维细胞进行鉴定。分别设置对照组和不同浓度的VEGF(1 ng/ml、10 ng/ml及100 ng/ml)组,取生长良好的3~5代翼状胬肉成纤维细胞进行分组培养。采用细胞计数试剂盒-8法检测各组成纤维细胞的增殖能力。应用细胞三维培养技术和糖原染色法观察各组VM的进展情况,采用蛋白质印迹法检测各组细胞的基质金属蛋白酶(MMP)-2和低氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白的表达。各组吸光度(OD值)、MMP-2及HIF-1α的描述均采用均数±标准差(x珋±s)表示,对照组与不同浓度VEGF组的比较采用单向方差分析,当差异有统计学意义时,进一步两两比较。双变量相关性分析采用Spearman's等级相关分析。结果人翼状胬肉成纤维细胞鉴定结果显示,细胞爬片经苏木精-伊红染色后,在显示镜下细胞呈长梭形、三角形、扇形或不规则状。细胞免疫化学染色结果显示,细胞的胞浆呈Vimentin阳性表达,广谱CK阴性表达。细胞计数试剂盒-8法检测细胞增殖结果显示,对照组、1 ng/ml组、10 ng/ml组及100 ng/ml组细胞的OD值分别为0.57±0.023、0.59±0.012、0.77±0.024及1.014±0.035。对照组和1 ng/ml组比较差异无统计学意义(t=1.21,P>0.05);10 ng/ml组和100 ng/ml组的OD值均明显高于对照组和1 ng/ml组(t=14.78,12.34;P<0.05);100 ng/ml组的OD值最高,与对照组、1 ng/ml组及10 ng/ml组比较,差异有统计学意义(t=20.12,19.45,13.41;P<0.05)。细胞三维培养及糖染色显示,10 ng/ml组和100 ng/ml组均出现VM结构,而对照组和1 ng/ml组未发现VM结构。10 ng/ml组和100 ng/ml组VM结构的密度分别为4.40±1.14和12.40±2.07,差异有统计学意义(t=-7.899,P<0.05)。对照组、1 ng/ml组、10 ng/ml组及100 ng/ml组细胞的MMP-2值分别为0.26±0.038、0.29±0.013、0.39±0.013及0.73±0.014;对照组、1 ng/ml组、10 ng/ml组及100 ng/ml组细胞的HIF-1α值分别为0.087±0.0086、0.087±0.0031、0.15±0.0016及0.37±0.026。对照组和1 ng/ml组中MMP-2和HIF-1α灰度值的差异均无统计学意义(t=1.21,0.01;P>0.05);10 ng/ml组中MMP-2和HIF-1α灰度值均显著高于对照组和1 ng/ml组(t=7.92,6.85,17.64,17.82;P<0.05);100 ng/ml组的中MMP-2和HIF-1α灰度值均显著高于其他3组(t=28.48,26.45,18.72,25.31,24.78,15.45;P<0.05)。翼状胬肉成纤维细胞的血管生成拟态密度与MMP-2和HIF-1α表达呈显著正相关(r=0.509,0.503;P<0.05)。结论 VEGF能够增强人翼状胬肉成纤维细胞的增殖能力、促进VM出现及促使MMP-2和HIF-1α表达增高。提示VEGF因素可能是翼状胬肉出现VM的分子机制,并协同增强MMP-2和HIF-1α表达一起影响翼状胬肉的进展。     

正常球结膜与翼状胬肉成纤维细胞生长增殖状况的对比观察

目的对比观察相同的培养条件下翼状胬肉与正常结膜成纤维细胞的生长增殖状况,对两种成纤维细胞的生长增殖特性作出评价。方法用10%胎生牛血清的RPMI1640培养液,在相同的培养条件下分别培养正常球结膜与初发翼状胬肉组织成纤维细胞;倒置相差显微镜下观察培养的两种成纤维细胞的特点及生长增殖状况。对传第3代的两种成纤维细胞,分别于接种后2、5、8d行噻唑蓝[3-（4,5-dimethyl -2thiazol）-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromid,MTT]比色试验,检测细胞增殖活力（细胞数）。结果翼状胬肉成纤维细胞较正常结膜成纤维细胞生长快,增殖旺盛;MTT检测结果显示：5d翼状胬肉成纤维细胞的细胞总数多于正常结膜成纤维细胞（P〈0.05）,8d更明显（P〈0.01）。结论体外翼状胬肉成纤维细胞的生长、增殖特性明显强于正常结膜成纤维细胞。提示治疗翼状胬肉药物的筛选和疗效评价的实验研究应直接应用翼状胬肉成纤维细胞为研究对象,才能作出较为符合客观实际的评价。